專利名稱：一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種煙酸和煙酰胺的檢測方法，尤其涉及一種用于牛奶和奶粉制品中煙酸和煙酰胺的檢測方法。
背景技術(shù)：
目前，國內(nèi)外關(guān)于煙酸和煙酰胺的檢測方法都比較復(fù)雜，一般有微生物法、高效液相法和酶聯(lián)免疫法。酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果與實際數(shù)值出入較大，高效液相法檢測的下限較微生物法要高出很多。微生物法檢測乳品中煙酸和煙酰胺是利用植物乳桿菌(Lactobaci I Iusplantarum) ,ATCC 8014對煙酸和煙酰胺的特異性，在含有煙酸和煙酰胺樣品中生長產(chǎn)生的酸度和形成的光密度來測定煙酸和煙酰胺的含量?，F(xiàn)有的微生物法檢測煙酸和煙酰胺需要經(jīng)過制備測試菌液、加入緩沖液和水水解，加入鹽酸調(diào)整PH值進行樣品前處理、制作標(biāo)準(zhǔn) 曲線、滅菌、接種、培養(yǎng)、使用風(fēng)光光度計測定。但是檢測過程復(fù)雜，使用分光管妒忌需將每個樣品放入比色皿，操作繁瑣；容易造成交叉污染，結(jié)果重現(xiàn)性不好。基于上述問題，開發(fā)一種操作簡單、重現(xiàn)性好、結(jié)果穩(wěn)定的煙酸和煙酰胺檢測方法就尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法，其操作簡單、重現(xiàn)性好、結(jié)果穩(wěn)定。本發(fā)明提供了一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法，包括
a、將牛奶或奶粉定容混勻得到溶解液；
b、將溶解液殺菌，得到滅菌液，存儲滅菌液；
C、配制煙酸和煙酰胺的培養(yǎng)基液，將培養(yǎng)基液殺菌得到殺菌基液，存儲殺菌基液；
d、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
e、分別將殺菌基液、滅菌液、植物乳桿菌和標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入微孔板條的相應(yīng)微孔中，孵育得到測試液；
f、處理測試液，使微生物懸濁其中，用酶標(biāo)儀讀取它們的混濁度；
g、繪制與標(biāo)準(zhǔn)品溶液相對應(yīng)的測試液中煙酸和煙酰胺的濃度與測試液混濁度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
h、將溶解液相對應(yīng)的測試液的混濁度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，換算得到牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的再一種示意性的實施方式中，步驟a中牛奶的取樣量為lmL，且放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到溶解液。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的另一種示意性的實施方式中，步驟a中奶粉的取樣量為lg，且放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到溶解液。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟b中溶解液在超凈臺用0. 2 ii m或0. 22 ii m無菌濾膜過濾殺菌，得到滅菌液，將滅菌液存儲于I. 5mL或2. OmL無菌試管中。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟c中加入IOmL無菌水至煙酸和煙酰胺培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋，搖勻，得到培養(yǎng)基液，將培養(yǎng)基液在90-100°C水浴中加熱至少5分鐘，其間振蕩至少2次，迅速冷卻至室溫，使用
0.2 ii m或0. 22 ii m無菌濾膜過濾殺菌培養(yǎng)基液得到殺菌基液，將殺菌基液存儲于15mL無菌離心管中。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步 驟d中配制了煙酸和煙酰胺濃度分別為0,0. 016,0. 032,0. 064,0. 096,0. 160mg/100g的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，且標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制方法為加入I. 8-2. 2mL無菌水至煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶中得到煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用移液器溶解煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用標(biāo)準(zhǔn)品瓶中的溶液沖洗移液器尖，得到標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液，使用標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液配制得到不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟e中取與標(biāo)準(zhǔn)品溶液和滅菌液份數(shù)對應(yīng)的微孔板條，分別用移液器吸取150 i! L殺菌基液至板條的微孔中，分別用移液器吸取150 UL標(biāo)準(zhǔn)品溶液和滅菌液至指定的全部微孔中，分別用移液器吸取植物乳桿菌至板條的微孔中，用粘合箔蓋住微孔板條的微孔，在370C ±1°C黑暗條件下孵育44-48小時。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟f中將微孔板在漩渦混合器上振蕩，使微生物懸濁在測試液中，用破壞微孔測試液表面所有的泡沫，用酶標(biāo)儀在610-630nm或540_550nm條件下分別讀取測試液的混濁度。在一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的又一種示意性的實施方式中，步驟h中將與溶解液相對應(yīng)的測試液的混濁度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中得到其煙酸和煙酰胺濃度，將與溶解液相對應(yīng)的測試液的煙酸和煙酰胺濃度換算得到牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。本發(fā)明提供的檢測方法，操作過程簡單，且微孔板均為一次性使用，避免了測試中的交叉干擾，結(jié)果重現(xiàn)性好。下文將以明確易懂的方式，結(jié)合實施例，對一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法的上述特性、技術(shù)特征、優(yōu)點及其實現(xiàn)方式予以進一步說明。
具體實施例方式I檢測原理
煙酸和煙酰胺是植物乳桿菌(Lactobacillus pi ant arum) ,ATCC 8014生長所必需的營養(yǎng)素。在待測樣品處理后，使其中只含有植物乳桿菌，植物乳桿菌的生長響應(yīng)與待測樣品中煙酸和煙酰胺含量呈線性關(guān)系。用比濁法測定待測樣品中細(xì)菌增殖后的混濁度，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較計算出待測樣品中煙酸和煙酰胺的含量。2儀器設(shè)備與試劑 2.1儀器設(shè)備水浴鍋(能達到95 °C)，酶標(biāo)儀(610-630或540-550nm)，微孔板，超凈工作臺，培養(yǎng)箱 37 °C ± I °C，0. 2 ii m 或 0. 22 ii m 無菌濾膜。可調(diào)移液器 0. 5-10 u L ,20-200 y L 和100-1000 u L,移液器頭20-200 y L和100-1000 u L (需滅菌)，50mL離心管，15mL離心管(需滅菌)，I. 5mL或2. OmL離心管(需滅菌)，標(biāo)準(zhǔn)品瓶，5mL或IOmL —次性無菌注射器，煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶。2. 2 試劑 所用試劑如下
(1)植物乳桿菌(Lactobacilluspi ant arum), ATCC 8014,市售;
(2 )煙酸和煙酰胺粉末標(biāo)準(zhǔn)品，市售，容納煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品的瓶子即為煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶；
(3)煙酸和煙酰胺培養(yǎng)基，其中含有除煙酸和煙酰胺外，植物乳桿菌生長所需要的其他物質(zhì)，自制;·
(4)蒸餾水或純水，自制。實施例I
I、牛奶處理方法如下
加入ImL牛奶樣品至50mL離心管中，準(zhǔn)確加入蒸餾水或純水39mL，漩渦混勻得到溶解液。在超凈臺中用0. 2 iim無菌濾膜過濾殺菌得到滅菌液，將滅菌液存儲至I. 5mL無菌試管中。其中，可以根據(jù)需要使用0. 22 y m無菌濾膜，與0. 2 y m無菌濾膜相比兩者并不產(chǎn)生使用效果上的差別；同時可以根據(jù)需要使用2. OmL無菌試管，與I. 5mL無菌試管相比兩者并不產(chǎn)生使用效果上的差別。本方法的檢出限是0. 016mg/100g,檢測范圍是0. 016-0. 16mg/100g。2、培養(yǎng)基處理方法如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。加入IOmL無菌水至煙酸和煙酰胺培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋，搖勻得到培養(yǎng)基液。將培養(yǎng)基液在90°C水浴中加熱5分鐘，其間振蕩至少2次(保證瓶子封閉)，迅速冷卻至室溫(低于30°C)。使用0. 2 iim無菌濾膜過濾殺菌得到殺菌基液，將殺菌基液存儲至15mL無菌離心管中。3、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。加入I. SmL無菌水至煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶中，用移液器溶解煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，為了使煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品充分溶解，還可以用標(biāo)準(zhǔn)品瓶中的溶液沖洗移液器尖，得到標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液，取6個I. 5mL無菌管，使用無菌水和標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液配制煙酸和煙酰胺濃度分別為 0,0. 016,0. 032,0. 064,0. 096,0. 160mg/100g 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。4、測試液的制備過程如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。(I)取微孔板條并在板上固定，其中微孔板上微孔的數(shù)量為七個，它們分別可用來盛放六個煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以及牛奶配制得到的滅菌液，未使用的微孔板條立即放回原來的箔袋中，并與干燥劑一起重新封好，儲存在2-8°C條件下；
(2)分別用移液器吸取150y L殺菌基液至每一個微孔中；(3)分別用移液器吸取150u L不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0、0. 016,0. 032、0. 064,0. 096,0. 160mg/100g)和滅菌液至指定的微孔中，即吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液至微孔板上的六個微孔中，吸取滅菌液至剩下的一個微孔中；
(4)分別用移液器吸取植物乳桿菌5u L菌液至每一個微孔中；
(5)用粘合箔蓋住微孔，除去粘合箔上的保護層，將其平放在微孔條上，用手或壓舌板將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條，保證粘合箔和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分。(6)在36°C黑暗條件下(可用孵育器)孵育44小時，得到七份測試液。5、使用酶標(biāo)儀測量測試液
再次向下擠壓粘合箔，將微孔板向上放置在桌面上，在漩渦混合器上振蕩，使微生物分別懸濁于測試液中，沿對角揭去粘合箔。用移液器槍頭破壞微孔內(nèi)測試液表面所有的泡沫。 使用酶標(biāo)儀在610-630nm條件下分別讀取七份測試液的混濁度。6、數(shù)據(jù)處理
繪制酶標(biāo)儀混濁度與六個標(biāo)準(zhǔn)品溶液相對應(yīng)的測試液中煙酸和煙酰胺濃度之間的曲線，其中縱坐標(biāo)為酶標(biāo)儀混濁度，橫坐標(biāo)為測試液中煙酸和煙酰胺濃度，擬合得到曲線的方程。將于溶解液對應(yīng)的測試液的混濁度數(shù)據(jù)代入擬合得到的方程中，計算得到測試液中煙酸和煙酰胺濃度，根據(jù)牛奶到溶解液到測試液的稀釋關(guān)系，換算出牛奶中煙酸和煙酰胺的濃度。一種牛奶中煙酸和煙酰胺的檢測方法，操作過程簡單，且微孔板均為一次性使用，避免了測試中的交叉干擾，結(jié)果重現(xiàn)性好。實施例2
I、牛奶處理方法如下
加入ImL牛奶樣品至50mL離心管中，準(zhǔn)確加入蒸餾水或純水39mL，漩渦混勻得到溶解液。在超凈臺中用0. 22 ii m無菌濾膜過濾殺菌得到滅菌液，將滅菌液存儲至2. OmL無菌試管中。本方法的檢出限是0. 016mg/100g,檢測范圍是0. 016-0. 16mg/100g。2、培養(yǎng)基處理方法如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。加入IOmL無菌水至煙酸和煙酰胺培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋，搖勻得到培養(yǎng)基液。將培養(yǎng)基液在100°c水浴中加熱10分鐘，其間振蕩至少2次(保證瓶子封閉)，迅速冷卻至室溫(低于30°C)。使用0. 22 iim無菌濾膜過濾殺菌得到殺菌基液，將殺菌基液存儲至15mL無菌
離心管中。3、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。加入2. 2mL無菌水至煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶中，用移液器溶解煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用標(biāo)準(zhǔn)品瓶中的溶液沖洗移液器尖，得到標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液，取6個I. 5mL無菌管，使用無菌水和標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液配制煙酸和煙酰胺濃度分別為0、0. 016,0. 032,0. 064,0. 096、
0.160mg/100g的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
4、測試液的制備過程如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。(I)取微孔板條并在板上固定，其中微孔板上微孔的數(shù)量為七個，它們分別可用來盛放六個煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以及牛奶配制得到的滅菌液，未使用的微孔板條立即放回原來的箔袋中，并與干燥劑一起重新封好，儲存在2-8°C條件下；
(2)分別用移液器吸取150y L殺菌基液至每一個微孔中；
(3)分別用移液器吸取150u L不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0、0. 016,0. 032、0. 064,0. 096,0. 160mg/100g)和滅菌液至指定的微孔中，即吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液至微孔板上的六個微孔中，吸取滅菌液至剩下的一個微孔中；
(4)分別用移液器吸取植物乳桿菌5u L菌液至每一個微孔中；
(5)用粘合箔蓋住微孔，除去粘合箔上的保護層，將其平放在微孔條上，用手或壓舌板將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條，保證粘合箔和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分。(6)在38°C黑暗條件下(可用孵育器)孵育48小時，得到七份測試液。5、使用酶標(biāo)儀測量測試液
再次向下擠壓粘合箔，將微孔板向上放置在桌面上，在漩渦混合器上振蕩，使微生物分別懸濁于測試液中，沿對角揭去粘合箔。用移液器槍頭破壞微孔內(nèi)測試液表面所有的泡沫。使用酶標(biāo)儀在540-550nm條件下分別讀取七份測試液的混濁度。 6、數(shù)據(jù)處理
繪制酶標(biāo)儀混濁度與六個標(biāo)準(zhǔn)品溶液相對應(yīng)的測試液中煙酸和煙酰胺濃度之間的曲線，其中縱坐標(biāo)為酶標(biāo)儀混濁度，橫坐標(biāo)為測試液中煙酸和煙酰胺濃度，擬合得到曲線的方程。將于溶解液對應(yīng)的測試液的混濁度數(shù)據(jù)代入擬合得到的方程中，計算得到測試液中煙酸和煙酰胺濃度，根據(jù)牛奶到溶解液到測試液的稀釋關(guān)系，換算出牛奶中煙酸和煙酰胺的濃度。實施例3
I、奶粉處理方法如下
加入Ig奶粉至50mL離心管中，準(zhǔn)確加入蒸餾水或純水39mL，漩渦混勻得到溶解液。在超凈臺中用0. 22 ii m無菌濾膜過濾殺菌得到滅菌液，將滅菌液存儲至2. OmL無菌試管中。本方法的檢出限是0. 016mg/100g,檢測范圍是0. 016-0. 16mg/100g。2、培養(yǎng)基處理方法如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。加入IOmL無菌水至煙酸和煙酰胺培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋，搖勻得到培養(yǎng)基液。將培養(yǎng)基液在100°c水浴中加熱20分鐘，其間振蕩至少2次(保證瓶子封閉)，迅速冷卻至室溫(低于30°C)。使用0. 22 iim無菌濾膜過濾殺菌得到殺菌基液，將殺菌基液存儲至15mL無菌離心管中。3、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。加入2. 2mL無菌水至煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶中，用移液器溶解煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用標(biāo)準(zhǔn)品瓶中的溶液沖洗移液器尖，得到標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液，取6個I. 5mL無菌管，使用無菌水和標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液配制煙酸和煙酰胺濃度分別為0、0. 016,0. 032,0. 064,0. 096、
0.160mg/100g的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。4、測試液的制備過程如下
本步驟中所有操作需在超凈臺內(nèi)進行。(I)取微孔板條并在板上固定，其中微孔板上微孔的數(shù)量為七個，它們分別可用來盛放六個煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以及牛奶配制得到的滅菌液，未使用的微孔板條立即放回原來的箔袋中，并與干燥劑一起重新封好，儲存在2-8°C條件下；
(2)分別用移液器吸取150y L殺菌基液至每一個微孔中；
(3)分別用移液器吸取150u L不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0、0. 016,0. 032、
0.064,0. 096,0. 160mg/100g)和滅菌液至指定的微孔中，即吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液至微孔板上的六個微孔中，吸取滅菌液至剩下的一個微孔中；
(4)分別用移液器吸取植物乳桿菌5u L菌液至每一個微孔中；
(5)用粘合箔蓋住微孔，除去粘合箔上的保護層，將其平放在微孔條上，用手或壓舌板將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條，保證粘合箔和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分。(6)在37°C黑暗條件下(可用孵育器)孵育48小時，得到七份測試液。5、使用酶標(biāo)儀測量測試液
再次向下擠壓粘合箔，將微孔板向上放置在桌面上，在漩渦混合器上振蕩，使微生物分別懸濁于測試液中，沿對角揭去粘合箔。用移液器槍頭破壞微孔內(nèi)測試液表面所有的泡沫。使用酶標(biāo)儀在540-550nm條件下分別讀取七份測試液的混濁度。6、數(shù)據(jù)處理
繪制酶標(biāo)儀混濁度與六個標(biāo)準(zhǔn)品溶液相對應(yīng)的測試液中煙酸和煙酰胺濃度之間的曲線，其中縱坐標(biāo)為酶標(biāo)儀混濁度，橫坐標(biāo)為測試液中煙酸和煙酰胺濃度，擬合得到曲線的方程。將于溶解液對應(yīng)的測試液的混濁度數(shù)據(jù)代入擬合得到的方程中，計算得到測試液中煙酸和煙酰胺濃度，根據(jù)奶粉到溶解液到測試液的稀釋關(guān)系，換算出奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。在本文中，“示意性”表示“充當(dāng)實例、例子或說明”，不應(yīng)將在本文中被描述為“示意性”的任何圖示、實施方式解釋為一種更優(yōu)選的或更具優(yōu)點的技術(shù)方案。應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書是按照各個實施例描述的，但并非每個實施例僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。上文所列出的一系列的詳細(xì)說明僅僅是針對本發(fā)明的可行性實施例的具體說明，它們并非用以限制本發(fā)明的保護范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實施例或變更均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法，其包括 a、將牛奶或奶粉定容混勻得到溶解液； b、將所述溶解液殺菌，得到滅菌液，存儲所述滅菌液； C、配制煙酸和煙酰胺的培養(yǎng)基液，將所述培養(yǎng)基液殺菌得到殺菌基液，存儲所述殺菌基液； d、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液； e、分別將所述殺菌基液、所述滅菌液、植物乳桿菌和所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入微孔板條的相應(yīng)微孔中，孵育得到測試液； f、處理所述測試液，使微生物懸濁其中，用酶標(biāo)儀讀取它們的混濁度； g、繪制與所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液相對應(yīng)的所述測試液中煙酸和煙酰胺的濃度與所述測試液混濁度的標(biāo)準(zhǔn)曲線； h、將所述溶解液相對應(yīng)的所述測試液的混濁度代入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線中，換算得到所述牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。
2.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟a為取所述牛奶lmL，放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到所述溶解液。
3.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟a為取所述奶粉lg，放入50mL的離心管中用蒸餾水或純水定容并漩渦混勻得到所述溶解液。
4.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟b中所述溶解液在超凈臺用0. 2pm或0.22 um無菌濾膜過濾殺菌，得到所述滅菌液，將所述滅菌液存儲于I. 5mL或2. OmL無菌試管中。
5.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟c中加入IOmL無菌水至煙酸和煙酰胺培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋，搖勻，得到所述培養(yǎng)基液，將所述培養(yǎng)基液在90-100°C水浴中加熱至少5分鐘，其間振蕩至少2次，迅速冷卻至室溫，使用0.2 或0.22 無菌濾膜過濾殺菌所述培養(yǎng)基液得到所述殺菌基液，將所述殺菌基液存儲于15mL無菌離心管中。
6.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟d中配制了煙酸和煙酰胺濃度分別為O、0.016,0. 032,0. 064,0. 096,0. 160mg/100g的所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液，且所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制方法為加入I. 8-2. 2mL無菌水至煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品瓶中得到煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用移液器溶解煙酸和煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，得到標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液，使用所述標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液配制得到不同濃度的所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
7.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟e中取與所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和所述滅菌液份數(shù)對應(yīng)的微孔板條，分別用移液器吸取150 y L所述殺菌基液至板條的全部微孔中，分別用移液器吸取150 UL所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和所述滅菌液至指定的微孔中，分別用移液器吸取植物乳桿菌至板條的微孔中，用粘合箔蓋住微孔板條的微孔，在37°C 土1°C黑暗條件下孵育44-48小時。
8.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟f中將所述微孔板在漩渦混合器上振蕩，使微生物懸池在所述測試液中，用破壞所述測試液表面所有的泡沫，用酶標(biāo)儀在610-630nm或540-550nm條件下分別讀取所述測試液的混濁度。
9.如權(quán)利要求I所述的檢測方法，其中步驟h中將與所述溶解液相對應(yīng)的測試液的混濁度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中得到其煙酸和煙酰胺濃度，將與所述溶解液相對應(yīng)的測試液的煙酸和煙酰胺濃度換算得到所述牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度 。
全文摘要
一種牛奶和奶粉中煙酸和煙酰胺的檢測方法，包括a、將牛奶或奶粉原樣定容混勻得到溶解液；b、將溶解液殺菌，得到并存儲滅菌液；c、配制煙酸和煙酰胺的培養(yǎng)基液，將培養(yǎng)基液殺菌得到殺菌基液；d、配制不同煙酸和煙酰胺濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；e、分別將殺菌基液、滅菌液、植物乳桿菌和標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入微孔板條的相應(yīng)微孔中，孵育得到測試液；f、處理測試液，使微生物懸濁其中，用酶標(biāo)儀讀取它們的混濁度；g、繪制測試液中煙酸和煙酰胺的濃度與測試液混濁度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；h、將溶解液相對應(yīng)的測試液的混濁度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到牛奶或奶粉中煙酸和煙酰胺的濃度。本發(fā)明操作過程簡單，且微孔板均為一次性使用，避免了測試中的交叉干擾，結(jié)果重現(xiàn)性好。
文檔編號G01N33/04GK102759605SQ20111010776
公開日2012年10月31日 申請日期2011年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月28日
發(fā)明者劉衛(wèi)星, 劉志楠, 劉曉川, 喻東威, 李梅, 杜麗, 薛志清, 趙源 申請人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團)股份有限公司