專利名稱：用于保護生物學活性分子和綴合標記物的非糖類有機化合物及其方法
用于保護生物學活性分子和綴合標記物的 非糖類有機化合物及其方法相關(guān)申請本申請要求了 2005年6月27日登記的美國臨時專利申請 60/694,604的優(yōu)先權(quán)，因此全文引入該申請作為參考。發(fā)明領(lǐng)域本申請涉及試驗。發(fā)明背景多種與蛋白關(guān)聯(lián)使用的緩沖劑和穩(wěn)定劑都是可以商購獲得的。這些 溶劑和緩沖劑可以用在多種方法和測試中，其中包括免疫測試。在千燥 的免疫層析測試試驗條件下，許多可以使用的緩沖劑和穩(wěn)定劑在保護和 保持生物學活性分子和綴合標記物的活性方面都會失效。 一些免疫層析 測試試驗材料的保存期限非常短，并且由于在干燥條件下的存儲期間分 子活性的退化，其經(jīng)常在短時期內(nèi)就會喪失效力或者變得完全失效。雖 然已經(jīng)出現(xiàn)了生產(chǎn)更有效且更持久的免疫層析測試試驗材料的趨勢，但 是仍然期望能進一步改善活性分子和綴合標記物活性的效力和持續(xù)性。發(fā)明簡述本發(fā)明提供了使用非糖類有機相容溶質(zhì)保護和保持生物學活性分 子和綴合標記物活性方法。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當與 一種或多種非糖類有機相 容溶質(zhì)一起沉積時，沉積在免疫層析測試(ICT)試驗干燥載體上的生 物學活性分子的活性可以保持、保護和持續(xù)保持更長的時間。非糖類有 ;fe/L相容溶質(zhì)可以用在與免疫測試例如ICT測試相關(guān)的地方，還可以用在 需要例如在溶液相、在干燥狀態(tài)或者在重組狀態(tài)中保護和保持生物學活 性分子和綴合標記物活性的任何應用中。非糖類有機相容溶質(zhì)可以與任 何測試方法相結(jié)合，在所述測試方法中使用干燥的測試帶作為沉積可遷 移和/或固定化的生物學活性分子和/或綴合標記物的載體。


圖1表明2%w/v的ecotine、 L-組氨酸、牛石黃酸和L-蘇氨酸組合物 對用于疾疾ICT裝置的不含蔗糖的結(jié)合襯墊干燥緩沖劑具有穩(wěn)定作用。 雖然在干燥襯墊緩沖劑配方中不含蔗糖，但對于在4CTC和55。C兩種溫 度下儲存的結(jié)合襯墊觀測到相同的靈敏性。圖2圖解了 4%w/v的單獨的L-組氨酸沒有使用于癡疾ICT裝置的 不含蔗糖的結(jié)合襯墊干燥緩沖劑具有穩(wěn)定性。發(fā)明詳述1、介紹當與 一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)一起沉積時，特別是當沉積到 免疫層析測試試驗的干燥載體上時，生物學活性分子的活性通常可以保 持、保護和持續(xù)保持更長的時間。在一方面，提供了一種方法，其包括a) 將一種或多種生物學活性分子沉積到 一個表面上；b) 將一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)沉積到該表面上；和c ) 干燥所述表面上沉積的 一 種或多種生物學活性分子和沉積的 一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)；其中所述一種或多種非糖類有機相容 溶質(zhì)在干燥和重組狀態(tài)下保護和保持了所述一種或多種生物學活性分 子的活性。在另一方面，提供了一種方法，其包括a) 提供一個樣品；b) 提供至少一部分包含一種或多種生物學活性分子和一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)的測試帶，其中所述一種或多種非糖類有機相容 溶質(zhì)在干燥和重組狀態(tài)下保護和保持了所述一種或多種生物學活性分子的活性；c) 將樣品與測試帶接觸；和d) 檢觀'J樣品中所關(guān)心分析物的存在或者測定其量。 在另一方面，提供了一種方法，其包括a) 提供一種或多種生物學活性分子；和b) 提供一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)；其中所述一種或多種非 糖類有機相容溶質(zhì)保持了所述一種或多種生物學活性分子的活性。本發(fā)明進一步的目的和優(yōu)點將隨著說明的進行而得以顯現(xiàn)。為了獲 得對本發(fā)明范圍的完整的理解，應當進一步地認識到，可以將本發(fā)明的 多個方面結(jié)合以產(chǎn)生合意的發(fā)明實施方式。除非另有定義，本文所使用的所有技術(shù)和科學術(shù)語的含義都與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義相同。當術(shù)語以單數(shù)提供時，發(fā)明人同時也考慮到了該術(shù)語的復數(shù)。本文所使用的命名法和如下所述 的操作步驟是本領(lǐng)域公知且常用的。術(shù)語"氨基酸"意圖包括所有分子，無論是天然的還是合成的，所 述分子同時包括氨基官能團和酸官能團二者并且能夠被包括到天然存在的氨基酸的聚合物中。示例性的氨基酸包括天然存在的氨基酸；其類 似物、衍生物和同系物；具有派生側(cè)鏈的氨基酸類似物；以及所有上述 物質(zhì)中的任意一種的全部立體異構(gòu)體。在本文中依照IUPAC-IUB的建議 對天然氨基酸的名稱進行了縮寫。術(shù)語"抗體"是指免疫球蛋白，其保持有特異性結(jié)合能力的衍生物， 以及具有與免疫球蛋白結(jié)合功能區(qū) 一致或大體一致的結(jié)合功能區(qū)的蛋 白。這些蛋白可以由天然來源獲得，或者可以部分或完全地通過合成來 制備。抗體可以是單克隆或多克隆的?？贵w可以是任意免疫球蛋白類別 中的成員，包括任意的人類類別IgG、 IgM、 IgA、 IgD和IgE。在示例 性的實施方式中，與本文所描述的方法和組合物一起使用的抗體是IgG 類的衍生物。術(shù)語"抗體片段"是指抗體的任何小于全長的衍生物。在示例性的要部分?？贵w片段的例子包括，但不限于，F(xiàn)ab、 Fab'、 F(ab')2、 scFv、 Fv、 dsFv雙功能抗體和Fd片段?？贵w片段可以通過任何方式產(chǎn)生。例 如，抗體片段可以通過完整抗體的裂解作用由酶或化學方法產(chǎn)生，其還 可以由基因編碼部分抗體序列而重組產(chǎn)生，或者其可以完全或部分地通 過合成產(chǎn)生?？贵w片段可以任選地為單鏈抗體片段。或者，所述片段可 以包含連接在一起的多個鏈，例如通過二硫化物連接基連接的。所述片 段也可以任選地為多分子復合物。功能性抗體片段一般包含至少約50 個氨基酸，更一般地包含至少約200個氨基酸。術(shù)語"生物學活性分子"是指為活性有機體的一部分的任何活性有 機分子，其可以是天然的、合成的或者是它們的組合。術(shù)語"包含"和"含有"是以包括、開放的含義使用的，其意思是 指可能包括其它元素。本文所使用的術(shù)語"包括"意思是指"包括但不限于"。"包括"和 "包括但不限于"可以互換使用。術(shù)語"標記"或"標記的"是指將可檢測的標示物任選共價或非共 價地結(jié)合或附著到分子中，所述分子例如是多肽，如抗體。標記多肽的 各種方法是本領(lǐng)域所公知的，并且是可以使用的。用于多肽的標記的例子包括，但不限于，以下物質(zhì)放射性同位素、熒光標記、重原子、酶 標記或指示基因、化學發(fā)光基團、生物素基團、通過二級指針辨認的預 先確定的多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對序列、二級抗體的結(jié)合位點、 金屬結(jié)合功能區(qū)、抗原表位標簽)。在一些實施方式中，標記物附著有 各種長度的隔離臂以減少潛在的位阻。術(shù)語"非糖類有機相容溶質(zhì)"是指非糖并且能溶解于有機溶液中的 任何分子。術(shù)語"測試帶"是指可以在其之上進行試驗的色語樣介質(zhì)。術(shù)語"樣品"是指可能含有分析物的任何液體樣品。 2、在干燥和重組狀態(tài)下保持生物學活性分子活性的方法本發(fā)明提供了非糖類有機相容溶質(zhì)在保護和保持生物學活性分子 和綴合標記物的活性方面的用途。下述方法適用于具有多孔載體的免疫 層析測試帶，例如硝化纖維測試帶，所述測試帶是本領(lǐng)域公知的。本發(fā)明提供了一種在干燥和重組狀態(tài)下保持生物學活性分子活性 的方法，其包括將一種或多種生物學活性分子沉積在一個表面上?？梢?使用任何合適的方法來將所述的一種或多種生物學活性分子沉積在所 述表面上。所述的一種或多種生物學活性分子可以是任何合適的生物學 活性分子，例如，能夠特異性結(jié)合一種或多種所關(guān)心的分析物的生物學 活性分子。本發(fā)明的合適的分子包括，例如，多克隆或單克隆的抗體或 抗體片段。所述表面可以是適于進行免疫測試的任何類型的表面，例如， 硝化纖維測試帶。在某些實施方式中，所述表面或測試帶是碎黃向流動(lateral flow) 裝置的一部分。在橫向流動裝置中，將含有所關(guān)心的目標分析物的樣品 加入到橫向流動裝置的施加孔中。測試樣品沿著測試帶或所述表面向含 有可遷移結(jié)合試劑的區(qū)域流動，所述的可遷移結(jié)合試劑設(shè)置在干燥狀態(tài)的區(qū)域中，例如，設(shè)置在襯墊中。當樣品前沿到達該區(qū)域時，可遷移的 標記的結(jié)合試劑從襯墊中釋放出來，然后與可能存在于測試樣品中的目 標分析物進行相互作用。樣品中的目標分析物與可遷移的結(jié)合試劑結(jié)合 并且繼續(xù)向檢測區(qū)流動。檢測區(qū)包含固定化的未標記的特異性結(jié)合試 劑，例如，在襯墊上，以用于結(jié)合分析物/可遷移結(jié)合試劑復合物。樣品 中分析物的存在是通過觀測標記的結(jié)合試劑/分析物復合物在檢測區(qū)域 中結(jié)合的程度(如果有的話)而確定的。結(jié)果可以通過觀測色度的方式 進行視覺評定，顏色的強度與測試樣品中目標分析物的濃度成正比。在 一個實施方式中，標記的試劑、分析物(如果存在)和固定化的未標記 的特異性結(jié)合試劑在"夾層"反應中共同作用。其結(jié)果是，如果樣品中 存在分析物，則標記的試劑就被結(jié)合在檢測區(qū)域中。兩種結(jié)合試劑必須 對分析物上不同的表位具有特異性。該類橫向流動裝置的例子公開于Davis等人的U.S. 6,352,862中，在 此將其全文引入作為參考。所述方法還可以包括將一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)沉積在一 個表面上。所述一種或多種生物學活性分子和一種或多種非糖類有機相 容溶質(zhì)在載體表面或表面上的沉積，可以以任何合適的方式進行，所述 方式例如同時或分別沉淀。本發(fā)明的一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)可 以是適于本發(fā)明目的的任何非糖類有機相容溶質(zhì)，所述目的就是在不存 在一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)時有效地使一種或多種生物學活性 分子的活性保持、保護較長的時間。本發(fā)明的一種或多種非糖類有機相 容溶質(zhì)包括，例如，氨基酸如甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、脯氨酸、谷氨 酸鈉、賴氨酸、氨基丁酸(aminobutricacid)、?；撬?，胺例如甜菜堿、 肌氨酸、N-氧化三甲胺，或滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)(osmolytes)或者其它合適的 溶質(zhì)侈寸^口2-茶盼、ectoine、 hydroxyectoine、甘、油、脫氧斗亥4唐才盡酉臾、單石舞 酸腺苷、PCR引物、精胺、亞精胺、Brij58、聚乙烯亞胺、聚組氨酸、 polythymadilic acid、乙酰-L-肉堿、L-carline、氨乙基亞磺酸和阿魏酸。所述方法還可以包括對表面上沉積的一種或多種生物學活性分子 和沉積的一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)進行干燥。本領(lǐng)域已知的任何 合適的干燥方法都可以用來干燥所述沉積的 一種或多種生物學活性分 子和一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)。所述方法的一個重要的方面是一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)在干燥和重組狀態(tài)下保護和保持一種或多種生物學活性分子的活性的能力。3 、檢測樣品中所關(guān)心分析物的存在或測定其量的方法本發(fā)明進一步提供了非糖類有機相容溶質(zhì)在保護和保持生物學活 性分子和綴合標記物的活性方面的用途及其方法。本文所提供的方法適 用于具有多孔載體的免疫層析測試帶例如硝化纖維測試帶，例如橫向流 動裝置，如先前部分所詳細描述的，所述測試帶數(shù)目眾多、工藝不同并 且是本領(lǐng)域公知的。例如，通常，用于測定樣品中所關(guān)心的分析物的存在或數(shù)量的免疫 測試裝置包括， 一個樣品施加元件，其與結(jié)合襯墊液體相通，所述結(jié)合 襯墊與具有測試結(jié)果區(qū)和對照區(qū)的硝化纖維測試帶液體相通。免疫測試 裝置還可以在與樣品施加襯墊反方向的末端包括一個末梢接收器，用于 在測試完成之后吸收任何過量的液體。所述樣品施加襯墊是一個多孔的襯墊，其能夠吸收待測樣品并將吸 收的樣品通過毛細管作用轉(zhuǎn)移到結(jié)合襯墊處。結(jié)合襯墊包括一種或多種 千燥的標記的分子或試劑例如抗體，其能夠與 一 種或多種所關(guān)心的分析 物進行特異性地結(jié)合從而形成分析物標記的試劑復合物。結(jié)合襯墊還可 以包括一種或多種穩(wěn)定化化合物，其能夠?qū)τ蓾穸群蜏囟人鸬臈l件 變化感發(fā)熱穩(wěn)定性以及穩(wěn)定性。結(jié)合襯墊是一種多孔襯墊，其能夠吸收 從樣品施加襯墊處轉(zhuǎn)移來的樣品并且通過毛細管作用將所述樣品轉(zhuǎn)移 到硝化纖維帶上。硝化纖維帶能夠吸收來自結(jié)合襯墊的樣品并且通過毛 細管作用將所述樣品向下游轉(zhuǎn)移到領(lǐng)'J試結(jié)果區(qū)和對照區(qū)。免疫測試裝置 的測試結(jié)果區(qū)包括一種或多種固定化分子或試劑，例如抗體，其能夠與 一種或多種所關(guān)心的分析物或分析物標記的試劑復合物的任意部分進 行特異性地結(jié)合。免疫測試裝置的對照區(qū)包括一種或多種固定化分子或 試劑，例如抗體，其能夠與一種或多種標記的試劑進行特異性地結(jié)合。當將液體試樣施加到裝置的樣品施加襯墊上時，所述樣品通過毛細 管作用穿過樣品施加襯墊、結(jié)合襯墊和硝化纖維襯墊。當樣品穿過結(jié)合 襯墊時，所述樣品溶解了干燥的標記分子或試劑，并且如果樣品中存在 所關(guān)心的分析物，則所溶解的標記分子或試劑就會與所關(guān)心的分析物結(jié) 合從而形成分析物標記的試劑復合物，相反，如果樣品中不存在所關(guān)心 的分析物，則沒有復合物形成。然后，將正試驗情況中的分析物標記的試劑復合物，或負試驗情況中的單獨的標記試劑，遷移到并且穿過硝化 纖維帶，接著經(jīng)過裝置的測試結(jié)果區(qū)和對照區(qū)。如果樣品中存在所關(guān)心 的分析物，則分析物標記的試劑復合物與測試結(jié)果區(qū)的固定化試劑相結(jié) 合從而形成可;^測的線，而如果樣品中不存在所關(guān)心的分析物，則沒有 分析物標記的試劑復合物形成，因此在測試結(jié)果區(qū)就不發(fā)生結(jié)合。無論 樣品中是否存在用于形成復合物的所關(guān)心的分析物，標記的試劑都會與 對照區(qū)的固定化試劑相結(jié)合從而形成可檢測的線，表示測試已經(jīng)完成。 任何過量的液體樣品在測試完成后均可以被所述裝置的末梢接收器吸 收。本發(fā)明提供了檢測樣品中所關(guān)心分析物的存在或測定其量的方法， 其包括提供懷疑含有所關(guān)心分析物的樣品的步驟。所述樣品可以是任何 樣品，例如生物學液體或環(huán)境樣品。所迷方法還可以包括提供一種免疫 層析測試帶，所述測試帶包含有一種或多種生物學活性分子和一種或多 種非糖類有機相容溶質(zhì)。免疫層析測試帶優(yōu)選與如上所述的免疫測試式裝置相連，所述裝置 是用于檢測樣品中所關(guān)心分析物的存在或測定分析物的數(shù)量的。本發(fā)明 的方法還可以包括將懷疑含有所關(guān)心的分析物的樣品與免疫層析測試 帶接觸的步驟。所迷方法還可以包括檢測所關(guān)心的分析物的存在或測定其量的步 驟。對所關(guān)心分析物的存在的檢測或?qū)ζ鋽?shù)量的測定可以通過能夠達到 該目的的任何合適的方法進行，例如，使用標記的抗體或抗體片段，其 中標記物包括一種或多種，例如，乳膠、染料、金溶膠、放射性或焚光 標記物。本發(fā)明的一個重要的方面包括一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)在 干燥和重組狀態(tài)下保護和保持一種或多種生物學活性分子的活性的能 力，所述干燥和重組狀態(tài)特別是例如任何上述裝置中的結(jié)合襯墊或含有 可遷移且干燥的結(jié)合試劑以及檢測區(qū)中的結(jié)合試劑的其它區(qū)域。本發(fā)明 的一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)可以選自，例如，氨基酸例如甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、脯氨酸、谷氨酸鈉、賴氨酸、氨基丁酸(aminobutric acid)、?；撬幔防缣鸩藟A、肌氨酸、N-氧化三甲胺，或滲透調(diào)節(jié)物 質(zhì)(osmolytes )或者其它合適的〉容質(zhì)例如2-萘S^、 ectoine、 hydroxyectoine、 甘油、脫氧核糖核酸、單磷酸腺苷、PCR引物、精胺、亞精胺、Brij58、聚乙烯亞胺、聚組氨酸、polythymadilic acid、乙酰-L-肉石咸、L-瓜氨酸 (L-catruline )、氨乙基亞磺酸和阿魏酸。實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了 一般性的描述，通過參照以下實施例可以更加 容易地理解本發(fā)明，包括這些實施例的目的僅僅是為了例證說明本發(fā)明 實施方式的某些方面，其并不打算以任何方式限定本發(fā)明。除非另有說 明，否則所有的標題都是為了方便讀者，而不是用于限定標題后正文的含義。實施例1: RSC的捕獲根據(jù)本實施例，建造并使用檢測RSV抗原的ICT裝置。含有1.0 mg/ml單克隆抗-RSV ( Binax Inc., Portland ME)和8% (w/v)?；撬?(Sigma, St Louis MO )(保護的)，或者只含有1.0 mg/ml單克隆抗-RSV (Binax Inc., Portland ME )(未保護的)的捕獲抗體溶液在制得之后就立 即進行劃線涂布。將所述捕獲溶液劃線涂布到層壓在聚酯薄膜上的硝化 纖維(HFIIOUBBS,Millipore, Bedford, MA)材料上，并在48。C下干燥 兩分鐘。然后按照裝置的一般設(shè)計用金標記的抗-RSV構(gòu)建所述裝置。 在隨后的幾天內(nèi)(時間零點)對一部分完成的裝置進行分析，將其余的 裝置密封在箔袋中并在55。C下存儲。將對RSV抗體呈陽性(靈敏、低靈敏和中等靈敏)和陰性的樣品 施加到裝置的萃取襯墊上，15分鐘后對它們進行分析以檢測RSV抗原。 對于未穩(wěn)定化和穩(wěn)定化劃線涂布捕獲溶液二者的陽性對照來說，初始測 試均產(chǎn)生了相似的響應。在所有情況下，陰性對照均未產(chǎn)生陽性信號。 在55。C下經(jīng)過一周以后，未保護的裝置未能檢測到靈敏對照。三周以后 對于未保護的裝置來說，低靈敏對照僅產(chǎn)生了微弱的信號，而保護的裝 置產(chǎn)生了幾乎與該保護裝置在第一周運行時相當?shù)捻憫Ｗ詈?，兩個月 后，未保護的裝置對三種陽性對照幾乎都沒有反應。保護的裝置仍能夠 檢測到低和中等靈敏對照中的RSV抗原。實施例2:肺炎鏈球菌的捕獲根據(jù)本實施例，建造并使用^企測肺炎鏈球菌(S. )抗原的ICT裝置。含有1.25 mg/ml親合純化兔抗肺炎鏈球菌抗體(Binax Inc.， Portland ME )和5 % ( w/v ) hydroxyectoine ( Fluka Production, GmbH )(保護的)，或者僅含有1.25 mg/ml親合純化兔抗肺炎鏈球菌抗體(Binax Inc., Portland ME)(未保護的)的捕獲抗體溶液在制得之后就立即進行 劃線涂布。將捕獲溶液劃線涂布到層壓在聚酯薄膜上的硝化纖維(SR, Millipore, Bedford, MA)材料上，并在50°C下干燥兩分鐘。然后按照裝 置的一般設(shè)計用金標記的兔抗肺炎鏈球菌抗體構(gòu)建所述裝置。在隨后的 幾天內(nèi)(時間零點)對一部分完成的裝置進行分析，將其余的裝置密封 在箔袋中并在55'C下存儲。將對肺炎鏈球菌抗體呈陽性(靈敏，低靈敏和中等靈敏)和陰性的 樣品施加到裝置的患者藥簽(swab)上，接著加入追加溶液，15分鐘后 對它們進行分析以檢測肺炎鏈球菌抗原。在所有情況下，陰性對照均未 產(chǎn)生陽性信號。在55。C下經(jīng)過一周之后，未保護的裝置產(chǎn)生的信號是用 hydroxyectoine穩(wěn)定化的裝置的一半。 一個月后，未保護的裝置未能檢 測到低靈敏的對照，而保護的裝置仍能夠檢測到靈敏的對照。兩個月之 后的結(jié)果與一個月時的結(jié)果類似。實施例3'.絲蟲的捕獲根據(jù)本實施例，建造并使用檢測RSV抗原的ICT裝置。含有1.5 mg/d 單克隆抗-A IgM ( Binax Inc., Portland ME )和5 % ( w/v ) 4青胺(Fluka Production, GmbH )(保護的)，或者僅含有1.5 mg/ml單克隆抗 -Z). IgM ( Binax Inc., Portland ME )(未保護的)得捕獲抗體溶液在制得之后就立即進行劃線涂布。將捕獲溶液劃線涂布到層壓在聚酯薄 膜上的硝化纖維(HFI IOUBBS, Millipore, Bedford, MA)材料上，并在5crc下干燥兩分鐘。然后按照裝置的一般設(shè)計用金標記的抗-D. ,w脂力:v 構(gòu)建所述裝置。在緊接下來的時間內(nèi)(時間零點)對一部分完成的裝置進行分析，將其余的裝置密封在箔袋中并且存儲在55。C下。將對D. ,mm"w抗體呈陽性(低和中等靈敏)和陰性的全血樣品施 加到裝置的萃取襯墊上，15分鐘后對它們進行分析以檢測Z). 抗 原。對于未穩(wěn)定化和穩(wěn)定化劃線涂布捕獲溶液二者的陽性對照來說，初 始測試均產(chǎn)生了相似的響應。在所有情況下，陰性對照均未產(chǎn)生陽性信 號。在55。C下經(jīng)過一周以后，未保護的裝置未能檢測到低靈敏的對照，而穩(wěn)定化的裝置產(chǎn)生了與初始測試相當?shù)男盘枴?一個月以后，未保護的 裝置未能檢測到低或中等靈敏的陽性對照，而保護的裝置能夠檢測到低 和中等靈敏的陽性對照。兩個月以后，未保護的裝置仍對陽性對照沒有 反應。保護的裝置能夠檢測到中等靈敏對照中的D.朋脂^抗原。實施例4: RSV的捕獲根據(jù)本實施例，建造并使用用于檢測RSV抗原的ICT裝置。將含 有1.0mg/ml單克隆抗-RSV(BinaxInc., Portland ME )和1.25% (w/v) 單磷酸腺苷(Sigma, St Louis , MO )(保護的)的捕獲抗體溶液在制備之 后就立即進行劃線涂布。將捕獲溶液劃線涂布到層壓在聚酯薄膜上的硝 化纖維(HFIIOUBBS,Millipore， Bedford, MA)材料上，并在48。C下干 燥兩分鐘。然后按照裝置的 一般設(shè)計用金標記的抗-RSV構(gòu)建所述裝置。 在隨后的幾天內(nèi)(時間零點)對一部分已經(jīng)完成的裝置進行分析，將其 余的裝置密封在箔袋中并且存儲在55。C下。將對RSV抗體呈陽性(靈敏，低靈敏和中等靈敏)和陰性的樣品 施加到裝置的萃取襯墊上，15分鐘后對它們進行分析以檢測RSV抗原。 用具有穩(wěn)定化RSV抗體的裝置進行的初始測試在靈敏、低靈敏和中等 靈敏三個陽性對照的每一個中均檢測到了 RSV抗原。在所有情況下， 陰性對照均未產(chǎn)生陽性信號。在55。C下經(jīng)過一周以后，每種對照類型所 產(chǎn)生的信號都與初始測試的相同。在55。C下經(jīng)過兩個月之后，所述裝置 仍能夠在靈敏、低靈敏和中等靈敏的對照中檢測到RSV抗原。實施例5:癡疾的免疫層析測試使用非糖類有機相容溶質(zhì)來穩(wěn)定硝化纖維和金上的抗體。0.1 %的聚 組氨酸濃度能夠使醛縮酶重組體得到穩(wěn)定化。在30。C下存儲的樣品顯示 具有至少29天的穩(wěn)定性，但其以前僅能穩(wěn)定2天。實施例6: 2% W/V的ectoineL-組氨酸、牛石黃酸和L-蘇氨酸的混合物使 含/不含蔗糖的結(jié)合襯墊干燥緩沖劑具有穩(wěn)定性按照SOP配方制備5X的結(jié)合干燥緩沖劑，除了不含SOP中的25 %w/v的蔗糖。通過加入5X的干燥緩沖劑將對照、抗惡性瘧原蟲(P /a/c,/^raw)和抗間日疾原蟲(尸.vzvox)金顆粒的混合物調(diào)節(jié)到IX,并且使每種ectoineL-組氨酸、?；撬岷蚅-蘇氨酸達到2%w/v。對SOP結(jié) 合襯墊基質(zhì)進行劃線涂布、干燥并在干燥瓶中在4 °C和55 °C兩種溫度下 存儲19個月和11天。將瓶子移至室溫下，達到平衡，并將各個溫度下 的襯墊插入到癡疾尿的浸量尺形式的裝置中。在每個裝置上均對相同的 重組間日疾原蟲抗原和組織培養(yǎng)懸浮惡性瘧原蟲抗原的混合物進行試 驗。無論千燥襯墊緩沖劑配制物中是否存在蔗糖，在4。C和55。C兩種溫 度下存儲的結(jié)合襯墊上觀測到相等的靈敏度。實施例7: 4 % W/V的單獨的L-組氨酸沒有使含/不含蔗糖的結(jié)合襯墊干 燥緩沖劑具有穩(wěn)定性按照SOP配方制備5X的結(jié)合干燥緩沖劑，除了不含SOP中的25 。/。w/v的蔗糖。通過加入5X的干燥緩沖劑將對照、抗惡性瘧原蟲和抗 間日癡原蟲金顆粒的混合物調(diào)節(jié)到IX,并且達到4%w/v。將SOP結(jié)合 襯墊基質(zhì)劃線涂布、干燥并在干燥瓶中在4。C和55。C兩種溫度下存儲19 個月和11天。將瓶子移至室溫下，達到平衡，并將各個溫度下的襯墊 插入到疾疾尿的浸量尺形式的裝置中。每個裝置上對相同的重組間日瘧 原蟲抗原和組織培養(yǎng)懸浮惡性癡原蟲抗原的混合物進行試驗。觀測到存 儲在4 。C下的結(jié)合襯墊比存儲在55 。C下的結(jié)合襯墊的靈敏度高許多。另 外，大量的結(jié)合物在試驗后仍保留在55。C材料的結(jié)合襯墊基質(zhì)中。等同形式本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認識到，或者僅使用常規(guī)試驗就能夠確定，本 文所描述的本發(fā)明實施方式的多種等價形式。這樣的等價形式也試圖包 括在下述權(quán)利要求內(nèi)。
權(quán)利要求
1、一種方法，其包括a) 將一種或多種生物學活性分子沉積到一個表面上；b) 將一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)沉積到所述表面上；和c) 干燥所述表面上沉積的一種或多種生物學活性分子和沉積的一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)，其中所述一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)在干燥和重組狀態(tài)下保持了所述一種或多種生物學活性分子的活性。
2、 權(quán)利要求1的方法，其中同時將所述一種或多種生物學活性分 子和所述一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)沉積到所述表面上。
3、 權(quán)利要求2的方法，其中每一種所述一種或多種生物學活性分 子中均選自抗體、標記的抗體、抗體片段和標記的抗體片段，并且所 述一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)包含單氨基酸。
4、 權(quán)利要求2的方法，其中每一種所述一種或多種生物學活性分 子均選自抗體、標記的抗體、抗體片段和標記的抗體片段，并且所述 一種或多種非糖類有機相容溶質(zhì)包含約1到約10個氨基酸的單氨基酸 鏈。
5、 權(quán)利要求3的方法，其中每一種所述一種或多種生物學活性分 子均選自固定化的抗體、固定化的抗體片段、可遷移的標記抗體和可 遷移的標記抗體片段，并且所述表面包含測試帶部分。
6、 權(quán)利要求5的方法，其中所述測試帶是免疫層析性的。
7、 權(quán)利要求5的方法，其中所述測試帶部分是結(jié)合襯墊。
8、 權(quán)利要求5的方法，其中所述測試帶部分是檢測區(qū)。
9、 權(quán)利要求5的方法，其中所述免疫層析帶包含有橫向流動裝置。
10、 權(quán)利要求2的方法，其中所述一種或多種生物學活性分子選自 抗體、標記的抗體、抗體片段和標記的抗體片段，并且所述一種或多種 非糖類有機相容溶質(zhì)包含一種或多種胺。
11 、權(quán)利要求2的方法，其中所述一種或多種生物學活性分子選自 抗體、標記的抗體、抗體片段和標記的抗體片段，并且所述一種或多種 非糖類有機相容溶質(zhì)包含滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)或其它相容的溶質(zhì)。
12、 一種方法，其包括a) 提供一個樣品；b) 提供至少一部分包含一種或多種生物學活性分子和一種或多 種非糖類有機相容溶質(zhì)的測試帶，其中所述一種或多種非糖類有機相容 溶質(zhì)在干燥和重組狀態(tài)下保護和保持了所述一種或多種生物學活性分子的活性；c) 將所述樣品與所述測試帶接觸；和d ) 檢觀'J樣品中分析物的存在或者測定其量，其中所述 一 種或多種 非糖類有機相容溶質(zhì)在干燥和重組狀態(tài)下保護和保持了所述一種或多 種生物學活性分子的活性。
13、 權(quán)利要求12的方法，其中所述測試帶部分是結(jié)合襯墊。
14、 權(quán)利要求12的方法，其中所述測試帶部分是檢測區(qū)。
15、 權(quán)利要求12的方法，其中所述測試帶是免疫層析性的。
16、 權(quán)利要求12的方法，其中所述測試帶包含有橫向流動裝置。
17、 權(quán)利要求12的方法，其中所述一種或多種非糖類有機相容溶 質(zhì)各自選自甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、脯氨酸、谷氨酸鈉、賴氨酸、 氨基丁酸、牛磺酸、胺、甜菜堿、肌氨酸、N-氧化三甲胺、2-萘酚、ectoine、 hydroxyectome、甘油、脫氧核糖核酸、單磷酸腺苷、PCR引物、精胺、 亞精胺、BnJ5 8、聚乙烯亞胺、聚組氨酸、polythymadilic acid、乙酰-L-肉堿和L-瓜氨酸。
18、 一種測試帶，其限定了一個流路并且包含 一個干燥形式的多孔元件，其包含用于結(jié)合分析物的標記的結(jié)合試劑，和 至少一種非糖類有機相容溶質(zhì)， 一個與所述多孔元件分隔但液體接觸的多孔帶，所述多孔帶包含檢 測區(qū)，禾口沿著流路設(shè)置的結(jié)合試劑，其是用來結(jié)合分析物和/或分析物與標記 的結(jié)合試劑的復合物其中所述結(jié)合試劑是在包含分析物的液體使標記的結(jié)合試劑發(fā)生 移動時用來在檢測區(qū)中捕獲分析物和/或分析物與標記的結(jié)合試劑的復 合物，并且所述非糖類有機相容溶質(zhì)選自甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸、脯氨酸、 谷氨酸鈉、賴氨酸、氨基丁酸、?；撬?、胺、甜菜堿、肌氨酸、N-氧化 三甲胺、2-萘酚、ectoine、 hydroxyectoine、甘油、脫氧核糖核酸、單磷酸腺苷、PCR引物、精胺、亞精胺、BnJ5 8、聚乙烯亞胺、聚組氨酸、 polythymadilica cid、 乙酰-L-肉石威和L-瓜氨酸。
全文摘要
本發(fā)明提供了如下方法，其包括使用非糖類有機相容溶質(zhì)保護和保持生物學活性分子和綴合標記物活性。所述方法特別適用于與免疫測試相關(guān)的方面，例如免疫層析測試試驗，并且可以結(jié)合入任何測試方法中，其中在所述測試方法中使用干燥的測試帶作為沉積可遷移和/或固定化的生物學活性分子和/或綴合標記物的載體。
文檔編號G01N33/53GK101253407SQ200680031421
公開日2008年8月27日 申請日期2006年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月27日
發(fā)明者A·H·戴維斯, B·C·雷恩曼, E·R·皮亞西奧, R·N·皮亞西奧, W·J·帕林 申請人:比納克斯公司