專利名稱：酶免疫滲濾檢測用裝置及其制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域，特別是一種酶免疫滲濾檢測用裝置。本發(fā)明還涉及該裝置的制作方法。
現(xiàn)有的酶免疫滲濾檢測用裝置，多采用將抗原或抗體直接點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上，待干燥后作為滲濾膜備用。其制作方法是將配制好的抗原或抗體溶液直接點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上，然后置于室溫干燥或從硝酸纖維素膜的背面用真空抽干。在硝酸纖維素膜的下面放置多層吸水濾紙，再裝于具有相應(yīng)形狀和大小的小盒中即可。操作時，向滲濾膜的點(diǎn)樣處加入待檢血清，待滲濾，然后加入液態(tài)的酶標(biāo)記物，待滲濾，3-5分鐘后再加入洗滌液，待滲濾，共洗三遍，再加入顯色液顯色。斑點(diǎn)顯色為陽性，斑點(diǎn)無色為陰性。在被硝酸纖維素膜吸附的樣品的干燥過程中，如不加入穩(wěn)定劑，常會造成點(diǎn)樣液中抗原或抗體發(fā)生不可逆的變性或活性的損失，影響了酶免疫滲濾檢測裝置的靈敏度和特異性。另外，該方法通常采用液態(tài)的酶標(biāo)記抗原或抗體作為酶標(biāo)記物，這樣不但影響了該酶免疫滲濾檢測裝置的穩(wěn)定性和保存期，而且使操作步驟增加。不能很好的達(dá)到當(dāng)今免疫學(xué)測定敏、準(zhǔn)、快、簡的要求。
本發(fā)明的任務(wù)是提供一種靈敏度和準(zhǔn)確度高并可長期穩(wěn)定存放的酶免疫滲濾檢測用裝置。
本發(fā)明還涉及上述裝置的制作方法。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的酶免疫滲濾檢測用裝置，主要由盒體組成，盒體內(nèi)自上而下設(shè)有過濾擴(kuò)展層、滲濾層和廢液吸收層，其特征在于在上述過濾擴(kuò)展層與滲濾層之間還設(shè)有一個酶標(biāo)記物層。
酶標(biāo)記物層為含有海藻糖穩(wěn)定化的固相酶標(biāo)記物的濾紙。
為了在過濾擴(kuò)展層與滲濾層之間形成一個酶標(biāo)記物層，本發(fā)明的制作方法主要包括用定性或定量濾紙制作過濾擴(kuò)展層，用多層吸水濾紙或其它吸水材料制作廢液吸收層，將固相抗原或抗體點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上制作滲濾層，其特征在于還包括用定性或定量濾紙制作固相酶標(biāo)記物層。
上述固相酶標(biāo)記物層的制作步驟為先取固相酶標(biāo)記物和海藻糖加蒸餾水溶解為點(diǎn)樣液，再取點(diǎn)樣液點(diǎn)樣于濾紙上。
本發(fā)明由于增設(shè)了一個酶標(biāo)記物層，只需一次加入血清或全血樣品即可洗滌顯色，無須再加入液態(tài)酶標(biāo)記物，操作簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，易于觀察，靈敏度和準(zhǔn)確度高，并可長期(室溫可保持1-2年)穩(wěn)定存放。其室溫穩(wěn)定性可與金標(biāo)滲濾法相媲美，適用于以三明治夾心為原理的酶免疫滲濾法測定抗體或抗原，具有結(jié)構(gòu)簡單、操作方便和靈敏、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，而且制備工藝簡單，成本低廉。
附圖
為本發(fā)明縱向拉長的剖面圖。
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
附圖中，1為盒體、2為過濾擴(kuò)展層、3為酶標(biāo)記物層、4為滲濾層、5為廢液吸收層。
如附圖所示，本發(fā)明為一種酶免疫滲濾檢測用裝置，主要是由多層濾紙和硝酸纖維素膜組成的多層盒式結(jié)構(gòu)，最上層是過濾擴(kuò)展層2，為定性或定量濾紙，用于擴(kuò)展血清或全血，還起過濾血球及其他顆粒的作用。第二層為酶標(biāo)記物層3，其支持物為定性或定量濾紙，濾紙上有穩(wěn)定化的固相酶標(biāo)記物，其制作方法是先取1-10mg干重的酶標(biāo)記物和30-100mg海藻糖加1ml的蒸餾水溶解即為點(diǎn)樣液，也可以向含有1-10mg/ml酶標(biāo)記物的溶液1ml中加入30-100mg的海藻糖；然后取點(diǎn)樣液1-2μl加于濾紙上呈圓點(diǎn)狀或其他形狀，最后將點(diǎn)樣濾紙置室溫風(fēng)干或37℃或60℃烘干即可。第三層為滲濾層4，其制作方法是先取1-10mg干重的抗原或抗體和30-100mg海藻糖，加1ml的蒸餾水溶解即為點(diǎn)樣液，也可以向含有1-10mg/ml抗原或抗體的1ml溶液中加入30-100mg的海藻糖。然后取點(diǎn)樣液1-2μl加于硝酸纖維素膜上呈圓點(diǎn)狀或其他形狀，最后將點(diǎn)樣硝酸纖維素膜置室溫風(fēng)干或37℃或60℃烘干即可。第四層為廢液吸收層5，主要由多層吸水濾紙或其他吸水材料組成。以上各層以點(diǎn)樣點(diǎn)為中心切割成規(guī)定大小的圓形、方形或其他形狀。層與層之間按照上述自上而下的順序重疊并密切接觸，然后將各層放入相應(yīng)形狀和大小的小盒體1中，小盒的上部在點(diǎn)樣的正上方有一區(qū)域為加樣區(qū)，小盒的中部在酶標(biāo)記物層3和滲濾層4之間有一開啟部，該開啟部可設(shè)計為一個拉鏈結(jié)構(gòu)或其它易開結(jié)構(gòu)，開啟時可以將過濾擴(kuò)展層2和酶標(biāo)記物層3一起揭開，使?jié)B濾層4全部暴露，以利于觀察結(jié)果，觀察硝酸纖維素膜上斑點(diǎn)的顯色情況。
操作時，取5-10μl的待檢血清或全血加入加樣區(qū)中，待滲濾，再取2-3滴洗滌液加入，待滲濾，5-10分鐘后再加入2-3滴洗滌液，待滲濾，共洗三遍，隨后加入顯色劑，待滲濾，最后開啟結(jié)合部觀察結(jié)果，斑點(diǎn)顯色為陽性，斑點(diǎn)無色為陰性(也可以開啟后加洗滌液，洗滌三遍，再加入顯色劑顯色)。靈敏度和準(zhǔn)確度高并可長期穩(wěn)定存放。
權(quán)利要求
1.酶免疫滲濾檢測用裝置，主要由盒體(1)組成，盒體(1)內(nèi)自上而下設(shè)有過濾擴(kuò)展層(2)、滲濾層(4)和廢液吸收層(5)，其特征在于在上述過濾擴(kuò)展層(2)與滲濾層(4)之間還設(shè)有一個酶標(biāo)記物層(3)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征在于上述酶標(biāo)記物層(3)為含有海藻糖穩(wěn)定化的固相酶標(biāo)記物的濾紙。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征在于上述滲濾層(4)為含有海藻糖穩(wěn)定化的固相特異性抗原或抗體的硝酸纖維素膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征在于盒體(1)中部在酶標(biāo)記物層(3)和滲濾層(4)之間還設(shè)有一個開啟部。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征在于盒體(1)中部在酶標(biāo)記物層(3)和滲濾層(4)之間還設(shè)有一個開啟部。
6.一種制造酶免疫滲濾檢測用裝置的方法，主要包括用濾紙制作過濾擴(kuò)展層(2)，用多層吸水濾紙或其它吸水材料制作廢液吸收層(5)，將固相抗原或抗體點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上制作滲濾層(4)，其特征在于還包括用定性或定量濾紙制作固相酶標(biāo)記物層(3)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于上述固相酶標(biāo)記物層(3)的制作步驟為先取固相酶標(biāo)記物和海藻糖加蒸餾水溶解為點(diǎn)樣液，再取點(diǎn)樣液點(diǎn)樣于濾紙上。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于上述滲濾層(4)的制作步驟為先將固相抗原或抗體加入海藻糖后再加適量蒸餾水后形成點(diǎn)樣液，再將點(diǎn)樣液點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征是固相酶標(biāo)記物、固相特異性抗原或抗體與海藻糖的重量比都為1∶10-30。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征是固相酶標(biāo)記物、固相特異性抗原或抗體與海藻糖的重量比都為1∶10-30。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征在于還包括將點(diǎn)樣成的固相酶標(biāo)記物層(3)和滲濾層(4)置室溫風(fēng)干或37℃或60℃烘干。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的酶免疫滲濾檢測用裝置，其特征在于還包括將點(diǎn)樣成的固相酶標(biāo)記物層(3)滲濾層(4)置室溫風(fēng)干或37℃或60℃烘干。
全文摘要
本發(fā)明為酶免疫滲濾檢測用裝置及其制作方法,該裝置是在一盒體內(nèi)設(shè)置過濾擴(kuò)展層、滲濾層和廢液吸收層,特點(diǎn)是還設(shè)有一個用定性或定量濾紙制作的固相酶標(biāo)記物層,使用時只需一次加入血清或全血樣品即可洗滌顯色,靈敏度和準(zhǔn)確度高并可長期(室溫可保持1—2年)穩(wěn)定存放。
文檔編號G01N33/543GK1272627SQ0011099
公開日2000年11月8日 申請日期2000年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月7日
發(fā)明者郭占軍, 趙華, 郭愛芹, 楊煥云 申請人:郭占軍