專利名稱：一種格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及一種檢測中藥中非法添加西藥成分的器具，特別涉及一種格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡，屬于中藥非法添加西藥成分檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
糖尿病降糖中藥或保健品中最常非法添加的降糖西藥成分是格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪。據(jù)五個省市對市面上銷售的32種宣稱具有降糖作用中藥及中藥保健品進(jìn)行的抽樣化驗檢查發(fā)現(xiàn)，70%的藥物中都添加有降糖西藥成分。如果患者在不知情的情況下， 私自服用過量號稱純中藥的藥物，就會出現(xiàn)病情加重或惡化的情況。例如格列苯脲的降糖作用為甲苯磺丁脲的100 200倍，治療量范圍大，降糖作用強，半減期12 14小時，維持時間長，易引起低血糖昏迷，特別是老年人。低血糖昏迷如持續(xù)6小時以上引起大腦功能損害可能是不可逆的，主要是神經(jīng)元廣泛變性、壞死，大小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞浸潤。神經(jīng)系統(tǒng)中大腦皮質(zhì)、海馬回，小腦、尾狀核，蒼白球處低血糖最為明顯。目前，檢測中藥中非法添加西藥成分的主要方法有高效液相色譜法及液質(zhì)聯(lián)用等進(jìn)行定性和定量的分析。這些方法對實驗儀器設(shè)備要求高，操作繁瑣，對操作人員的專業(yè)知識要求高，費時費力。因此建立一種準(zhǔn)確可靠又快速方便的檢測中藥中西藥成分的分析方法是非常必要的。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型的目的在于提供一種操作簡便快捷、成本低、攜帶方便、非專業(yè)人員也能操作及可進(jìn)行現(xiàn)場檢測的膠體金試紙，且能同時檢測三類西藥降糖成分，克服現(xiàn)有技術(shù)操作繁瑣、專業(yè)要求高的缺陷。本實用新型的技術(shù)方案一種格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡，在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼表面有檢測窗孔3和加樣孔4，測試條2是由支承背板5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜7、14、15、硝酸纖維素膜6和吸水膜9所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9，另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜7、14、15 ；膠體金膜依次為含抗格列苯脲抗體、抗格列齊特抗體、抗格列吡嗪抗體的膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有三條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含格列苯脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶10，含格列齊特蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶11，含格列吡嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶12，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶13 ；測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測樣品中格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪的含量，檢測樣品為膠囊、片劑或藥丸降糖中藥樣品，處理方法如下(1)隨機采集一定量的待測樣本，粉碎均勻；[0008](2)稱取5g粉碎后的樣品，加入IOmL樣品抽提液，充分?jǐn)嚢杌旌?min以上，震蕩反應(yīng)30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸餾水；(3)將步驟(2)所得溶液移入IOmL離心管，4000r/min離心lOmin，取離心后的上清液；上清液澄清，按上清液樣品稀釋液為1 3的比例稀釋，即取上清液IOOyL加入 300 μ L樣品稀釋液，混合均勻后測定；上清液渾濁，則用濾紙過濾，取過濾后的上清液，按上清液100 μ L加入300 μ L樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，混合均勻后測定；樣品稀釋液為ρΗ7. 6、IOmmol PBST溶液。如果顯示檢測帶10、11、12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，表示檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪含量沒有超過允許值。如果檢測帶10、11、12不顯示顏色，只有質(zhì)控帶13顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪含量同時超過允許值。如果檢測帶10、11不顯示顏色，檢測帶12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲和格列齊特含量超過允許值，而格列吡嗪含量沒有超過允許值。如果檢測帶10、12不顯示顏色，檢測帶11和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲和格列吡嗪含量超過允許值，而格列齊特含量沒有超過允許值。如果檢測帶11、12不顯示顏色，檢測帶10和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列齊特和格列吡嗪含量超過允許值，而格列苯脲含量沒有超過允許值。如果檢測帶10不顯示顏色，檢測帶11、12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲含量超過允許值，而格列齊特、格列吡嗪含量沒有超過允許值。如果檢測帶11不顯示顏色，檢測帶10、12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列齊特含量超過允許值，而格列苯脲、格列吡嗪含量沒有超過允許值。如果檢測帶12不顯示顏色，檢測帶10、11和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列吡嗪含量超過允許值，而格列苯脲、格列齊特含量沒有超過允許值。如果檢測帶10、11、12和質(zhì)控帶13均不顯色，則表明測試條失效。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明三聯(lián)檢測卡能同時檢測出中藥樣品中含有的格列苯脲、格列齊特及格列吡嗪，本三聯(lián)檢測卡易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。

圖1格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡的外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測試條，3、檢測窗孔，4、加樣孔。圖2格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡的測試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、含格列本脲抗體的膠體金膜，14、含格列齊特抗體的膠體金膜，15、 含格列吡嗪抗體的膠體金膜，8、樣品墊，9、吸水膜。圖3格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡的硝酸玻璃纖維膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、含格列苯脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶，11、含格列齊特蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶，12、含格列吡嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶，13、質(zhì)控帶。
具體實施方式
本實用新型結(jié)合具體實施例參見附圖進(jìn)一步說明如下實施例1 格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡它是在檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測試條2的設(shè)置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長7cm，寬2cm，厚0. 5cm，薄殼壁厚0. 1cm，由工程塑料制成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內(nèi)。測試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約6. 0cm，片寬約0. km，厚度小于2. 5mm。 測試條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長6. Ocm,寬 0. 4cm ；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm，長2_2. 5cm,寬 0. 4cm0硝酸纖維素膜6上有三條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖3，三條顯示印跡帶中，第一條是檢測帶10，含格列苯脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，第二條檢測帶11，含格列齊特蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，第三條是檢測帶12，含格列吡嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，第四條是質(zhì)控帶13，含抗兔抗體或抗鼠抗體。調(diào)節(jié)三種蛋白質(zhì)偶聯(lián)物濃度大約為lmg/mL，抗兔抗體或抗鼠抗體濃度大約為 0. lmg/mL時噴膜。支承背板5 —端上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6—端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜7、14、15，膠體金膜7、14、15依次是含抗格列苯脲抗體、抗格列齊特抗體和抗格列吡嗪抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜。膠體金膜 7、14、15 均厚 0. 5-0. 8mm,長 0. 5-0. 6cm,寬 0. 4cm。樣品墊 8 厚 0. 5-0. 8mm,長 2cm, 寬0. 4cm0吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,長1. 6-2cm,寬0. 4cm0膠體金膜是將抗體與膠體金顆粒標(biāo)記后，調(diào)節(jié)濃度大約為ID涂布膠體玻璃纖維膜，烘干后備用金。金膜7、14、15、樣品墊8 及吸水膜9與硝酸纖維素膜6搭接長度為0. 1-0. 2cm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。實施例2本實用新型格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡用于檢測膠囊、片劑、藥丸等降糖中藥樣品中是否含有格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪，據(jù)此鑒別降糖中藥有無違法添加西藥降糖成分。處理方法如下(1)隨機采集一定量的待測樣本，粉碎均勻；(2)稱取5g粉碎后的樣品，加入IOmL樣品抽提液，充分?jǐn)嚢杌旌?min以上，震蕩反應(yīng)30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸餾水；(3)將步驟(2)所得溶液移入IOmL離心管，4000r/min離心lOmin，取離心后的上清液；上清液澄清，按上清液樣品稀釋液為1 3的比例稀釋，即取上清液100 μ L加入 300 μ L樣品稀釋液，混合均勻后測定；上清液渾濁，則用濾紙過濾，取過濾后的上清液，按上清液100 μ L加入300 μ L樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，混合均勻后測定；樣品稀釋液為ρΗ7. 6、IOmmol PBST溶液。使用格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡進(jìn)行檢測時，先將待檢測的樣品液從加樣孔中4滴注入格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡的樣品墊8，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜7所含的抗格列苯脲、抗格列齊特和抗格列吡嗪單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜6擴(kuò)散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)
^ ο檢測卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金標(biāo)記的抗體，在測試帶上分別與含格列苯脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、含格列齊特蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、含格列吡嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶。當(dāng)樣品中有相應(yīng)的待檢格列苯脲、格列齊特及格列吡嗪存在，則樣品加入后即與相應(yīng)的抗體發(fā)生反應(yīng)， 而不會與相應(yīng)的檢測帶所含的格列苯脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、格列齊特蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、格列吡嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應(yīng)，從而不顯色。主要反應(yīng)的結(jié)果有以下9種情況1、如果顯示檢測帶10、11、12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪含量沒有超過允許值。2、如果檢測帶10、11、12不顯示顏色，只有質(zhì)控帶13顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪含量同時超過允許值。3、如果檢測帶10、11不顯示顏色，檢測帶12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲和格列齊特含量超過允許值，而格列吡嗪含量沒有超過允許值。4、如果檢測帶10、12不顯示顏色，檢測帶11和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲和格列吡嗪含量超過允許值，而格列齊特含量沒有超過允許值。5、如果檢測帶11、12不顯示顏色，檢測帶10和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列齊特和格列吡嗪含量超過允許值，而格列苯脲含量沒有超過允許值。6、如果檢測帶10不顯示顏色，檢測帶11、12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列苯脲含量超過允許值，而格列齊特、格列吡嗪含量沒有超過允許值。7、如果檢測帶11不顯示顏色，檢測帶10、12和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列齊特含量超過允許值，而格列苯脲、格列吡嗪含量沒有超過允許值。8、如果檢測帶12不顯示顏色，檢測帶10、11和質(zhì)控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中格列吡嗪含量超過允許值，而格列苯脲、格列齊特含量沒有超過允許值。9、如果檢測帶10、11、12和質(zhì)控帶13均不顯色，則表明測試條失效。
權(quán)利要求1. 一種格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡，其特征在于在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1)中設(shè)置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4)，測試條 (2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、(14)、(15)、 硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜(7)、(14)、(15)；膠體金膜(7)、(14)、(15)依次是含抗格列苯脲抗體、抗格列齊特抗體、 抗格列吡嗪抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有三條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含格列苯脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶(10)，含格列齊特蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶(11)， 含格列吡嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物檢測帶(12)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(13)；測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
專利摘要一種格列苯脲、格列齊特和格列吡嗪三聯(lián)檢測卡，屬于中藥中非法添加西藥成分檢測技術(shù)領(lǐng)域。本實用新型三聯(lián)檢測卡外殼內(nèi)有測試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、數(shù)段膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；數(shù)段膠體金膜依次是含抗格列苯脲抗體、抗格列齊特抗體、抗格列吡嗪抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有3條檢測帶，分別含格列苯脲蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、格列齊特蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、格列吡嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，另有1條含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本實用新型優(yōu)點是能同時檢測出降糖中藥中非法添加的格列苯脲、格列齊特及格列吡嗪。檢測卡易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號G01N33/558GK202075279SQ20102068145
公開日2011年12月14日 申請日期2010年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月27日
發(fā)明者吳文曄, 周堅, 熊曉芳 申請人:無錫安迪生物工程有限公司