專(zhuān)利名稱(chēng)：EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢滲濾法試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗體聯(lián) 檢滲濾法試劑盒。
背景技術(shù)：
鼻咽癌(NPC)是上皮細(xì)胞來(lái)源地惡性腫瘤，在世界各地廣泛存在。在我國(guó)南方，特 別是珠江三角洲及香港地區(qū)，是世界上鼻咽癌的高發(fā)區(qū)。我國(guó)約有80%以上的健康成人是 EB病毒攜帶者。在東南亞和北非也有較高的發(fā)病率。早期鼻咽癌放療后5年生存率可達(dá) 80-90% ，而晚期鼻咽癌的生存率僅為20% 。因此加強(qiáng)鼻咽癌的二級(jí)預(yù)防，即早發(fā)現(xiàn)、早診斷 和早治療是提高鼻咽癌患者存活率的關(guān)鍵。 鼻咽癌的發(fā)生與EB病毒(Epstein-Barr， EBV)感染密切相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)EBV的抗 體早期診斷NPC是提高NPC患者存活率的一個(gè)重要手段。 研究表明，鼻咽癌病人在臨床癥狀出現(xiàn)平均前三年時(shí)，就可觀察到其血清中多種 抗EB病毒抗原抗體的含量顯著升高，因而目前臨床上篩查鼻咽癌患者最常用的手段即免 疫血清學(xué)檢測(cè)EB病毒感染。其中臨床上普遍使用的檢測(cè)指標(biāo)有EA-IgG、VCA-IgA等。由于 不同鼻咽癌病人的抗體譜不完全相同，因此多種抗原抗體的聯(lián)合檢測(cè)可進(jìn)一步提高其診斷 性能。有實(shí)驗(yàn)表明，多種抗體聯(lián)檢的敏感度和特異性均較抗體單檢有所提高，而且可以用于 鼻咽癌高發(fā)區(qū)健康人群篩查的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。 目前在臨床上應(yīng)用的對(duì)血清EB病毒抗體的檢測(cè)方法常為免疫熒光法和免疫酶標(biāo) 法。免疫熒光法檢測(cè)EB抗體雖靈敏度和特異性較好，但是其結(jié)果判斷帶有主觀性，不易標(biāo) 準(zhǔn)化。ELISA與熒光法比較更快速方便，且易于標(biāo)準(zhǔn)化，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。 如何高效快速的對(duì)多種EB病毒的抗體進(jìn)行檢測(cè)，是目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。膠體金 免疫滲濾法在ELISA基礎(chǔ)上應(yīng)運(yùn)而生，其原理是以硝酸纖維素膜為載體，此方法檢測(cè)抗體 簡(jiǎn)單快速，不需其他儀器設(shè)備，幾分鐘即可用肉眼觀察檢測(cè)結(jié)果，目前已在臨床檢測(cè)中取得 了廣泛的應(yīng)用，且在整個(gè)免疫學(xué)檢測(cè)范圍內(nèi)也有廣泛的應(yīng)用。采用膠體金免疫滲濾技術(shù)聯(lián) 合檢測(cè)EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體，在臨床上有很高的實(shí)用檢測(cè)意義，但目前尚未有將其 應(yīng)用于EB病毒抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于提供一種EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗體聯(lián)檢滲濾法試劑 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型可采取下述技術(shù)方案 本實(shí)用新型所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢滲濾法試劑盒，包括盒體，所 述盒體由卡蓋和卡座扣合而成，在所述卡座內(nèi)的定位槽中固定有硝酸纖維素膜，在其上間 隔設(shè)置的位點(diǎn)上點(diǎn)制有EB病毒的EA、 VCA抗原和羊抗鼠IgG抗體，在所述硝酸纖維素膜的 下方墊有吸水濾紙，在與所述位點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的卡蓋上開(kāi)設(shè)有觀察窗口 。[0010] 所述盒體的形狀為矩形、三角形或正方形，開(kāi)設(shè)在卡蓋上的觀察窗口為圓形或正方形。 本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)在于利用了膠體金免疫滲濾法的原理，使EB病毒的兩種抗原、 抗體在同一滲濾裝置(硝酸纖維素膜，即NC膜)上進(jìn)行反應(yīng)、洗滌，并通過(guò)肉眼觀察各斑點(diǎn) 的顯色情況，從而對(duì)EB病毒的EA-IgG、 VCA-IgA抗體進(jìn)行快速檢測(cè)；操作簡(jiǎn)便、迅速、準(zhǔn)確， 可適用于大規(guī)模血液檢查，更有利于鼻咽癌患者的早期發(fā)現(xiàn)和診斷。 本實(shí)用新型試劑盒與ELISA試劑盒相比，其優(yōu)點(diǎn)在于 1、同時(shí)檢測(cè)多種抗體EB病毒兩種抗體的聯(lián)合檢測(cè)提高了檢測(cè)的靈敏度和特異 性，對(duì)鼻咽癌的診斷有很好的臨床意義。 2、反應(yīng)時(shí)間短整個(gè)實(shí)驗(yàn)可在3-5分鐘內(nèi)完成，適合大規(guī)模的快速血檢；該試劑盒 檢測(cè)步驟少，但敏感度卻與需1-2小時(shí)完成的ELISA相仿； 3、檢測(cè)過(guò)程中不需其他儀器設(shè)備，因此檢測(cè)結(jié)果也不受儀器的影響，同時(shí)不受反 應(yīng)環(huán)境的影響，加入膠體金標(biāo)記物即可顯色，操作簡(jiǎn)便；4、所需檢測(cè)標(biāo)本量小，需要的血 液量?jī)H30iU，只采集指尖血或耳血即可；而ELISA檢測(cè)一個(gè)指標(biāo)需100 iil血清，采血量 大。
本實(shí)用新型試劑盒與傳統(tǒng)膠體金試劑盒相比，其優(yōu)點(diǎn)在于 1、同時(shí)檢測(cè)EB病毒的兩種抗原，靈敏度和特異性均較單檢高； 2、外形多變且美觀，使用方便，適合家庭自助檢測(cè)，有利于鼻咽癌病癥的早發(fā)現(xiàn)和
早診斷。

圖1、圖2、圖3是本實(shí)用新型的盒體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
如圖1、2、3所示，所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢滲濾法試劑盒，包括盒 體l，所述盒體l由卡蓋和卡座扣合而成，在所述卡座內(nèi)的定位槽中固定有硝酸纖維素膜2， 在其上相距一定距離的位點(diǎn)3上點(diǎn)制有EB病毒的EA、 VCA抗原和羊抗鼠IgG抗體，在所述 硝酸纖維素膜2的下方墊有吸水濾紙，在與所述位點(diǎn)3相對(duì)應(yīng)的卡蓋上開(kāi)設(shè)有面積小于定 位槽面積的觀察窗口 4，這樣可以使硝酸纖維素膜2和濾紙?jiān)诙ㄎ徊壑泄潭ǚ€(wěn)固；為方便家 庭使用，所述盒體1的形狀可以為矩形、三角形、正方形或其他一些幾何形狀，開(kāi)設(shè)在卡蓋 上的觀察窗口 4也可以為圓形、梅花形或正方形等其他幾何形狀。 本發(fā)明的試劑盒檢測(cè)方法如下 1、將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，水平放置，室溫(18 25°C )平衡30分鐘； 2、每個(gè)裝置上加入待測(cè)樣本30 iil ; 3、待標(biāo)本被吸干后加入緩沖液6滴(300ul); 4、加入金標(biāo)液2滴(100ul); 5、待液體被吸干后加入緩沖液6滴； 6、待膜上液體吸干后5min肉眼觀察結(jié)果，質(zhì)控點(diǎn)顯示紅色斑點(diǎn)，觀察相應(yīng)檢測(cè)位 置有無(wú)紅色的斑點(diǎn)，出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)判為該樣本EB病毒抗體在體內(nèi)呈陽(yáng)性，無(wú)紅色斑點(diǎn)即判
4為陰性。
權(quán)利要求一種EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢滲濾法試劑盒，包括盒體(1)，其特征在于所述盒體(1)由卡蓋和卡座扣合而成，在所述卡座內(nèi)的定位槽中固定有硝酸纖維素膜(2)，在其上間隔設(shè)置的位點(diǎn)(3)上點(diǎn)制有EB病毒的EA、VCA抗原和羊抗鼠IgG抗體，在所述硝酸纖維素膜(2)的下方墊有吸水濾紙，在與所述位點(diǎn)(3)相對(duì)應(yīng)的卡蓋上開(kāi)設(shè)有觀察窗口(4)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢滲濾法試劑盒，其特征在 于所述盒體(1)的形狀為矩形、三角形或正方形，開(kāi)設(shè)在卡蓋上的觀察窗口 (4)為圓形或 正方形。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢滲濾法試劑盒，包括盒體，所述盒體由卡蓋和卡座扣合而成，在所述卡座內(nèi)的定位槽中固定有硝酸纖維素膜，在其上相距一定距離的位點(diǎn)上點(diǎn)制有EB病毒的EA、VCA抗原和羊抗鼠IgG抗體，在所述硝酸纖維素膜的下方墊有吸水濾紙，在與所述位點(diǎn)相對(duì)應(yīng)的卡蓋上開(kāi)設(shè)有觀察窗口。本實(shí)用新型利用了膠體金免疫滲濾法的原理，使EB病毒的兩種抗原、抗體在同一滲濾裝置(NC膜)上進(jìn)行反應(yīng)，并通過(guò)肉眼觀察各斑點(diǎn)的顯色情況，從而對(duì)EB病毒的EA-IgG、VCA-IgA抗體進(jìn)行快速檢測(cè)；操作簡(jiǎn)便、迅速、準(zhǔn)確，可適用于大規(guī)模血液檢查，更有利于鼻咽癌患者的早期發(fā)現(xiàn)和診斷。
文檔編號(hào)G01N33/569GK201497742SQ200920091659
公開(kāi)日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2009年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月17日
發(fā)明者付光宇, 劉功成, 吳學(xué)煒, 張銀, 李奎, 李桂林, 李靜輝, 王菁, 苗蘭芳, 項(xiàng)立紅 申請(qǐng)人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司