一種吉他霉素的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種吉他霉素的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的吉他霉素的藥物組合物中含有吉他霉素和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，吉他霉素、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)卵巢衰退引起的睡眠障礙具有治療作用；吉他霉素和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，治療作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療更年期綜合征以及睡眠障礙的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說(shuō)明】
一種吉他霉素的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及吉他霉素的新用途，具體涉及一種吉他霉素的藥 物組合物及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 吉他霉素抗菌性能與紅霉素近似，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌，如葡萄球菌、化膿性鏈球菌、 綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、破傷風(fēng)桿菌、白喉?xiàng)U菌等有較強(qiáng)的抑制作用。對(duì)革蘭氏陰性菌，如 淋球菌、百日咳桿菌等革蘭氏陰性菌也有相當(dāng)?shù)囊种谱饔?。此外，?duì)支原體、鉤端螺旋體、立 克次體有抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種吉他霉素的藥物組合物，該藥物組合物中含有吉他霉 素和一種天然產(chǎn)物，吉他霉素和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療更年期綜合征以及睡眠障礙。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0006]
[0007] -種吉他霉素的藥物組合物，包括吉他霉素、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0009] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將商陸粉碎，用75~85%乙醇 熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取， 分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物用 大孔樹脂除雜，先用10 %乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70 %洗 脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用80%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療更年期綜合征以及睡眠障礙的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述吉他霉素的藥物組合物在制備治療更年期綜合征以及睡眠障礙的藥物中的 應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的吉他霉素的藥物組合物中含有吉他霉素和一種結(jié)構(gòu) 新穎的天然產(chǎn)物，吉他霉素、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)卵巢衰退引起的睡眠障礙具有治療 作用；吉他霉素和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，治療作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療更年期綜 合征以及睡眠障礙的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019] 試劑來(lái)源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將商陸（2kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提?。?5L X 3次），合并提取 液，濃縮至無(wú)醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫10 個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1 (10個(gè)柱體積）、30:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (10個(gè) 柱體積)和5:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用 正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1 (10個(gè)柱體積）、4:1 (8個(gè)柱體積)和2:1 (6個(gè)柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證:冊(cè)431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 265.1359，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C15H2Q〇4,不飽和度為 6。核磁共振氫譜數(shù)據(jù) SH(ppm，CD2Cl2,500MHz):H-la(l.ll，m)，H-lb (1.94，m)，H-2(1.97，m，2H)，H-4(5.73，br，s)，H-5(2.24，d，J=10.4Hz)，H-9(2.21，m)，H-10 (1.61，m)，H-12a(5.53，t，J = 2.4Hz)，H-12b(5.14，t，J = 2.0Hz)，H-13a(4.33，dd，J=13.4， 2.0Hz)，H-13b(4.57，dd，J=13.4,2.0Hz)，H-14(1.07，d，J = 6.4Hz)，H-15(1.85，br，s);核 磁共振碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，CD2C12，125MHz): 26 · 6(CH2，1 -C)，30 · 4(CH2，2-C)，136 · 8(C，3-C)， 145.2(CH，4-C)，47.7(CH，5-C)，77.9(C，6-C)，105.4(C，7-C)，215.1(C，8-C)，42.6(CH，9- C)，40.7(CH，10-C)，146.1(C，11-C)，112.9(CH2，12-C)，67.8(CH2，13-C)，15.4(CH 3，14-C)， 18.2(013，15-〇。該化合物的氫譜中有一個(gè)乙烯基甲基信號(hào)[5(11.85(3!1，1^，8，16-15)]，一 個(gè)雙峰甲基信號(hào)[6 111.07(3!1，(1，1 = 6.4抱，16-14)]，一個(gè)末端雙鍵質(zhì)子信號(hào)[6115.53(1!1，^ =2.4抱，!1-123)和5.14(1!1，^ = 2.0!^，!1-1213)]，一個(gè)含氧亞甲基質(zhì)子信號(hào)[5[14.33(1!1， (1(1，了=13.4,2.0抱，!1-133)和4.57(1!1，(1(1，了=13.4,2.0抱，!1-1313)]以及一個(gè)烯屬次甲基質(zhì) 子信號(hào)[S H5.73(lH，br，S，H-4)]。該化合物的碳譜顯示15個(gè)碳信號(hào)，其中有兩組雙鍵碳信 號(hào)，一個(gè)羰基碳信號(hào)，一個(gè)半縮酮碳信號(hào)以及兩個(gè)連氧碳信號(hào)。綜合高分辨質(zhì)譜和核磁數(shù)據(jù) 顯示，該化合物可能為一個(gè)倍半萜類化合物。查閱文獻(xiàn)可知，該化合物和已知化合物 Lyophyllone B具有相似的結(jié)構(gòu)。比較兩者核磁數(shù)據(jù)可知，相較于已知化合物，新化合物中 C-8位連氧碳信號(hào)的缺失的同時(shí)多了一個(gè)酮羰基碳信號(hào)。在該化合物的HMBC譜中，Me-14與 C-8，H-9與C-8以及H-10與C-8的相關(guān)性說(shuō)明多出來(lái)的酮羰基是位于C-8位的。N0ESY譜中，H-10與Me-14，H-5與H-9之間的相關(guān)性說(shuō)明H-10與Me-14為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和 N0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一 步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0022] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0023]
[0024] 實(shí)施例2:藥理作用
[0025]本實(shí)施例以去卵巢大鼠為動(dòng)物模型，采用大鼠皮層腦電圖描記技術(shù)，從睡眠時(shí)相 方面觀察藥物改善更年期失眠癥的作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動(dòng)物
[0028] Wistar大鼠，雌性，體重200g~240g，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 吉他霉素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所?；衔?I)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。
[0031] 1.3儀器
[0032] 16道生理信號(hào)記錄儀(美國(guó)Stoelting公司），大鼠腦立體定位儀（美國(guó)Stoelting 公司），有機(jī)玻璃籠（自制），恒溫恒濕自動(dòng)光控電子屏蔽室。
[0033] 1.4大鼠分組及模型制備
[0034] 將大鼠分為5組，每組8只，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組和吉他霉素組(80mg· kg<)、化合物（I)組(80mg · kg<)、吉他霉素與化合物（I)組合物組【40mg · kg<吉他霉素+ 40mg · kg^1化合物（I)】。模型組和藥物組分別做卵巢切除手術(shù)，空白對(duì)照組做假手術(shù)。模型 對(duì)照組和給藥組為篩選合格的埋好記錄電極的去卵巢大鼠。術(shù)后1周，給藥組分別灌胃給予 相應(yīng)藥物，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃給予等容量蒸餾水，共7d。
[0035]卵巢切除手術(shù)操作方法:戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40mg/kg)，腦立體定位儀固 定，頭部剪毛與消毒后，剪開頭部皮膚，分別于冠狀縫前1mm及人字縫前1mm與顱骨中線右側(cè) 旁開1mm交叉點(diǎn)處，用特制的止血鉗夾住2個(gè)螺絲釘入顱骨內(nèi)，使之與硬腦膜接觸，但不穿透 硬腦膜，為皮層電極，用于記錄腦電。在兩側(cè)頸肌內(nèi)分別插入銀絲電極以記錄肌電，4個(gè)電極 分別焊至4線微型插座上，借牙科水泥固定于顱骨上，同時(shí)無(wú)菌操作行雙側(cè)卵巢切除術(shù)?？?白對(duì)照組（即假手術(shù)組)安裝電極后僅切除約lg重脂肪，不切除卵巢。術(shù)后放在特制的有機(jī) 玻璃筒內(nèi)單籠飼養(yǎng)，去卵巢大鼠3d后進(jìn)行陰道涂片，連續(xù)5d，以證明去勢(shì)是否徹底。各組大 鼠每天保證明暗交替12h。
[0036] 1.5慢波睡眠時(shí)間測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0037]末次給藥30min后，頭部的記錄電極通過(guò)微型插座和連接線連接到16道生理信號(hào) 記錄儀上，記錄腦電和肌電（每日9:00~17:00間進(jìn)行，計(jì)算機(jī)自動(dòng)連續(xù)記錄8h)，記錄慢波 睡眠深睡期（SWS1)和淺睡期（SWS2)時(shí)間。
[0038] 1.6快速眼球運(yùn)動(dòng)睡眠時(shí)間測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0039]末次給藥30min后，頭部的記錄電極通過(guò)微型插座和連接線連接到16道生理信號(hào) 記錄儀上，記錄腦電和肌電（每日9:00~17:00間進(jìn)行，計(jì)算機(jī)自動(dòng)連續(xù)記錄8h)，記錄快速 眼球運(yùn)動(dòng)睡眠(REM)的時(shí)間及清醒(WAKE)時(shí)間。
[0040] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0041]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0042] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0043] 2.1對(duì)自由活動(dòng)去卵巢大鼠淺睡期的影響
[0044]與空白對(duì)照組比，模型對(duì)照組大鼠 SWS2顯著縮短(P<0.01)，說(shuō)明造模成功；與模 型對(duì)照組比，吉他霉素組、化合物（I)組大鼠 SWS2延長(zhǎng)(P<0.05);與模型對(duì)照組相比，吉他 霉素與化合物（I)組合物組大鼠 SWS2顯著延長(zhǎng)(P<0.01)。藥物對(duì)SWS1沒(méi)有明顯影響。結(jié)果 見(jiàn)表1。
[0045] 2.2對(duì)自由活動(dòng)去卵巢大鼠快速眼球運(yùn)動(dòng)睡眠的影響
[0046]與空白對(duì)照組比，模型對(duì)照組大鼠 REM顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，說(shuō)明造模成功；與模型 對(duì)照組比，吉他霉素組、化合物（I)組大鼠 REM縮短(P<0.05);與模型對(duì)照組相比，吉他霉素 與化合物（I)組合物組大鼠 REM顯著縮短(P<0.01)。藥物對(duì)SWS1沒(méi)有明顯影響。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0047] 表1對(duì)自由活動(dòng)去卵巢大鼠睡眠時(shí)相的影響
[0048]
[0049] 圍絕經(jīng)期綜合征是指婦女在絕經(jīng)前后，由于卵巢功能退行性改變、雌激素水平低 下、神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào)、免疫功能下降所導(dǎo)致的以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主并伴有心 理癥狀的一組證候群。主要癥狀按系統(tǒng)分為精神神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、血管舒縮失調(diào)癥狀、泌尿系 統(tǒng)、生殖道及第二性征改變等。目前西醫(yī)治療上主要有激素替代法和以鎮(zhèn)靜催眠藥作為主 要治療藥物，同時(shí)配合非藥物治療(如睡眠衛(wèi)生教育、光照治療、心理和認(rèn)知行為治療)等療 法。鎮(zhèn)靜安眠藥物作用特點(diǎn)在于使失眠者入睡快，淺睡眠時(shí)間延長(zhǎng)，中間不易醒，但都(95% 以上)程度不等地縮短了 SWS2和REMS睡眠，從而產(chǎn)生了嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如宿醉、耐受性及 依賴型等，使其應(yīng)用受到限制。隨著激素替代治療使用的不斷增加，其副作用受到越來(lái)越多 的重視，如誘發(fā)乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肝腎功能異常等風(fēng)險(xiǎn)增加。
[0050] 本實(shí)驗(yàn)采用大鼠皮層腦電圖描記技術(shù)，首先對(duì)去卵巢大鼠的腦電圖進(jìn)行描記。結(jié) 果發(fā)現(xiàn)，去卵巢大鼠在睡眠時(shí)相上表現(xiàn)為SWS2明顯縮短。SWS2在整個(gè)睡眠時(shí)相中稱為慢波 睡眠深睡期，是最重要的睡眠成分。據(jù)此，國(guó)內(nèi)學(xué)者提出新型催眠藥物應(yīng)選擇性地延長(zhǎng)慢波 睡眠深睡期，同時(shí)保證REM正常比例。國(guó)內(nèi)學(xué)者還研究發(fā)現(xiàn)，慢波失眠者有深睡眠減少甚至 缺乏，REM(快動(dòng)眼睡眠)活動(dòng)度和密度低改變等。多項(xiàng)圍絕經(jīng)期綜合征流行病學(xué)調(diào)查表明， 我國(guó)圍絕經(jīng)期癥狀中尤以睡眠障礙發(fā)生率高。本研究結(jié)果表明，去卵巢大鼠與假手術(shù)組在 睡眠時(shí)相上表現(xiàn)為SWS2明顯縮短，與圍絕經(jīng)期患者主要癥狀為睡眠障礙相一致，從腦電圖 方面為圍絕經(jīng)期患者的臨床表現(xiàn)提供了依據(jù)。
[0051] 上述結(jié)果表明，吉他霉素、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)卵巢衰退引起的睡眠障礙具 有治療作用；吉他霉素和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，治療作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療更 年期綜合征以及睡眠障礙的藥物。
[0052]上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種吉他霉素的藥物組合物，其特征在于:包括吉他霉素、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的吉他霉素的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體 或潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的吉他霉素的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將商 陸粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫 10個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2: 1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用80%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療更年期綜合征以及睡眠障礙的藥物中的應(yīng) 用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的吉他霉素的藥物組合物在制備治療更年期綜合征以及睡 眠障礙的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/7048GK106008425SQ201610335378
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月15日
【發(fā)明人】劉雨
【申請(qǐng)人】劉雨