專(zhuān)利名稱(chēng)：氨基酸的paabs－f柱前衍生化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物的柱前衍生化方法，屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
柱前衍生化是提高氨基酸檢測(cè)靈敏度常用的方法，但目前已報(bào)道的氨基酸的衍生化方法都或多或少地存在一些問(wèn)題。例如鄰苯二甲醛(OPA)[1]只能衍生伯氨基酸，且衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定；氯甲酸芴甲酯(FMOC)[2]是衍生胺類(lèi)化合物的常用試劑，但是它本身及水解產(chǎn)物均產(chǎn)生與衍生物類(lèi)似的熒光，從而干擾分離；異硫氰酸苯酯(PITC)與氨基酸衍生后需要真空干燥以除去過(guò)量試劑，且PITC損耗色譜柱壽命[3]；二甲氨基萘磺酰氯(Dansyl-Cl)[4]衍生物對(duì)光敏感，且該試劑選擇性差。對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)以往主要用于有機(jī)合成，未見(jiàn)用于柱前衍生化的報(bào)道。因此，有必要開(kāi)發(fā)新型衍生試劑用于氨基酸的柱前衍生，以提高氨基酸的分離檢測(cè)能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種衍生反應(yīng)條件簡(jiǎn)單、溫和，能同時(shí)衍生一級(jí)和二級(jí)氨基酸，過(guò)量試劑不需預(yù)先除去，干擾少，反應(yīng)后可直接進(jìn)樣進(jìn)行色譜分析等優(yōu)良特性氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是將含有氨基酸的樣品經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，加入PAABS-F的乙醇溶液和少量甲醇，混勻，在25-45℃條件下衍生化反應(yīng)20-40分鐘后，進(jìn)樣至高效毛細(xì)管電泳或高效液相色譜進(jìn)行分離和檢測(cè)，測(cè)定氨基酸的濃度。
所述的衍生化反應(yīng)的最佳溫度為30℃，最佳時(shí)間為30分鐘。為了減少干擾，提高測(cè)得氨基酸濃度的準(zhǔn)確性，所述的進(jìn)樣前先對(duì)待測(cè)溶液用0.22μm膜進(jìn)行過(guò)濾。所述的少量甲醇為PAABS-F的乙醇溶液的1/200。
本發(fā)明具有衍生反應(yīng)條件簡(jiǎn)單、溫和，能同時(shí)衍生一級(jí)和二級(jí)氨基酸，過(guò)量試劑不需預(yù)先除去，干擾少，反應(yīng)后可直接進(jìn)樣進(jìn)行色譜分析等優(yōu)良特性。此外它與氨基酸的衍生產(chǎn)物非常穩(wěn)定，常溫?zé)o需避光的條件下能放置7天。最佳衍生反應(yīng)溫度為35℃，特別適合于生物樣品的分析。


圖1是13種L-氨基酸柱前衍生化后的高效毛細(xì)管電泳圖，1.Lys；2.Gln；3.Asn；4.Val；5.Ser；6.Met；7.Pro；8.Ala；9.Gly；10.Cys；11.PAABS-CH；12.Asp；13.Arg；14.His；圖2是人血清中氨基酸的高效毛細(xì)管電泳圖，1.Lys；2.Gln；3.Thr；4.Asn；5.Ile；6.Leu；7.Val；8.Ser；9.Met；10.Pro；11.Ala；12.Gly；13.Phe；14.Trp；15.Cys；16.PAABS-CH。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1儀器與條件毛細(xì)管電泳儀，毛細(xì)管總長(zhǎng)60cm，有效柱長(zhǎng)50cm，內(nèi)徑50μm。13種氨基酸(生化試劑，國(guó)藥集團(tuán))。SDS(生化試劑，AlfaAesar)。
實(shí)施步驟定量移取每種氨基酸(0.05mmol/L)40μL至2mL的具塞磨口試管內(nèi)，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混勻，塞緊后將其放入35℃恒溫水浴中30min。進(jìn)樣前用0.22μm膜過(guò)濾。
實(shí)施例2儀器與條件毛細(xì)管電泳儀，毛細(xì)管總長(zhǎng)60cm，有效柱長(zhǎng)50cm，內(nèi)徑50μm。13種氨基酸(生化試劑，國(guó)藥集團(tuán))。SDS(生化試劑，AlfaAesar)。
實(shí)驗(yàn)步驟取預(yù)處理好的血清樣品0.8mL，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混勻，塞緊后將其放入35℃恒溫水浴中30min。進(jìn)樣前用0.22μm膜過(guò)濾。
權(quán)利要求
1.一種氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是將含有氨基酸的樣品經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，加入PAABS-F的乙醇溶液和少量甲醇，混勻，在25-45℃條件下衍生化反應(yīng)20-40分鐘后，進(jìn)樣至高效毛細(xì)管電泳或高效液相色譜進(jìn)行分離和檢測(cè)，測(cè)得氨基酸的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的衍生化反應(yīng)的最佳溫度為30℃，最佳時(shí)間為30分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的進(jìn)樣前先對(duì)待測(cè)溶液用0.22μm膜進(jìn)行過(guò)濾。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基酸的PAABS-F柱前衍生化方法，其特征是所述的少量甲醇為PAABS-F的乙醇溶液的1/200。
全文摘要
氨基酸的PAABS－F柱前衍生化方法，屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。將含有氨基酸的樣品經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，加入PAABS－F和少量甲醇，混勻，在25－45℃條件下衍生化反應(yīng)20－40分鐘后，進(jìn)樣至高效毛細(xì)管電泳或高效液相色譜進(jìn)行分離和檢測(cè)，測(cè)得氨基酸的濃度。本發(fā)明具有衍生反應(yīng)條件簡(jiǎn)單、溫和，能同時(shí)衍生一級(jí)和二級(jí)氨基酸，過(guò)量試劑不需預(yù)先除去，干擾少，反應(yīng)后可直接進(jìn)樣進(jìn)行色譜分析等優(yōu)良特性。此外它與氨基酸的衍生產(chǎn)物非常穩(wěn)定，常溫?zé)o需避光的條件下能放置7天。最佳衍生反應(yīng)溫度為35℃，特別適合于生物樣品的分析。
文檔編號(hào)G01N30/02GK1825113SQ20061003907
公開(kāi)日2006年8月30日 申請(qǐng)日期2006年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月21日
發(fā)明者瞿其曙, 湯曉慶, 胡效亞, 劉尹, 陸曉 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)