專利名稱：檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)成份的檢測(cè)的技術(shù)領(lǐng)域，具體來說，涉及檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法。
背景技術(shù)：
山梨酸是一種常用的食品防腐劑，與其鉀鹽的防腐效果相同，它對(duì)多種微生物細(xì)胞的呼吸酶系的活性有抑制作用，并對(duì)微生物的細(xì)胞膜生長(zhǎng)有阻礙作用，從而達(dá)到抑制微生物的繁殖。由于它既能抑制多種微生物的繁殖，又具有很好的殺菌作用，被廣泛用于罐頭、果醬、醬油、食醋、汽水以及各類肉食品中。山梨酸是各國(guó)允許使用，而且歷史比較悠久的食品防腐劑。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 21703-2010乳和乳制品中苯甲酸和山梨酸的測(cè)定》中用液相色譜法來測(cè)定山梨酸的含量。該方法的預(yù)處理為先在IOOmL容量瓶中稱取液體乳20g，或者在 IOOmL容量瓶中稱取固體樣品3g，加IOmL水全部溶解。然后加入25mL 0. lmol/L氫氧化鈉溶液，在70°C水浴中處理15min。冷卻后，用0. 5mol/L硫酸溶液將pH調(diào)節(jié)到8，然后加人 2mL 92g/L亞鐵氰化鉀溶液和2mL 183g/L乙酸鋅溶液。劇烈振搖，靜置15min，混合后冷卻到室溫，再用甲醇定容，靜置15min，上清液經(jīng)過濾膜過濾。收集濾液作為試樣溶液，用于高效液相色譜儀測(cè)定。該方法需要使用甲醇45mL 65mL，會(huì)對(duì)環(huán)境造成一定污染，同時(shí)處理樣品時(shí)間長(zhǎng)，操作較為復(fù)雜。該方法通常是先對(duì)具有確定山梨酸含量的工作液進(jìn)行標(biāo)定，然后再用同樣的方法處理和測(cè)試被測(cè)樣品，根據(jù)這兩次測(cè)量的結(jié)果來推算被測(cè)樣品中的山梨酸含量。但這方法測(cè)量精度不高，由于一次測(cè)量的數(shù)值可能會(huì)受到一些不確定因素的干擾，因此根據(jù)該工作液的數(shù)值確定的樣品中山梨酸含量可能并不準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法，它采用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測(cè)待測(cè)乳或乳粉樣品中的山梨酸峰面積，并將此峰面積與預(yù)先制定出的山梨酸含量與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)來確定乳或乳粉中的山梨酸含量。該方法采用了新穎的預(yù)處理過程，使得操作更為簡(jiǎn)便，精度較高，并提高了檢測(cè)時(shí)的抗干擾能力。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法，該方法使用了氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，包括以下步驟(i)制備具有不同山梨酸含量的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀在適當(dāng)?shù)臍庀嗌V和質(zhì)譜條件下對(duì)其檢測(cè)， 從而生成山梨酸含量與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(ii)稱取一定重量的乳或乳粉，對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理從而形成待測(cè)乳或乳粉樣品，利用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀在與步驟(i)相同的氣相色譜-質(zhì)譜條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到待測(cè)乳或乳粉樣品的檢測(cè)峰面積；和(iii)將步驟(ii)中獲得的待測(cè)乳或乳粉樣品的檢測(cè)峰面積與步驟(i)中得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，確定待測(cè)乳或乳粉樣品中的山梨酸含量。在檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法的再一種示意性實(shí)施方式中，步驟(i)中的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備方法如下(a)分別取200. 0 μ g/mL的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液0. ImL, 0. 4mL,0. 6mL、0. 8mL和1. OmL到離心管中；(b)在所述離心管中加入蒸餾水至5mL，再加入 6mol/L的1. OmL鹽酸溶液和2. OmL分析純二氯甲烷，用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在 3000rpm 4000rpm條件下離心5 IOmin ； (c)用注射器吸取下清液經(jīng)過濾膜過濾到進(jìn)樣小瓶，從而獲得 10. 0 μ g/mL,40. 0 μ g/mL,60. 0 μ g/mL,80. 0 μ g/mL 和 100. 0 μ g/mL 的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。在檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法的另一種示意性實(shí)施方式中，氣相色譜條件為色譜柱毛細(xì)管色譜柱，固定相為亞硝基對(duì)苯二甲酸改性聚乙二醇或相當(dāng)者，色譜柱規(guī)格為 30mX0. 25mmX0. 2μπι 或 30mX0. 32mmX 0. 2 μ m ；進(jìn)樣口溫度250 300 °C ；進(jìn)樣方式分流，分流比為40 1到50 1;載氣高純氦氣；流速毛細(xì)管色譜柱內(nèi)徑為0.25mm 的流速為1. 0 1. 4mL/min,毛細(xì)管色譜柱內(nèi)徑為0. 32mm的流速為1. 8 2. 5mL/min ；升溫程序如下初溫為140°C，維持1 anin，然后以10 15°C /min升到175 190°C后，保持 4 7min，程序共8 Hmin。質(zhì)譜條件為電離方式電子轟擊電離(EI)；電離能量70eV; 離子源溫度200 220°C;傳輸線溫度250 沘0 ；溶劑延遲時(shí)間3. 0 5. 5min ；進(jìn)樣量 IyL;掃描模式多反應(yīng)檢測(cè)(MRM)，定性離子m/z 112 > 67，112 > 97，定量離子m/z 112 > 97 ；碰撞能量:m/z 112 > 67 為 3V，m/z 112 > 97 為 6V。在檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法的還一種示意性實(shí)施方式中，步驟(ii)中的預(yù)處理進(jìn)一步包括如下步驟(a)稱取5-10g待測(cè)乳樣品到25mL容量瓶中，加入1 2g 乙酸鋅，用蒸餾水定容到刻度，轉(zhuǎn)移到50mL離心管中；(b)用旋渦混合器充分混合；(c)用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 IOmin ； (d)過濾水層，吸取5mL濾液于一個(gè)的離心管中，加入6mol/L鹽酸溶液1. OmL, 2. OmL分析純二氯甲烷；(e)用旋渦混合器混合 lmin，用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 lOmin。在檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法的另一種示意性實(shí)施方式中，步驟(ii)中的預(yù)處理進(jìn)一步包括如下步驟(a)稱取2 3g乳粉樣品于50mL離心管中，加入1 2g乙酸鋅，用蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中，用蒸餾水定容到刻度，充分混合后轉(zhuǎn)入50mL 離心管中；(b)用旋渦混合器充分混合；(c)用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心 5 IOmin ； (d)過濾水層，吸取5mL濾液于一個(gè)的離心管中，加入6mol/L鹽酸溶液1. OmL, 2. OmL分析純二氯甲烷；(e)用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 lOmin。上述檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法采用了氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀，對(duì)制備出的不同山梨酸含量的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，得出山梨酸含量與峰面積之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并將檢測(cè)出的待測(cè)乳或乳粉樣品的山梨酸峰面積與該標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，從而得出待測(cè)乳或乳粉樣品中的山梨酸含量。與國(guó)標(biāo)GB 21703-2010中僅通過一次檢測(cè)即得出對(duì)照值的方法相比，這種方法利用多個(gè)檢測(cè)點(diǎn)的數(shù)據(jù)擬合成了標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終的檢測(cè)精度更高。上述檢測(cè)方法中采用的氣相色譜-質(zhì)譜條件使用了較佳參數(shù)，組合使用了 SCAN(全掃描)模式和MRM(多反應(yīng)檢測(cè))模式，能獲得更高的檢測(cè)精度，并且在檢測(cè)中的干擾因素較小，基本不會(huì)負(fù)面影響檢測(cè)結(jié)果。具體的說，進(jìn)樣口溫度的選擇能保證樣品瞬間汽化，選擇的較佳分流比也可以保證樣品能被檢測(cè)到，并且還不至于污染氣質(zhì)的離子源。不同色譜柱的流速大小，則是按照色譜柱廠家提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理得出的較優(yōu)數(shù)據(jù)。另外，升溫程序還能保證在較短的時(shí)間內(nèi)分離樣品，節(jié)省時(shí)間。傳輸線溫度可以保證汽化的樣品在進(jìn)入離子源時(shí)不液化，溶劑延遲時(shí)間則與程序升溫的時(shí)間對(duì)應(yīng)。而且，質(zhì)譜條件下的碰撞電壓時(shí)經(jīng)過優(yōu)化而選出的，在此電壓條件下，被測(cè)物的響應(yīng)度最高。另外，該檢測(cè)方法對(duì)乳或乳粉的預(yù)處理也更為簡(jiǎn)便，消耗了更少有機(jī)溶劑，操作時(shí)間短，并盡可能多地排除了干擾因子。


以下附圖僅對(duì)本發(fā)明做示意性說明和解釋，并不限定本發(fā)明的范圍，其中圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，氣相色譜-質(zhì)譜儀處于SCAN模式時(shí)，得到的 100. 0 μ g/mL山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖；圖2是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于SCAN模式時(shí)，得到的100. 0 μ g/mL山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)譜圖；圖3是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于MRM模式時(shí)，得到的 100. 0 μ g/mL山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖；圖4是在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于MRM模式時(shí)，得到的100. 0 μ g/mL山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)譜圖；圖5是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于MRM模式時(shí)的一種山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中山梨酸含量與峰面積間對(duì)應(yīng)關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例方式為了對(duì)本發(fā)明的技術(shù)特征、目的和效果有更加清楚的理解，現(xiàn)對(duì)照

本發(fā)明的具體實(shí)施方式
。需要指出的是，本發(fā)明中所提到的各具體數(shù)值，并非完全數(shù)學(xué)意義上的數(shù)字，凡是符合化學(xué)工程意義上的數(shù)值都是適用的。本發(fā)明實(shí)施例中采用的實(shí)驗(yàn)儀器與試劑如下450GC-300MS氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀購(gòu)自美國(guó)瓦里安(VARIAN)公司；色譜柱毛細(xì)管色譜柱，固定相為亞硝基對(duì)苯二甲酸改性聚乙二醇或相當(dāng)者，色譜柱規(guī)格為 30mX0. 25mmX0. 2μπι 或 30mX0. 32mmX0. 2ym ；離心管規(guī)格是10 15mL以及50mL，上述離心管的規(guī)格是根據(jù)離心機(jī)的尺寸來選擇，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，所有能達(dá)到檢測(cè)目的的離心管規(guī)格都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)；山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液取自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心，濃度1. Og/L，編號(hào)GBW(E) 100022 ；山梨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為200. 0μ g/mL，制備方法是取濃度為1. Og/L的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液lmL，用蒸餾水定容到5mL ；鹽酸溶液濃度為6mol/L，制備方法是取50mL有優(yōu)級(jí)純鹽酸溶液，用蒸餾水定容于IOOmL容量瓶中；乙酸鋅屬于分析純；
二氯甲烷屬于色譜純。 本發(fā)明實(shí)施例中采用的儀器檢測(cè)條件將在下文描述。氣相色譜條件進(jìn)樣口溫度250 300°C，進(jìn)樣口溫度要保證樣品能被汽化，上述溫度范圍選擇可以保證樣品瞬間汽化，在檢測(cè)過程中無什么區(qū)別；進(jìn)樣方式分流，分流比為40 1到50 1，該分流比是較優(yōu)數(shù)據(jù)，可以保證樣品被檢測(cè)到，同時(shí)還不至于污染氣質(zhì)的離子源；載氣高純氦氣；流速毛細(xì)管色譜柱內(nèi)徑為0. 25mm的流速為1. 0 1. 4mL/min，毛細(xì)管色譜柱內(nèi)徑為0. 32mm的流速為1. 8 2. 5mL/min，針對(duì)不同色譜柱選定的流速大小，是按照色譜柱廠家提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理得出的較優(yōu)數(shù)據(jù)；升溫程序如下初溫為140°C維持1 2min，然后以10 15°C /min升到175 190°C后，保持4 7min，程序共8 Hmin，相對(duì)而言，程序升溫是較靈活的一項(xiàng)，此處提供的數(shù)據(jù)只是作為其中一種可能的實(shí)施方式，不過用此程序升溫條件，可以保證在較短的時(shí)間內(nèi)分離樣品，節(jié)省時(shí)間。質(zhì)譜條件電離方式電子轟擊電離(EI)；電離能量70eV ；離子源溫度200 220°C，在實(shí)際操作過程中，氣質(zhì)的離子源溫度默認(rèn)為200°C， 有時(shí)為了減少離子源被污染，可以提高20°C ；傳輸線溫度250 280°C，傳輸線溫度是保證汽化的樣品在進(jìn)入離子源時(shí)不液化，此范圍內(nèi)的任何溫度范圍都可以達(dá)到要求；溶劑延遲時(shí)間3. 0 5. 5min，溶劑延遲時(shí)間是與程序升溫的時(shí)間對(duì)應(yīng)的，采用最快的程序升溫(約8min)，溶劑延遲時(shí)間為3. Omin，采用最慢的程序升溫(約Hmin)，溶劑延遲時(shí)間為5. 5min ；進(jìn)樣量lyL;掃描模式多反應(yīng)檢測(cè)(MRM)，定性離子m/z 112 > 67，112 > 97，定量離子m/z 112 > 97 ；碰撞能量:m/z112 > 67 為 3V，m/z 112 > 97 為 6V。下面將結(jié)合一個(gè)具體實(shí)施例對(duì)檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的檢測(cè)方法進(jìn)行具體描述。山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備下文將說明每mL 二氯甲烷中山梨酸含量分別為10.0μβ、40.0μβ、60.0μβ、 80. Oyg和100. O μ g的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備方法。取200. O μ g/mL 的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液 0. ImL,0. 4mL、0. 6mL、0. 8mL 和 1. OmL 分別置于到一個(gè)15mL離心管中，分別在離心管中加入蒸餾水至5. OmL，再加入先前配得的1. OmL鹽酸溶液(濃度6mol/L)和2mL 二氯甲烷，用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在3000rpm條件下離心IOmin ；用注射器吸取各離心管下清液經(jīng)過濾膜過濾到進(jìn)樣小瓶，此即為制得的ImL 二氯甲烷中分別含 10. O μ g/mL、40. O μ g/mL、60. O μ g/mL、80. O μ g/mL 和 100. O μ g/mL 山梨酸的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定本發(fā)明使用了 300-MS氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀作為檢測(cè)設(shè)備，其工作條件如下氣相色譜條件進(jìn)樣口溫度250 300 V ；進(jìn)樣方式分流，分流比為40 1 ；載氣高純氦氣；流速毛細(xì)管色譜柱內(nèi)徑為0. 25mm的流速為1. OmL/min ；升溫程序如下初溫為140°C維持lmin，然后以15°C /min升到185°C后，保持 6min,禾呈序共lOmin。質(zhì)譜條件電離方式電子轟擊電離(EI)；電離能量70eV;離子源溫度200°C ；傳輸線溫度250°C ；溶劑延遲時(shí)間3. Omin ；進(jìn)樣量lyL;掃描模式多反應(yīng)檢測(cè)(MRM)，定性離子m/z 112 > 67，112 > 97，定量離子m/z 112 > 97 ；碰撞能量:m/z112 > 67 為 3V，m/z 112 > 97 為 6V。按照上述制備山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的條件，根據(jù)上述條件調(diào)節(jié)氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀，待狀態(tài)穩(wěn)定后，用氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)制備出的具有不同山梨酸含量的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)行分析，再根據(jù)所標(biāo)定的數(shù)值確定山梨酸含量與峰面積對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，此即為山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖1是在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于SCAN模式時(shí)，取上述山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100. O μ g/ mL得到的總離子流色譜圖；圖2是在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于SCAN模式時(shí)，取上述山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100. Ομ g/mL得到的質(zhì)譜圖；圖3是在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于MRM模式時(shí)，取上述山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100. O μ g/mL得到的總離子流色譜圖；圖4是在氣相色譜-質(zhì)譜儀處于MRM 模式時(shí)，取上述山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100. O μ g/mL得到的質(zhì)譜圖。圖5是在氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀處于MRM模式時(shí)的一種山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，橫坐標(biāo)表示所吸取的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中所含的山梨酸的質(zhì)量(所取的點(diǎn)分別是每毫升二氯甲烷中含有山梨酸10. O μ g、40. O μ g、60. O μ g、80. O μ g、100. O μ g)，縱坐標(biāo)是相應(yīng)山梨酸質(zhì)量測(cè)得的峰面積。值得一提的是，在SCAN模式下，被測(cè)物只要在質(zhì)譜中有響應(yīng)都會(huì)在工作站中形成峰，有時(shí)雜質(zhì)峰的響應(yīng)會(huì)超過被測(cè)物的響應(yīng)，或者會(huì)對(duì)被測(cè)物造成干擾。 MRM模式是在SCAN模式后選擇被測(cè)物的幾個(gè)特征離子來進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)要將離子進(jìn)行二次打碎，通過二次打碎找到更合適的離子，這樣就會(huì)將被測(cè)物中的干擾去掉。如圖1和圖3所示，圖1為SCAN模式，其中基線很高，被測(cè)物的峰型很差；圖3為MRM模式，峰型尖銳且對(duì)稱。在本實(shí)施例中，先用SCAN模式找出被測(cè)物的保留時(shí)間和離子碎片，然后用MRM模式進(jìn)行檢測(cè)，避免了干擾，并且MRM模式只能由本發(fā)明中使用的氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀(GC-MS/MS)實(shí)現(xiàn)。得出的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)數(shù)據(jù)如下初始線性曲線擬合，線性方程y = +1473. 7448 X _1. 3407+4 ；偏差0.22%。利用本發(fā)明的上述方法確定出的山梨酸含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以很方便地對(duì)乳或乳粉中的山梨酸含量進(jìn)行檢測(cè)。下文將詳細(xì)說明乳或乳粉中山梨酸含量的檢測(cè)方法。乳中山梨酸含量的檢測(cè)首先，稱取IOg乳樣品到25mL容量瓶中，加入2g乙酸鋅，用蒸餾水定容到刻度，轉(zhuǎn)移到50mL離心管中，用旋渦混合器充分混合，用離心機(jī)在4000rpm條件下離心5min。然后，過濾水層，吸取5. OmL濾液于一個(gè)15mL的離心管中，加入6mol/L鹽酸溶液 1. OmL, 2. OmL 二氯甲烷，用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在3000rpm條件下離心lOmin。最后，用ImL注射器吸取下清液經(jīng)過濾膜過濾到進(jìn)樣小瓶，此即為制得的待測(cè)乳樣品。將上述待測(cè)乳或乳粉樣品注入到氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀中，在與山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的檢測(cè)條件下，得到峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)比，從而獲得其中的山梨酸含量(yg)。式樣中山梨酸含量X，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mg/kg)表示，按下式計(jì)算
^ Cs cX = -X 5
mi式中Cs表示從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得試樣中山梨酸的含量(μ g)，mi表示試樣的質(zhì)量 (g)。在此實(shí)施例中，Cs為O. O μ g，mi為10. 0027g,由上式計(jì)算得0. Omg/kg,由此可見，處理后的樣品中山梨酸的含量至少低于其檢出限，即1. Omg/kg。用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀對(duì)上述待測(cè)液進(jìn)行測(cè)量，隨后將測(cè)量的結(jié)果與所確定的山梨酸含量標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，確定待測(cè)液的山梨酸含量。這樣，就可以根據(jù)待測(cè)液的山梨酸含量計(jì)算出乳中的山梨酸含量。乳粉中山梨酸含量的檢測(cè)首先，稱取2g乳粉樣品于50mL離心管中，加入2g乙酸鋅，用水溶解并轉(zhuǎn)移到25mL 容量瓶中，加入200. ομ g/mL的山梨酸標(biāo)液1. OmL，用水定容，充分混合后轉(zhuǎn)入50mL離心管中，用離心機(jī)在4000rpm條件下離心IOmin。然后，過濾水層，吸取5. OmL濾液于一個(gè)15mL的離心管中，加入6mol/L鹽酸溶液 1. OmL, 2. OmL 二氯甲烷，用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在3000rpm條件下離心5min。最后，用ImL注射器吸取下清液經(jīng)過濾膜過濾到進(jìn)樣小瓶，此即為制得的待測(cè)乳粉樣品。將上述待測(cè)乳粉樣品注入到氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀中，在與山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的檢測(cè)條件下，得到峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)比，從而獲得其中的山梨酸含量(yg)。式樣中山梨酸含量X，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mg/kg)表示，按下式計(jì)算
^ Cs cX = -X 5
mi式中Cs表示從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得試樣中山梨酸的含量(μ g)，mi表示試樣的質(zhì)量 (g)。在此實(shí)施例中，Cs為36. 8μ g，mi為2. 0032g,由上式計(jì)算得91. 86mg/kg,回收率為 92%。以上預(yù)處理中選擇的乙酸鋅的量可以根據(jù)所取的乳或乳粉樣品發(fā)生變化，比如說當(dāng)取更多乳或乳粉樣品時(shí)，乙酸鋅的量應(yīng)相應(yīng)增加。離心機(jī)也可以在提供的條件內(nèi)選定不同的值。這些都是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解并且能夠?qū)崿F(xiàn)的，在此不作贅述。如上所述，在上述檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法中，通過制備一系列具有不同山梨酸含量的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，可以提高山梨酸含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確度，減少測(cè)量中的干擾。同樣在檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法中，采用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定乳或乳粉中的山梨酸含量，具有消耗有機(jī)溶劑少、提取時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單方便、檢測(cè)準(zhǔn)確率高、 抗干擾能力強(qiáng)等特點(diǎn)，很好的滿足了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)量大的需要。上文所列出的一系列的詳細(xì)說明僅僅是針對(duì)本發(fā)明的可行性實(shí)施例的具體說明， 它們并非用]以限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實(shí)施例或變更均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法，其特征在于，該方法使用了氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，所述方法包括以下步驟(i)制備具有不同山梨酸含量的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用所述氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀對(duì)其檢測(cè)，從而生成山梨酸含量與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；( )稱取一定重量的乳或乳粉，對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理從而形成待測(cè)乳或乳粉樣品，利用所述氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀在與步驟(i)相同的氣相色譜-質(zhì)譜條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到所述待測(cè)乳或乳粉樣品的檢測(cè)峰面積；和(iii)將步驟(ii)中獲得的所述待測(cè)乳或乳粉樣品的檢測(cè)峰面積與步驟⑴中得到的所述標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，確定所述待測(cè)乳或乳粉樣品中的山梨酸含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(i)中的所述山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備方法如下(a)分別取200.0 μ g/mL的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液0. ImL,0. 4mL、0. 6mL、0. 8mL和1. OmL到離心管中；(b)在所述離心管中加入蒸餾水至5.OmL,再加入6. Omol/L的1. OmL鹽酸溶液和2. OmL 分析純二氯甲烷，用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 IOmin ；(c)用注射器吸取下清液經(jīng)過濾膜過濾到進(jìn)樣小瓶，從而獲得10.0 μ g/mL、40. 0 μ g/ mL、60. 0 μ g/mL、80. 0 μ g/mL 和 100. 0 μ g/mL 的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀的氣相色譜條件為色譜柱毛細(xì)管色譜柱，固定相為亞硝基對(duì)苯二甲酸改性聚乙二醇，色譜柱規(guī)格為 30mX0. 25mmX0. 2μπι 或 30mX0. 32mmX0. 2ym ； 進(jìn)樣口溫度250 300°C ； 進(jìn)樣方式分流，分流比為40 1到50 1 ；載氣高純氦氣；流速毛細(xì)管色譜柱內(nèi)徑為0. 25mm的流速為1. 0 1. 4mL/min，毛細(xì)管色譜柱內(nèi)徑為 0. 32mm 的流速為 1. 8 2. 5mL/min ；升溫程序如下初溫為140°C維持1 2min，然后以10 15°C /min升到175 190°C 后，保持4 7min，程序共8 Hmin。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀的質(zhì)譜條件為 電離方式電子轟擊電離(EI)；電離能量70eV ； 離子源溫度200 220°C ； 傳輸線溫度250 280°C ； 溶劑延遲時(shí)間3. 0 5. 5min ； 進(jìn)樣量1 μ L ；掃描模式多反應(yīng)檢測(cè)，定性離子m/z 112 > 67，112 > 97，定量離子m/z 112 > 97 ； 碰撞能量m/z 112 > 67 為 3V，m/z 112 > 97 為 6V。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述步驟(ii)中的所述預(yù)處理包括如下步驟(a)稱取IOg所述乳到25mL容量瓶中，加入1 2g乙酸鋅，用蒸餾水定容到刻度，轉(zhuǎn)移到50mL離心管中；(b)用旋渦混合器充分混合；(c)用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 IOmin；(d)過濾水層，吸取5mL濾液于一個(gè)的離心管中，加入6mol/L鹽酸溶液1.OmL, 2. OmL分析純二氯甲烷；(e)用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 lOmin。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述步驟(ii)中的所述預(yù)處理進(jìn)一步包括如下步驟(a)稱取2g所述乳粉于50mL離心管中，加入1 2g乙酸鋅，用蒸餾水溶解并轉(zhuǎn)移到 25mL容量瓶中，用蒸餾水定容到刻度，充分混合后轉(zhuǎn)入50mL離心管中；(b)用旋渦混合器充分混合；(c)用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 IOmin；(d)過濾水層，吸取5mL濾液于一個(gè)的離心管中，加入6mol/L鹽酸溶液1.OmL, 2. OmL分析純二氯甲烷；(e)用旋渦混合器混合lmin，用離心機(jī)在3000rpm 4000rpm條件下離心5 lOmin。
全文摘要
一種檢測(cè)乳或乳粉中山梨酸含量的方法，使用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，包括(i)制備具有不同山梨酸含量的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，利用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀對(duì)其檢測(cè)，從而生成山梨酸含量與峰面積之間對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；(ii)稱取一定重量的乳或乳粉，對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理從而形成待測(cè)乳或乳粉樣品，利用氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀在與步驟(i)相同的氣相色譜-質(zhì)譜條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，得到待測(cè)乳或乳粉樣品的檢測(cè)峰面積；和(iii)將步驟(ii)中獲得的待測(cè)乳或乳粉樣品的檢測(cè)峰面積與步驟(i)中得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)，確定待測(cè)乳或乳粉樣品中的山梨酸含量。該方法消耗有機(jī)溶劑少，操作簡(jiǎn)單方便，檢測(cè)準(zhǔn)確率高，抗干擾能力強(qiáng)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102338778SQ201010238580
公開日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2010年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月28日
發(fā)明者烏尼爾, 劉衛(wèi)星, 姜瑞清, 常建軍, 李梅, 胡桂林, 郭建敏, 陳軍 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團(tuán))股份有限公司