專利名稱：一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法。
背景技術(shù)：
目前，磷霉素1、2_環(huán)氧丙基磷酸二鈉鹽，是一種游離酸，最初從Mi^ptomyces fradicle中分離，對革蘭氏陽性和陰性菌有效，其作用機理是抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成導(dǎo)致細(xì)菌死亡。磷霉素能與一種細(xì)菌細(xì)胞壁合成酶相結(jié)合，阻礙細(xì)菌利用有關(guān)物質(zhì)合成細(xì)胞壁的第一步反應(yīng)，從而起殺菌作用，磷霉素抗菌譜較廣，主要用于金萄菌、大腸埃希菌、肺炎雷伯菌、產(chǎn)氣桿菌、沙雷菌屬、志賀菌屬、銅綠假單孢菌等敏感菌引起的呼吸道、泌尿道、腸道和皮膚軟組織感染，以及敗血癥、腹膜炎、腦膜炎等。綜上所述其療效僅次于青霉素類，發(fā)生過敏性休克的機會甚少。所以受到廣大的醫(yī)務(wù)人員及患者的歡迎，使用磷霉素的診所和個人隨處可見。順丙烯磷酸是制備磷霉素的中間體，丙二稀磷酸為順丙烯磷酸的前體，在磷霉素的制備過程中，順丙烯磷酸中的反異構(gòu)體及丙二稀磷酸的含量直接影響到磷霉素系列產(chǎn)品的收率及質(zhì)量。為保證藥品的質(zhì)量及其安全性，需建立檢測方法對磷霉素中順丙烯磷酸、順丙烯磷酸中的反異構(gòu)體及丙二稀磷酸的含量進(jìn)行控制。目前，順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，未見相關(guān)報道。因此，研制開發(fā)一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法一直是亟待解決的新課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法， 本方法采用高效液相色譜法監(jiān)控順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其前體丙二稀磷酸的含量，以確保能夠持續(xù)穩(wěn)定地生產(chǎn)出質(zhì)量均一的合格產(chǎn)品。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，所述方法包括如下步驟(1)色譜條件色譜柱C-18柱，4. 6mmX250mmX5. Oym ；流速1. Oml/min ；紫外檢測器，檢測波長 225nm，進(jìn)樣量 10 μ 1 ；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；(2)供試液制備取供試品0. 1 μ 1，用流動相溶解并稀釋到25ml，過濾；(3)取供試液，進(jìn)樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12. 3min，其順反異構(gòu)體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38，采用面積歸一化法計算各雜質(zhì)含量；所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2%的四丁基氫氧化銨水溶液； 所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為；所述流動相磷酸氫二鉀水溶液的PH需用磷酸調(diào)到7.0;所述流動相磷酸氫二鉀水溶液與甲醇體積比為90 1;所述檢測方法根據(jù)保留時間及相對保留值對順丙烯磷酸及其順反異構(gòu)體、丙二稀磷酸進(jìn)行識別。本發(fā)明的要點在于它的檢測方法。該檢測方法的基本原理是，順丙烯磷酸、丙二稀磷酸、順丙烯磷酸反式異構(gòu)體在流動相中的保留時間不同，利用HPLC檢測方法分別計算其含量。一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有通過該方法檢測順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)，重現(xiàn)性、靈敏度、準(zhǔn)確度均能符合要求等優(yōu)點，將廣泛的應(yīng)用于藥物分析領(lǐng)域中。
具體實施例方式以下實例將有助于對本發(fā)明的了解，但這些實例僅為了對本發(fā)明加以說明，本發(fā)明并不限于這些內(nèi)容。一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，所述方法包括如下步驟(1)色譜條件色譜柱C-18柱，4. 6_Χ250_Χ5. Ομπι ；流速1. Oml/min ；紫外檢測器，檢測波長 225nm，進(jìn)樣量 10 μ 1 ；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；(2)供試液制備取供試品0. 1 μ 1，用流動相溶解并稀釋到25ml，過濾；(3)取供試液，進(jìn)樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12. 3min，其順反異構(gòu)體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38，采用面積歸一化法計算各雜質(zhì)含量；所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2%的四丁基氫氧化銨水溶液； 所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為；所述流動相磷酸氫二鉀水溶液的PH需用磷酸調(diào)到7.0;所述流動相磷酸氫二鉀水溶液與甲醇體積比為90 1;所述檢測方法根據(jù)保留時間及相對保留值對順丙烯磷酸及其順反異構(gòu)體、丙二稀磷酸進(jìn)行識別。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步具體描述1.相關(guān)溶液及流動相的配制1. 1流動相的制備取磷酸二氫鉀6. 8g，加水適量溶解，加入20. Oml質(zhì)量百分比濃度為55%的四丁基氫氧化銨水溶液，用水稀釋到1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH到7. O。量取該液 900ml，與IOOml甲醇混合，過濾，脫氣。1.2供試品溶液制備1. 2. 1取供試品(批號:1)0. 1ml，用流動相溶解并稀釋到25ml，過濾。1. 2. 2取供試品(批號2)0. 1ml，用流動相溶解并稀釋到25ml，過濾。1. 2. 3取供試品(批號3)0. 1ml，用流動相溶解并稀釋到25ml，過濾。2.測定方法將3批供試品溶液各10 μ 1分別注入液相色譜儀，記錄圖譜。順丙烯磷酸保留時間為12. 3min，其順反異構(gòu)體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38。采用面積歸一化法計算各雜質(zhì)含量。
3.檢測結(jié)果供試品1丙二稀磷酸的峰面積為811140，順丙烯磷酸的峰面積為3436614，順丙烯磷酸反式異構(gòu)體的峰面積為1409M8丙二稀磷酸含量=811140+(811140+3436614+1409248)X 100%= 14. 34%順丙烯磷酸含量=3436614+(811140+3436614+1409248) X 100%= 60. 75%順丙烯磷酸反式異構(gòu)體含量=1409248+(811140+3436614+1409248)X 100% =
24.91%供試品2丙二稀磷酸的峰面積為831520，順丙烯磷酸的峰面積為3386510，順丙烯磷酸反式異構(gòu)體的峰面積為1438236丙二稀磷酸含量=831520+(831520+3386510+1438236)X 100%= 14. 70%順丙烯磷酸含量=3386510+(831520+3386510+1438236) X 100%= 59. 87%順丙烯磷酸反式異構(gòu)體含量=1438236+(831520+3386510+1438236) X 100% =
25.43%供試品3丙二稀磷酸的峰面積為820377，順丙烯磷酸的峰面積為3356745，順丙烯磷酸反式異構(gòu)體的峰面積為1436502丙二稀磷酸含量1 = 820377^- (820377+3356745+1436502) X 100%= 14. 61%順丙烯磷酸含量1 = 3356745 + (820377+3356745+1436502) X 100%= 59. 80%順丙烯磷酸反式異構(gòu)體含量=1436502+(820377+3356745+1436502) X 100% = 25. 59%。
權(quán)利要求
1.一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于所述方法包括如下步驟(1)色譜條件色譜柱c-18柱，4. 6πιπιΧ250πιπιΧ5.0μπι;流速1. Oml/min ；紫外檢測器，檢測波長 225nm，進(jìn)樣量 10 μ 1 ；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；(2)供試液制備取供試品0.1 μ 1，用流動相溶解并稀釋到25ml，過濾；(3)取供試液，進(jìn)樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12.3min，其順反異構(gòu)體相對保留值為1. 15，丙二稀磷酸相對保留值為0. 38，采用面積歸一化法計算各雜質(zhì)含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2%的四丁基氫氧化銨水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為55%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于所述流動相磷酸氫二鉀水溶液的PH需用磷酸調(diào)到7. O。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于所述流動相磷酸氫二鉀水溶液與甲醇體積比為90 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于所述檢測方法根據(jù)保留時間及相對保留值對順丙烯磷酸及其順反異構(gòu)體、丙二稀磷酸進(jìn)行識別。
全文摘要
一種應(yīng)用于藥物分析領(lǐng)域中的順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)的檢測方法，所述方法包括如下步驟色譜條件色譜柱C-18柱，4.6mm×250mm×5.0μm；流速1.0ml/min；紫外檢測器，檢測波長225nm，進(jìn)樣量10μl；流動相50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液-甲醇；供試液制備取供試品0.1μl，用流動相溶解并稀釋到25ml，過濾；取供試液，進(jìn)樣10微升，記錄圖譜，順丙烯磷酸保留時間為12.3min，其順反異構(gòu)體相對保留值為1.15，丙二稀磷酸相對保留值為0.38，采用面積歸一化法計算各雜質(zhì)含量；所述流動相中50mmol/L的磷酸氫二鉀水溶液中含2％的四丁基氫氧化銨水溶液；所述四丁基氫氧化銨水溶液的濃度為55％。該發(fā)明通過該方法檢測順丙烯磷酸中順反異構(gòu)體及其相關(guān)雜質(zhì)，重現(xiàn)性、靈敏度、準(zhǔn)確度均能符合要求。
文檔編號G01N30/02GK102507758SQ20111031035
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月13日
發(fā)明者馮文宇, 周秀峰, 唐奎山, 婁玉濤, 孟濤, 尤楠, 蘇貴弟, 鄧暤, 金玉坤 申請人:東北制藥集團(tuán)股份有限公司