專利名稱：一種用于測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測試劑盒，特別涉及一種用于檢測人體血清中幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑盒及其制備方法。本發(fā)明屬于生物檢測技術領域
背景技術：
幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,簡稱HP)是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的細菌，呈革蘭染色陰性，在胃粘膜上皮細胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。幽門螺桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性胃潰殤以及胃動膜相關淋巴組織 (MALT)淋巴瘤的主要致病因素，并且與胃癌的發(fā)生密切相關.1994年世界衛(wèi)生組織/國際癌癥研究機構(WH0/IARC)將幽門螺桿菌定為I類致癌原。慢性胃炎患者的胃粘膜活檢標本中幽門螺桿菌檢出率可達80% 90%.而消化性胃潰殤患者更高，可達95%以上，甚至接近100%。胃癌由于局部上皮細胞己發(fā)生異化，因此其檢出率高低報道不一。幽門螺桿菌的感染己是個世界性問題，對其進行準確診斷有利于控制HP傳播與流行及根除HP感染治療的監(jiān)測。目前，國內外已建立的HP檢測方法從檢測手段上分為侵入性和非侵入性兩大類。一、侵入性檢測方法這類方法的特點是使用內窺鏡取得胃活檢組織后進行檢測，試驗方法主要有快速尿酶試驗法、病理學檢測法及細菌培養(yǎng)法。I、快速尿酶檢測法依據HP具有豐富的尿素酶可分解尿素產生氨氣，由pH指示劑顯色。該法簡便、迅速、靈敏，但也有可能因含尿素酶的其他細菌存在而產生假陽性。此夕卜，近期使用過降低胃部細菌量或直接抑制尿素酶活性的藥物的樣品可產生假陰性。2、病理學檢測法通過對胃粘膜組織進行切片染色檢查，可直接顯示HP菌體而證實，其中銀染法檢測率高，但不同病理學家觀察的差異性對于胃萎縮樣品的診斷具有一定的困難性。3、細菌培養(yǎng)法取胃粘膜活組織作HP培養(yǎng)，因培養(yǎng)細菌較少、操作過程較復雜、時間周期較氏、費用昂貴而不適宜普遍應用。二、非侵入性檢測方法此類方法特點是不需要使用內窺鏡采取胃活檢組織，從而避免病人因反復做胃窺鏡而帶來的侵害痛苦或發(fā)生其它類型的感染。試驗方法主要有尿素呼吸試驗、PCR檢測法和免疫血清學法。I、尿素呼吸試驗由于HP富含尿素酶,用13C或14C標記的尿素由受試者服用后，根據氣體核素質譜儀檢測到分解產生的帶同位素標記的二氧化碳標本來判斷HP感染程度。該法靈敏度高，可定量，但有一定的放射性危險，并且受設備限制難于普遍推廣。2、PCR檢測法主要檢測胃液、粘膜中HP尿素酶(UReA)基因和毒素相關蛋白A (CagA)基因，但操作復雜，易污染，對檢驗人員的專業(yè)知識及操作技術的要求較高，且大大增加患者的經濟開支，因此在臨床上的應用也較為有限。3、免疫血清學法目前已有方法包括酶聯免疫法、免疫印跡法和膠體金法,為HP的流行病學調查提供了有利便捷手段，但檢測速度慢，除酶聯免疫法可使用全自動酶免分析儀(且需2 3小時、步驟多)外，其余都需手工操作，患者獲得檢測結果為定性分析，不適于治療監(jiān)控及療效評估。目前，雖然檢測幽門螺旋桿菌感染的方法繁多，但還沒有一種合適的生化分析儀，能夠簡便、快速、大批量且定量的進行檢測。如能建立該種方法，則能使檢測過程大為簡便化，操作人員只需設置好上機參數，將試劑和樣本置于相應位置后，生化分析儀即可全自動 完成檢測，并能夠迅速得到結果，易于在各級醫(yī)療機構推廣應用，對于幽門螺旋桿菌的防治具有重大的臨床意義和普及價值。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現有方法及技術的缺陷，提供一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑盒及其制備方法以及使用該試劑進行臨床樣本檢測的方法。該試劑適用于各類型生化分析儀，具有樣本無需稀釋、操作簡單、快速、定量準確、重復性好、穩(wěn)定性好、敏感度高、特異性強的特點。為實現本發(fā)明的目的，采用了如下的技術方案本發(fā)明的一種用于測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于包括稀釋液、幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑及空白液；其中，所述的幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的兩種不同粒徑的膠乳顆粒的混合物，所述的膠乳顆粒為聚苯乙烯微球。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的稀釋液為含有表面活性劑及反應增強劑的緩沖液，所述的緩沖液為Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HE PES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的任一種，優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液；所述的反應增強劑為PEG-300、PEG2000或PEG6000中的任一種或幾種，優(yōu)選為PEG6000 ;更優(yōu)選的所述的稀釋液中還含有2mol/L的氯化鈉。其中，無機鹽氯化鈉可以調節(jié)離子強度，反應增強劑可以加快抗原抗體的免疫反應速度，縮短檢測時間，表面活性劑(Tween 20)可以去除非特異性的結合反應。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的粒徑為60 -90nm和粒徑為160 — 200nm的膠乳顆粒的混合物。優(yōu)選的，所述的膠乳顆粒為聚苯乙烯納米微球，這種組合既能夠提高反應的靈敏度，而且也能夠提高試劑的檢測范圍。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的膠乳試劑可以按照以下方法制備得到( I)膠乳前處理取Iml未標記的膠乳顆粒加入IOml 0. 02M pH7. 4磷酸緩沖液中，離心機IOOOOrpm離心20min,去掉上清液、再用IOml 0. 02M pH7. 4磷酸緩沖液重懸顆粒,離心機IOOOOrpm離心20min，去掉上清并用5ml 0. 02M pH7. 4磷酸緩沖液重懸、4°C保存待用；(2)膠乳顆粒標記將步驟(I)處理后膠乳用0. 02M pH6. IMES緩沖液將膠乳顆粒稀釋成10mg/ml濃度，然后加入Img EDC,混勻活化15分鐘，離心8000rpm棄去上清，并用0. 02MPH7. 4磷酸緩沖液重懸，加入Img幽門螺桿菌抗原于10mg/ml 2ml膠乳液體中，室溫混勻2 — 4小時,離心機SOOOrpm離心15分鐘，將上清分離到另外的容器中備用，顆粒使用封閉液重懸，并室溫混勻I小時，離心機SOOOrpm離心15min，沉淀復溶于分散液，將標記完成的膠乳顆粒分裝成Iml/支，4°C保存；(3)使用上述步驟分別對粒徑60 - 90nm和160 — 200nm的膠乳進行分別標記，標記結束后將所述60-90nm膠乳和所述160-200nm膠乳進行混合，按質量體積百分比計，使60 — 90nm 膠乳的濃度為 0. 673-0. 732%，使 160 — 200nm 膠乳的濃度為 0. 135-0. 323%,混合后進行保存，優(yōu)選的使用上述流程分別對粒徑70 - 90nm和160 — ISOnm的膠乳進 行分別標記，標記結束后將所述70 - 90nm膠乳和所述160 — ISOnm膠乳進行混合，按質量體積百分比計，使70 - 90nm膠乳濃度為0. 708-0. 732%，使160 — 180nm膠乳濃度為0. 135-0. 235%，混合后進行保存；所述的封閉液為含有5g/L BSA的0. 02M PH7. 4的磷酸緩沖液；所述的分散液由BSA，吐溫-20、PVP-K30以及生物防腐劑通過0. 02M PH7. 4的磷酸緩沖液配制而成，其中BSA濃度為lg/L，吐溫-20濃度為0. 05% (v/v), PVP-K30濃度為2g/L，生物防腐劑濃度為0. 05% (v/v)。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述抗原包括幽門螺桿菌全菌體蛋白、幽門螺桿菌尿素酶、幽門螺桿菌細胞毒素相關蛋白A(Cytotoxin associated gene A, Cag A)或幽門螺桿菌細胞空泡毒素A (Vacuolating cytotoxinA, VacA)中的一種或多種。幽門螺桿菌可以產生大量的尿素酶，該尿素酶對細菌在體內的定植及致病發(fā)揮著重要作用。尿素酶主要由A(UreA)和B(UreB)兩個亞單位組成，分子量分別約為30kD和63kD，業(yè)已證實尿素酶B亞單位(ureB)是幽門螺桿菌的一個重要保護性抗原?，F有研究進一步表明，大約占50-60%的幽門螺桿菌能在體外產生細胞毒素活性，其中細胞毒素的表達與暴露在幽門螺桿菌表面的細胞毒素相關基因A密切相關，該基因表達的蛋白僅存在于產細胞毒素的幽門螺桿菌中，并具有良好的免疫原性，現在認為，該蛋白作為抗原能為臨床胃部疾患的診斷提供依據。細胞空泡毒素A (VacA)也是幽門螺桿菌的特異性表達蛋白，對于臨床幽門螺桿菌的檢測具有重要的參考價值。本發(fā)明所述幽門螺桿菌抗原的制備步驟包括步驟I細菌培養(yǎng)，包括固態(tài)培養(yǎng)、液態(tài)小量培養(yǎng)和液態(tài)大量培養(yǎng)；步驟2:細菌鑒定、破碎、離心、提取上清、純化及蛋白濃度測定。 在本發(fā)明具體實施例中，作為參考公開了一種制備幽門螺桿菌全菌體抗原的方 法。在本發(fā)明所述的試劑盒中，優(yōu)選的，還含有標準稀釋液、校準品和質控品。優(yōu)選的，所述的標準稀釋液為Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HE PES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、M0PS0緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的任一種，優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液。
在本發(fā)明中，所述校準品、質控品是一種用來與樣本比較，進行結果計算和質量控制的幽門螺桿菌抗體溶液，優(yōu)選的，所述的校準品、質控品是一種幽門螺桿菌抗體溶液，其中包括PBS緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑以及幽門螺桿菌特異性抗體；所述穩(wěn)定劑選自蛋白質、氨基酸、無機鹽、表面活性劑中的一種或多種，優(yōu)選為含0. 05%BSA的磷酸鹽緩沖液，
所述防腐劑選自0. 1%的疊氮鈉、Procl in_300、慶大霉素中的一種或多種。校準品的濃度可以是高濃度單點參考校準品，在使用時用生理鹽水稀釋成多個不同濃度的參考校準品，也可以直接制備成多個不同濃度的參考校準品，還可以是固定濃度的單點參考校準品，與生理鹽水共同繪制校準曲線。本發(fā)明優(yōu)選固定濃度的單點參考校準品，校準品、質控品的濃度分別為50AU/mL、31AU/mL。在具體實施例中，公開了一種制備校準品、質控品的方法。本發(fā)明還公開了所述的試劑盒在制備測定幽門螺桿菌抗體試劑中的應用。進一步的，本發(fā)明還提供了一種用于診斷胃病或胃癌的三聯檢試劑盒，其特征在于包括本發(fā)明所述的用于測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒，還包括胃蛋白酶原I檢測試劑盒及胃蛋白酶原II檢測試劑盒。作為參考，在本發(fā)明的具體實施例部分給出了胃蛋白酶原I檢測試劑盒及胃蛋白酶原II檢測試劑盒的制備方法。本發(fā)明測定樣本的原理是膠乳增強免疫比濁法，所選樣本為人體血清，樣本與試劑Rl預孵育3-5分鐘后(使樣本中的抗體結合位點充分暴露)，加入試劑R2(幽門螺桿菌抗原膠乳試劑)，繼續(xù)孵育3-5分鐘，人體血清中的幽門螺桿菌特異性抗體與試劑R2中的幽門螺桿菌抗原結合，形成不溶性的抗原一抗體復合物，產生一定的濁度，其泊、度高低與檢測樣本中的特異性抗體濃度成正比。在規(guī)定波長下測定該不溶性抗原抗體復合物的吸光度值，與己知濃度的幽門螺桿菌特異性抗體校準品進行比較，則可計算出樣本中幽門螺桿菌抗體的濃度。本發(fā)明提供的試劑為液體雙試劑，適用于各類型全自動生化分析儀和半自動生化分析儀，與現有技術相比，具有以下特點 I、定量檢測，靈敏度高，可達到2. OAU/mL，線性范圍廣，可達到245AU/mL;2、檢測準確度和精密度好；3、特異性強，且不易受干擾4、穩(wěn)定性好，2_8°C可避光貯存至少12個月，各試劑開瓶后至少可以保存14天5、樣本不用預稀釋、操作簡單、快速，從檢測到出結果僅需10分鐘，特別適用于大批量篩查，檢測速度可隨生化分析儀檢測速度的提高而提高。


圖I為本發(fā)明所述試劑盒線性范圍相關性示意圖；圖2為使用本發(fā)明的試劑盒進行檢測的流程示意圖。圖3為胃蛋白酶原I與胃部胃底和胃體的胃粘膜狀況關系圖；圖4為胃蛋白酶原II與胃部胃竇和胃角部位的胃粘膜狀況關系圖。
具體實施例方式本發(fā)明公開了一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳免疫試劑及其制備與應用，本領域技術人員可以借鑒本文內容，通過適當改進工藝參數而實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明所要求保護的技術方案之內。本發(fā)明的產品及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發(fā)明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發(fā)明技術。為使本發(fā)明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明實施例所涉及主要材料及試劑的購買來源Q-2陰離子交換層析柱、DEAE-Sephadex A52 (DEAE-52)層析柱購買自美國GE公司；弗氏完全佐劑，生物防腐劑Proclin-300、2_(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES)購買自SIGMA ； 10% (w/w)聚苯乙烯納米微球溶液購買自美國Bangs ;胃蛋白酶原I抗體PGI-8003和PGI-8015購買自Medix批號0021636，胃蛋白酶原II抗體PGII-8103和PGII-8101購買自Medix批號0023880PVP-K30 (Polyvinylpyrrolidone)、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉、氯化鉀PFG-6000、EDC (1_ (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、吐溫_20等購自國藥集團；牛血清白蛋白(BSA)購自元亨金馬；HP菌種購自上海天呈科技有限公司，編號43504 ；幽門螺桿菌抗體購自上海領潮生物公司，編號L1H01202 ；實施例I幽門螺桿菌抗原的制備(以全菌體蛋白抗原為例)(I)細菌培養(yǎng)(a)固態(tài)培養(yǎng)將HP菌種接種于巧克力培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)3-4天，即產生扁平帶點透明而似膠狀菌落，此即為幽門螺旋桿菌，以接種環(huán)挑起數個菌落，將細菌于巧克力培養(yǎng)基上用三區(qū)劃線法劃開后，37°C培養(yǎng)3-4天，每隔四天傳代一次以保持菌的活性。(b)小量液態(tài)培養(yǎng)將回態(tài)培養(yǎng)出的幽門螺旋桿菌菌落，以接種環(huán)掛下數個菌落，并抖落于125ml錐形瓶中，瓶內盛有BHI培養(yǎng)液50ml，其中含Iml新生小牛血清和0. Iml幽門螺旋桿菌篩選液，將錐形瓶瓶口以棉塞覆蓋緊，37°C培養(yǎng)3 4天。(c)大量液態(tài)培養(yǎng)吸取0. 5ml小量培養(yǎng)菌液，進行初步尿素鑒定以及外觀觀察，確認沒有受到其他雜菌污染。吸取15ml菌液加入500ml錐形瓶中，瓶內盛有BHI培養(yǎng)液250ml，其中含5ml新生小牛血清和0. 5ml幽門螺旋桿菌篩選液，將錐形瓶瓶口以棉塞覆蓋緊，置于37°C培養(yǎng)3 4天。(2)細菌鑒定、破碎、離心和提取上清(a)細菌鑒定外觀型態(tài)觀察觀察菌落在巧克力培養(yǎng)基上的生長型態(tài)，為扁平帶點透明而似膠狀菌落。尿素檢驗法幽門螺桿菌的尿素酶極為豐富，約含菌體蛋白的15%尿素酶催化尿素水解可產生氨氣。取0. 5ml尿素測試溶液置于試管中，加入0. 5ml菌液，于37°C反應約半小時。若含有幽門螺旋桿菌，則測試溶液會由黃色轉變?yōu)榉奂t色。
(b)細菌破碎、離心和提取上清取250mL幽門螺旋桿菌菌液，于8000rpm離心20分鐘，棄上請，沉淀加入IOmlO. 05M甘氨酸緩沖液(pH=7. 0)清洗,于8000rpm離心20分鐘，棄上清，沉淀加入IOml 0. 05M甘氨酸緩沖液(pH=7. 0)混合均勻，超聲破菌，于18. OOOrpm離心20分鐘，取出上清液并將其放置80°C備用。(c)抗原蛋白濃度測定以Bio-Rad蛋白測定試劑盒定量幽門螺桿菌抗原蛋白濃度，首先將胎牛血清蛋白(BSA)溶于PBS中制備下列各濃度的標準品0mg/mL、0. lmg/ml、0. 2mg/ml、0. 3mg/ml、0. 4mg/ml、0. 5mg/ml時,然后以二次水5倍稀釋分析緩沖液(含考馬斯亮蘭R-250).接著在96微孔盤中加入100 ill稀釋后的分析緩沖液，最后分別加入IOiU各濃度標準品及(2)中所獲幽門螺桿菌抗原蛋白質溶液，于室溫反應5分鐘，以可見分光光度計或酶標儀在595nm波長下讀取OD值，繪制標準曲線，并計算幽門螺桿菌抗原蛋白質濃度。
實施例2本發(fā)明試劑盒的組裝I緩沖液配置I. I稀釋液(試劑Rl)的配制將下表I中試劑稱量好放入潔凈容器中，加純化水混勻，測定pH值為7. 4，定容IOOOml0表I稀釋液(試劑Rl)的配制
~m\每升液體用量
磷酸氫二納 2. 88g
磷酸二氫納
氯化納116.88g
PEG-60002g
PVP — k3020g
BSA10.Og
吐溫 -200. 5ml
Proclin-300 0. 5mI 加純化水至1000mlI. 2標準稀釋液的配制將下表2中試劑稱量好放入潔凈容器中，加純化水溶解混勻，測定pH值為7. 4，定容至 1000ml。表2標準稀釋液的配制
權利要求
1.一種用于測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒，其特征在于包括稀釋液、幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑及空白液； 所述的幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的兩種不同粒徑的膠乳顆粒的混合物，所述的膠乳顆粒為聚苯乙烯微球。
2.按照權利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述的稀釋液為含有反應增強劑的緩沖液，所述的緩沖液為Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HE PES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的任一種，優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液；所述的反應增強劑為PEG-300、PEG2000或PEG6000中的任一種或幾種，優(yōu)選為PEG6000 ;更優(yōu)選的所述的稀釋液中還含有2mol/L的氯化鈉。
3.按照權利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述的膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的粒徑為60 - 90nm和粒徑為160 — 200nm的膠乳顆粒的混合物。
4.按照權利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述的膠乳試劑按照以下方法制備得到 (1)膠乳前處理 取Iml未標記的膠乳顆粒加入IOml O. 02M pH7. 4磷酸緩沖液中，離心機IOOOOrpm離心20min,去掉上清液、再用IOml O. 02M pH7. 4磷酸緩沖液重懸顆粒,離心機IOOOOrpm離心20min，去掉上清并用5ml O. 02M pH7. 4磷酸緩沖液重懸、4°C保存待用； (2)膠乳顆粒標記 將步驟(I)處理后膠乳用O. 02M pH6. IMES緩沖液將膠乳顆粒稀釋成10mg/ml濃度，然后加入Img EDC,混勻活化15分鐘，離心8000rpm棄去上清，并用O. 02MPH7. 4磷酸緩沖液重懸，加入Img幽門螺桿菌抗原于10mg/ml 2ml膠乳液體中，室溫混勻2 — 4小時,離心機SOOOrpm離心15分鐘，將上清分離到另外的容器中備用，顆粒使用封閉液重懸，并室溫混勻I小時，離心機SOOOrpm離心15min，沉淀復溶于分散液，將標記完成的膠乳顆粒分裝成Iml/支，4°C保存； (3)使用上述步驟分別對粒徑60- 90nm和160 — 200nm的膠乳進行分別標記，標記結束后將所述60 - 90nm膠乳和所述160 — 200nm膠乳進行混合，按質量體積百分比計，使60 — 90nm 膠乳的濃度為 O. 673-0. 732%，使 160 — 200nm 膠乳的濃度為 O. 135-0. 323%,混合后進行保存，優(yōu)選的使用上述流程分別對粒徑70 - 90nm和160 — ISOnm的膠乳進行分別標記，標記結束后將所述70 - 90nm膠乳和所述160 — ISOnm膠乳進行混合，按質量體積百分比計，使70 - 90nm膠乳濃度為O. 708-0. 732%，使160 — 180nm膠乳濃度為O.135-0. 235%，混合后進行保存； 所述的封閉液為含有5g/L BSA的O. 02M PH7. 4的磷酸緩沖液； 所述的分散液由BSA，吐溫-20、PVP-K30以及生物防腐劑通過O. 02M PH7. 4的磷酸緩沖液配制而成，其中BSA濃度為lg/L，吐溫-20濃度為O. 05% (v/v), PVP-K30濃度為2g/L，生物防腐劑濃度為O. 05% (v/v)。
5.按照權利要求I所述的試劑盒，其特征在于所述抗原包括幽門螺桿菌全菌體蛋白抗原、幽門螺桿菌尿素酶抗原、幽門螺桿菌細胞毒素相關蛋白A抗原或幽門螺桿菌細胞空泡毒素A抗原中的一種或多種。
6.按照權利要求I所述的試劑盒，其特征在于還含有標準稀釋液、校準品和質控品。
7.按照權利要求7所述的試劑盒，其特征在于所述的標準稀釋液為Tris/HCl緩沖液、磷酸鹽緩沖液、HE PES緩沖液、甘氨酸緩沖液、巴比妥緩沖液、MOPSO緩沖液、DIPSO緩沖液或HEPPS緩沖液中的任一種，優(yōu)選為磷酸鹽緩沖液。
8.按照權利要求7所述的試劑盒，其特征在于所述的校準品、質控品是一種幽門螺桿菌抗體溶液，其中包括PBS緩沖液、穩(wěn)定劑、防腐劑以及幽門螺桿菌特異性抗體； 所述穩(wěn)定劑選自蛋白質、氨基酸、無機鹽、表面活性劑中的一種或多種 所述防腐劑選自O. 1%的疊氮鈉、Proclin-300、慶大霉素中的一種或多種。
9.權利要求1-9任一項所述的試劑盒在制備測定幽門螺桿菌抗體試劑中的應用。
10.一種用于診斷胃病或胃癌的三聯檢試劑盒，其特征在于包括權利要求1-8任一項所述的試劑盒，還包括胃蛋白酶原I檢測試劑盒及胃蛋白酶原II檢測試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測定幽門螺桿菌抗體的膠乳增強免疫比濁試劑盒及其制備方法和應用。該試劑盒的組成包括稀釋液、幽門螺桿菌抗原的膠乳試劑和空白液，還可包括校準品和質控品。所述的幽門螺桿菌抗原為幽門螺桿菌抗原，可為幽門螺桿菌全菌體蛋白抗原、幽門螺桿菌尿素酶抗原、幽門螺桿菌細胞毒素相關蛋白A抗原或幽門螺桿菌細胞空泡毒素A抗原中的一種或多種，所述膠乳試劑為已吸附幽門螺桿菌抗原的兩種不同粒徑膠乳顆粒的混合物，制備所述校準品、質控品所需的幽門螺桿菌抗體源自感染幽門螺桿菌患者血清中IgM和/或IgG。本發(fā)明適用于各類型全自動生化分析儀和半自動生化分析儀，具有檢測快速、敏感度高、特異性強和準確性好等優(yōu)點。
文檔編號G01N33/574GK102662059SQ20121014741
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月11日 優(yōu)先權日2012年5月11日
發(fā)明者金鑫 申請人:北京美康生物技術研究中心