專利名稱：一種固相萃取耦合固相微萃取的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種應(yīng)用于痕量有機(jī)物分析的固相萃取耦合固相微萃取技術(shù)的分析
方法，更具體的說是一種用于分析水中超痕量多溴聯(lián)苯醚的固相萃取耦合固相微萃取的分 析方法。
背景技術(shù)：
持久性有機(jī)污染物(POPs)的基本特性，如親脂性、難降解以及易被生物有機(jī)體富 集等，使得占據(jù)食物鏈頂端的人類成為最易受其影響的種群。全球范圍內(nèi)的研究都表明，多 溴聯(lián)苯醚(PBDEs)在人類組織器官中的含量持續(xù)增加，基于此，越來越多的法規(guī)已經(jīng)禁止 或限制這類物質(zhì)的生產(chǎn)和使用，例如，五溴和八溴聯(lián)苯醚也于2004年8月被歐盟禁止生產(chǎn)， 同時在今年也被列入POPs名單。然而，由于其穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，難以被降解，至今以及未來 幾年仍會在全球范圍內(nèi)各種環(huán)境介質(zhì)中廣泛存在。目前，有限的研究數(shù)據(jù)均顯示，PBDEs具 有甲狀腺毒性、神經(jīng)系統(tǒng)毒性和生殖發(fā)育毒性等生態(tài)毒理效應(yīng)。
現(xiàn)階段，關(guān)于水中痕量PBDEs的檢測，文獻(xiàn)中報(bào)道的有液液萃取、固相萃取、固相 微萃取、中空纖維-液液萃取、攪拌棒固相萃取等。然而，這些方法中大多數(shù)僅適用于實(shí)驗(yàn) 室內(nèi)部，分析一些的濃度較高的模擬水溶液，卻無法對PBDEs含量更低的環(huán)境水樣進(jìn)行分 析。也有文獻(xiàn)報(bào)道，采用固相萃取的方法可以實(shí)現(xiàn)天然水中PBDEs的分析，然而，該技術(shù)采 樣量大、費(fèi)時費(fèi)力。 發(fā)明專利《一種固相微萃取分析方法》(申請?zhí)枮?008100989121)中提到采用普 通光纖分析水中PBDEs，并且具有操作簡單、成本低、綠色環(huán)保、工作量小、能實(shí)現(xiàn)快速測定 的優(yōu)點(diǎn)，然而，該技術(shù)仍然僅適用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部模擬加標(biāo)水樣的分析，難以實(shí)現(xiàn)PBDEs含量 更低自然水樣的監(jiān)測。 通過檢索發(fā)現(xiàn)國內(nèi)外文獻(xiàn)沒有關(guān)于采用方法對水中有機(jī)物進(jìn)行固相微萃取耦合 固相萃取分析方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
1.發(fā)明要解決的技術(shù)問題現(xiàn)有的水中PBDEs分析方法，檢測限普遍較高， 一般
無法實(shí)現(xiàn)天然水體中PBDEs的分析；雖有文獻(xiàn)報(bào)道，成功采用的SPE的方法對天然水體中
PBDEs進(jìn)行分析，然而該方法采樣量大(50-100L)，分析過程費(fèi)時費(fèi)力。本發(fā)明的目的是提
供一種固相萃取耦合固相微萃取分析新方法，適用小體積于天然水中包括PBDEs在內(nèi)的各
種超痕量化合物的分析檢測。 2.技術(shù)方案 本發(fā)明的技術(shù)方案如下 —種固相萃取耦合固相微萃取的分析方法，其步驟為
1)用濾膜過濾新采集的水樣，去除懸浮性顆粒物； 2)用正己烷、二氯甲烷和甲醇活化SPE富集柱，而后對水樣進(jìn)行富集；
3)依次用正己烷和正己烷/ 二氯甲烷洗脫SPE富集柱中富集的PBDEs，并收集洗脫液； 4)將收集的洗脫液旋蒸濃縮至近干； 5)將步驟洗脫物質(zhì)全部轉(zhuǎn)入萃取瓶，氮?dú)獯蹈桑?6)將聚二甲基硅氧烷涂層的光纖放在GC進(jìn)樣口以260 30(TC進(jìn)行活化，直至氣相_質(zhì)譜檢測器顯示無雜質(zhì)峰出現(xiàn)； 7)在步驟5)氮?dú)獯蹈傻妮腿∑恐?，加?-3ml甲醇和7_10ml蒸餾水，超聲混勻，形成待測水樣，將步驟6)活化好的光纖浸沒在待測水樣中，控制萃取時間為0. 5-1. 5h，溫度為30-50°C ; 8)將步驟(7)萃取后的光纖從待測溶液中取出，風(fēng)干后放在進(jìn)樣口，27(TC下在GC-MS進(jìn)樣口熱解析3-10min，進(jìn)行GC-MS分析。 上述步驟1)中濾膜孔徑為0. 45 m。步驟2)中1L水富集在2小時左右完成。步驟3)中依次用3-7ml正己烷和8-12ml 1 : 1正己烷/ 二氯甲烷洗脫。
上述方案中，步驟(2)中活化的主要作用，一方面是去除柱子中雜質(zhì)，另一方面是為了使弱極性的C18填料在由弱極性到極性的過渡中與水充分接觸，利于富集；步驟(2)中所用柱子購自SUPELCO公司，型號為Supelclean ENVI-18SPE Tubes 6ml (lgm);步驟(6)中的光纖，由Fiberguide Industries (Stirling, NJ)提供，纖維石英內(nèi)核直徑為196 y m，PDMS涂層為45 m。將PDMS纖維進(jìn)行高溫活化，目的是去除涂層中所含的雜質(zhì)。
3.有益效果 本發(fā)明提供了一種應(yīng)用于自然水體中有機(jī)物分析的固相萃取耦合固相微萃取的分析方法，將固相萃取與固相微萃取耦合，適用于分析水中超痕量多溴聯(lián)苯醚。本發(fā)明方法相對其他相同效果的分析方法來說，成本低、工作量小。本發(fā)明對PBDEs進(jìn)行分析的方法檢測限在0. 06-1. 84pg/L之間；整個分析過程，13種多溴聯(lián)苯醚在水中濃度與儀器響應(yīng)的相關(guān)系數(shù)(R)在0. 9929以上。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)例進(jìn)一步說明本發(fā)明 實(shí)施例1 : (1)質(zhì)譜條件的確定 本方法采用環(huán)境樣品分析中較先進(jìn)的三重四級桿，選擇13種PBDEs的二級質(zhì)譜特征進(jìn)行定性定量分析，從而提高了靈敏度，降低了檢測限。準(zhǔn)確配置含有13種多溴聯(lián)苯醚(BDE-17、 BDE-28、 BDE_71、 BDE_47、 BDE_66、 BDE-IOO、 BDE_99、 BDE_85、 BDE_154、 BDE_153、BDE-138、BDE-183、BDE-190，濃度均為100ng/mL)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液lmL。下面工作分三步進(jìn)行。第一步，將scantype設(shè)定為full scan, scan mode設(shè)定為ms mode，米用Q3MS作為檢測器，離子源溫度設(shè)定為28(TC，傳輸線溫度設(shè)定為28(TC，其他設(shè)置均采用儀器默認(rèn)設(shè)置，進(jìn)樣，獲得質(zhì)譜圖后，選擇每一個化合物最大豐度離子；第二步，scantype仍設(shè)定為fullscan, scan mode設(shè)定為ms/ms mode,并勾選product，在parent mass處土真寫各保留時間段內(nèi)對應(yīng)化合物的最大豐度離子質(zhì)量數(shù)，設(shè)定轟擊電子能量為15、20、25、30、35和40ev，依次進(jìn)樣，篩選最佳轟擊電子能量下的最大響應(yīng)離子，獲得13種化合物的特征離子對；第三步，
4將scan type設(shè)定為SRM，輸入不同保留時間段下各個化合物的離子對，并輸入轟擊電子能量。此時，方法也就建立完善。
GC-MS測定條件GC-MS為Thermo Fisher Scientific公司生產(chǎn)的Trace Gc Ultra-TSQSeriesMass Spectrometer System(San Jose， CA， U. S. A)。
氣相部分色譜柱為毛細(xì)管柱DB-XLB(15mX0. 25mmX0. 25iim) (J&W Scientific)。載氣為氦氣，恒流，流速為lml/min。升溫程序是起始140°C ，保持2min， 20°C /min升至200°C ， 3°C /min升至270°C， 10°C /min升至300。C，保持3min。進(jìn)樣量為1 ii 1。
質(zhì)譜部分采用化學(xué)電離的電離方式。傳輸線溫度28(TC。離子源溫度28(TC。離子碎片掃描模式為SRM(選擇反應(yīng)性模式)。轟擊氣為氬氣，其氣體壓強(qiáng)為lmTorr。
(2)SPE標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確配制13種PBDEs(BDE-17、BDE-28、BDE-71、BDE-47、BDE-66、BDE-100、BDE-99、BDE-85、 BDE-154、 BDE_153、 BDE_138、 BDE_183、 BDE-190)濃度梯度分別是200、 1000. 0、5000. 0、 10000. 0、20000. 0、50000. 0和100000. 0pg/1的水溶液IL，過O. 45iim濾膜，采用正己烷、二氯甲烷、甲醇和水活化好的SPE進(jìn)行富集，需控制富集速度，1L水控制在2小時左右過完。將富集好的SPE柱，用5ml正己烷和10ml 1 : 1正己烷/ 二氯甲烷進(jìn)行洗脫，梨形瓶收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，將濃縮液全部轉(zhuǎn)入氮吹管中，近干，加入10ng PCB內(nèi)標(biāo)，定容至100iil，轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶，GC/MS分析。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)在0. 9985到0. 9998之間。結(jié)果表明，水樣中PBDEs濃度與GC/MS的響應(yīng)值在一定濃度范圍內(nèi)具有非常好的線性關(guān)系。 GC-MS分析條件同(1)。
(3)SPE回收率 準(zhǔn)確配制含有13種PBDEs(BDE-17、 BDE_28、 BDE_71、 BDE_47、 BDE-66、 BDE-IOO、BDE-99 、 BDE-85 、 BDE-154、 BDE-153、 BDE-138、 BDE-183、 BDE-190，濃度均為1 Opg/mL)的水樣1L，過0. 45 ii m濾膜，拿用正己烷、二氯甲烷、甲醇和水活化好的SPE進(jìn)行富集，控制富集速度約為10ml/min， 1L水控制在2小時左右過完。將富集好的SPE柱，用5ml正己烷和10ml1 : l正己烷/二氯甲烷進(jìn)行洗脫，梨形瓶收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，將濃縮液全部轉(zhuǎn)入氮吹管中，近干，加入10ng PCB內(nèi)標(biāo)，定容至100iil，轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶，GC/MS分析。結(jié)果表明，13中PBDEs的回收率在71. 3%到146. 4%之間。
GC-MS分析條件同實(shí)施例1 。
(4) SPE重現(xiàn)性 準(zhǔn)確配制5份含有13種PBDEs (BDE-17、BDE-28、BDE-71、BDE-47、BDE-66、BDE-100、BDE-99、 BDE-85、 BDE_154、 BDE_153、 BDE_138、 BDE-183、 BDE-190，濃度均為10pg/mL)的水樣1L，過0. 45 ii m濾膜，拿用正己烷、二氯甲烷、甲醇和水活化好的SPE進(jìn)行富集，控制好富集速度，1L水控制在2小時左右過完。將富集好的SPE柱，用5ml正己烷和10ml 1 : 1正己烷/ 二氯甲烷進(jìn)行洗脫，梨形瓶收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，將濃縮液全部轉(zhuǎn)入氮吹管中，近干，加入10ng PCB內(nèi)標(biāo)，定容至100iil，轉(zhuǎn)入進(jìn)樣瓶，GC/MS分析。對獲得地質(zhì)譜圖進(jìn)行積分。結(jié)果表明，13種PBDEs的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在4. 2%至17. 1%之間。說明，該方法重現(xiàn) 性較好。 GC-MS分析條件同(1)。
(5) SPE數(shù)據(jù)質(zhì)量保證與控制 綜合SPE步驟質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，13種PBDEs(BDE-17、 BDE_28、 BDE_71、 BDE—47、 BDE-66、 BDE-100、 BDE_99、 BDE_85、 BDE_154、 BDE_153、 BDE_138、 BDE_183、 BDE-190)在 200-100000pg/L的加標(biāo)濃度范圍內(nèi)，加標(biāo)濃度與儀器響應(yīng)大小的相關(guān)系數(shù)均大于0. 9971， 表明該步驟在較寬的濃度范圍內(nèi)仍具有一定線性；在10pg/mL的加標(biāo)濃度下，13中PBDEs 的回收率在71. 3%到146. 4%之間，表明整個分析過程中，PBDEs的損失量低，無外源性污 染；重復(fù)5次做樣，13種PBDEs的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在4. 2%至17. 1 %之間，表明該分析方法穩(wěn) 定；僅采用SPE分析水樣，13種PBDEs的檢測限在42. 7-139. 6pg/L之間。
GC-MS分析條件同(1)。
(6) SPME數(shù)據(jù)質(zhì)量保證與控制 用甲醇體積分?jǐn)?shù)為30%的純水準(zhǔn)確配制四份含有13種多溴聯(lián)苯醚(BDE-17、 BDE-28、 BDE-71、 BDE_47、 BDE-66、 BDE-IOO、 BDE_99、 BDE_85、 BDE_154、 BDE_153、 BDE-138、 BDE-183、 BDE-190，濃度為30pg/mL)的水樣10ml ，分別把270 °C下活化好的1. 5cm長 的PDMS涂層的纖維置于上述溶液中萃取90min后取出，用蒸餾水沖洗并風(fēng)干后，在氣相 進(jìn)樣口 27(TC下熱解析10min， GC-ECD分析。測得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為6. 7_14%，檢測限為 0. 93—-1. 94pg/mL。另外，用甲醇體積分?jǐn)?shù)為30%的純水準(zhǔn)確配制14種PBDEs濃度梯度分 別是1. 5、3. 0、7. 5、15、30、60pg/ml， 1000rpm下分別把270。C下活化好的1. 5cm長的PDMS纖 維置于上述溶液中萃取90min后取出，用蒸餾水沖洗并風(fēng)干后，在氣相進(jìn)樣口 27(TC下熱解 析10min， GC-ECD分析。結(jié)果顯示，所有PBDEs和PBDEs甲氧基化代謝產(chǎn)物的濃度和GC-ECD 響應(yīng)峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)的2次方在0. 9954和0. 9999之間。
GC-ECD測定條件 GC-ECD型號為Agilent (Palo Alto， CA， USA) 7890，其中氣相色譜檢測器溫度為 300。C，色譜柱為毛細(xì)管柱DB-XLB(15mX0. 25mmX0. 25 ii m) (J&W Scientific)，升溫程序 是起始140°C，保持2min，20。C /min升至200°C ， 3 °C /min升至270°C ， 10°C /min升至 300。C，保持7min。 (7) SPE-SPME質(zhì)量保證與控制 準(zhǔn)確配制5份含有13種PBDEs (BDE-17、BDE-28、BDE-71、BDE-47、BDE-66、BDE-100、 BDE-99、 BDE-85、 BDE_154、 BDE_153、 BDE_138、 BDE_183、 BDE-190,濃度均為10pg/mL)的水 樣1L，過0. 45 m濾膜，拿用正己烷、二氯甲烷、甲醇和水活化好的SPE進(jìn)行富集，控制好富 集速度，1L水控制在2小時左右過完。將富集好的SPE柱，用5ml正己烷和10ml 1 : 1正 己烷/ 二氯甲烷進(jìn)行洗脫，梨形瓶收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，將濃縮液轉(zhuǎn)入12ml棕色血 清瓶，氮吹吹干，加入3ml甲醇和7ml蒸餾水，超聲混勻，分別把27(TC下活化好的1. 5cm長 的PDMS涂層的纖維置于上述溶液中萃取90min后取出，用蒸餾水沖洗并風(fēng)干后，在氣相進(jìn) 樣口 27(TC下熱解析10min，GC-MS分析。其相關(guān)系數(shù)均在0. 9929以上，18種化合物的檢測 限在O. 06-1. 84pg/L之間。
GC-MS分析條件同(1)。
實(shí)施例2:
方法空白的控制 本方法所測實(shí)際水樣中PBDEs含量極低，操作過程易受外界干擾。方法空白的控制對整個過程極其重要。整個分析前處理過程包括水樣過膜、SPE柱富集、有機(jī)溶劑洗脫SPE柱、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、氮吹和SPME富集。按照從后往前的順序， 一步一步來做空白，尋找可能的干擾源。最后發(fā)現(xiàn)，水樣過膜、有機(jī)溶劑洗脫SPE柱、氮吹和SPME富集4步，不存在受實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中PBDEs污染的可能性。SPE柱富集和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)兩步則存在問題。空白進(jìn)樣獲得的色譜結(jié)果顯示，空白SPE柱直接洗脫液，PBDEs總含量約為74. lpg ;而旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的真空體系PBDEs的殘余量，則因上次樣品性質(zhì)而異。針對這些外源污染，采用以下措施。改進(jìn)SPE柱活化方法將SPE柱放入干凈的燒杯，依次加入5ml正己烷、二氯甲烷和甲醇，均自然流淌，直至有機(jī)溶劑液面剛浸沒填料；最后，加入5ml蒸餾水，自然流淌直剛浸沒填料；再加入5ml蒸餾水即可進(jìn)行富集步驟。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)每次進(jìn)行樣品分析之前，先用干凈有機(jī)溶劑蒸餾沖洗，去除上次殘余。
GC-MS分析條件同實(shí)施例1 。
實(shí)施例3 :
環(huán)境樣品測定 為配合國家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目《持久性有機(jī)污染物的典型環(huán)境過程及構(gòu)效關(guān)系研究》，選擇江蘇省內(nèi)的八處水源地(楊中市二墩橋、邳州市自來水公司、藺家壩取水口 、太湖寺前村、沛縣自來水公司、七里溝、吳江凈水廠、張家港市三水廠)作為采樣點(diǎn)，各采集水樣1L，過0. 45 ii m濾膜，用正己烷、二氯甲烷、甲醇和水活化好的SPE進(jìn)行富集，將富集速度控制在10min/min左右。將富集好的SPE柱，放于洗脫裝置上，用5ml正己烷和10ml1 : l正己烷/二氯甲烷進(jìn)行洗脫，用梨形瓶收集洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，將濃縮液轉(zhuǎn)入氮吹管中，氮吹吹干，加入3ml甲醇和7ml蒸餾水，加入lng PCB內(nèi)標(biāo)，超聲混勻，分別把270°C下活化好的1. 5cm長的PDMS涂層的纖維置于上述溶液中萃取90min后取出，用蒸餾水沖洗并風(fēng)干后，在氣相進(jìn)樣口 27(TC下熱解析10min，GC-MS分析。在檢測8個點(diǎn)中，均檢出了PBDEs。 GC-MS分析條件同實(shí)施例1 。 從具體操作中發(fā)現(xiàn)，對于所研究的化合物而言，本發(fā)明方法應(yīng)注意以下方面
SPE步驟將SPE柱放入干凈的燒杯，依次加入5ml正己烷、二氯甲烷和甲醇，均自然流淌，直至有機(jī)溶劑液面剛浸沒填料；最后，加入5ml蒸餾水，自然流淌直剛浸沒填料；再加入5ml蒸餾水即可進(jìn)行富集步驟。對于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，每次做樣之前，應(yīng)先用干凈有機(jī)溶劑蒸餾沖洗，去除上次殘余。 SPME步驟可以采用的優(yōu)化條件為，活化溫度為27(TC，熱解析時間為10min，攪拌速率為1000rpm，甲醇體積比含量為30%，鹽含量為0%，萃取溫度為4(TC，萃取時間為90min。 用本發(fā)明對地下水和地表水水樣進(jìn)行了檢測，檢出多溴聯(lián)苯醚。檢測結(jié)果顯示，該方法對于實(shí)際水樣中PBDEs測定，具有檢測限低，工作量小的優(yōu)點(diǎn)。這說明改進(jìn)的固相微萃取方法簡單、經(jīng)濟(jì)、有效，可以用于低濃度小體積環(huán)境樣品分析。本發(fā)明結(jié)合其他色譜測定方法，可以廣泛應(yīng)用于其他相關(guān)的有機(jī)物分析。
權(quán)利要求
一種固相萃取耦合固相微萃取的分析方法，其步驟為1)用濾膜過濾新采集的水樣，去除懸浮性顆粒物；2)用正己烷、二氯甲烷和甲醇活化SPE富集柱，而后對水樣進(jìn)行富集；3)依次用正己烷和正己烷/二氯甲烷洗脫SPE富集柱中富集的PBDEs，并收集洗脫液；4)將收集的洗脫液旋蒸濃縮至近干；5)將步驟洗脫物質(zhì)全部轉(zhuǎn)入萃取瓶，氮?dú)獯蹈桑?)將聚二甲基硅氧烷涂層的光纖放在GC進(jìn)樣口以260～300℃進(jìn)行活化，直至氣相-質(zhì)譜檢測器顯示無雜質(zhì)峰出現(xiàn)；7)在步驟5)氮?dú)獯蹈傻妮腿∑恐校尤?-3ml甲醇和7-10ml蒸餾水，超聲混勻，形成待測水樣，將步驟6)活化好的光纖浸沒在待測水樣中，控制萃取時間為0.5-1.5h，溫度為30-50℃；8)將步驟(7)萃取后的光纖從待測溶液中取出，風(fēng)干后放在進(jìn)樣口，270℃下在GC-MS進(jìn)樣口熱解析3-10min，進(jìn)行GC-MS分析。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的固相萃取耦合固相微萃取的分析方法，其特征在于步驟l)中濾膜孔徑為0. 45 ii m。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的固相萃取耦合固相微萃取的分析方法，其特征在于步驟2)中1L水富集在2小時左右完成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的固相萃取耦合固相微萃取的分析方法，其特征在于步驟3)中依次用3-7ml正己烷和8-12ml 1 : 1正己烷/ 二氯甲烷洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種固相萃取耦合固相微萃取的分析方法，屬于分析方法領(lǐng)域。其步驟為用濾膜過濾水樣；活化SPE富集柱，而后對水樣進(jìn)行富集；洗脫SPE富集柱中富集的PBDEs，并收集洗脫液；將收集的洗脫液旋蒸濃縮至近干；將步驟洗脫物質(zhì)全部轉(zhuǎn)入萃取瓶，氮?dú)獯蹈?；將聚二甲基硅氧烷涂層的光纖放在GC進(jìn)樣口以260～300℃進(jìn)行活化；在氮?dú)獯蹈傻妮腿∑恐?，加入甲醇和蒸餾水，超聲混勻，形成待測水樣，將活化好的光纖浸沒在待測水樣中萃取；將萃取后的光纖風(fēng)干后放在進(jìn)樣口，熱解析后進(jìn)行GC-MS分析。本發(fā)明將固相萃取與固相微萃取耦合，適用于分析水中超痕量多溴聯(lián)苯醚，且成本低、工作量小，對PBDEs進(jìn)行分析的檢測限在0.06-1.84pg/L之間。
文檔編號G01N30/08GK101782556SQ20091026423
公開日2010年7月21日 申請日期2009年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月31日
發(fā)明者于紅霞, 劉紅玲, 溫泉, 蘇冠勇, 鄔旸, 韋斯 申請人:南京大學(xué)