專利名稱：治療和診斷表達slc34a2(tat211=seqid2)的腫瘤的抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明致力于可用于診斷和治療哺乳動物中的腫瘤的物質(zhì)組合物，及使用那些物質(zhì)組合物來診斷和治療哺乳動物中的腫瘤的方法。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤(癌)是在美國位居心臟病之后的第二位致死原因(Boring et al.，CACancel J. Clin. 43:7(1993))。癌的特征為衍生自正常組織的異?；蚰[瘤性細(xì)胞的數(shù)量增力口，所述細(xì)胞增殖形成腫瘤塊；這些贅生性腫瘤細(xì)胞侵入鄰近組織；及產(chǎn)生惡性細(xì)胞，所述惡性細(xì)胞最終經(jīng)血液或淋巴系統(tǒng)傳播到局部淋巴結(jié)并經(jīng)稱為轉(zhuǎn)移的過程傳播到遠(yuǎn)處。在癌性狀態(tài)，細(xì)胞在正常細(xì)胞不生長的條件下增殖。癌自身表現(xiàn)為多種形式，特征為不同程度的侵襲力和進攻性。在尋找癌癥診斷和治療的有效細(xì)胞靶物的嘗試中，研究人員試圖鑒定在一種或多種特定類型的癌細(xì)胞的表面上與一種或多種正常非癌性細(xì)胞相比特異性表達的跨膜多肽膜相關(guān)多肽。通常，此類膜相關(guān)多肽在癌細(xì)胞的表面上比在非癌性細(xì)胞的表面上表達的量更大。此類腫瘤相關(guān)細(xì)胞表面抗原多肽的鑒定導(dǎo)致了經(jīng)基于抗體的療法特異性靶向破壞癌細(xì)胞的能力。在這點上，注意到基于抗體的療法已經(jīng)證明在某些癌癥的治療中是非常有效的。例如，丨丨丨..土(.:1.:丨)「丨—丨 貧和RIrH .;XAN.1K都來自Genentech Inc. , South SanFrancisco, California)是已經(jīng)分別成功用于治療乳腺癌和非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤的抗體。更具體的說，i U.:RC[.:P'n；S 是從重組DNA衍生的人源化單克隆抗體，其選擇性結(jié)合人表皮生長因子受體2 (HER2)原癌基因的胞外結(jié)構(gòu)域。HER2蛋白過表達在25-30%的原發(fā)性乳腺癌中觀察到。Rn'〖AAN.K.是遺傳工程嵌合鼠/人單克隆抗體，其針對在正常的和惡性的B淋巴細(xì)胞的表面上發(fā)現(xiàn)的⑶20抗原。這兩種抗體都是在CHO細(xì)胞中重組生產(chǎn)的。盡管在哺乳動物癌癥療法中有了上述進展，對于能夠分別檢測哺乳動物中腫瘤的存在和有效抑制腫瘤性細(xì)胞生長的另外的診斷和治療劑仍然存在很大的需要。因此，本發(fā)明的目標(biāo)之一是鑒定在一種或多種類型的癌細(xì)胞上與正常細(xì)胞上或其它不同癌細(xì)胞上相比表達更大量的細(xì)胞膜相關(guān)多肽，及使用那些多肽及其編碼核酸來生成可用于哺乳動物中的癌癥的治療性處理和診斷性檢測的物質(zhì)組合物。發(fā)明概述在本說明書中，申請人首次描述了如下所述的細(xì)胞多肽(及其編碼核酸或其片段)的鑒定，所述細(xì)胞多肽在一種或多種類型癌細(xì)胞表面上表達的程度高于它們在一種或多種類型正常非癌細(xì)胞表面上表達的程度。這些多肽在本文中稱為腫瘤相關(guān)抗原性靶多肽(Tumor-associated Antigenic Target polypeptides, “TAT” 多妝)，它們有望充當(dāng)哺乳動物中癌癥治療和診斷的有效靶物。因此，在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明提供了分離的核酸分子，其具有編碼腫瘤相關(guān)抗原性靶多肽或其片段(“TAT”多肽)的核苷酸序列。在某些方面，所述分離的核酸分子包含與下述各項具有至少約80%的核酸序列同一性，或者至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)編碼 具有本文所公開的氨基酸序列的全長TAT多肽、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、或本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的DNA分子；或者(b) (a)的 DNA 分子的互補分子(complement)。在其它方面，所述分離的核酸分子包含與下述各項具有至少約80%的核酸序列同一性，或者至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)包含本文所公開的全長TAT多肽cDNA的編碼序列、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽的編碼序列、本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域的編碼序列、或本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的編碼序列的DNA分子；或者(b) (a)的DNA分子的互補分子。本文的另一個方面提供了分離的核酸分子，其包含如下核苷酸序列，所述核苷酸序列編碼跨膜域刪除的或跨膜域滅活的TAT多肽，或者與此類編碼核苷酸序列互補，其中，本文中公開了此類多肽的跨膜域。因此，設(shè)想了本文中所描述的TAT多肽的可溶性胞外域。在其它方面，本發(fā)明致力于分離的核酸分子，其與下述核苷酸序列雜交(a)編碼具有本文所公開的全長氨基酸序列的TAT多肽、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、或本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的核苷酸序列，或者(b) (a)的核苷酸序列的互補分子。在這點上，本發(fā)明的一個實施方案致力于本文所公開的全長TAT多肽編碼序列的片段或其互補序列，它們可用作例如雜交探針，所述雜交探針可用作例如診斷探針、PCR引物、反義寡核苷酸探針，或者用于編碼全長TAT多肽的片段，可任選編碼包含抗TAT多肽抗體的結(jié)合位點的多肽。此類核酸片段的長度通常為至少約5個核苷酸，或者長度為至少約
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、
45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、 170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990 或 1000 個核苷酸，其中在此語境中，術(shù)語“約”意指所述核苷酸序列長度加上或減去所述長度的10%。此外，此類核酸片段經(jīng)常包含衍生自TAT多肽全長編碼序列或其互補序列的連續(xù)核苷酸。注意到TAT多肽編碼核苷酸序列或其互補序列的新片段可以常規(guī)方式確定，即使用多種眾所周知的序列對比程序中的任一種將TAT多肽編碼核苷酸序列與其它已知核苷酸序列對比，并確定哪個(些)TAT多肽編碼核苷酸序列或其互補序列是新的。本文設(shè)想了 TAT多肽編碼核苷酸序列或其互補序列的所有此類新片段。還設(shè)想了由這些核苷酸分子片段編碼的TAT多肽片段，優(yōu)選那些 包含抗TAT多肽抗體的結(jié)合位點的TAT多肽片段。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了分離的TAT多肽，其由上文鑒定的任何分離的核酸序列編碼。在某一個方面，本發(fā)明涉及分離的TAT多肽，其包含與具有本文所公開的全長氨基酸序列的TAT多肽、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、由本文所公開的任何核酸序列編碼的氨基酸序列、本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段具有至少約80% 的氨基酸序列同一性，或者至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在又一個方面，本發(fā)明涉及分離的TAT多肽，其包含與編碼(a)具有本文所公開的全長氨基酸序列的TAT多肽、(b)本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、(c)本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、(d)本文所公開的任何核酸序列編碼的氨基酸序列、或(e)本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的DNA分子的互補序列雜交的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。在一個具體的方面，本發(fā)明提供了分離的TAT多肽，其沒有N-末端信號序列和/或沒有起始甲硫氨酸，且由編碼上文所述氨基酸序列的核苷酸序列所編碼。本文還描述了用于產(chǎn)生它的方法，其中所述方法包括在適于表達TAT多肽的條件下培養(yǎng)包含如下載體的宿主細(xì)胞，所述載體包含適宜的編碼核酸分子，并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收TAT多肽。本發(fā)明的另一個方面提供了分離的TAT多肽，其是跨膜域刪除的或跨膜域滅活的。本文還描述了用于產(chǎn)生它的方法，其中所述方法包括在適于表達TAT多肽的條件下培養(yǎng)包含如下載體的宿主細(xì)胞，所述載體包含適宜的編碼核酸分子，并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收TAT多肽。在本發(fā)明的其它實施方案中，本發(fā)明提供了包含編碼任何本文所述多肽的DNA的載體。還提供了包含任何此類載體的宿主細(xì)胞。舉例而言，所述宿主細(xì)胞可以是CHO細(xì)胞、大腸桿菌(E. coli)細(xì)胞或酵母細(xì)胞。還提供了用于產(chǎn)生任何本文所述多肽的方法，包括在適于表達期望多肽的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收期望多肽。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了分離的嵌合多肽，其包含與異源(非TAT)多肽融合的任何本文所述TAT多肽。此類嵌合分子的例子包括與異源多肽諸如例如表位標(biāo)簽序列或免疫球蛋白Fe區(qū)融合的任何本文所述TAT多肽。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了抗體，其結(jié)合，優(yōu)選特異性結(jié)合任何前述或后述多肽。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體、單鏈抗體、或競爭性抑制抗TAT多肽抗體與其各自抗原性表位結(jié)合的抗體。本發(fā)明的抗體可任選偶聯(lián) 生長抑制劑或細(xì)胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿(maytansinoid)或加利車霉素(calicheamicin)、抗生素、放射性同位素、溶核酶(nucleolytic enzyme)或諸如此類。本發(fā)明的抗體可任選在CHO細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞中產(chǎn)生，且優(yōu)選抑制其所結(jié)合的細(xì)胞生長或增殖或者誘導(dǎo)其所結(jié)合的細(xì)胞死亡。為了診斷目的，本發(fā)明的抗體可以被可檢測地標(biāo)記，附著于固相支持物，等等。在本發(fā)明的其它實施方案中，本發(fā)明提供了包含編碼任何本文所述抗體的DNA的載體。還提供了包含任何此類載體的宿主細(xì)胞。舉例而言，所述宿主細(xì)胞可以是CHO細(xì)胞、大腸桿菌細(xì)胞或酵母細(xì)胞。還提供了用于產(chǎn)生任何本文所述抗體的方法，包括在適于表達期望抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收期望的抗體。在又一個實施方案中，本發(fā)明涉及物質(zhì)組合物，其包含與載體組合的如本文所述的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT多肽、或如本文所述的抗TAT抗體。任選的是，所述載體是藥學(xué)可接受的載體。在又一個實施方案中，本發(fā)明涉及制品，其包括容器及該容器中容納的物質(zhì)組合物，其中所述物質(zhì)組合物可包含如本文所述的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT多肽、或如本文所述的抗TAT抗體。該制品可任選還包括附于所述容器的標(biāo)簽或所述容器中包括的包裝插頁，其涉及所述物質(zhì)組合物在腫瘤的治療性處理或診斷性檢測中的用途。本發(fā)明的另一個實施方案致力于如本文所述的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT多肽、或如本文所述的抗TAT多肽抗體用于制備藥物的用途，所述藥物可用于治療對所述TAT多肽、嵌合TAT多肽、或抗TAT多肽抗體有響應(yīng)的狀況。本發(fā)明的其它實施方案致力于任何分離的抗體，其包含本文所公開的CDR-L1、⑶R-L2、⑶R-L3、⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3序列中的一種或多種，或是與任何此類抗體結(jié)合相同表位的任何抗體。本發(fā)明的另一個實施方案致力于用于抑制表達TAT多肽的細(xì)胞生長的方法，其中該方法包括使所述細(xì)胞接觸與所述TAT多肽結(jié)合的抗體，且其中所述抗體與所述TAT多肽的結(jié)合引起所述表達TAT多肽的細(xì)胞的生長抑制。在優(yōu)選的實施方案中，所述細(xì)胞是癌細(xì)胞，且所述抗體與所述TAT多肽的結(jié)合引起表達所述TAT多肽的所述細(xì)胞死亡。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體、或單鏈抗體。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選偶聯(lián)生長抑制劑或細(xì)胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此類。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選在CHO細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞中產(chǎn)生。本發(fā)明的又一個實施方案致力于治療性處理具有癌性腫瘤的哺乳動物的方法，所述癌性腫瘤包含表達TAT多肽的細(xì)胞，其中該方法包括給所述哺乳動物施用治療有效量的結(jié)合所述TAT多肽的抗體，由此所述腫瘤得到有效的治療性處理。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體或單鏈抗體。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選偶聯(lián)生長抑制劑或細(xì)胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此類。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選在CHO細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞中產(chǎn)生。本發(fā)明的又一個實施方案致力于測定懷疑含有TAT多肽的樣品中該TAT多肽的存在的方法，其中該方法包括使所述樣品暴露于結(jié)合所述TAT多肽的抗體，并測定所述樣品中所述抗體與所述TAT多肽的結(jié)合，其中此類結(jié)合的存在表明所述樣品中存在所述TAT多肽。任選的是，所述樣品可包括懷疑表達TAT多肽的細(xì)胞(可以是癌細(xì)胞)。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選被可檢測地標(biāo)記、附著于固相支持物，或諸如此類。 本發(fā)明的又一個實施方案致力于診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，其中該方法包括檢測(a)從所述哺乳動物獲得的組織細(xì)胞的測試樣品中和(b)相同組織來源或類型的已知正常非癌性細(xì)胞的對照樣品中編碼TAT多肽的基因的表達水平，其中所述TAT多肽在測試樣品中的表達水平高于對照樣品表明獲取該測試樣品的哺乳動物中存在腫瘤。 本發(fā)明的又一個實施方案致力于診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，其中該方法包括(a)使包含從所述哺乳動物獲得的組織細(xì)胞的測試樣品接觸結(jié)合TAT多肽的抗體，并
(b)檢測所述測試樣品中所述抗體和所述TAT多肽之間復(fù)合物的形成，其中復(fù)合物的形成表明所述哺乳動物中存在腫瘤。任選的是，所采用的抗體被可檢測地標(biāo)記，附著于固相支持物，或諸如此類，和/或所述組織細(xì)胞的測試樣品是從懷疑具有癌性腫瘤的個體獲得的。本發(fā)明的又一個實施方案致力于治療或預(yù)防與改變的，優(yōu)選提高的TAT多肽表達或TAT多肽活性有關(guān)的細(xì)胞增殖性紊亂(病癥)的方法，該方法包括給需要此類治療的受試者施用有效量的TAT多肽的拮抗劑。優(yōu)選的是，所述細(xì)胞增殖性紊亂是癌癥，且所述TAT多肽的拮抗劑是抗TAT多肽抗體或反義寡核苷酸。細(xì)胞增殖性紊亂TAT多肽的有效治療或預(yù)防可以是直接殺死表達TAT多肽的細(xì)胞或抑制其生長的結(jié)果，或者通過拮抗TAT多肽的細(xì)胞生長促進活性實現(xiàn)。本發(fā)明的又一個實施方案致力于使抗體與表達TAT多肽的細(xì)胞結(jié)合的方法，其中該方法包括在適于所述抗體與所述TAT多肽結(jié)合的條件下使表達TAT多肽的細(xì)胞接觸所述抗體，并容許它們之間的結(jié)合。在優(yōu)選的實施方案中，所述抗體用可定性和/或定量測定所述抗體結(jié)合所述細(xì)胞的位置和/或量的分子或化合物標(biāo)記。本發(fā)明的其它實施方案致力于TAT多肽、編碼TAT多肽的核酸或包含該核酸的載體或宿主細(xì)胞、或抗TAT多肽抗體在制備可用于(i)癌癥或腫瘤的治療性處理或診斷性檢測或(ii)細(xì)胞增殖性紊亂(病癥)的治療性處理或預(yù)防的藥物中的用途。本發(fā)明的另一個實施方案致力于抑制癌細(xì)胞生長的方法，其中所述癌細(xì)胞的生長至少部分依賴于TAT多肽的生長促進效果(其中所述TAT多肽可以是由癌細(xì)胞自身表達的，或者是由產(chǎn)生對癌細(xì)胞具有生長促進效果的多肽的細(xì)胞表達的)，其中該方法包括使所述TAT多肽接觸結(jié)合所述TAT多肽的抗體，由此拮抗所述TAT多肽的生長促進活性，繼而抑制所述癌細(xì)胞的生長。優(yōu)選完全抑制癌細(xì)胞的生長。甚至更優(yōu)選的是，所述抗體與所述TAT多肽的結(jié)合誘導(dǎo)所述癌細(xì)胞的死亡。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體或單鏈抗體。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選偶聯(lián)生長抑制劑或細(xì)胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此類。本發(fā)明方法中所使用的抗體可任選在CHO細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞中產(chǎn)生。本發(fā)明的又一個實施方案致力于治療性處理哺乳動物中的腫瘤的方法，其中所述腫瘤的生長至少部分依賴于TAT多肽的生長促進效果，其中所述方法包括給所述哺乳動物施用治療有效量的結(jié)合所述TAT多肽的抗體，由此拮抗所述TAT多肽的生長促進活性并使所述腫瘤得到有效的治療性處理。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體或單鏈抗體。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選偶聯(lián)生長抑制劑或細(xì)胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此、類。本發(fā)明方法中所采用的抗體可任選在CHO細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞中產(chǎn)生。在其它實施方案中，本發(fā)明致力于如下這套本申請或未來申請可能的
權(quán)利要求
I.分離的核酸，其具有與下述各項具有至少80%核酸序列同一性的核苷酸序列(a)DNA分子,其編碼SEQ ID N0:2所不氨基酸序列；(b)DNA分子，其編碼SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽；(C)DNA分子，其編碼SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)DNA分子，其編碼SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列；(f) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼序列；或(g) (a), (b), (c)，(d), (e)或(f)的互補序列。2.分離的核酸，其具有(a)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO:2所示氨基酸序列；(b)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽；(c)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列；(f) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)；或(g) (a), (b), (c)，(d), (e)或(f)的互補序列。3.分離的核酸，其與下述任一項雜交(a)核酸，其編碼SEQ ID NO:2所示氨基酸序列；(b)核酸，其編碼SEQ ID N0:2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽；(c)核酸，其編碼SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)核酸，其編碼SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列；(f) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)；或(g) (a), (b), (c)，(d), (e)或(f)的互補序列。4.權(quán)利要求3的核酸，其中所述雜交在嚴(yán)格條件下發(fā)生。
5.權(quán)利要求3的核酸，其長度為至少約5個核苷酸。6.表達載體,其包含權(quán)利要求1、2或3的核酸。7.權(quán)利要求6的表達載體，其中所述核酸與控制序列可操作連接，所述控制序列受到用該載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的識別。8.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求7的表達載體。9.權(quán)利要求8的宿主細(xì)胞，其是CHO細(xì)胞、大腸桿菌細(xì)胞或酵母細(xì)胞。10.用于生產(chǎn)多肽的方法,包括在適于表達所述多肽的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求8的宿主細(xì)胞，并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收所述多肽。11.分離的多肽，其與下述各項具有至少80%的氨基酸序列同一性
(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO:2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(c)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽。12.分離的多肽，其具有(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。13.嵌合多肽，其包含與異源多肽融合的權(quán)利要求11或12的多肽。14.權(quán)利要求13的嵌合多肽，其中所述異源多肽是表位標(biāo)簽序列或免疫球蛋白的Fe區(qū)。15.分離的抗體，其結(jié)合與下述各項具有至少80%氨基酸序列同一性的多肽(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO:2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(c)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽。16.分離的抗體，其結(jié)合具有下述任一項的多肽(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。
17.權(quán)利要求15或16的抗體，其是單克隆抗體。18.權(quán)利要求15或16的抗體，其是抗體片段。19.權(quán)利要求15或16的抗體，其是嵌合或人源化抗體。20.權(quán)利要求15或16的抗體，其與生長抑制劑偶聯(lián)。21.權(quán)利要求15或16的抗體，其與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。22.權(quán)利要求21的抗體，其中所述細(xì)胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶核酶。23.權(quán)利要求21的抗體，其中所述細(xì)胞毒劑是毒素。24.權(quán)利要求23的抗體，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。 25.權(quán)利要求23的抗體，其中所述毒素是美登木素生物堿。26.權(quán)利要求15或16的抗體，其在細(xì)菌中產(chǎn)生。27.權(quán)利要求15或16的抗體，其在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。28.權(quán)利要求15或16的抗體，其誘導(dǎo)與其結(jié)合的細(xì)胞死亡。29.權(quán)利要求15或16的抗體，其被可檢測地標(biāo)記。30.分離的核酸，其具有編碼權(quán)利要求15或16的抗體的核苷酸序列。31.表達載體，其包含與控制序列可操作連接的權(quán)利要求30的核酸，所述控制序列由用該載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞識別。32.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求31的表達載體。33.權(quán)利要求32的宿主細(xì)胞，其是CHO細(xì)胞、大腸桿菌細(xì)胞或酵母細(xì)胞。34.用于生產(chǎn)抗體的方法，包括在適于表達所述抗體的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求32的宿主細(xì)胞，并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收所述抗體。35.物質(zhì)組合物，其包含與載體組合的(a)權(quán)利要求11的多肽；(b)權(quán)利要求12的多肽；(c)權(quán)利要求13的嵌合多肽；(d)權(quán)利要求15的抗體；或(e)權(quán)利要求16的抗體。36.權(quán)利要求35的物質(zhì)組合物，其中所述載體是藥學(xué)可接受的載體。37.制品，其包括(a)容器；及(b)所述容器中容納的權(quán)利要求35的物質(zhì)組合物。38.權(quán)利要求37的制品，還包括附于所述容器的標(biāo)簽或所述容器中包括的包裝插頁，其涉及所述物質(zhì)組合物用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的用途。39.抑制細(xì)胞生長的方法，所述細(xì)胞表達與所述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質(zhì)(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO:2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(c)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；
(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，所述方法包括使所述細(xì)胞接觸結(jié)合所述蛋白質(zhì)的抗體，由此所述抗體與所述蛋白質(zhì)的結(jié)合引起所述細(xì)胞的生長抑制。40.權(quán)利要求39的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。41.權(quán)利要求39的方法，其中所述抗體是抗體片段。42.權(quán)利要求39的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。43.權(quán)利要求39的方法，其中所述抗體與生長抑制劑偶聯(lián)。44.權(quán)利要求39的方法，其中所述抗體與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。 45.權(quán)利要求44的方法，其中所述細(xì)胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶核酶。46.權(quán)利要求44的方法，其中所述細(xì)胞毒劑是毒素。47.權(quán)利要求46的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。48.權(quán)利要求46的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。49.權(quán)利要求39的方法，其中所述抗體在細(xì)菌中產(chǎn)生。50.權(quán)利要求39的方法，其中所述抗體在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。51.權(quán)利要求39的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。52.權(quán)利要求51的方法，其中使所述癌細(xì)胞進一步暴露于放射處理或化療劑。53.權(quán)利要求51的方法，其中所述癌細(xì)胞選自乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸直腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞和白血病細(xì)胞。54.權(quán)利要求51的方法，其中所述癌細(xì)胞與相同組織來源的正常細(xì)胞相比更大量的表達所述蛋白質(zhì)。55.權(quán)利要求39的方法，其引起所述細(xì)胞死亡。56.權(quán)利要求39的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。57.治療性處理具有癌性腫瘤的哺乳動物的方法，所述癌性腫瘤包含表達與下述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質(zhì)的細(xì)胞(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO:2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(c)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，所述方法包括給所述哺乳動物施用治療有效量的結(jié)合所述蛋白質(zhì)的抗體，由此有效治療所述哺乳動物。58.權(quán)利要求57的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。59.權(quán)利要求57的方法，其中所述抗體是抗體片段。60.權(quán)利要求57的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。61.權(quán)利要求57的方法，其中所述抗體與生長抑制劑偶聯(lián)。62.權(quán)利要求57的方法，其中所述抗體與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。63.權(quán)利要求62的方法，其中所述細(xì)胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶核酶。64.權(quán)利要求62的方法，其中所述細(xì)胞毒劑是毒素。 65.權(quán)利要求64的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。66.權(quán)利要求64的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。67.權(quán)利要求57的方法，其中所述抗體在細(xì)菌中產(chǎn)生。68.權(quán)利要求57的方法，其中所述抗體在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。69.權(quán)利要求57的方法，其中使所述腫瘤進一步暴露于放射處理或化療劑。70.權(quán)利要求57的方法，其中所述腫瘤是乳腺腫瘤、結(jié)腸直腸腫瘤、肺腫瘤、卵巢腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、肝腫瘤、膀胱腫瘤、胰腺腫瘤或?qū)m頸腫瘤。71.權(quán)利要求57的方法，其中所述腫瘤的癌性細(xì)胞與相同組織來源的正常細(xì)胞相比更大量的表達所述蛋白質(zhì)。72.權(quán)利要求57的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。73.測定懷疑含有某種蛋白質(zhì)的樣品中該蛋白質(zhì)的存在的方法，其中所述蛋白質(zhì)與下述任一項具有至少80%的氨基酸序列同一性(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO:2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(c)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，所述方法包括使所述樣品暴露于結(jié)合所述蛋白質(zhì)的抗體，并測定所述樣品中所述抗體與所述蛋白質(zhì)的結(jié)合，其中所述抗體與所述蛋白質(zhì)的結(jié)合表明所述樣品中存在所述蛋白質(zhì)。74.權(quán)利要求73的方法，其中所述樣品包含懷疑表達所述蛋白質(zhì)的細(xì)胞。75.權(quán)利要求74的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。76.權(quán)利要求73的方法，其中所述抗體被可檢測地標(biāo)記。77.權(quán)利要求73的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有
(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(c) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。78.診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，所述方法包括測定從所述哺乳動物獲得的組織細(xì)胞的測試樣品中及相同組織來源的已知正常細(xì)胞的對照樣品中編碼與下述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質(zhì)的基因的表達水平 (a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO: 2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，其中所述蛋白質(zhì)在測試樣品中的表達水平高于對照樣品表明獲取測試樣品的哺乳動物中存在腫瘤。79.權(quán)利要求78的方法，其中測定編碼所述蛋白質(zhì)的基因的表達水平的步驟包括在原位雜交或RT-PCR分析中使用寡核苷酸。80.權(quán)利要求78的方法，其中測定編碼所述蛋白質(zhì)的基因的表達水平的步驟包括在免疫組化或Western印跡分析中使用抗體。81.權(quán)利要求78的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(c) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。82.診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，所述方法包括使從所述哺乳動物獲得的組織細(xì)胞的測試樣品接觸這樣的抗體，該抗體結(jié)合與下述任一項具有至少80%的氨基酸序列同一性的蛋白質(zhì)(a) SEQ ID NO:2 所示多肽；(b)SEQ ID NO:2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(c)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，并檢測測試樣品中所述抗體和所述蛋白質(zhì)之間復(fù)合物的形成，其中復(fù)合物的形成表明所述哺乳動物中存在腫瘤。83.權(quán)利要求82的方法，其中所述抗體被可檢測地標(biāo)記。
84.權(quán)利要求82的方法，其中所述組織細(xì)胞的測試樣品從懷疑具有癌性腫瘤的個體獲得。85.權(quán)利要求82的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。 86.治療或預(yù)防與某種蛋白質(zhì)的表達或活性增高有關(guān)的細(xì)胞增殖性紊亂的方法，所述蛋白質(zhì)與下述任一項具有至少80%的氨基酸序列同一丨丨生(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO: 2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，所述方法包括給需要此類治療的受試者施用有效量的所述蛋白質(zhì)的拮抗劑，由此有效治療或預(yù)防所述細(xì)胞增殖性紊亂。87.權(quán)利要求86的方法，其中所述細(xì)胞增殖性紊亂是癌癥。88.權(quán)利要求86的方法，其中所述拮抗劑是抗TAT多肽抗體或反義寡核苷酸。89.使抗體與細(xì)胞結(jié)合的方法，所述細(xì)胞表達與下述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質(zhì)(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO: 2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，所述方法包括使所述細(xì)胞接觸結(jié)合所述蛋白質(zhì)的抗體，并允許所述抗體與所述蛋白質(zhì)的結(jié)合發(fā)生，由此使所述抗體結(jié)合所述細(xì)胞。90.權(quán)利要求89的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。91.權(quán)利要求89的方法，其中所述抗體是抗體片段。92.權(quán)利要求89的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。93.權(quán)利要求89的方法，其中所述抗體與生長抑制劑偶聯(lián)。94.權(quán)利要求89的方法，其中所述抗體與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。95.權(quán)利要求94的方法，其中所述細(xì)胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶核酶。96.權(quán)利要求94的方法，其中所述細(xì)胞毒劑是毒素。
97.權(quán)利要求96的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。98.權(quán)利要求96的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。99.權(quán)利要求89的方法，其中所述抗體在細(xì)菌中產(chǎn)生。100.權(quán)利要求89的方法，其中所述抗體在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。101.權(quán)利要求89的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。102.權(quán)利要求101的方法，其中使所述癌細(xì)胞進一步暴露于放射處理或化療劑。
103.權(quán)利要求101的方法，其中所述癌細(xì)胞選自乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸直腸癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞、黑素瘤細(xì)胞和白血病細(xì)胞。104.權(quán)利要求103的方法，其中所述癌細(xì)胞與相同組織來源的正常細(xì)胞相比更大量地表達所述蛋白質(zhì)。105.權(quán)利要求89的方法，其引起所述細(xì)胞死亡。106.權(quán)利要求1-5或30任一項的核酸在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的藥物中的用途。107.權(quán)利要求1-5或30任一項的核酸在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。108.權(quán)利要求1-5或30任一項的核酸在制備用于治療或預(yù)防細(xì)胞增殖性紊亂(病癥)的藥物中的用途。109.權(quán)利要求6、7或31任一項的表達載體在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的藥物中的用途。110.權(quán)利要求6、7或31任一項的表達載體在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。111.權(quán)利要求6、7或31任一項的表達載體在制備用于治療或預(yù)防細(xì)胞增殖性紊舌L (病癥)的藥物中的用途。112.權(quán)利要求8、9、32或33任一項的宿主細(xì)胞在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的藥物中的用途。113.權(quán)利要求8、9、32或33任一項的宿主細(xì)胞在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。114.權(quán)利要求8、9、32或33任一項的宿主細(xì)胞在制備用于治療或預(yù)防細(xì)胞增殖性紊亂(病癥)的藥物中的用途。115.權(quán)利要求11-14任一項的多肽在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的藥物中的用途。116.權(quán)利要求11-14任一項的多肽在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。117.權(quán)利要求11-14任一項的宿主細(xì)胞在制備用于治療或預(yù)防細(xì)胞增殖性紊亂的藥物中的用途。118.權(quán)利要求15-29任一項的抗體在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的藥物中的用途。119.權(quán)利要求15-29任一項的抗體在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。120.權(quán)利要求15-29任一項的抗體在制備用于治療或預(yù)防細(xì)胞增殖性紊亂的藥物中的用途。
121.權(quán)利要求35或36任一項的物質(zhì)組合物在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的藥物中的用途。122.權(quán)利要求35或36任一項的物質(zhì)組合物在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。123.權(quán)利要求35或36任一項的物質(zhì)組合物在制備用于治療或預(yù)防細(xì)胞增殖性紊亂的藥物中的用途。124.權(quán)利要求37或38任一項的制品在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的藥物中的用途。125.權(quán)利要求37或38任一項的制品在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。
126.權(quán)利要求37或38任一項的制品在制備用于治療或預(yù)防細(xì)胞增殖性紊亂的藥物中的用途。127.用于抑制細(xì)胞生長的方法，其中所述細(xì)胞的生長至少部分依賴于下述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質(zhì)的生長促進作用(a) SEQ ID NO: 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO: 2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，所述方法包括使所述蛋白質(zhì)接觸與所述蛋白質(zhì)結(jié)合的抗體，由此抑制所述細(xì)胞的生長。128.權(quán)利要求127的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。129.權(quán)利要求127的方法，其中所述蛋白質(zhì)由所述細(xì)胞表達。130.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體與所述蛋白質(zhì)的結(jié)合拮抗所述蛋白質(zhì)的細(xì)胞生長強化活性。131.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體與所述蛋白質(zhì)的結(jié)合誘導(dǎo)所述細(xì)胞死亡。132.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。133.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體是抗體片段。134.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。135.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體與生長抑制劑偶聯(lián)。136.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。137.權(quán)利要求136的方法，其中所述細(xì)胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶核酶。138.權(quán)利要求136的方法，其中所述細(xì)胞毒劑是毒素。139.權(quán)利要求138的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。140.權(quán)利要求138的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。141.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體在細(xì)菌中產(chǎn)生。142.權(quán)利要求127的方法，其中所述抗體在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。143.權(quán)利要求127的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有
(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(c) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的 全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。144.治療性處理哺乳動物中的腫瘤的方法，其中所述腫瘤的生長至少部分依賴于下述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質(zhì)的生長促進作用(a) SEQ ID NO:2 所示多肽；(b) SEQ ID NO: 2所示多肽，缺少其相關(guān)信號肽；(C)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域，具有其相關(guān)信號肽；(d)SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域，缺少其相關(guān)信號肽；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的多肽，所述方法包括使所述蛋白質(zhì)接觸與所述蛋白質(zhì)結(jié)合的抗體，由此有效治療所述腫瘤。145.權(quán)利要求144的方法，其中所述蛋白質(zhì)由所述腫瘤的細(xì)胞表達。146.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體與所述蛋白質(zhì)的結(jié)合拮抗所述蛋白質(zhì)的細(xì)胞生長促進活性。147.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。148.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體是抗體片段。149.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。150.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體與生長抑制劑偶聯(lián)。151.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。152.權(quán)利要求151的方法，其中所述細(xì)胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶核酶。153.權(quán)利要求151的方法，其中所述細(xì)胞毒劑是毒素。154.權(quán)利要求153的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。155.權(quán)利要求153的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。156.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體在細(xì)菌中產(chǎn)生。157.權(quán)利要求144的方法，其中所述抗體在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。158.權(quán)利要求144的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有(a) SEQ ID NO :2所示氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(c) SEQ ID NO: 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關(guān)信號肽序列；(d)SEQ ID NO:2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關(guān)信號肽序列；(e) SEQ ID NO: I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO: I所示核苷酸序列的全長編碼區(qū)所編碼的氨基酸序列。159.分離的抗體，其與權(quán)利要求15至29任一項的抗體結(jié)合相同表位。160.權(quán)利要求159的抗體，其是單克隆抗體。
161.權(quán)利要求159的抗體，其是抗體片段。162.權(quán)利要求159的抗體，其是嵌合或人源化抗體。163.權(quán)利要求159的抗體，其與生長抑制劑偶聯(lián)。164.權(quán)利要求159的抗體，其與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。165.權(quán)利要求164的抗體，其中所述細(xì)胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶核酶。166.權(quán)利要求164的抗體，其中所述細(xì)胞毒劑是毒素。167.權(quán)利要求166的抗體，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。、168.權(quán)利要求166的抗體，其中所述毒素是美登木素生物堿。169.權(quán)利要求159的抗體，其在細(xì)菌中產(chǎn)生。170.權(quán)利要求159的抗體，其在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。171.權(quán)利要求159的抗體，其誘導(dǎo)其所結(jié)合的細(xì)胞死亡。172.權(quán)利要求159的抗體，其被可檢測地標(biāo)記。173.權(quán)利要求159的抗體，其包含權(quán)利要求15至29的任何抗體的至少一個互補
決定區(qū)。174.產(chǎn)生結(jié)合TAT多肽的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。175.鑒定如下所述抗體的方法，所述抗體結(jié)合權(quán)利要求15至29的任何抗體結(jié)合的表位，所述方法包括測定測試抗體阻斷權(quán)利要求15至29的任何抗體結(jié)合的能力，其中所述測試抗體在相等抗體濃度阻斷所述權(quán)利要求15至29的任何抗體與所述TAT多肽結(jié)合達至少40%的能力表明所述測試抗體能夠結(jié)合所述權(quán)利要求15至29的任何抗體所結(jié)合的表位。閱讀本說明書后，本發(fā)明的其它實施方案對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的。附圖簡述圖I顯示了 TAT211cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO: I)，其中SEQ IDNO: I是本文中稱作“DNA219894”的克隆。圖2顯示了衍生自圖I中所示SEQ ID NO: I的編碼序列的氨基酸序列(SEQ IDNO:2)。圖3A-C顯示了以下各項的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列的比對輕鏈人亞類I共有序列(huKI; SEQ ID 勵3)、鼠10111抗了六了211抗體(1111110111-1;5￡0 IDN0:4)、和 IOHl 抗 TAT211移植的“人源化”抗體(10Hl-graft;SEQ ID NO:5)、和多種其它抗TAT211 “人源化”抗體(SEQ ID NO :6-11)。圖4A-C顯示了以下各項的重鏈可變區(qū)氨基酸序列的比對重鏈人亞組III共有序列(hum III;SEQ ID NO: 12)、鼠 IOHl 抗 TAT211 抗體(mulOHl-H; SEQ ID N0:13)、10H1 抗TAT211移植的“人源化”抗體(10Hl-graft;SEQ IDN0:14)、和多種其它抗TAT211 “人源化抗體(SEQ ID NO: 15-20)。圖5顯示了選定的親和力成熟的IOHl衍生抗體的各種⑶R-Ll序列(SEQ IDNOS:21-34)。圖6顯示了選定的親和力成熟的IOHl衍生抗體的各種⑶R-L2序列(SEQ IDNOS:35-38)。圖7顯示了選定的親和力成熟的IOHl衍生抗體的各種⑶R-L3序列(SEQ IDNOS:39-41)。圖8顯示了選定的親和力成熟的IOHl衍生抗體的各種⑶R-Hl序列(SEQ IDNOS:42-45)。圖9顯示了選定的親和力成熟的IOHl衍生抗體的各種⑶R-H2序列(SEQ IDNOS:46-60)。

圖10顯示了選定的親和力成熟的IOHl衍生抗體的各種⑶R-H3序列(SEQ IDNOS:61-65)。圖11顯示了用于實施本發(fā)明的例示性受體人共有框架序列，序列標(biāo)識符如下人 VH亞類I共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID NO:66)、人VH亞類I共有框架除去延伸的高變區(qū)(SEQ ID NO: 67-69)、人 VH 亞類 II 共有框架除去 Kabat CDR(SEQ ID NO: 70)、人 VH 亞類II共有框架除去延伸的高變區(qū)(SEQ ID NO: 71-73)、人VH亞類III共有框架除去KabatCDR “L變體”(SEQID NO: 74)、和人VH亞類III共有框架除去Kabat CDR “F變體”(SEQIDNO:75)。圖12顯示了用于實施本發(fā)明的例示性受體人共有框架序列，序列標(biāo)識符如下人VLk亞類I共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID NO: 76)、人VLk亞類II共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID NO: 77)、人 VL K 亞類 III 共有框架除去 Kabat CDR(SEQ ID NO: 78)、和人 VLk亞類IV共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID NO: 79) 圖13顯示了抗體10H1. I. 4B的重鏈氨基酸序列(SEQ ID NO:80)。圖14顯示了抗體10H1. I. 4B的輕鏈氨基酸序列(SEQ ID NO:81)。圖15顯示了下述ADC vc-MMAE綴合抗體處理對0VCAR-3細(xì)胞(其在細(xì)胞表面上內(nèi)源表達 TAT211 多肽)的體外殺傷10H1. 11( )、10H1. 11. I ( )、( ■ )、10H1. 11. 2B ( A ) >IOHL 11.4B( )、10H1. 11.6B⑴、10Hl-grart(〇)、抗人 gD( | )、抗豚草(□)。圖16顯示了下述ADC vc-MMAE綴合抗體處理對293細(xì)胞(其不在細(xì)胞表面上內(nèi)源表達TAT211多肽)的體外殺傷10H1. 11.4B( )、或抗人gD( | )。圖17顯示了下述ADC vc-MMAE綴合抗體處理對293/TAT211細(xì)胞(其改造成在細(xì)胞表面上表達TAT211多肽)的體外殺傷10H1. 11.4B( )、或抗人gD( | )。圖18顯示了使用下述ADC vc-MMAE綴合抗體進行的小鼠乳房脂肪墊實驗中對0VCAR-3腫瘤的體內(nèi)殺傷單獨的媒介(口)、10H1. 11( )、10H1. 11. I ( ■)、IOHL 11. 2B( ▲ )、IOHL 11. 4B( )、IOHL 11. 6B(+)、和 lOHl-graft (〇)。圖19顯示了使用下述ADC vc-MMAE綴合抗體進行的小鼠乳房脂肪墊實驗中對0VCAR-3腫瘤的體內(nèi)殺傷單獨的媒介⑴、3mg/g的10H1. 11. 4B ( ■ )、lmg/kg的10H1. 11. 4B( )、或不結(jié)合TAT211的非特異性抗gpl20對照抗體(▲)。優(yōu)選實施方案的詳述I.定義術(shù)語“TAT多肽”和“TAT”在用于本文時且后面緊跟著數(shù)值名稱時指各種多肽，其中完整名稱(即TAT/數(shù)值)指本文描述的特定多肽序列。術(shù)語“TAT/數(shù)值多肽”和“TAT/數(shù)值”，其中術(shù)語“數(shù)值”作為實際數(shù)值名稱提供，在用于本文時涵蓋天然序列多肽、多肽變體和天然序列多肽的片段和多肽變體(本文中有進一步定義)。本文中描述的TAT多肽可從多種來源分離，諸如人組織類型或其它來源，或者通過重組或合成方法制備。術(shù)語“TAT多肽”指本文中公開的每一種個別的TAT/數(shù)值多肽。本說明書中涉及“TAT多肽”的所有公開內(nèi)容適用于獨自的以及共同的每一種多肽。例如，關(guān)于多肽的制備、純化、衍生、針對該多肽的抗體的形成、針對該多肽的TAT結(jié)合寡肽的形成、針對該多肽的TAT結(jié)合有機分子的形成、施用、含有該多肽的組合物、用該多肽治療疾病、等等的描述適用于本發(fā)明的具體的每一種多肽。術(shù)語“TAT多肽”還包括本文中公開的TAT/數(shù)值多肽的變體。在一個實施方案中，TAT211多肽序列顯示為SEQ ID NO:2。“天然序列TAT多肽”包括與衍生自自然界的相應(yīng)TAT多肽具有相同氨基酸序列的多肽。此類天然序列TAT多肽可從自然界分離，或者可通過重組或合成手段生成。術(shù)語“天然序列TAT多肽”明確涵蓋天然存在的截短或分泌形式的特定TAT多肽(例如胞外結(jié)構(gòu)域序列)、該多肽的天然存在變體形式(例如可變剪接形式)和天然存在的等位變體。在本發(fā)明的某些實施方案中，本文中公開的天然序列TAT多肽是包含附圖中所示全長氨基酸序列的成熟或全長天然序列多肽。起始和終止密碼子(如果指示的話)在圖中以粗體和下劃線顯示。附圖中以“N”或“X”指示的核酸殘基是任何核酸殘基。然而，盡管附圖中公開的TAT 多肽據(jù)顯示以本文中指派為圖中第I位氨基酸的甲硫氨酸殘基開始，可以想到且有可能的是，可采用位于圖中第I位氨基酸上游或下游的其它甲硫氨酸殘基作為TAT多肽的起始氨基酸殘基。TAT多肽“胞外結(jié)構(gòu)域”或“ECD”指基本上不含跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的TAT多肽形式。通常，TAT多肽ECD具有少于1%的所述跨膜結(jié)構(gòu)域和/或胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選具有少于0. 5%的所述結(jié)構(gòu)域。可以理解，為本發(fā)明TAT多肽鑒定的任何跨膜結(jié)構(gòu)域是依照本領(lǐng)域常規(guī)用于鑒定該種類型疏水性結(jié)構(gòu)域的標(biāo)準(zhǔn)鑒定的。跨膜結(jié)構(gòu)域的精確邊界可以變化，但最有可能是本文中最初鑒定的結(jié)構(gòu)域任一末端不超過約5個氨基酸。因此，任選的是，TAT多肽的胞外結(jié)構(gòu)域可含有實施例或說明書中鑒定的跨膜結(jié)構(gòu)域/胞外結(jié)構(gòu)域邊界任一側(cè)的約5個或更少氨基酸，而且本發(fā)明設(shè)想了具有或沒有相關(guān)信號肽的此類多肽及編碼它們的核酸。本說明書和/或附圖中可能顯示了本文中所公開的各種TAT多肽的“信號肽”的大致位置。然而，應(yīng)當(dāng)注意，信號肽的C-末端邊界可以變化，但最有可能的是本文中最初鑒定的信號肽C-末端邊界任一側(cè)不超過約5個氨基酸，其中信號肽的C-末端邊界可依照本領(lǐng)域常規(guī)用于鑒定該種類型氨基酸序列元件的標(biāo)準(zhǔn)鑒定(例如Nielsen et al.，Prot.Eng. 10:1-6(1997)和 von Heinje et al.，Nucl. Acids. Res. 14:4683-4690(1986))。此外，還認(rèn)識到，在有些情況中，從分泌多肽上切除信號序列不是完全統(tǒng)一的，導(dǎo)致超過一種分泌種類。本發(fā)明涵蓋這些成熟多肽，其中信號肽在本文中所鑒定的信號肽C-末端邊界任一側(cè)不超過約5個氨基酸內(nèi)切除，本發(fā)明還涵蓋編碼所述成熟多肽的多核苷酸?！癟AT多肽變體”意指與本文中所公開的全長天然序列TAT多肽序列、缺乏本文中所公開的信號肽的TAT多肽序列、具有或沒有本文中所公開的信號肽的TAT多肽胞外結(jié)構(gòu)域、或本文中所公開的全長TAT多肽序列的任何其它片段(諸如那些由只呈現(xiàn)全長TAT多肽的完整編碼序列一部分的核酸編碼的片段)具有至少約80%的氨基酸序列同一性的本文中所定義的TAT多肽，優(yōu)選活性TAT多肽。此類TAT多肽變體包括例如其中全長天然氨基酸序列的N-或C-末端添加或刪除一個或多個氨基酸殘基的TAT多肽。通常，TAT多肽變體與本文中所公開的全長天然序列TAT多肽序列、缺乏本文中所公開的信號肽的TAT多肽序列、具有或沒有本文中所公開的信號肽的TAT多肽胞外結(jié)構(gòu)域、或本文中所公開的全長TAT多肽序列的任何其它特別限定片段具有至少約80%的氨基酸序列同一性，或者至少約81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的氨基酸序列同一性。通常，TAT變體多肽的長度為至少約10個氨基酸，或者長度為至少約20、
30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600 個氨基酸或更多。任選的是，TAT變體多肽與天然TAT多肽序列相比具有不超過一個保守氨基酸替代，或者與天然TAT多肽序列相比具有不超過2、3、4、5、6、7、8、9或10個保守氨基酸替代。 關(guān)于本文中所鑒定的TAT多肽序列的“百分比(%)氨基酸序列同一性”定義為對比序列并在必要時引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，且不將任何保守替代視為序列同一性的一部分時，候選序列中與特定TAT多肽序列中的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的百分率。可以本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的多種方式進行測定百分比氨基酸序列同一性目的的序列對比，例如使用公眾可得到的計算機軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可決定測量對比的適宜參數(shù)，包括對所比較序列全長獲得最大對比所需的任何算法。然而，為了本發(fā)明，％氨基酸序列同一性值是使用序列比較計算機程序ALIGN-2獲得的，其中美國專利No. 7，160，985中提供了 ALIGN-2程序的完整源代碼，通過提及收入本文。ALIGN-2序列比較計算機程序由Genentech公司編寫，其源代碼已經(jīng)連同用戶文檔一起提交給美國版權(quán)局(US Copyright Office, WashingtonD. C.，20559)，并以美國版權(quán)注冊號了乂邪10087注冊。公眾可通過Genentech公司(SouthSan Francisco, California)得到ALIGN-2程序,或者可從源代碼編譯。ALIGN2程序應(yīng)當(dāng)編譯成在UNIX操作系統(tǒng)，優(yōu)選數(shù)碼UNIX V4. OD上使用。所有序列比較參數(shù)由ALIGN-2程序設(shè)定且不變。在采用ALIGN-2用于氨基酸序列比較的情況中，給定氨基酸序列A相對于(to)、與(with)、或針對(against)給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述為具有或包含相對于、與、或針對給定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的給定氨基酸序列A)如下計算分?jǐn)?shù)X/Y 乘 100其中X是由序列對比程序ALIGN-2在該程序的A和B對比中評分為相同匹配的氨基酸殘基數(shù)，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數(shù)?？梢灶I(lǐng)會，若氨基酸序列A的長度與氨基酸序列B的長度不相等，則A相對于B的％氨基酸序列同一性將不等于B相對于A的％氨基酸序列同一丨I"生?！癟AT變體多核苷酸”或“TAT變體核酸序列”意指編碼本文中所定義的TAT多肽，優(yōu)選活性TAT多肽且與編碼本文中所公開的全長天然序列TAT多肽序列、本文中所公開的缺乏信號肽的全長天然序列TAT多肽序列、本文中所公開的具有或沒有信號肽的TAT多肽胞外結(jié)構(gòu)域、或本文中所公開的全長TAT多肽序列的任何其它片段(諸如那些由只呈現(xiàn)全長TAT多肽的完整編碼序列一部分的核酸編碼的片段)的核苷酸序列具有至少約80%核酸序列同一性的核酸分子。通常，TAT變體多核苷酸與編碼本文中所公開的全長天然序列TAT多肽序列、本文中所公開的缺乏信號肽的全長天然序列TAT多肽序列、本文中所公開的具有或沒有信號序列的TAT多肽胞外結(jié)構(gòu)域、或本文中所公開的全長TAT多肽序列的任何其它片段的核酸序列具有至少約80%的核酸序列同一性，或者至少約81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的核酸序列同一性。變體不涵蓋天然核苷酸序列。通常，TAT變體多核苷酸的長度為至少約5個核苷酸，或者長度為至少約6、7、8、
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、
55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680 、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990 或 1000 個核苷酸，其中在此語境中，術(shù)語“約”意指所述核苷酸序列長度加上或減去所述長度的10%。關(guān)于本文中所鑒定的TAT編碼核酸序列的“百分比(%)核酸序列同一性”定義為對比序列并在必要時引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，候選序列中與TAT目的核酸序列中的核苷酸相同的核苷酸的百分率?？梢员绢I(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的多種方式進行測定百分比核酸序列同一性目的的序列對比，例如使用公眾可得到的計算機軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。然而，為了本發(fā)明，％核酸序列同一性值是使用序列比較計算機程序ALIGN-2獲得的，其中美國專利No. 7，160，985中提供了 ALIGN-2程序的完整源代碼，通過提及收入本文。ALIGN-2序列比較計算機程序由Genentech公司編寫，其源代碼已經(jīng)連同用戶文檔一起提交給美國版權(quán)局(US Copyright Office, WashingtonD. C.，20559)，并以美國版權(quán)注冊號了乂邪10087注冊。公眾可通過Genentech公司(SouthSan Francisco, California)得到ALIGN-2程序,或者可從提供的源代碼編譯。ALIGN2程序應(yīng)當(dāng)編譯成在UNIX操作系統(tǒng)，優(yōu)選數(shù)碼UNIX V4. OD上使用。所有序列比較參數(shù)由ALIGN-2程序設(shè)定且不變。在采用ALIGN-2來比較核酸序列的情況中，給定核酸序列C相對于(to)、與(with)、或針對(against)給定氨基酸序列D的％核酸序列同一'丨生(或者可表述為具有或包含相對于、與、或針對給定核酸序列D的某一 ％核酸序列同一性的給定核酸序列C)如下計算分?jǐn)?shù)W/Z 乘 100其中W是由序列對比程序ALIGN-2在該程序的C和D對比中評分為相同匹配的核苷酸數(shù)，且其中Z是D中的核苷酸總數(shù)。可以領(lǐng)會，若核酸序列C的長度與核酸序列D的長度不相等，則C相對于D的％核酸序列同一性將不等于D相對于C的％核酸序列同一性。在其它實施方案中，TAT變體多核苷酸是編碼TAT多肽且能夠與編碼本文中所公開的全長TAT多肽的核苷酸序列雜交，優(yōu)選在嚴(yán)格雜交和洗滌條件下雜交的核酸分子。TAT變體多肽可以是那些由TAT變體多核苷酸編碼的變體多肽。
術(shù)語“全長編碼區(qū)”在涉及編碼TAT多肽的核酸使用時指編碼本發(fā)明全長TAT多肽的核苷酸序列(常常在附圖中起始和終止密碼子(含)之間顯示)。術(shù)語“全長編碼區(qū)”在涉及ATCC保藏核酸使用時指插入保藏在ATCC的載體中的cDNA的TAT多肽編碼部分(常常在附圖中起始和終止密碼子(含)之間顯示)?！胺蛛x的”，在用于描述本文中所公開的各種TAT多肽時，意指已經(jīng)鑒定且與/由其天然環(huán)境的一種成分分開和/或回收的多肽。其天然環(huán)境的污染性成分指通常會干擾該多肽的診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在優(yōu)選的實施方案中，將多肽純化至(I)足以通過使用轉(zhuǎn)杯式測序儀獲得至少15個殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(2)根據(jù)使用考馬斯藍(lán)或優(yōu)選銀染色的非還原或還原條件下的SDS-PAGE，達到同質(zhì)。既然TAT多肽天然環(huán)境的至少一種成分不會存在，那么分離的多肽包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位多肽。然而，分離的多肽通常通過至少一個純化步驟來制備?！胺蛛x的”TAT多肽編碼核酸或其它多肽編碼核酸指已經(jīng)鑒定且與該多肽編碼核酸 的天然來源中通常與之相關(guān)的至少一種污染性核酸分子分開的核酸分子。分離的多肽編碼核酸分子不同于在自然界中發(fā)現(xiàn)它時的形式或背景。分離的多肽編碼核酸分子因此與存在于天然細(xì)胞中時的特定多肽編碼核酸分子有區(qū)別。然而，分離的多肽編碼核酸分子包括通常表達該多肽的細(xì)胞中所包含的多肽編碼核酸分子，例如當(dāng)所述核酸分子在所述細(xì)胞中的染色體定位不同于它在天然細(xì)胞中的染色體定位時。術(shù)語“控制序列”指在特定宿主生物體中表達可操作連接的編碼序列所必需的DNA序列。例如，適于原核生物的控制序列包括啟動子、任選的操縱基因序列、和核糖體結(jié)合位點。已知真核細(xì)胞利用啟動子、多腺苷酸化信號、和增強子。若一條核酸與另一條核酸序列處于功能性相互關(guān)系中，則它是“可操作連接”的。例如，若前序列(presequence)或分泌前導(dǎo)序列(secretory leader)的DNA表達成參與多肽分泌的前蛋白質(zhì)(preprotein),則它與多肽的DNA可操作連接；若啟動子或增強子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則它與該序列可操作連接；或者，若核糖體結(jié)合位點的位置促進翻譯，則它與編碼序列可操作連接。通常，“可操作連接”意味著相連的DNA序列是相鄰的，而且在分泌前導(dǎo)的情況中意味著相鄰且處于閱讀狀態(tài)。然而，增強子不必相鄰。連接可通過在方便的限制性位點處的連接反應(yīng)來實現(xiàn)。如果沒有此類位點，那么依照常規(guī)實踐使用合成的寡核苷酸銜接頭或接頭。雜交反應(yīng)的“嚴(yán)格性”可以容易的由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定，而且通常根據(jù)探針長度、洗滌溫度、和鹽濃度憑經(jīng)驗計算。通常，較長的探針要求較高的溫度以正確退火，而較短的探針需要較低的溫度。雜交通常依賴于當(dāng)互補鏈存在于低于其解鏈溫度的環(huán)境中時變性DNA重新退火的能力。探針和可雜交序列之間的期望同源性程度越高，可使用的相對溫度也越高。結(jié)果是，推斷出較高相對溫度將趨向于使反應(yīng)條件更為嚴(yán)格，而較低溫度也就較不嚴(yán)格。關(guān)于雜交反應(yīng)嚴(yán)格性的另外細(xì)節(jié)和解釋，參見Ausubel等人,《Current Protocolsin Molecular Biology)), Wiley Interscience Publishers, 1995?！皣?yán)格條件”或“高嚴(yán)格性條件”，如本文中所定義的，可如下鑒別(I)采用低離子強度和高溫進行洗滌，例如0. 015M氯化鈉/0. 0015M檸檬酸鈉/0. 1%十二烷基硫酸鈉，50°C； (2)在雜交過程中采用變性劑，諸如甲酰胺，例如50%(v/v)甲酰胺及0. 1%牛血清清蛋白/0. l%Ficoll/0. 1%聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸鈉緩沖液pH 6. 5，含750mM氯化鈉，75mM檸檬酸鈉，42 °C ;或(3)在采用50%甲酰胺，5x SSC (0. 75M NaCl，0. 075M檸檬酸鈉)，50mM磷酸鈉(pH 6. 8)，0. 1%焦磷酸鈉，5x Denhardt氏溶液，超聲波處理的鮭魚精DNA (50 u g/ml),0. 1%SDS,和10%硫酸右旋糖苷的溶液中于42°C雜交過夜，以及于42°C在0. 2x SSC (氯化鈉/檸檬酸鈉)中洗滌10分鐘，接著在含EDTA的0. Ix SSC中于55°C進行10分鐘高嚴(yán)格性洗漆?！爸械葒?yán)格條件”可以如 Sambrook 等人，《Molecular Cloning:ALaboratoryManual)),New York,Cold Spring Harbor Press, 1989所述鑒別，包括使用比上文所述較不嚴(yán)格的洗滌溶液和雜交條件(例如溫度、離子強度和％SDS)。中等嚴(yán)格條件的一個例子是于37°C 在含20% 甲酰胺，5x SSC(150mM NaCl，15mM 檸檬酸三鈉)，50mM 磷酸鈉(pH 7. 6)，5xDenhardt氏溶液，10%硫酸右旋糖苷，和20mg/ml變性剪切的鮭魚精DNA的溶液中溫育過夜，接著在Ix SSC中于約37-50°C洗滌濾膜。技術(shù)人員將認(rèn)識到如何根據(jù)需要調(diào)整溫度、離子強度等以適應(yīng)諸如探針長度等因素。
術(shù)語“表位標(biāo)記的”在用于本文時指包含與“標(biāo)簽多肽”融合的TAT多肽或抗TAT抗體的嵌合多肽。標(biāo)簽多肽具有足夠殘基以提供表位而可制備針對其的抗體，但又足夠短使得其不干擾與其融合的多肽的活性。標(biāo)簽多肽優(yōu)選還是相當(dāng)獨特的，使得所述抗體基本上不與其它表位發(fā)生交叉反應(yīng)。合適的標(biāo)簽多肽通常具有至少6個氨基酸殘基且通常在約8個到約50個氨基酸殘基之間(優(yōu)選在約10個到約20個氨基酸殘基之間)?！坝谢钚缘摹被颉盎钚浴睘榱吮景l(fā)明指保留天然或天然存在TAT的生物學(xué)和/或免疫學(xué)活性的TAT多肽形式，其中“生物學(xué)”活性指由天然或天然存在TAT引起的，誘導(dǎo)針對天然或天然存在TAT所具有的抗原性表位的抗體生成的能力以外的生物學(xué)功能(或是抑制性的或是刺激性的)，而“免疫學(xué)”活性指誘導(dǎo)針對天然或天然存在TAT所具有的抗原性表位的抗體生成的能力。術(shù)語“拮抗劑”以最廣義使用，包括部分或完全阻斷、抑制、或中和本文中所公開的天然TAT多肽的生物學(xué)活性的任何分子。類似的，術(shù)語“激動劑”以最廣義使用，包括模擬本文中所公開的天然TAT多肽的生物學(xué)活性的任何分子。合適的激動劑或拮抗劑分子明確包括激動性或拮抗性抗體或抗體片段、天然TAT多肽的片段或氨基酸序列變體、肽、反義寡核苷酸、有機小分子等。用于鑒定TAT多肽的激動劑或拮抗劑分子的方法可包括使TAT多肽接觸候選激動劑或拮抗劑分子并測量通常與TAT多肽有關(guān)的一種或多種生物學(xué)活性的可檢測變化。“處理”或“治療”或“緩和”指治療性處理及預(yù)防性或防范性措施二者，其中目標(biāo)是預(yù)防或減緩(減輕)所針對的病理學(xué)狀況或紊亂。需要治療的受試者包括早就患有紊亂的受試者以及傾向于患上紊亂的受試者或要預(yù)防紊亂的受試者。如果在依照本發(fā)明的方法接受治療量的抗TAT抗體、TAT結(jié)合寡肽或TAT結(jié)合有機分子后，患者在如下一項或多項中顯示出可觀察和/或可測量的降低或消失，那么受試者或哺乳動物成功“治療” 了表達TAT多肽的癌癥癌細(xì)胞數(shù)減少或癌細(xì)胞消失；腫瘤體積縮??；癌細(xì)胞浸潤到周圍器官中，包括癌傳播到軟組織和骨中受到抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選停止)；腫瘤轉(zhuǎn)移受到抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選停止);腫瘤生長受到一定程度的抑制；和/或與特定癌癥有關(guān)的一種或多種癥狀得到一定程度的減輕；發(fā)病率和死亡率降低；及生命質(zhì)量提高。就抗TAT抗體或TAT結(jié)合寡肽可預(yù)防癌細(xì)胞生長和/或殺死現(xiàn)有癌細(xì)胞而言，它可能是抑制細(xì)胞的和/或毒害細(xì)胞的。這些體征或癥狀的減輕還可以由患者感受到。用于評估疾病的成功治療和改善的上述參數(shù)可以容易地通過內(nèi)科醫(yī)師所熟悉的常規(guī)流程來測量。對于癌癥治療，可通過例如評估疾病進展時間(time to diseaseprogression, TTP)和/或測定響應(yīng)速率(response rate, RR)來測量功效。轉(zhuǎn)移可通過分期測試(staging test)來測定，及通過骨掃描及鈣水平和其它酶的測試以測定是否傳播到骨。還可進行CT掃描以查明是否傳播到骨盆及該區(qū)域中的淋巴結(jié)。分別使用胸腔X射線和通過已知方法進行的肝酶水平測量來分別查明是否轉(zhuǎn)移到肺和肝。用于監(jiān)測疾病的其它常規(guī)方法包括經(jīng)直腸超聲檢查(TRUS)和經(jīng)直腸針吸活組織檢查(TRNB)?！伴L期”施用指以與短期模式相反的連續(xù)模式施用藥劑，從而將初始治療效果(活性)維持較長的一段時間?！伴g歇”施用指并非連續(xù)不間斷進行的處理，而是本質(zhì)上是循環(huán)的處理。 對于癌癥的治療、減輕癥狀、或診斷而言，“哺乳動物”指歸入哺乳類的任何動物，包括人、家畜和牲畜，及動物園、運動或?qū)櫸飫游?，諸如犬、貓、牛、馬、綿羊、豬、山羊、兔等。優(yōu)選的是，哺乳動物指人?！奥?lián)合”一種或多種其它治療劑的施用包括同時(共同)施用和任意次序的連續(xù)施用?！拜d體”在用于本文時包括藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑，它們在所采用的劑量和濃度對暴露于其的細(xì)胞或哺乳動物是無毒的。通常，生理學(xué)可接受的載體是PH緩沖水溶液。生理學(xué)可接受載體的來自包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸鹽的緩沖劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA ;糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽相反離子，諸如鈉；和/或非離子表面活性劑，諸如TWEEN 、聚乙二醇(PEG)和“固相”或“固體支持物”意指本發(fā)明的抗體、TAT結(jié)合寡肽或TAT結(jié)合有機分子可粘著或附著其上的非水性基質(zhì)。本文中所涵蓋的固相的例子包括那些部分或完全由玻璃(例如可控孔徑玻璃)、多糖(例如瓊脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和聚硅氧烷(silicone)制成的固相。在某些實施方案中，根據(jù)語境，固相可包括測定板的孔；在其它實施方案中，它指純化柱(例如親和層析柱)。此術(shù)語還包括離散顆粒的不連續(xù)固相，諸如美國專利4，275，149中所述。“脂質(zhì)體”指由各種類型脂質(zhì)、磷脂和/或表面活性劑構(gòu)成的，可用于對哺乳動物遞送藥物(諸如TAT多肽、針對其的抗體或TAT結(jié)合寡肽)的小囊泡。與生物膜的脂質(zhì)排列相似，脂質(zhì)體的成分通常排列成雙層形式。“小”分子或有機“小”分子在本文中定義為分子量小于約500道爾頓。本文中所公開的多肽、抗體、TAT結(jié)合寡肽、TAT結(jié)合有機分子、或其激動劑或拮抗劑的“有效量”指足以實現(xiàn)明確規(guī)定的目的的量?！坝行Я俊笨蓱{經(jīng)驗且以常規(guī)方式，聯(lián)系所述的目的來確定。術(shù)語“治療有效量”指在受試者或哺乳動物中有效“治療”疾病或紊亂的抗體、多肽、TAT結(jié)合寡肽、TAT結(jié)合有機分子或其它藥物的量。在癌癥的情況中，藥物的治療有效量可減少癌細(xì)胞數(shù)；縮小腫瘤體積；抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選停止)癌細(xì)胞浸潤到周圍器官中；抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；一定程度的抑制腫瘤生長；和/或一定程度的減輕與癌癥有關(guān)的一種或多種癥狀。參見本文中“治療”的定義。就藥物可預(yù)防現(xiàn)存癌細(xì)胞生長和/或殺死現(xiàn)有癌細(xì)胞的程度而言，它可以是抑制細(xì)胞的和/或毒害細(xì)胞的?？筎AT抗體、TAT多肽、TAT結(jié)合寡肽或TAT結(jié)合有機分子的“生長抑制量”指能夠在體外或在體內(nèi)抑制細(xì)胞，尤其是腫瘤，例如癌細(xì)胞生長的量。抗TAT抗體、TAT多肽、TAT結(jié)合寡肽或TAT結(jié)合有機分子為了抑制腫瘤性細(xì)胞生長的“生長抑制量”可憑經(jīng)驗且以常規(guī)方式來確定?？筎AT抗體、TAT多肽、TAT結(jié)合寡肽或TAT結(jié)合有機分子的“細(xì)胞毒性量”指能夠在體外或在體內(nèi)引起細(xì)胞，尤其是腫瘤，例如癌細(xì)胞破壞的量?？筎AT抗體、TAT多肽、TAT結(jié)合寡肽或TAT結(jié)合有機分子為了抑制腫瘤性細(xì)胞生長的“細(xì)胞毒性量”可憑經(jīng)驗且以常規(guī)方式來確定。 術(shù)語“抗體”以最廣義使用，明確覆蓋例如單一抗TAT單克隆抗體(包括激動性、拮抗性和中和性抗體)、具有多表位特異性的抗TAT抗體組合物、多克隆抗體、單鏈抗TAT抗體、及抗TAT抗體的片段(見下文)，只要它們展現(xiàn)出期望生物學(xué)或免疫學(xué)活性。術(shù)語“免疫球蛋白”(Ig)在本文中與抗體可互換使用?！胺蛛x的”抗體指已經(jīng)鑒定且與/由其天然環(huán)境的一種成分分開和/或回收的抗體。其天然環(huán)境的污染性成分指會干擾該抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在優(yōu)選的實施方案中，將抗體純化至(I)根據(jù)Lowry方法的測定，抗體重量超過95%，最優(yōu)選重量超過99%，(2)足以通過使用轉(zhuǎn)杯式測序儀獲得至少15個殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(3)根據(jù)使用考馬斯藍(lán)或優(yōu)選銀染色的還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE，達到同質(zhì)。既然抗體天然環(huán)境的至少一種成分不會存在，那么分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體。然而，分離的抗體通常通過至少一個純化步驟來制備?；镜?鏈抗體單元是由兩條相同的輕鏈(L)和兩條相同的重鏈(H)構(gòu)成的異四聚體糖蛋白(IgM抗體由5個基本的異四聚體單元及稱作J鏈的另外多肽組成，因此包含10個抗原結(jié)合位點；而分泌型IgA抗體可聚合形成包含2-5個基本的4鏈單元及J鏈的多價裝配物)。在IgG的情況中，4鏈單元通常是約150，000道爾頓。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與重鏈相連，而兩條重鏈通過一個或多個二硫鍵彼此相連，二硫鍵的數(shù)目取決于重鏈的同種型。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規(guī)律的鏈內(nèi)二硫鍵。每條重鏈在N-末端具有一個可變區(qū)(Vh)，接著是三個(對于a和Y鏈)或四個(對于U和e同種型)恒定區(qū)(Ch)。每條輕鏈在N-末端具有一個可變區(qū)(VJ，接著是其另一端的一個恒定區(qū)(Q)。'與￥11排列在一起，而Q與重鏈的第一恒定區(qū)(ChI)排列在一起。認(rèn)為特定的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈可變區(qū)之間形成界面。成對的一個Vh和一個'一起形成一個抗原結(jié)合位點。關(guān)于不同類別抗體的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，參見例如《Basic and Clinical Immunology》,第8版，DanielP. Stites, Abba I. Terr 和 Tristram G. Parslow 編，Appleton&Lange, Norwalk, CT, 1994,第71頁和第6章。
來自任何脊椎動物物種的輕鏈，根據(jù)其恒定區(qū)氨基酸序列，可歸入兩種截然不同類型中的一種，稱作卡帕(O和拉姆達U)。根據(jù)其重鏈(Ch)恒定區(qū)氨基酸序列，免疫球蛋白可歸入不同的類別或同種型。有五類免疫球蛋白1§么、1§0、1§￡、1§6和1§11，分別具有稱作a、6、e、Y和y的重鏈。根據(jù)Ch序列和功能的較小差異，Y和a類可進一步分為亞類，例如人類表達 下列亞類IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。術(shù)語“可變的”指可變區(qū)中的某些區(qū)段在抗體序列中差異廣泛的實情。V結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)抗原結(jié)合并限定特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，變異性并非均勻分布于可變區(qū)跨越的Iio個氨基酸。事實上，V區(qū)由15-30個氨基酸，稱作框架區(qū)(KR)的相對不變異的區(qū)段及將框架區(qū)分開的每個長度為9-12個氨基酸，稱作“高變區(qū)”的極度變異的較短區(qū)域構(gòu)成。天然重鏈和輕鏈的可變區(qū)各自包含四個FR，它們大多采取￠-折疊構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成￠-折疊結(jié)構(gòu)一部分的三個高變區(qū)連接。每條鏈中的高變區(qū)通過FR非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的高變區(qū)一起促成抗體的抗原結(jié)合位點的形成(參見 Kabat 等人，《Sequences of Proteins of Immunological Interest》,第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991 )。恒定區(qū)不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，諸如抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)中抗體的參與。術(shù)語“單克隆抗體”在用于本文時指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個抗體相同，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變外。單克隆抗體是高度特異的，針對單一抗原性位點。另外，與通常包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。除了它們的特異性，單克隆抗體的優(yōu)越性體現(xiàn)在它們在合成時可未受到其它抗體的污染。修飾語“單克隆”不能解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，可用于本發(fā)明的單克隆抗體可通過最初由Kohler et al., Nature, 256:495(1975)描述的雜交瘤方法來制備，或者可通過重組DNA方法在細(xì)菌、真核動物或植物細(xì)胞中制備(參見例如美國專利4，816，567)。“單克隆抗體”還可使用例如 Clackson et al. , Nature, 352:624-628 (1991)和 Marks et al. , J. Mol.Biol.，222:581-597(1991)中描述的技術(shù)從噬菌體抗體庫分離。單克隆抗體在本文中包括“嵌合”抗體，以及此類抗體的片段，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，只要它們展現(xiàn)出期望生物學(xué)活性(參見美國專利4，816，567和Morrison etal.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括包含衍生自非人靈長類動物(如舊大陸猴類(Old World Monkey)、猿等)的可變區(qū)抗原結(jié)合序列和人恒定區(qū)序列的“靈長類化(primatized) ”抗體?！巴暾贵w”指包含抗原結(jié)合位點以及Q和至少重鏈恒定區(qū)Ch1、Ch2和Ch3的抗體。恒定區(qū)可以是天然序列恒定區(qū)(例如人天然序列恒定區(qū))或其氨基酸序列變體。優(yōu)選的是，完整抗體具有一項或多項效應(yīng)器功能?！翱贵w片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)。抗體片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab' )2和Fv片段；雙抗體(diabody);線性抗體(參見美國專利 5，641，870，實施例 2; Zapata et al. , Protein Eng. 8 (10) : 1057-1062 (1995));單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個相同的抗原結(jié)合片段，稱作“Fab”片段，和一個殘余“Fe”片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。Fab片段由一條完整輕鏈及一條重鏈的可變區(qū)(Vh)和第一恒定區(qū)(ChI)組成。每個Fab片段對于抗原結(jié)合是單價的，即它具有一個抗原結(jié)合位點。胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生一個較大F(ab' )2片段，它粗略相當(dāng)于兩個通過二硫鍵相連的Fab片段，具有二價抗原結(jié)合活性且仍能夠交聯(lián)抗原。Fab’片段因在C0I結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了少數(shù)殘基而與Fab片段有所不同，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個或多個半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中對其中恒定區(qū)半胱 氨酸殘基攜帶游離硫醇基的Fab’的稱謂。F(ab’)2抗體片段最初是作為成對Fab’片段生成的，在Fab’片段之間具有鉸鏈半胱氨酸。還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。Fe片段包含通過二硫鍵保持在一起的兩條重鏈的羧基末端部分?？贵w的效應(yīng)器功能是由Fe區(qū)中的序列決定的，該區(qū)還是受到在某些類型細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的Fe受體(FcR)識別的部分?！癋v”是包含完整抗原識別和結(jié)合位點的最小抗體片段。此片段由緊密、非共價結(jié)合的一個重鏈可變區(qū)和一個輕鏈可變區(qū)的二聚體組成。從這兩個結(jié)構(gòu)域的折疊中散發(fā)出六個高變環(huán)(重鏈和輕鏈各3個環(huán))，貢獻出抗原結(jié)合的氨基酸殘基并賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個可變區(qū)(或只包含對抗原特異的三個CDR的半個Fv)也具有識別和結(jié)合抗原的能力，盡管親和力低于完整結(jié)合位點?！皢捂淔v”，也可縮寫為“sFv”或“scFv”，是包含連接成一條多肽鏈的抗體Vh和'結(jié)構(gòu)域的抗體片段。優(yōu)選的是，sFv多肽在Vh和'結(jié)構(gòu)域之間還包含多肽接頭，使得sFv形成抗原結(jié)合期望的結(jié)構(gòu)。關(guān)于sFv的綜述參見Pliickthun,《The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies》，vol. 113, Rosenburg 和 Moore 編，Springer-Verlag, New York,pp. 269-315,1994;Borrebaeck 1995,見下文。術(shù)語“雙抗體”指通過在Vh和\結(jié)構(gòu)域之間使用短接頭(約5-10個殘基)構(gòu)建sFv片段(見上一段)而制備的小型抗體片段，由于接頭短，使得V結(jié)構(gòu)域?qū)嵭墟滈g而非鏈內(nèi)配對，導(dǎo)致二價片段，即具有兩個抗原結(jié)合位點的片段。雙特異性雙抗體是兩個“交叉” sFv片段的異二聚體，其中兩種抗體的Vh和\結(jié)構(gòu)域存在于不同多肽鏈上。雙抗體更完整的描述于例如 EP 404, 097;WO 93/11161 ;Hollinger et al. , Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 90:6444-6448(1993)。非人(例如嚙齒類)抗體的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人抗體的序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區(qū)殘基用具有期望抗體特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類的高變區(qū)殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有發(fā)現(xiàn)的殘基。進行這些修飾是為了進一步改進抗體的性能。通常，人源化抗體包含至少一個、通常兩個基本上整個如下可變區(qū)，其中整個或基本上整個高變環(huán)對應(yīng)于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，且整個或基本上整個FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe),通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones et al. , Nature321:522-525(1986);Riechmann et al. , Nature 332:323-329 (1988);Presta,Curr.Op. Struct. Biol. 2:593-596(1992)。“物種依賴性抗體”，例如哺乳動物抗人IgE抗體，指對來自第一哺乳動物物種的抗原的結(jié)合親和力強于對來自第二哺乳動物物種的該抗原的同系物的結(jié)合親和力的抗體。通常，物種依賴性抗體“特異性結(jié)合”人類抗原(即具有不超過約1x10_7M，優(yōu)選不超過約1x10_8M，最優(yōu)選不超過約1x10_9M的結(jié)合親和力(Kd))，但是對來自第二非人哺乳動物物種的該抗原的同系物具有比其對人類抗原的結(jié)合親和力弱至少約50倍，或至少約500倍，或至少約1000倍的結(jié)合親和力。物種依賴性抗體可以是上文定義的各種類型抗體，但是優(yōu)選人源化抗體或人抗體。術(shù)語“依照Kabat的可變域殘基編號”或“依照Kabat的氨基酸位置編號”及其變體指Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. PublicHealth Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)中的抗體編輯用于重鏈可變域或輕鏈可變域的編號系統(tǒng)。使用此編號系統(tǒng)，實際的線性氨基酸序列可包含 較少或另外的氨基酸，對應(yīng)于可變域FR或CDR的縮短或插入。例如，重鏈可變域可包含H2殘基52后的單一氨基酸插入(依照Kabat為殘基52a)及重鏈FR殘基82后的插入殘基(例如依照Kabat為殘基82a、82b和82c等)。給定抗體的Kabat殘基編號可通過將抗體序列與“標(biāo)準(zhǔn)”Kabat編號序列對比同源區(qū)來確定。短語“基本上相似”或“基本上相同”在用于本文時表示兩個數(shù)值(通常一個涉及本發(fā)明的抗體而另一個涉及參照/比較抗體)之間足夠高的相似程度，以致本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為在用所述數(shù)值(例如Kd值)所測量的生物學(xué)特性背景內(nèi)兩個數(shù)值之間的差異具有很小的或沒有生物學(xué)和/或統(tǒng)計學(xué)顯著性。作為參照/比較抗體的數(shù)值的函數(shù)，所述兩個數(shù)值之間的差異優(yōu)選小于約50%，優(yōu)選小于約40%，優(yōu)選小于約30%，優(yōu)選小于約20%，優(yōu)選小于約10%?！敖Y(jié)合親和力”通常指分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間全部非共價相互作用總和的強度。除非另有說明，在用于本文時，“結(jié)合親和力”指反映結(jié)合對的成員(例如抗體與抗原)之間I: I相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X對其配偶體Y的親和力通常可用解離常數(shù)(Kd)來表述。親和力可通過本領(lǐng)域知道的常用方法來測量，包括本文中所描述的。低親和力抗體通常緩慢的結(jié)合抗原且趨于容易解離，而高親和力抗體通常更快速的結(jié)合抗原且趨于保持更長時間的結(jié)合。本領(lǐng)域知道測量結(jié)合親和力的多種方法，其中任一種都可用于本發(fā)明的目的。下文描述了具體的示例性實施方案。在一個實施方案中，依照本發(fā)明的“Kd”或“Kd值”是通過如下測定法所述使用Fab型式的目的抗體及其抗原進行的放射性標(biāo)記抗原結(jié)合測定法(RIA)來測量的通過在存在未標(biāo)記抗原的滴定系列的條件下，用最小濃度的125I標(biāo)記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被的平板捕捉結(jié)合的抗原來測量Fab對抗原的溶液中的結(jié)合親和力(Chen，et al.，J MolBiol 293:865-881 (1999)) o 為了確定測定條件，用 50mM 碳酸鈉(pH 9. 6)中的 5 y g/ml捕捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)過夜，隨后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白在室溫(約23° C)封閉2-5小時。在非吸附平板(Nunc#269620)中，將IOOpM或26pM[125I]_抗原與連續(xù)稀釋的目的Fab混合(例如與Presta et al. , CancerRes. 57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗體，F(xiàn)ab-12的評估一致)。然后將目的Fab保溫過夜；不過，保溫可持續(xù)更長時間(例如65個小時)以保證達到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板以進行室溫保溫(例如I小時)。然后除去溶液，并用含0. l%Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 u I/孔閃爍液(MicroScint-20; Packard),然后在Topcount伽馬計數(shù)器(Packard)上對平板計數(shù)10分鐘。選擇各Fab的給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于競爭性結(jié)合測定法。依照另一實施方案，Kd或Kd值是通過表面等離振子共振測定法使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)在 25 ° C 使用固定化抗原CM5芯片在約10個響應(yīng)單位(RU)測量的。簡而言之，依照供應(yīng)商的說明書用鹽酸N-乙基-N，-(3- 二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至5 u g/ml (約0. 2 ii M)，然后以5 iil/分鐘的流速注入以獲得約10個響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團。為了進行動力學(xué)測量，在25° C以約25iU/分鐘的流速注入在含0. 05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab (0. 78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3. 2)通過同時擬合結(jié)合和解離傳感圖計算結(jié)合速率(kQn)和解離速率U。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率IwZkm計算。參見例如Chen，Y.，et al.，JMol Biol 293:865-881(1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測定法，結(jié)合速率超過IO6M-1S'那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來測定，即根據(jù)分光計諸如配備了斷流裝置的 分光光度計(a stop-f low equipped spectrophometer) (Aviv Instruments)或 8000 系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用經(jīng)攪拌的比色杯的測量,在存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBS，pH 7. 2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25° C的熒光發(fā)射強度(激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm, 16nm帶通(band pass))的升高或降低。依照本發(fā)明的“結(jié)合速率”(on-rate, rate of association, association rate)或“k。/也可通過上文所述相同的表面等離振子共振技術(shù)使用BIAcOreTM-2000或BIAcoreTm-3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)在25° C使用固定化抗原CM5芯片在約10個響應(yīng)單位(RU)來測定。簡而言之，依照供應(yīng)商的說明書用鹽酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)_碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5, BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至5 u g/ml (約0. 2 u M)，然后以5 Ul/分鐘的流速注入以獲得約10個響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團。為了進行動力學(xué)測量，在25° C以約25 Ul/分鐘的流速注入在含0. 05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab(0. 78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3. 2)通過同時擬合結(jié)合和解離傳感圖計算結(jié)合速率(km)和解離速率。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率計算。參見例如 Chen, Y.，et al.，J Mol Biol 293:865-881(1999)。然而，如果根據(jù)上文表面等離振子共振測定法，結(jié)合速率超過IO6M4S'那么結(jié)合速率優(yōu)選使用熒光淬滅技術(shù)來測定，即根據(jù)分光計諸如配備了斷流裝置的分光光度計(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用經(jīng)攪拌的比色杯的測量,在存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBS，pH 7. 2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25° C的突光發(fā)射強度(激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。在一個實施方案中，依照本發(fā)明的“Kd”或“Kd值”是通過如下測定法所述使用Fab型式的抗體和抗原分子進行的放射性標(biāo)記抗原結(jié)合測定法(RIA)來測量的通過在存在未標(biāo)記抗原的滴定系列的條件下，用最小濃度的125I標(biāo)記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被的平板捕捉結(jié)合的抗原來測量Fab對抗原的溶液中的結(jié)合親和力(Chen, et al. , J Mol Biol 293:865-881(1999))。為了確定測定條件，用50mM碳酸鈉(pH 9.6)中的5 y g/ml捕捉用抗Fab抗體(CappelLabs)包被微量滴定板(Dynex)過夜，隨后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白在室溫(約23。C)封閉2-5小時。在非吸附平板(Nunc#269620)中，將IOOpM或26pM[125I]-抗原與連續(xù)稀釋的目的 Fab 混合(與 Presta et al. , Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)中抗 VEGF抗體，F(xiàn)ab-12的評估一致)。然后將目的Fab保溫過夜；不過，保溫可持續(xù)更長時間(例如65個小時)以保證達到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板以進行室溫保溫I小時。然后除去溶液，并用含0. l%Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 U I/孔閃爍液(MicroScint-20;Packard),然后在Topcount伽馬計數(shù)器(Packard)上對平板計數(shù)10分鐘。選擇各Fab的給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于競爭性結(jié)合測定法。依照另一實施方案，Kd或Kd值是通過表面等離振子共振測定法使用BIACOTeTM-2000或BIAcore -3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)在25° C使用固定化抗原CM5芯片在約10個響應(yīng)、單位(RU)測量的。簡而言之，依照供應(yīng)商的說明書用鹽酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)_碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5, BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至5 u g/ml (約0. 2 u M)，然后以5 Ul/分鐘的流速注入以獲得約10個響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團。為了進行動力學(xué)測量，在25° C以約25 Ul/分鐘的流速注入在含0. 05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab(0. 78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcore Evaluation Software version 3. 2)通過同時擬合結(jié)合和解離傳感圖計算結(jié)合速率(km)和解離速率Gwf)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率 kf/U 計算。參見例如 Chen, Y. , et al. , J Mol Biol 293:865-881(1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測定法，結(jié)合速率超過IO6M4S'那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來測定，即根據(jù)分光計諸如配備了斷流裝置的分光光度計(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用經(jīng)攪拌的比色杯的測量,在存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBS，pH 7. 2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25° C的熒光發(fā)射強度(激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。 在一個實施方案中，依照本發(fā)明的“結(jié)合速率”(on-rate, rate ofassociation, association rate)或“km”是通過上文所述相同的表面等離振子共振技術(shù)使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore, Inc. , Piscataway, NJ)在 25 ° C 使用固定化抗原CM5芯片在約10個響應(yīng)單位(RU)測定的。簡而言之，依照供應(yīng)商的說明書用鹽酸N-乙基-N，-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至5 ii g/ml (約0. 2iiM)，然后以5iU/分鐘的流速注入以獲得約10個響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團。為了進行動力學(xué)測量，在25° C以約25iU/分鐘的流速注入在含0. 05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab (0. 78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3. 2)通過同時擬合結(jié)合和解離傳感圖計算結(jié)合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率IwZkm計算。參見例如Chen，Y.，etal. , J Mol Biol 293:865-881 (1999) 0然而，如果根據(jù)上文表面等離振子共振測定法，結(jié)合速率超過IO6M-1S'那么結(jié)合速率優(yōu)選使用熒光淬滅技術(shù)來測定，即根據(jù)分光計諸如配備了斷流裝置的分光光度計(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用經(jīng)攪拌的比色杯的測量，在存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBS, pH7. 2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25。C的熒光發(fā)射強度(激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。短語“實質(zhì)性降低”或“實質(zhì)性不同”在用于本文時表示兩個數(shù)值(通常一個涉及本發(fā)明的抗體而另一個涉及參照/比較抗體)之間足夠高的差異程度，以致本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為在用所述數(shù)值(例如Kd值、HAMA反應(yīng))所測量的生物學(xué)特性背景內(nèi)兩個數(shù)值之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)顯著性。作為參照/比較抗體的數(shù)值的函數(shù)，所述兩個數(shù)值之間的差異優(yōu)選大于約10%，優(yōu)選大于約20%，優(yōu)選大于約30%，優(yōu)選大于約40%，優(yōu)選大于約50%?！翱乖笔强贵w可選擇性結(jié)合的預(yù)定抗原。靶抗原可以是多肽、碳水化合物、核酸、脂質(zhì)、半抗原或其它天然發(fā)生的或合成的化合物。優(yōu)選的是，靶抗原是多肽。就本文目的而 言，“受體人框架”是包含衍生自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架之氨基酸 序列的框架?！把苌浴比嗣庖咔虻鞍卓蚣芑蛉斯灿锌蚣艿氖荏w人框架包含與之相同的氨基酸序列，或者可包含預(yù)先存在的氨基酸序列變化。當(dāng)存在預(yù)先存在的氨基酸變化時，優(yōu)選存在不超過5個，優(yōu)選4個或更少，或者3個或更少預(yù)先存在的氨基酸變化。當(dāng)VH中存在預(yù)先存在的氨基酸變化時，優(yōu)選那些變化只位于71H、73H和78H中的三個、兩個或一個位置；例如，位于那些位置的氨基酸殘基可以是71A、73T和/或78A。在一個實施方案中，VL受體人框架在序列上與VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。本發(fā)明的抗體可能能夠競爭對第二抗體所結(jié)合的相同表位的結(jié)合。若單克隆抗體在標(biāo)準(zhǔn)體外抗體競爭結(jié)合分析中在相同抗體濃度阻斷其它單克隆抗體的結(jié)合達40%或更多，則認(rèn)為各單克隆抗體共享“相同表位”?！叭斯灿锌蚣堋笔谴砣嗣庖咔虻鞍譜L或VH框架序列選集中最常見的氨基酸殘基的框架。通常，所述人免疫球蛋白VL或VH選集來自可變區(qū)序列亞型。通常，所述序列亞型是如Kabat等人所述的亞型。在一個實施方案中，對于VL,所述亞型是如Kabat等人所述的亞型K I。在一個實施方案中，對于VH，所述亞型是如Kabat等人所述的亞型III。“VH亞型III共有框架”包含獲自Kabat等人所述的可變重鏈亞型III中的氨基酸序列的共有序列。“VL亞型I共有框架”包含獲自Kabat等人所述的可變輕鏈k亞型I中的氨基酸序列的共有序列。“未修飾的人框架”是具有與受體人框架相同的氨基酸序列的人框架，例如在受體人框架中沒有人到非人的氨基酸替代?！案淖兊母咦儏^(qū)”就本文目的而言是其中包含一個或多個(例如I個至約16個)氨基酸替代的高變區(qū)?！拔葱揎椀母咦儏^(qū)”就本文目的而言是具有與衍生它的非人抗體相同的氨基酸序列的高變區(qū)，即其中沒有一個或多個氨基酸替代的高變區(qū)。術(shù)語“高變區(qū)”、“ HVR ”、“ HV ”或“⑶R ”在用于本文時指抗體可變域中序列上高度可變且/或形成結(jié)構(gòu)上確定的環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含6個高變區(qū)三個在VH中(HI、H2、H3)，三個在VL中(LI、L2、L3)。本文使用且包括許多高變區(qū)的敘述。Kabat互補決定區(qū)(O)R)是以序列可變性為基礎(chǔ)的，而且是最常用的(Kabat et al. , Sequences of Proteinsof Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD. (1991))。Chothia 改為指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(Chothia and LeskJ. Mol.Biol. 196:901-917(1987))?！敖佑|”高變區(qū)是以可獲得復(fù)雜晶體結(jié)構(gòu)的分析為基礎(chǔ)的。下文記錄了這些高變區(qū)中每一個的殘基。除非另有說明，將采用Kabat編號。高變區(qū)的位置通常如下第24-34位氨基酸(HVR-Ll)、第49-56位氨基酸(HVR-L2)、第89-97位氨基酸(HVR-L3)、第26-35A位氨基酸(HVR-Hl)、第49-65位氨基酸(HVR-H2)和第93-102位氨基酸(HVR-H3)。高變區(qū)還可包括如下“延伸的高變區(qū)”:VL中的氨基酸24_36(L1)和氨基酸46-56 (L2)。對于這些定義中的每一個，可變域殘基是依照文獻Kabat等人(見上文)所述編號的?！翱蚣堋被颉癋R”殘基是可變區(qū)中除了如本文所定義的高變區(qū)殘基以外的那些殘基。 “人抗體”是具有與由人生成的抗體的氨基酸序列對應(yīng)的氨基酸序列且/或使用本文所公開的用于制備人抗體的任何技術(shù)制備的抗體。人抗體的這種定義明確排除了包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。“親和力成熟的”抗體指在其一個或多個CDR中具有導(dǎo)致抗體對抗原的親和力與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進的一處或多處改變的抗體。優(yōu)選的親和力成熟的抗體將具有納摩爾或甚至皮摩爾水平的對靶抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過本領(lǐng)域已知流程生成。Marks et al. , Bio/Technology 10:779-783 (1992)描述了經(jīng)由通過VH和VL結(jié)構(gòu)域改組的親和力成熟。下列文獻描述了⑶R和/或框架殘基的隨機誘變Barbas et al. , Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994) ; Schieret al., Gene 169:147-155 (1995);Yelton et al.，J. Immunol. 155:1994-2004(1995);Jackson et al.，J. Immunol. 154 (7) : 3310-9 (1995);及 Hawkins et al. , J. Mol.Biol.226:889-896(1992)?！白钄嘈浴笨贵w或“拮抗性”抗體指抑制或降低其所結(jié)合的抗原的生物學(xué)活性的抗體。優(yōu)選的阻斷性抗體或拮抗性抗體基本上抑制或完全抑制抗原的生物學(xué)活性?！癟AT結(jié)合寡肽”指結(jié)合，優(yōu)選特異性結(jié)合本文中所描述的TAT多肽的寡肽。TAT結(jié)合寡肽可使用已知寡肽合成方法而化學(xué)合成，或者可使用重組技術(shù)來制備和純化。TAT結(jié)合寡肽的長度通常是至少約5個氨基酸，或者長度為至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個氨基酸或更多，其中能夠結(jié)合，優(yōu)選特異性結(jié)合本文所述TAT多肽的此類TAT結(jié)合寡肽可使用眾所周知的技術(shù)無需過多實驗就得以鑒定。在這點上，注意到用于對寡肽庫篩選能夠特異性結(jié)合多肽靶物的寡肽的技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的(參見例如美國專利 5，556，762，5，750，373，4，708，871，4，833，092，5，223，409，5，403，484，5，571，689，5，663，143; PCT
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