專利名稱：一種裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，尤其是一種可控性
良好、對(duì)水溶性物質(zhì)有高裝載效率和緩釋性的聚電解質(zhì)微膠囊的制備方法，屬于生物醫(yī)學(xué)材料、藥物遞送以及組織工程領(lǐng)域。 微膠囊是一種通過(guò)成膜物質(zhì)將囊內(nèi)外空間隔離開來(lái)，并具有特定幾何結(jié)構(gòu)的微型容器，尺寸大小通常在納/微米至毫米級(jí)，形狀以球形為主。微膠囊的內(nèi)部空間可以容納大量的客體分子，實(shí)現(xiàn)微觀包裹效應(yīng)，并在最大程度上保護(hù)客體分子的性質(zhì)不受外界環(huán)境影響。在許多領(lǐng)域，水溶性物質(zhì)包括無(wú)機(jī)小分子、有機(jī)小分子及生物大分子都需要裝載于微膠囊內(nèi)，例如將各種藥物、香精、油墨、染料、納米粒子甚至生物細(xì)胞等裝載于微膠囊內(nèi)得到不同功能的微膠囊，廣泛用于醫(yī)藥、食品、印刷以及生物工程方面。 微膠囊的制備方法有化學(xué)法和物理法，即微膠囊的囊壁膜由化學(xué)反應(yīng)合成或通過(guò)物理化學(xué)法或物理作用形成；微膠囊壁膜材料可以是天然大分子、合成高分子以及無(wú)機(jī)化合物，也可以由多種材料復(fù)合構(gòu)成。 微膠囊裝載客體物質(zhì)可以在制備微膠囊的同時(shí)完成對(duì)客體分子的裝載。例如水/油/水雙乳法裝載藥物分子、生物酶等；凝聚相分離法包裹親水性或親油性物質(zhì)
(Yi-Yan YangH. _H. C. ， Tai-Sh皿g Chung. Effect of preparation temperature on thecharacteristics and release profiles ofPLGA microspheres containing protein
fabricated by double-emulsion solvent extraction/evaporation method. Journalof Controlled Release. 2000，69(1) :81—96 ;Joachim Herrmann R. B. The effect
microspheres prepared by a W/0/W solventevaporation method. Journal ofControlled Release. 1 995，36(1_2)63_7 1);界面溶劑交換法(Yoon Yeo K. P. A newmicroencapsulation method using an ultrasonic atomizer based on interfacialsolvent exchange. Jo證alof Controlled Release. 2004， 100 (3) :379-388);微乳液聚合法等(樊耀峰，王學(xué)晨，等.高分子材料科學(xué)與工程2005， 21 (1) :288-292)。這些方法都需要使用有機(jī)溶劑或乳化劑，對(duì)蛋白質(zhì)等生物大分子物質(zhì)的活性很不利，并且微囊的通透性及緩釋性難以在微觀上進(jìn)行調(diào)控。 與上述方法相比，層層自組裝構(gòu)建聚電解質(zhì)微膠囊的方法在水相中進(jìn)行。微膠囊的大小和形狀由用作模板的膠體粒子控制，囊壁厚度可以在納米尺度內(nèi)精確調(diào)控。利用層層自組裝法，可以在組裝構(gòu)建微膠囊的同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)的包裹裝載，例如，在蛋白質(zhì)聚集體或藥物晶體等膠體粒子表面直接進(jìn)行聚電解質(zhì)分子的層層包覆，但是對(duì)被包覆物的形狀、尺寸、溶解性及電性等都有特定的要求；也可以將待裝載物作為囊壁材料之一組裝形成亞穩(wěn)定的內(nèi)殼，在適當(dāng)?shù)臈l件下再使其解體而包覆于穩(wěn)定外殼形成的微膠囊內(nèi)。該方法的適用性很有限，且活性物質(zhì)經(jīng)歷的制備過(guò)程長(zhǎng)而復(fù)雜。聚電解質(zhì)微膠囊裝載物質(zhì)的另一種方
背景技術(shù)：
somatostatin release from poly (lactide)式是預(yù)先制備了中空微膠囊，再將客體分子裝載到微膠囊內(nèi)部。例如，通過(guò)改變鹽濃度、pH值、引入光或熱等外界信號(hào)調(diào)節(jié)微膠囊膜壁的滲透性，從而使囊外物質(zhì)滲入囊內(nèi)。這種方法的特點(diǎn)是裝條件較溫和，但最大缺點(diǎn)在于裝載效率低；通過(guò)改變?nèi)軇┬再|(zhì)或pH值等環(huán)境條件來(lái)改變客體物質(zhì)的溶解性，使其沉淀在微膠囊內(nèi)部的方法對(duì)被裝載物的溶解性質(zhì)有特定要求，適用范圍有限。 在預(yù)先制備的微膠囊對(duì)物質(zhì)的裝載中，利用微膠囊內(nèi)預(yù)先存在的帶電荷的大分子基質(zhì)造成微膠囊內(nèi)外環(huán)境條件的差異，該差異推動(dòng)微囊外溶液中的物質(zhì)向微囊內(nèi)遷移和聚集，達(dá)到有效裝載的目的，這就是自然沉積裝載法。這種方法的最普遍例子是以三聚氰胺-甲醛樹脂(Melamine formaldehyde, MF)膠體微粒為模板制備的聚電解質(zhì)微膠囊(簡(jiǎn)稱MF微膠囊)對(duì)物質(zhì)的裝載(Changyou Gao E. D. ， Helmuth M5hwald, JiacongShen， . Spontaneous Deposition ofWater—Soluble Substances into Microcapsules :Phenomenon, Mechanism, and Application13. AngewandteChemie InternationalEdition. 2002,41(20) :3789-3793)。 MF微膠囊內(nèi)存在有未溶解完全的MF寡聚體與內(nèi)層聚電解質(zhì)聚苯乙烯磺酸鈉(PSS)形成的帶負(fù)電的MF/PSS復(fù)合物，從而驅(qū)使囊外物質(zhì)向囊內(nèi)聚集。利用MF微膠囊已實(shí)現(xiàn)了多種物質(zhì)的裝載，但MF具有生物毒性，且復(fù)合物MF/PSS的性質(zhì)具有很大的不確定性。有研究者在此基礎(chǔ)上制備了內(nèi)含PSS或羧甲基纖維素鈉(CMC)的CaC03膠體微粒模板，從而制備了內(nèi)含PSS或CMC的聚電解質(zhì)微膠囊(J. Biomater. Sci.Polymer Edn， Vol. 17， No. 9， pp. 997-1014 (2006);中國(guó)專利200510061354. 8)。這種方法中CaC03膠體微粒的形態(tài)和粒徑的可控性較差，且CaC03微粒具有多孔性，對(duì)聚電解質(zhì)大分子有較強(qiáng)的吸附力，因而微膠囊壁的厚度及微囊內(nèi)的大分子成分不易控制。此外，對(duì)CaC03微粒內(nèi)有機(jī)大分子的生物相容性和可降解性也沒(méi)有作特別考慮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)已有技術(shù)的不足而提供一種裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法。其特點(diǎn)是設(shè)計(jì)生物相容的、性質(zhì)可控的有機(jī)/無(wú)機(jī)雜化膠體粒子模板，在膠體模板上通過(guò)聚電解質(zhì)的層層自組裝，溶解去除模板中無(wú)機(jī)成分后制備得到內(nèi)部充填有多糖大分子基質(zhì)結(jié)構(gòu)的聚電解質(zhì)微膠囊，實(shí)現(xiàn)對(duì)廣泛水溶性物質(zhì)的有效裝載。
本發(fā)明的目的由以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)。 裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法包括以下步驟 1.將帶有負(fù)電荷的天然多糖聚電解質(zhì)溶于濃度為0.01 0. lmol/L的含碳酸根的無(wú)機(jī)鹽水溶液中，攪拌下與濃度為0. 001 0. Olmol/L的含錳無(wú)機(jī)鹽水溶液相混合，離子型天然多糖聚電解質(zhì)在反應(yīng)體系中的終濃度為0. 25 5mg/mL，攪拌反應(yīng)0. 1 20min，離心收集沉淀物，用去離子水洗1 3次，得到內(nèi)部結(jié)合有天然多糖聚電解質(zhì)的雜化MnC03膠體微粒模板。 2.將步驟1制得的雜化MnC03膠體微粒模板分散在NaCl濃度為0. 1 lmol/L的負(fù)電性聚電解質(zhì)溶液中，負(fù)電性聚電解質(zhì)的濃度為0. 5 5mg/mL。 5 30min后離心收集沉淀，以去離子水重新分散后再離心收集沉淀，如此反復(fù)水洗1 3次，得到第一層包覆有負(fù)電性聚電解質(zhì)層的雜化MnC03膠體微粒，再將該膠體微粒分散在NaCl濃度為0. 1 lmol/L的正電性聚電解質(zhì)溶液中，正電性聚電解質(zhì)的濃度為0. 5 5mg/mL。 5 30min后離心收集膠體微粒，以去離子水重新分散后再離心收集沉淀物，反復(fù)用水洗1 3次，完成了第二層 為正電性聚電解質(zhì)層的包覆。重復(fù)以上過(guò)程，按要求的層數(shù)將負(fù)電性和正電性聚電解質(zhì)交 替層層吸附組裝，得到具有核_殼結(jié)構(gòu)的膠體微粒，通過(guò)溶解或分解去除雜化微粒的MnC03 成分，就得到內(nèi)部預(yù)先充填有帶負(fù)電荷的天然多糖聚電解質(zhì)基質(zhì)的微膠囊。
3.在溫度4 4(TC，將步驟2所制得的基質(zhì)型微膠囊分散在濃度為0. 1 20mg/ mL的水溶性物質(zhì)的溶液中pHl. 0 8. O，共孵育0. 5 12h，將客體水溶性物質(zhì)裝載到微膠 囊內(nèi)；對(duì)于在海藻酸鈉/MnC03雜化微粒模板上制備的微膠囊(海藻酸鈉)/(海藻酸/殼 聚糖)5，完成裝載后，加入濃度為0.01 0. lmol/L的CaCl2溶液50 500uL，孵育10 60min，以對(duì)載藥后的微膠囊進(jìn)行交聯(lián)處理。
含錳無(wú)機(jī)鹽為硫酸錳或氯化錳。 含碳酸根無(wú)機(jī)鹽為碳酸氫鈉、碳酸氫氨或碳酸鈉中的任一種。
雜化MnC03膠體微粒模板中的天然多糖聚電解質(zhì)為海藻酸鈉(alginate sodium, ALG)或透明質(zhì)酸鈉(hyaluronate sodium, HA)或硫酸葡聚糖(dextran sulfate, DEX)或 肝素鈉(h印arinate sodi咖，HEP)或硫酸軟骨素(chondroitinsulfate， CS)或硫酸角質(zhì)素 (kerata固lfate， KS)或殼聚糖(chitosan， CHI)中的任一種。 微膠囊囊壁膜所用的正、負(fù)聚電解質(zhì)材料為合成聚電解質(zhì)或天然生物聚電解質(zhì)， 負(fù)電性聚電解質(zhì)為聚苯乙烯磺酸鈉或海藻酸或硫酸葡聚糖或透明質(zhì)酸或肝素鈉或硫酸軟 骨素或硫酸角質(zhì)素中的任一種；正電性聚電解質(zhì)為聚烯丙基胺鹽酸鹽或殼聚糖或魚精蛋白 (protamin)或膠原蛋白(collagen)中的任一禾中。 雜化MnC03膠體微粒模板中的MnC03成份的去除，用鹽酸溶解或用乙二胺四乙酸 (Ethylnediam tetraacetic acid disodium， EDTA)絡(luò)合分角牟。 水溶性物質(zhì)為帶正電荷的物質(zhì)、不帶電荷的或帶負(fù)電荷的物質(zhì)，包括羅丹明、 聚烯丙基銨鹽酸鹽、肌紅蛋白、白蛋白、魚精蛋白、干擾素、溶菌酶、胰島素、白介素11及 其它白介素、促生長(zhǎng)多肽激素(Protropin)、重組生長(zhǎng)激素(Somatropin)、促濾泡素 Gonal-F(follitropin a )、人絨毛膜促性腺激素(HCG)、胸腺肽、紅細(xì)胞生成素、表皮生長(zhǎng) 因子、降鈣素、骨粘連蛋白、骨鈣素、脲素、脲酶、聚賴氨酸、聚組氨酸或聚精氨酸中的任一 種。 本發(fā)明中微膠囊的囊壁厚度和囊壁結(jié)構(gòu)是通過(guò)調(diào)整囊壁膜的聚電解質(zhì)層數(shù)或吸 附組裝的條件(例如聚電解質(zhì)溶液中NaCl的濃度、pH值和聚電解質(zhì)濃度)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，從而 調(diào)控囊內(nèi)裝載物的釋放速率。
性能測(cè)試 通過(guò)掃描電鏡照片、激光共聚焦照片、以及對(duì)蛋白質(zhì)大分子的裝載和釋放曲線得 知，本發(fā)明制得的基質(zhì)型微膠囊內(nèi)預(yù)充填有性質(zhì)及含量都可調(diào)控的多糖大分子基質(zhì)，這種 基質(zhì)型微膠囊具有規(guī)則完整的外形和可調(diào)的尺寸；該微膠囊對(duì)包括生物大分子在內(nèi)的水溶 性物質(zhì)有較高的裝載量；微膠囊的裝載能力可以通過(guò)內(nèi)部的多糖基質(zhì)量來(lái)調(diào)節(jié)；改變環(huán)境 條件，裝載在微膠囊內(nèi)的水溶性物質(zhì)能夠釋放出來(lái)，有良好的緩釋效應(yīng)。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn) 1.可調(diào)控性與CaC03相比，雜化微粒模板中的無(wú)機(jī)成分MnC03使模板微粒的形狀 和粒徑分布更易于控制；通過(guò)模板微粒中有機(jī)多糖的種類可以進(jìn)一步調(diào)控微粒的形貌及粒徑，從而有效控制微膠囊的大小；微膠囊內(nèi)多糖基質(zhì)的性質(zhì)及含量可以精確調(diào)控，從而可以 調(diào)控微膠囊的裝載能力；微膠囊囊壁厚度具有可調(diào)控性。
2.生物相容性制備基質(zhì)型微膠囊的膠體模板是由離子型天然多糖大分子與碳 酸鹽組成的有機(jī)/無(wú)機(jī)雜化微球粒子，模板具有良好的生物相容性，且易于完全去除。
3.本發(fā)明中基質(zhì)型微膠囊的制備方法簡(jiǎn)單，制備條件溫和，整個(gè)制備過(guò)程不涉及 有機(jī)溶劑，完全在水相中進(jìn)行；可完全使用生物相容性材料來(lái)制備。 4.基質(zhì)型微膠囊對(duì)水溶性物質(zhì)的裝載原理是自然誘導(dǎo)沉積，其裝載量高，裝載方
法簡(jiǎn)便，裝載條件溫和，不使用任何有機(jī)溶劑，適用于生物活性大分子的裝載。 5.適用范圍廣本發(fā)明制備的基質(zhì)型聚電解質(zhì)微膠囊適用于裝載多種水溶性物
質(zhì)，尤其是生物活性大分子，可用于藥物緩釋、微反應(yīng)器、生物傳感器及組織工程等。


圖1為制備的含有天然多糖聚電解質(zhì)有機(jī)成分的雜化MnC03微粒模板的掃描電鏡
照片圖1A HA/MnC03，圖IB ALG/MnC03，圖1C DEX/MnC03，圖ID HEP/MnC03。 圖2為含有由熒光染料DTAF(Ethylonediam tetraacetic acid disodi咖)標(biāo)記的
天然多糖聚電解質(zhì)的雜化MnC03微粒模板的激光共聚焦顯微鏡照片圖2A DTAF-HA/MnC03，
圖2B DTAF_AG/MnC03，直觀證明了多糖大分子結(jié)合在雜化MnC03微粒內(nèi)。 圖3由天然多糖/MnC03雜化微粒模板制備的內(nèi)含多糖聚電解質(zhì)基質(zhì)的微膠囊的
掃描電鏡照片，圖3A ALG基質(zhì)微膠囊，圖3B DEX基質(zhì)微膠囊，圖3C HA基質(zhì)微膠囊；微膠囊
結(jié)構(gòu)為(多糖)/ (PSS/PAH) 5/PSS。 圖4用DTAF標(biāo)記天然多糖，制備得到DTAF-天然多糖/MnC03雜化微粒模板， 以該模板制備的內(nèi)含DTAF-多糖聚電解質(zhì)基質(zhì)的微膠囊的激光共聚焦顯微鏡照片圖 4ADTAF-HA基質(zhì)微膠囊，圖4B DTAF-ALG基質(zhì)微膠囊。進(jìn)一步證明了由多糖/MnC03雜化微 粒模板制備得到了內(nèi)部預(yù)充填有多糖大分子的解電解質(zhì)微膠囊。 圖5以ALG/MnC03雜化微粒為模板，以天然生物聚電解質(zhì)海藻酸鈉和殼聚糖為微 膠囊囊壁材料制備的結(jié)構(gòu)為(ALG) / (海藻酸/殼聚糖)5的基質(zhì)型聚電解質(zhì)微膠囊。
圖6基質(zhì)型微膠囊(ALG) / (PSS/PAH) 6 (圖6A)和非基質(zhì)型微膠囊(PSS/PAH) 6 (圖 6B)裝載羅丹明-66后的激光共聚焦顯微鏡照片，大量羅丹明分子被裝載于基質(zhì)型微膠囊 內(nèi)，而作為對(duì)照的非基質(zhì)型微膠囊內(nèi)的羅丹明分子很少。 圖7基質(zhì)型微膠囊(ALG) / (海藻酸鹽/殼聚糖)5 (圖7A)和非基質(zhì)型微膠囊(海
藻酸鹽/殼聚糖)5(圖7B)裝載抗腫瘤蛋白質(zhì)藥物(基因重組人干擾素，rh-IFN)后的激光
共聚焦顯微鏡照片，干擾素由熒光染料FITC標(biāo)記。FITC-rhIFN分子有效地裝載于基質(zhì)型微
膠囊內(nèi)，而在作為對(duì)照的非基質(zhì)型微膠囊內(nèi)的FITC-rhIFN分子則很不明顯。 圖8內(nèi)含不同類型、不同量的多糖聚電解質(zhì)基質(zhì)的微膠囊對(duì)肌紅蛋白的裝載能
力。基質(zhì)型微膠囊對(duì)肌紅蛋白的平均裝載能力明顯高于非基質(zhì)中空微膠囊，并且微膠囊內(nèi)
的多糖基質(zhì)含量越多，微膠囊的裝載能力越大。 圖9微膠囊內(nèi)肌紅蛋白的累積釋放量與時(shí)間的關(guān)系。表明在生理?xiàng)l件下(pH7. 4)， 所裝載的蛋白質(zhì)能夠從微膠囊內(nèi)緩釋出來(lái)，并且在同一釋放條件下，微膠囊內(nèi)多糖聚電解 質(zhì)基質(zhì)的類型對(duì)微膠囊內(nèi)蛋白質(zhì)的釋放量有一定影響。
圖10環(huán)境介質(zhì)的pH條件改變對(duì)裝載于微膠囊內(nèi)蛋白質(zhì)釋放行為的影響。pH2. 0 條件下釋放量非常低，幾乎沒(méi)有釋放行為。 圖11海藻酸基質(zhì)微膠囊裝載干擾素藥物后，交聯(lián)與未交聯(lián)的比較。說(shuō)明內(nèi)含海藻 酸基質(zhì)的以海藻酸鈉和殼聚糖為囊壁聚電解質(zhì)材料的微膠囊裝載干擾素藥物后，經(jīng)過(guò)Ca2+ 交聯(lián)處理，其載藥量明顯高于未經(jīng)Ca2+交聯(lián)處理的微膠囊。 圖12裝載于Ca2+交聯(lián)處理和未交聯(lián)處理的微膠囊內(nèi)的干擾素在pH7. 4條件下的 釋放行為。這表明Ca2+的交聯(lián)對(duì)微膠囊內(nèi)的蛋白質(zhì)藥物有進(jìn)一步的包埋作用，導(dǎo)致交聯(lián)處 理的微膠囊內(nèi)rh-IFN的釋放速率和釋放量明顯低于未交聯(lián)處理微膠囊內(nèi)的rh-IFN的釋 放。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)行具體的描述，有必要在此提出的是本實(shí)施例只用于對(duì)本發(fā)明 進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù) 上述本發(fā)明的內(nèi)容作出 一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。
實(shí)施例1 將透明質(zhì)酸鈉(HA)溶解于500mL濃度為0. Olmol/L的碳酸氫銨溶液中，配成HA 的終濃度為0. 25mg/mL或0. 5mg/mL或3. Omg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. OOlmol/ L的硫酸錳溶液迅速混合。30分鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，得到結(jié)合有透明質(zhì)酸鈉大 分子的碳酸錳微粒(表示為HA/MnCO》，用去離子水通過(guò)離心(5000rpm， 10min)洗滌三次， 存于1. 5mL離心管中備用。HA/MnC03雜化微粒模板的掃描電鏡照片詳見圖1A。以熒光染料 DTAF標(biāo)記透明質(zhì)酸鈉大分子，按上述方法制備DTAF_HA/MnC03雜化膠體微粒模板，在激光共 聚焦顯微鏡下觀察，詳見圖2A。 將1 5 30mg直徑為3 6 y m的HA/MnC03雜化微粒模板在1. 5mL離心管中以去 離子水分散后再離心收集，如此洗滌三次后，(A)以50iiL水分散，加入lmL聚苯乙烯磺酸 鈉(PSS)溶液(NaCl含量為0.4mol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集，水洗三次， 去除多余的游離PSS，在HA/MnC03雜化微粒模板表面吸附上了一層PSS (表示為MnC03 (HA) / PSS) 。 (B)再以50 ii L水分散，加入lmL聚烯丙基胺鹽酸鹽(PAH)溶液(NaCl含量為0. 4mo1/ L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集，水洗三次，去除游離的PAH，在HA/MnC03雜化微 粒模板表面又吸附上了一層PAH(表示為MnC03 (HA) /PSS/PAH)。重復(fù)上述A、B步驟，直到形 成具有MnC03(HA)/(PSS/PAH)5/PSS核-殼結(jié)構(gòu)的微粒。向這些微粒加入濃度為0. 2mol/L 的EDTA溶液，反應(yīng)20分鐘，離心收集，再加入EDTA溶液，繼續(xù)反應(yīng)20分鐘，離心收集。該 過(guò)程重復(fù)1 3次，用水洗滌離心收集的沉淀3次，得到了去除MnC03微粒，結(jié)構(gòu)為(HA)/ (PSS/PAH) 5/PSS或(HA) /PSS/ (PAH/PSS) 3/PAH的內(nèi)部具有HA多糖基質(zhì)的聚電解質(zhì)微膠囊， 其掃描電鏡照片見圖3C。以圖2A的膠體微粒為模板，用上述方法制備的基質(zhì)型微膠囊的激 光共聚焦顯微鏡照片見圖4A。 取500uL基質(zhì)型微膠囊(結(jié)構(gòu)為(HA) /PSS/ (PAH/PSS) 3/PAH)懸液于3mL的小瓶 中，與lmL濃度為6mg/mL的肌紅蛋白溶液相混合，室溫下輕輕振搖8小時(shí)，離心收集，沉淀 以緩沖液冼滌三次，收集所有上清液備測(cè)。對(duì)完成蛋白質(zhì)裝載的基質(zhì)型微膠囊加入500uL 磷酸緩沖液(pH7. 4)或300uL鹽酸緩沖液(pH2. 0) ， 37。C下緩慢攪拌進(jìn)行微膠囊內(nèi)蛋白質(zhì)的釋放，每隔一定時(shí)間離心收集一次，取出480uL或280uL上清液，同時(shí)加入480uL或280uL 37t:的新鮮緩沖液(pH7. 4或2. 0)，以保持釋放體系體積不變。 用吸光度法測(cè)定以上所有離心上清液中蛋白質(zhì)的濃度，通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算微膠囊對(duì)肌紅蛋白的裝載量，見圖8。基質(zhì)型微膠囊對(duì)肌紅蛋白的平均裝載能力明顯 高于非基質(zhì)中空微膠囊，并且微膠囊內(nèi)的HA基質(zhì)含量越多，微囊的裝載能力越大；在pH7.4 條件下，基質(zhì)型微膠囊內(nèi)肌紅蛋白的累積釋放量與時(shí)間的關(guān)系見圖9，表明裝載于基質(zhì)型微 膠囊內(nèi)的蛋白質(zhì)能夠緩釋出來(lái)；環(huán)境介質(zhì)的pH值會(huì)顯著影響微膠囊內(nèi)的蛋白質(zhì)釋放行為， 在pH2. 0條件下釋放量很低，見圖10。
實(shí)施例2 將透明質(zhì)酸鈉(HA)溶解于500mL濃度為0. 05mol/L的碳酸氫鈉溶液中，配成HA 終濃度為5mg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. 005mol/L的硫酸錳溶液迅速混合。30分 鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，洗滌后，得到結(jié)合有透明質(zhì)酸鈉大分子的碳酸錳微粒(表 示為HA/MnC03)。以HA/MnC03雜化微粒為模板，按實(shí)施例1制備HA基質(zhì)微膠囊。取lmL基 質(zhì)型微膠囊懸液與lmL濃度為3mg/mL的胰島素溶液相混合，調(diào)節(jié)pH為1. 5，室溫下放置8 小時(shí)后離心收集微膠囊，用緩沖液洗滌三次后重新分散于緩沖液中，以未裝載胰島素的基 質(zhì)型微膠囊懸液為空白對(duì)照，通過(guò)紫外分光光度法證明HA基質(zhì)微囊內(nèi)聚集有高濃度的蛋 白質(zhì)。 實(shí)施例3 將海藻酸鈉(ALG)溶解于500mL濃度為0. Olmol/L的碳酸氫氨溶液中，配成ALG 的終濃度為0. 25mg/mL或0. 5mg/mL或4. Omg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. OOlmol/L 的硫酸錳溶液迅速混合。30分鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，得到結(jié)合有海藻酸鈉大分子 的碳酸錳微粒模板(表示為ALG/MnCO》，用去離子水通過(guò)離心(5000rpm， 10min)洗滌三次， 存于1.5mL離心管中備用。ALG/MnC03雜化微粒模板的掃描電鏡照片詳見圖1B。以熒光染 料DTAF標(biāo)記海藻酸鈉大分子，按上述方法制備DTAF_ALG/MnC03雜化膠體微粒模板，在激光 共聚焦顯微鏡下觀察，詳見圖2B。 將15 30mg直徑為2 4 y m的上述ALG/MnC03雜化微粒模板在1. 5mL離心 管中以去離子水分散后再離心收集，如此洗滌三次后，(A)以50iiL水分散，加入lmL聚 苯乙烯磺酸鈉(PSS)溶液(NaCl含量為0. 5mol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收 集，水洗三次，去除多余的游離PSS，在ALG/MnC03雜化微粒表面吸附上了一層PSS(表示為 MnC03(ALG)/PSS) 。 (B)再以50 P L水分散，加入lmL聚烯丙基胺鹽酸鹽(PAH)溶液(NaCl含 量為0. 5mol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集，水洗三次，去除游離的PAH，在ALG/ MnC03雜化微粒模板表面又吸附上了一層PAH(表示為MnC03(ALG)/PSS/PAH)。重復(fù)以上A、 B步驟，直到形成具有MnC03 (ALG) / (PSS/PAH) 5/PSS核-殼結(jié)構(gòu)的微粒。向這些微粒加入濃 度為0. 2mol/L的EDTA溶液，反應(yīng)20分鐘，離心收集，再加入EDTA溶液，繼續(xù)反應(yīng)20分鐘， 離心收集。該過(guò)程重復(fù)1 3次，用水洗滌離心收集的沉淀3次，得到了去除MnC03微粒， 結(jié)構(gòu)為(ALG) / (PSS/PAH) 5/PSS或(ALG) / (PSS/PAH) 6或(ALG) /PSS/ (PAH/PSS) 3/PAH的內(nèi)部 具有ALG多糖基質(zhì)的聚電解質(zhì)微膠囊，其掃描電鏡照片見圖3A。以純MnC03微粒為模板制 備的非基質(zhì)型聚電解質(zhì)微膠囊的組成為(PSS/PAH)6。以圖2B的膠體微粒為模板，用上述方 法制備的基質(zhì)型微膠囊的激光共聚焦顯微鏡照片見圖4B。
各取50 ii L結(jié)構(gòu)為(ALG)/(PSS/PAH)6的基質(zhì)型微膠囊和結(jié)構(gòu)為(PSS/PAH)6的非 基質(zhì)型微膠囊懸液分別與200 L濃度為2mg/mL的羅丹明6_G溶液相混合，室溫下放置10 分鐘后離心收集，用水洗滌三次，于激光共聚焦顯微鏡下觀察，詳見圖6所示，與非基質(zhì)型 微膠囊相比，大量的羅丹明分子集聚在基質(zhì)型微膠囊內(nèi)。 取500uL基質(zhì)型微膠囊(結(jié)構(gòu)為(ALG) /PSS/ (PAH/PSS) 3/PAH)懸液于3mL的小瓶 中，與lmL濃度為6mg/mL的肌紅蛋白溶液相混合，室溫下輕輕振搖8小時(shí)，離心收集，沉淀 以緩沖液冼滌三次，收集所有上清液備測(cè)。對(duì)完成蛋白質(zhì)裝載的基質(zhì)型微膠囊加入500uL 磷酸緩沖液(PH7. 4)或300uL鹽酸緩沖液(pH2. 0) ， 37。C下緩緩攪拌進(jìn)行微膠囊內(nèi)蛋白質(zhì)的 釋放，每隔一定時(shí)間離心收集一次，取出480uL或280uL上清液，同時(shí)加入480uL或280uL 37t:的新鮮緩沖液(pH7. 4或2. 0)，以保持釋放體系體積不變。 用吸光度法測(cè)定以上所有離心上清液中蛋白質(zhì)的濃度，通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算微膠囊對(duì)肌紅蛋白的裝載量，見圖8?；|(zhì)型微膠囊對(duì)肌紅蛋白的平均裝載能力明顯高 于非基質(zhì)中空微膠囊，并且微膠囊內(nèi)的ALG基質(zhì)含量越多，微囊的裝載能力越大；在pH7. 4 條件下，基質(zhì)型微膠囊內(nèi)肌紅蛋白的累積釋放量與時(shí)間的關(guān)系(圖9)表明，裝載于基質(zhì)型 微膠囊內(nèi)的蛋白質(zhì)能夠緩釋出來(lái)；環(huán)境介質(zhì)的pH值會(huì)顯著影響微膠囊內(nèi)的蛋白質(zhì)釋放行 為，在pH2. 0條件下釋放量非常低，見圖10。
實(shí)施例4 將海藻酸鈉(ALG)溶解于500mL濃度為0. 05mol/L的碳酸氫鈉溶液中，配成ALG終 濃度為0. 5mg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. 005mol/L的硫酸錳溶液迅速混合。30分 鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，得到結(jié)合有海藻酸鈉大分子的碳酸錳微粒(表示為ALG/ MnC03)，洗滌后，以ALG/MnC03雜化微粒為模板，以天然生物聚電解質(zhì)海藻酸鈉和殼聚糖為 微膠囊囊壁材料，用實(shí)例1的層層自組裝方法制備結(jié)構(gòu)為(ALG)/(海藻酸/殼聚糖)5的基 質(zhì)型聚電解質(zhì)微膠囊，其掃描電鏡照片見圖5。 以熒光染料FITC標(biāo)記蛋白質(zhì)藥物基因重組人干擾素分子(表示為FITC-rhIFN)。 取少量基質(zhì)型微膠囊(ALG) / (海藻酸/殼聚糖)5懸液和非基質(zhì)型微膠囊(海藻酸/殼聚 糖)5懸液，分別與0. 5mL FITC-rhIFN溶液相混合，室溫下共培育2小時(shí)，離心收集，水洗三 次，于激光共聚焦顯微鏡下觀察(圖7) ，F(xiàn)ITC-rhIFN分子有效地裝載于基質(zhì)型微膠囊內(nèi)，而 在非基質(zhì)型微膠囊內(nèi)FITC-rhIFN分子很不明顯。 取lOOuL基質(zhì)型微膠囊(ALG) / (海藻酸/殼聚糖)5懸液于1. 5mL的離心管中，加 入lmL濃度為5mg/mL的rh-IFN溶液，室溫下緩慢振搖6小時(shí)，然后分成兩份，向其中一份 加入50uL濃度為0. Olmol/L的CaCl2溶液，孵育30分鐘，離心收集；另一份直接離心收集。 離心沉淀均以緩沖液洗滌三次，保留所有上清液備測(cè)。向這兩份裝載有rh-IFN的微膠囊各 加入500uL磷酸鹽緩沖液(pH7. 4) ， 37 t:下緩慢攪拌進(jìn)行微膠囊內(nèi)rh-IFN的釋放，每隔一定 時(shí)間離心收集一次，取出480uL上清液，同時(shí)補(bǔ)充等體積37t:的新鮮緩沖液(pH7. 4)。
用蛋白質(zhì)染色吸光度法測(cè)定所有上清液中rh-IFN的濃度，通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn) 曲線計(jì)算基質(zhì)型微膠囊(ALG)/(海藻酸/殼聚糖)5對(duì)rh-IFN的裝載量，見圖11。內(nèi)部基 質(zhì)成分和囊壁組分均含有海藻酸鈉的微膠囊裝載蛋白質(zhì)藥物后，經(jīng)過(guò)Ca2+交聯(lián)處理，其載 藥量明顯高于未交聯(lián)處理的微膠囊。生理pH7. 4條件下，微膠囊內(nèi)rh-IFN的累積釋放量與 時(shí)間的關(guān)系(圖12)說(shuō)明，相比未交聯(lián)處理的基質(zhì)型微膠囊內(nèi)的rh-IFN，經(jīng)過(guò)C^+交聯(lián)處理的基質(zhì)型微膠囊內(nèi)rh-IFN的釋放速率和釋放量更慢更少，表明Ca2+的交聯(lián)對(duì)微膠囊內(nèi)的 蛋白質(zhì)藥物有進(jìn)一步的包埋作用。相對(duì)于其他化學(xué)交聯(lián)法或高溫收縮法，Ca"交聯(lián)法溫和 簡(jiǎn)便，對(duì)生物活性大分子藥物很友好。
實(shí)施例5 將海藻酸鈉(ALG)溶解于500mL濃度為0. lmol/L的碳酸鈉溶液中，配成ALG終 濃度為5mg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. Olmol/L的氯化錳溶液迅速混合。30分鐘 后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，洗滌后，得到結(jié)合有海藻酸鈉大分子的碳酸錳微粒(表示為 ALG/MnC03)。以ALG/MnC03雜化微粒為模板，按實(shí)施例3制備ALG基質(zhì)微膠囊。取500 y L基 質(zhì)型微膠囊懸液與lmL濃度為1. 5mg/mL的溶菌酶溶液相混合，調(diào)節(jié)pH為6. 0，室溫下放置 8小時(shí)后離心收集微膠囊，用緩沖液洗滌三次后重新分散于緩沖液中，以未裝載溶菌酶的基 質(zhì)型微膠囊懸液為空白對(duì)照，通過(guò)紫外分光光度法證明ALG基質(zhì)微膠囊內(nèi)聚集有大量的蛋 白酶。 實(shí)施例6 將硫酸葡聚糖(DEX)溶解于500mL濃度為0. Olmol/L的碳酸氫銨溶液中，配成DEX 的終濃度為0. 25mg/mL或0. 5mg/mL或3. Omg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. OOlmol/ L的硫酸錳溶液迅速混合。30分鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，得到結(jié)合有硫酸葡聚糖大 分子的碳酸錳微粒模板(表示為DEX/MnC03)，用去離子水通過(guò)離心(5000rpm， 10min)洗滌 三次，存于1. 5mL離心管中備用。DEX/MnC03雜化微粒模板的掃描電鏡照片詳見圖1C。
將15 30mg直徑為2 4 y m的上述DEX/MnC03雜化微粒模板在1. 5mL離心管中 以去離子水分散后再離心收集，如此洗滌三次后，(A)以50iiL水分散，加入lmL聚苯乙烯 磺酸鈉(PSS)溶液(NaCl含量為0. 1 lmol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集， 水洗三次，去除多余的游離PSS，在DEX/MnC03雜化微粒模板表面吸附上了一層PSS (表示為 MnC03(DEX)/PSS) 。 (B)再以50y L水分散，加入lmL聚烯丙基胺鹽酸鹽(PAH)溶液(NaCl 含量為0. 1 lmol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集，水洗三次，去除游離的PAH， 在DEX/MnC03雜化微粒模板表面又吸附上了一層PAH(表示為MnC03(DEX)/PSS/PAH)。重復(fù) 以上A、 B步驟，直到形成具有MnC03(DEX)/(PSS/PAH)5/PSS核-殼結(jié)構(gòu)的微粒。向這些微 粒加入濃度為0. 2mol/L的EDTA溶液，反應(yīng)20分鐘，離心收集，再加入EDTA溶液，繼續(xù)反應(yīng) 20分鐘，離心收集。該過(guò)程重復(fù)1 3次，用水洗滌離心收集的沉淀3次，得到了去除MnC03 微粒，結(jié)構(gòu)為(DEX) / (PSS/PAH) 5/PSS或(DEX) /PSS/ (PAH/PSS) 3/PAH的內(nèi)部具有DEX多糖基 質(zhì)的聚電解質(zhì)微膠囊，其掃描電鏡照片見圖3B。 取500uL基質(zhì)型微膠囊(結(jié)構(gòu)為(DEX) /PSS/ (PAH/PSS) 3/PAH)懸液于3mL的小瓶 中，與lmL濃度為6mg/mL的肌紅蛋白溶液相混合，室溫下輕輕振搖8小時(shí)，離心收集，沉淀 以緩沖液冼滌三次，收集所有上清液備測(cè)。 用吸光度法測(cè)定以上所有離心上清液中蛋白質(zhì)的濃度，通過(guò)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線 計(jì)算微膠囊對(duì)肌紅蛋白的裝載量，見圖8。基質(zhì)型微膠囊對(duì)肌紅蛋白的平均裝載能力明顯高 于非基質(zhì)中空微膠囊，并且微膠囊內(nèi)的DEX基質(zhì)含量越多，微囊的裝載能力越大。
實(shí)施例7 將硫酸葡聚糖(DEX)溶解于500mL濃度為0. 05mol/L的碳酸氫鈉溶液中，配成DEX 終濃度為5mg/mL，溶解完全后，與5Q0mL濃度為0. 005mol/L的氯化錳溶液迅速混合。30分鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，洗滌后，得到結(jié)合有硫酸葡聚糖大分子的碳酸錳微粒(表 示為DEX/MnC03)。以DEX/MnC03雜化微粒為模板，按實(shí)施例6制備DEX基質(zhì)微膠囊。取lmL DEX基質(zhì)微膠囊懸液與lmL濃度為5mg/mL的魚精蛋白溶液相混合，調(diào)節(jié)pH為5. 0，室溫下 放置6小時(shí)后離心收集微膠囊，用緩沖液洗滌三次后重新分散于緩沖液中，以未裝載魚精 蛋白的基質(zhì)型微膠囊懸液為空白對(duì)照，通過(guò)紫外分光光度法證明DEX基質(zhì)微膠囊內(nèi)聚集有 高濃度的魚精蛋白。
實(shí)施例8 將肝素鈉(HEP)溶解于500mL濃度為0. 02mol/L的碳酸氫鈉溶液中，配成HEP的 終濃度為0. 25mg/mL或0. 5mg/mL或4. 0mg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. 002mol/L的 硫酸錳溶液迅速混合。30分鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，得到結(jié)合有肝素鈉大分子的碳 酸錳微粒模板(表示為HEP/MnCO》，用去離子水通過(guò)離心(5000rpm， 10min)洗滌三次，存于 1.5mL離心管中備用。HEP/MnC03雜化微粒模板的掃描電鏡照片詳見圖1D。
將15 30mg直徑為2 4 y m的上述HEP/MnC03雜化微粒模板在1. 5mL離心管中 以去離子水分散后再離心收集，如此洗滌三次后，(A)以50iiL水分散，加入lmL聚苯乙烯 磺酸鈉(PSS)溶液(NaCl含量為O. 1 lmol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集， 水洗三次，去除多余的游離PSS，在HEP/MnC03雜化微粒模板表面吸附上了一層PSS (表示為 MnC03 (HEP) /PSS) 。 (B)再以50 y L水分散，加入lmL聚烯丙基胺鹽酸鹽(PAH)溶液(NaCl 含量為0. 1 lmol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集，水洗三次，去除游離的PAH， 在HEP/MnC03雜化微粒模板表面又吸附上了一層PAH(表示為MnC03(HEP)/PSS/PAH)。重復(fù) 以上A、 B步驟，直到形成具有MnC03(HEP)/(PSS/PAH)5/PSS核-殼結(jié)構(gòu)的微粒。向這些微 粒加入濃度為0. 2mol/L的EDTA溶液，反應(yīng)20分鐘，離心收集，再加入EDTA溶液，繼續(xù)反應(yīng) 20分鐘，離心收集。該過(guò)程重復(fù)1 3次，用水洗滌離心收集的沉淀3次，得到了去除MnC03 微粒，內(nèi)部具有HEP多糖基質(zhì)的聚電解質(zhì)微膠囊。 取lmL HEP基質(zhì)微膠囊懸液與lmL濃度為10mg/mL的尿素溶液相混合，調(diào)節(jié)pH為 2. O，室溫下放置4小時(shí)后離心收集微膠囊，再重新分散于緩沖液中，以未裝載脲素的基質(zhì) 型微膠囊懸液為空白對(duì)照，通過(guò)紫外分光光度法證明HEP基質(zhì)微囊內(nèi)聚集有高濃度的的脲 素。 實(shí)施例9 將硫酸軟骨素(CS)溶解于500mL濃度為0. Olmol/L的碳酸氫鈉溶液中，配成CS 的終濃度為0. 5mg/mL或2mg/mL或4. Omg/mL，溶解完全后，與500mL濃度為0. OOlmol/L的 硫酸錳溶液迅速混合。30分鐘后，將反應(yīng)體系離心收集沉淀，得到結(jié)合有肝素鈉大分子的碳 酸錳微粒模板(表示為CS/MnCO》，用去離子水通過(guò)離心(5000rpm， 10min)洗滌三次，存于 1.5mL離心管中備用。 將15 30mg直徑為2 4 y m的上述CS/MnC03雜化微粒模板在1. 5mL離心管中 以去離子水分散后再離心收集，如此洗滌三次后，(A)以50iiL水分散，加入lmL聚苯乙烯 磺酸鈉(PSS)溶液(NaCl含量為O. 1 lmol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集， 水洗三次，去除多余的游離PSS，在CS/MnC03雜化微粒模板表面吸附上了一層PSS (表示為 MnC03(CS)/PSS) 。 (B)再以50y L水分散，加入lmL聚烯丙基胺鹽酸鹽(PAH)溶液(NaCl含 量為0. 1 lmol/L)，輕輕振搖離心管。15分鐘后，離心收集，水洗三次，去除游離的PAH，在CS/MnC03雜化微粒模板表面又吸附上了一層PAH(表示為MnC03 (CS) /PSS/PAH)。重復(fù)以上 A、 B步驟，直到形成具有MnC03 (CS) / (PSS/PAH) 5/PSS核-殼結(jié)構(gòu)的微粒。向這些微粒加入 濃度為0. 2mol/L的EDTA溶液，反應(yīng)20分鐘，離心收集，再加入EDTA溶液，繼續(xù)反應(yīng)20分 鐘，離心收集。該過(guò)程重復(fù)1 3次，用水洗滌離心收集的沉淀3次，得到了去除MnC03微 粒，內(nèi)部具有CS多糖基質(zhì)的聚電解質(zhì)微膠囊。 取lmLl CS基質(zhì)微膠囊懸液與2mL濃度為lmg/mL的骨粘連蛋白溶液相混合，調(diào)節(jié) pH為1. 2，室溫下放置IO小時(shí)后離心收集微膠囊，再重新分散于緩沖液中，以未裝載骨粘連 蛋白的基質(zhì)型微膠囊懸液為空白對(duì)照，通過(guò)紫外分光光度法證明CS基質(zhì)微囊內(nèi)聚集有高 濃度的的蛋白質(zhì)。
權(quán)利要求
一種裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)將帶有負(fù)電荷的天然多糖聚電解質(zhì)溶于濃度為0.01～0.1mol/L的含碳酸根的無(wú)機(jī)鹽水溶液中，攪拌下與濃度為0.001～0.01mol/L的含錳無(wú)機(jī)鹽水溶液相混合，離子型天然多糖聚電解質(zhì)在反應(yīng)體系中的終濃度為0.25～5mg/mL，攪拌反應(yīng)0.1～20min，離心收集沉淀物，用去離子水洗1～3次，得到內(nèi)部結(jié)合有天然多糖聚電解質(zhì)的雜化MnCO3膠體微粒模板；(2)將步驟1制得的雜化MnCO3膠體微粒模板分散在NaCl濃度為0.1～1mol/L的負(fù)電性聚電解質(zhì)溶液中，負(fù)電性聚電解質(zhì)的濃度為0.5～5mg/mL；5～30min后離心收集沉淀，以去離子水重新分散后再離心收集沉淀，如此反復(fù)水洗1～3次，得到第一層包覆有負(fù)電性聚電解質(zhì)層的雜化MnCO3膠體微粒，再將該膠體微粒分散在NaCl濃度為0.1～1mol/L的正電性聚電解質(zhì)溶液中，正電性聚電解質(zhì)的濃度為0.5～5mg/mL；5～30min后離心收集膠體微粒，以去離子水重新分散后再離心收集沉淀物，反復(fù)用水洗1～3次，完成了第二層為正電性聚電解質(zhì)層的包覆；重復(fù)以上過(guò)程，按要求的層數(shù)將負(fù)電性和正電性聚電解質(zhì)交替層層吸附組裝，得到具有核-殼結(jié)構(gòu)的膠體微粒，通過(guò)溶解或分解去除雜化微粒的MnCO3成分，就得到內(nèi)部預(yù)先充填有帶負(fù)電荷的天然多糖聚電解質(zhì)基質(zhì)的微膠囊；(3)在溫度4～40℃，將步驟2所制得的基質(zhì)型微膠囊分散在濃度為0.1～20mg/mL的水溶性物質(zhì)的溶液中，共孵育0.5～12h，將客體水溶性物質(zhì)裝載到微膠囊內(nèi)；對(duì)于在海藻酸鈉/MnCO3雜化微粒模板上制備的微膠囊(海藻酸鈉)/(海藻酸/殼聚糖)5，完成裝載后，加入濃度為0.01～0.1mol/L的CaCl2溶液50～500uL，孵育10～60min，對(duì)該載藥后的微膠囊進(jìn)行交聯(lián)處理。
2. 如權(quán)利要求1所述裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特征在于含錳無(wú)機(jī)鹽為硫酸錳或氯化錳。
3. 如權(quán)利要求1所述裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特征在于含碳酸根無(wú)機(jī)鹽為碳酸氫鈉、碳酸氫銨或碳酸鈉中的任一種。
4. 如權(quán)利要求1所述裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特征在于雜化MnC03膠體微粒模板中的天然多糖聚電解質(zhì)為海藻酸鈉、透明質(zhì)酸鈉、硫酸葡聚糖、肝素鈉、硫酸軟骨素、硫酸角質(zhì)素或殼聚糖中的任一種。
5. 如權(quán)利要求1所述裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特征在于微膠囊囊壁膜所用的聚電解質(zhì)材料為負(fù)電性聚電解質(zhì)聚苯乙烯磺酸鈉、海藻酸、硫酸葡聚糖、透明質(zhì)酸、肝素鈉、硫酸軟骨素或硫酸角質(zhì)素中的任一種；正電性聚電解質(zhì)為聚烯丙基胺鹽酸鹽、殼聚糖、魚精蛋白或膠原蛋白中的任一種。
6. 如權(quán)利要求1所述裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特征在于雜化MnC03膠體微粒模板中的MnC03成份的去除，用鹽酸溶解或用乙二胺四乙酸絡(luò)合分解。
7. 如權(quán)利要求1所述裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特征在于所述水溶性物質(zhì)為羅丹明、聚烯丙基銨鹽酸鹽、肌紅蛋白、白蛋白、魚精蛋白、干擾素、溶菌酶、胰島素、白介素11及其它白介素、促生長(zhǎng)多肽激素、重組生長(zhǎng)激素、促濾泡素、人絨毛膜促性腺激素、胸腺肽、紅細(xì)胞生成素、表皮生長(zhǎng)因子、降鈣素、骨粘連蛋白、骨鈣素、脲素、脲酶、聚賴氨酸、聚組氨酸或聚精氨酸中的任一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種裝載水溶性物質(zhì)的基質(zhì)型微膠囊的制備方法，其特點(diǎn)是設(shè)計(jì)生物相容的、性質(zhì)可控的有機(jī)/無(wú)機(jī)雜化膠體微粒模板，在膠體模板上通過(guò)聚電解質(zhì)的層層交替自組裝，達(dá)到一定層數(shù)以后，溶解去除雜化模板中的無(wú)機(jī)成分，制備得到內(nèi)部充填有多糖大分子基質(zhì)結(jié)構(gòu)的聚電解質(zhì)微膠囊，在溫和條件下，實(shí)現(xiàn)對(duì)廣泛水溶性物質(zhì)的有效裝載。微膠囊的裝載能力可以通過(guò)內(nèi)部的多糖基質(zhì)量來(lái)調(diào)節(jié)；改變環(huán)境條件，裝載在微膠囊內(nèi)的水溶性物質(zhì)能夠釋放出來(lái)，有良好的緩釋效應(yīng)。
文檔編號(hào)B01J13/02GK101708450SQ200910216060
公開日2010年5月19日 申請(qǐng)日期2009年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月30日
發(fā)明者艾華, 魏清榮 申請(qǐng)人:四川大學(xué)