一種苯丙素類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種苯丙素類化合物及其制備方法和應(yīng)用，所述苯丙素類化合物是從黑紫獐牙菜（Swertia atroviolacea）中分離得到，化合物命名為3?羥基?1?(6?羥甲基?1,3?二氫異苯并呋喃?5?基)丙烷?1?酮，其分子式為C12H14O4，具有下述結(jié)構(gòu)式：（1）所述苯丙素類化合物的制備方法，是以黑紫獐牙菜為原料，經(jīng)浸膏提取、MCI脫色、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到。所述苯丙素類化合物經(jīng)5α-還原酶活性測試，對5α-還原酶具有較好的抑制作用。本發(fā)明還公開了上述化合物的制備方法和用途。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單，且具有較好的5α-還原酶抑制作用，可作為制備5α-還原酶抑制劑的先導(dǎo)化合物。
【專利說明】
一種苯丙素類化合物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從黑紫獐牙菜中首次提取得到的苯 丙素類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 猜牙菜屬（5Veriia)是龍膽科下的一個(gè)屬，全球約170種，我國有80余種，主要分布 于云南、四川等地。在我國該屬植物入藥歷史悠久，藥用有35種，具有清熱利膽、除濕解毒等 功效，常用于治療急性黃疽型肝炎、骨髓炎等疾病。該屬植物的化學(xué)成分豐富，主要有口山 酮、黃酮、環(huán)稀醚砲、三砲和生物堿等化合物。黑紫猜牙菜（5Veriia a irorioiacea)為猜牙 菜屬多年生草本植物，生于海拔3400~4575 m的山坡草地、多石山頂或巖石縫中，是云南省 迪慶藏族地區(qū)特有品種。
[0003] 苯丙素（phenylpropanoid)是天然存在的一類苯環(huán)與三個(gè)直鏈碳連接(C6-C3基 團(tuán)）構(gòu)成的化合物。苯丙素類化合物如香豆素、木脂素等，廣泛存在于植物中，已在很多領(lǐng)域 如醫(yī)藥、食品、化妝品等成為重要的原料，其中許多化合物具有各種生物活性，在醫(yī)藥、生物 等領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。本發(fā)明從黑紫獐牙菜中分離得到了一種具有5 σ-還原酶抑制活 性的苯丙素類化合物，該化合物至今尚未見到相關(guān)報(bào)道。
[0004] 類固醇5 〇 -還原酶是定位于靶細(xì)胞微粒體上的膜蛋白，依賴還原輔酶Π (NADPH) 作為供氫體，催化還原一系列類固醇底物如睪酮、17 σ-羥基黃體酮、雄烯二酮等。在催化還 原雄激素睪酮(Τ)轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚愿鼜?qiáng)的雄激素雙氫睪丸激素(DHT)的過程中，5 σ-還原酶起著 關(guān)鍵作用。Τ及其還原代謝物DHT是維持男性顯性特征和性成熟的本質(zhì)男性激素，占男性體 內(nèi)激素80%左右，其中DHT被認(rèn)為是體內(nèi)作用最強(qiáng)的雄激素。如果體內(nèi)DHT含量過高，將會(huì)導(dǎo) 致引發(fā)性激素效應(yīng)的相關(guān)內(nèi)分泌失調(diào)，引發(fā)多種疾病，如良性前列腺增生、痤瘡、男性禿發(fā) 和女性多毛癥等。Τ與5 還原酶和它的輔酶NADPH形成的復(fù)合物結(jié)合，如果有某種抑制劑 存在，由于抑制劑的結(jié)構(gòu)和Τ類似，抑制劑同樣也可以與復(fù)合物結(jié)合，這樣抑制劑就與Τ相互 競爭與復(fù)合物結(jié)合，從而減少了 Τ向DHT的轉(zhuǎn)化，因而降低了體內(nèi)DHT的含量，緩解了體內(nèi)由 于DHT含量過高引起的各種疾病。通過分離得到了一種具有5 σ-還原酶抑制活性的苯丙素 類化合物，該化合物相關(guān)的5 σ -還原酶抑制活性也未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種新的苯丙素類化合物;第二目的在于提供所述苯丙素 類化合物的制備方法;第三目的在于提供所述苯丙素類化合物在制備5 &還原酶抑制劑中 的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的第一目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的苯丙素類化合物是從干燥的黑紫獐牙菜 (5^61^3 3(1'0^'〇23。63)全草中分離得到，命名為3-羥基-1-(6-輕甲基-1，3-二氫異苯并 口夫喃 _5_基）丙烷_1_酉同，英文名為：3_hydroxy_l_(6_hyd;roxymethyl_l，3_ dihydroisobenzofuran-5-y 1 )propan-l_one，其分子式為 C12H14O4，具有下述結(jié)構(gòu)式：
該化合物為淺黃色膠狀物。
[0007] 本發(fā)明的第二目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的苯丙素類化合物的制備方法，是以干燥 的黑紫獐牙菜全草為原料，經(jīng)浸膏提取、MCI脫色、硅膠柱層析、高壓液相色譜步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒑谧镶啦说娜莘鬯?，用95%乙醇室溫下提取3~5次，每次3天，合并 提取液、過濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀物，濃縮成浸膏a; B、 MCI脫色:浸膏a用MCI柱脫色，用80%-95%甲醇/水洗脫，合并有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏 b； C、 硅膠柱層析:浸膏b用重量比8~10倍量的100~200目硅膠干法裝柱進(jìn)行硅膠柱層析； 以體積配比為1:0、9 :1、8:2、7:3、6:4、1:1和0:1的氯仿/丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集梯度 洗脫液、濃縮，合并相同的部分； D、 高壓液相色譜分離:C步驟洗脫液的8:2部分經(jīng)反相C18中壓液相色譜分離純化，所得 14~18 min色譜峰對應(yīng)的洗脫液，進(jìn)一步經(jīng)高壓液相色譜分離純化，即得所述的苯丙素類化 合物。
[0008] 以上述方法制備的苯丙素類化合物的結(jié)構(gòu)通過以下方法鑒定出來的： 本發(fā)明化合物為淺黃色膠狀物;紫外光譜（溶劑為甲醇），Amax (log ε) 275 (3.74)、 232 (3·86)、210 (4.05) nm;紅外光譜（溴化鉀壓片）vmax 3387、3086、2946、1658、1610、 1574、1456、1348、1267、1164、1038、876 cm-S高分辨質(zhì)譜（HRES頂S)給出準(zhǔn)分子離子峰m/ 2 245.0783 []\?^]+(計(jì)算值245.0790)。結(jié)合1!1和13〇匪1?譜給出一個(gè)分子式(： 12!114〇4，不 飽和度為6。紅外光譜數(shù)據(jù)證實(shí)化合物中存在羥基(3387 cnf1)和芳環(huán)（1610、1574、1456 cm +1)功能團(tuán)。從1Η和13C NMR譜(數(shù)據(jù)歸屬見表-1)信號可以看出化合物的12個(gè)碳包括五個(gè)亞甲 基(C-8、C-9、C-1、C-2、C-3 )、兩個(gè)烯碳次甲基(C-3、C-6)以及五個(gè)季碳(包括一個(gè)羰基C-7和四個(gè)烯碳C-l、C-2、C-4、C-5 )，這些信號表明化合物為苯丙素類化合物。根據(jù)H-1和C-1、 C-2、C-3的HMBC相關(guān)（圖3)可證實(shí)羥甲基取代在苯環(huán)的C-2位;H-8和C-l、C-7、C-9的HMBC相 關(guān)顯示丙基取代在苯環(huán)的C-1位;根據(jù)不飽和度計(jì)算發(fā)現(xiàn)，化合物中還有另外一個(gè)環(huán)存在， HMBC譜中，H-3 和C-2、04、05、06的相關(guān)以及!1-2和(：-3、(：-3、(：-4、(：-5的相關(guān)證實(shí)(：-2 、C-3、C-4、C-5形成一個(gè)呋喃環(huán);根據(jù)H-6、H-8、H-9與羰基有HMBC相關(guān)，可證實(shí)羰基位于C-7位，至此本化合物的結(jié)構(gòu)得以確定。
[0009] 表-1.化合物的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)（溶劑為CDC13)

本發(fā)明的第三目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的苯丙素類化合物在制備5 σ-還原酶抑制劑中 的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明化合物是首次從黑紫獐牙菜中分離出來的，通過核磁共振和質(zhì)譜測定方法 確定為苯丙素類化合物，并表征了其具體結(jié)構(gòu)。該化合物經(jīng)活性測試，結(jié)果表明，其對5 σ -還原酶抑制率為45.6±2.85%，顯示該化合物具有一定的5 σ-還原酶抑制活性。本發(fā)明化合 物結(jié)構(gòu)簡單活性較好，可作為5 σ-還原酶抑制劑的先導(dǎo)性化合物，具有良好的應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0011] 圖1為本發(fā)明苯丙素類化合物的核磁共振氫譜； 圖2為本發(fā)明苯丙素類化合物的核磁共振碳譜； 圖3為本發(fā)明苯丙素類化合物的主要HMBC相關(guān)圖示。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不以任何方式對本發(fā)明 加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0013] 除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為體積百分?jǐn)?shù)。
[0014] 本發(fā)明所述的苯丙素類化合物，是從干燥的黑紫猜牙菜（5Veriia aircmWacea) 全草中分離得到，其分子式為C12H14O4，具有下述結(jié)構(gòu)式：
該化合物為淺黃色膠狀物，命名為3-羥基-1-(6-羥甲基-1，3-二氫異苯并呋喃-5-基） 丙烷_1_酮，英文名為：3-hydroxy-1-(6-hydroxymethyl-l，3-dihydroisobenzofuran-5-y1) propan-1-one 〇
[0015] 本發(fā)明所述的苯丙素類化合物的制備方法，是以干燥的黑紫獐牙菜全草為原料， 經(jīng)浸膏提取、MCI脫色、硅膠柱層析、高壓液相色譜步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒑谧镶啦说娜莘鬯?，用95%乙醇室溫下提取3~5次，每次3天，合并 提取液、過濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀物，濃縮成浸膏a; B、 MCI脫色:浸膏a用MCI柱脫色，用80%-95%甲醇/水洗脫，合并有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏 b； C、 硅膠柱層析:浸膏b用重量比8~10倍量的100~200目硅膠干法裝柱進(jìn)行硅膠柱層析； 以體積配比為1:0、9 :1、8:2、7:3、6:4、1:1和0:1的氯仿/丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集梯度 洗脫液、濃縮，合并相同的部分； D、 高壓液相色譜分離:C步驟洗脫液的8:2部分經(jīng)反相C18中壓液相色譜分離純化，所得 14~18 min色譜峰對應(yīng)的洗脫液，進(jìn)一步經(jīng)高壓液相色譜分離純化，即得所述的苯丙素類化 合物。
[0016]所述C步驟的浸膏b在經(jīng)硅膠柱層析前，用重量比1.5~3倍量的氯仿/甲醇混合溶 劑溶解，然后用浸膏重1~1.5倍的80~100目硅膠拌樣。
[0017]所述〇步驟的反相(318中壓液相色譜分離純化是以21.2 111111\25〇1]1111、5以1]1的〇18 色譜柱為固定相，以45%的乙腈為流動(dòng)相，流速為20 mL/min，紫外檢測器檢測波長為210~ 230 nm，每次進(jìn)樣2 mL，收集14~18 min的色譜峰。
[0018] 所述D步驟的14~18 min色譜峰對應(yīng)的洗脫液在經(jīng)高壓液相色譜分離純化前，脫除 溶劑后用甲醇溶解。
[0019] 所述D步驟的高壓液相色譜分離純化是以40%的乙腈為流動(dòng)相，流速3 mL/min，9.4 mm X 250 mm、5 μπι的Ci8色譜柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為210~280 nm，每次進(jìn)樣50 yL，收集15.2 min的色譜峰，多次累加后蒸干。
[0020] 本發(fā)明的應(yīng)用為所述的苯丙素類化合物在制備5 σ-還原酶抑制劑中的應(yīng)用。
[0021] 本發(fā)明所述的黑紫獐牙菜不受地區(qū)限制，均可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，下面以采自云南省 迪慶地區(qū)的黑紫獐牙菜為原料，對本發(fā)明做進(jìn)一步說明： 實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按 照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過購買獲得的常規(guī)產(chǎn) 品。本發(fā)明中的溶液如果只給出了溶質(zhì)，沒有公開溶劑，則本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉溶劑為 水。本發(fā)明中純氯仿指100%氯仿，純丙酮是指100%丙酮，純甲醇指100%甲醇。
[0022] 實(shí)施例1 以采自云南省迪慶地區(qū)的黑紫獐牙菜為原料。將黑紫獐牙菜全草取樣2.5 kg粉碎，以 95%的乙醇室溫下提取4次，每次提取3天，提取液每次3.5 L，提取液合并，過濾，減壓濃縮成 浸膏，得浸膏86 g。浸膏用MCI柱脫色，用90%甲醇/水洗脫，脫色后的浸膏用55 g氯仿/甲醇 混合溶劑溶解，然后加入80目硅膠52 g拌樣。拌樣后，用100~200目硅膠1 kg干法裝柱；用體 積比依次為1:0、9:1、8: 2、7: 3、6:4、1:1和0:1的氯仿/丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集梯度洗 脫液、濃縮，合并相同的部分，其中體積為8:2部分1 g;8:2部分洗脫液通入反相C18中壓液相 色譜，該中壓液相色譜采用21.2 mm X 250 mm、5 μπι的C18色譜柱，流動(dòng)相流速為20 mL/ min，流動(dòng)相為45%的乙腈。紫外檢測器為雙波長檢測器，檢測波長為210、230 nm，每次進(jìn)樣2 mL，收集14~18 min色譜峰所對應(yīng)的洗脫液，洗脫液脫除溶劑后用甲醇溶解，溶解液再通入 高壓液相色譜進(jìn)行分離純化，該高壓液相色譜采用9.4 _ X 250 _、5 μπι的Cis色譜柱，流 動(dòng)相流速為3 mL/min，流動(dòng)相為40%的乙腈，紫外檢測器檢測波長為210、254、280 nm，每次 進(jìn)樣50 yL，收集色譜峰保留時(shí)間為15.2 min時(shí)所對應(yīng)的洗脫液，多次累加后蒸干，即得所 述苯丙素類化合物。
[0023] 實(shí)施例2 以采自云南省迪慶地區(qū)的黑紫獐牙菜為原料。將黑紫獐牙菜全草取樣2.5 kg粉碎，以 95%的乙醇室溫下提取4次，每次提取3天，提取液每次3.5 L，提取液合并，過濾，減壓濃縮成 浸膏，得浸膏86 g。浸膏用MCI柱脫色，用90%甲醇/水洗脫，脫色后的浸膏用55 g氯仿/甲醇 混合溶劑溶解，然后加入80目硅膠52 g拌樣。拌樣后，用100~200目硅膠1 kg干法裝柱；用體 積比依次為1:0、9:1、8: 2、7: 3、6:4、1:1和0:1的氯仿/丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集梯度洗 脫液、濃縮，合并相同的部分，其中體積為8:2部分1 g;8:2部分洗脫液通入反相C18中壓液相 色譜，該中壓液相色譜采用21.2 mm X 250 mm、5 μπι的C18色譜柱，流動(dòng)相流速為20 mL/ min，流動(dòng)相為45%的乙腈。紫外檢測器為雙波長檢測器，檢測波長為210、230 nm，每次進(jìn)樣2 mL，收集14~18 min色譜峰所對應(yīng)的洗脫液，洗脫液脫除溶劑后用甲醇溶解，溶解液再通入 高壓液相色譜進(jìn)行分離純化，該高壓液相色譜采用9.4 _ X 250 _、5 μπι的Cis色譜柱，流 動(dòng)相流速為3 mL/min，流動(dòng)相為40%的乙腈，紫外檢測器檢測波長為210、254、280 nm，每次 進(jìn)樣50 yL，收集色譜峰保留時(shí)間為15.2 min時(shí)所對應(yīng)的洗脫液，多次累加后蒸干，即得所 述苯丙素類化合物。
[0024] 實(shí)施例3 取實(shí)施例1制備的化合物，為淺黃色膠狀物； 測定方法為:用核磁共振，結(jié)合其它波譜技術(shù)鑒定結(jié)構(gòu)。
[0025] (1)紫外光譜（溶劑為甲醇），Amax (log ε) 275 (3.74)、232 (3.86)、210 (4.05) nm； (2) 紅外光譜（溴化鉀壓片）vmax 3387、3086、2946、1658、1610、1574、1456、1348、 1267、1164、1038、876 cm-^ (3) 高分辨質(zhì)譜（HRESIMS)給出準(zhǔn)分子離子峰m/z 245.0783 [M+Na]+ (計(jì)算值 245.0790)。結(jié)合1Η和13 C NMR譜給出一個(gè)分子式，不飽和度為6。紅外光譜數(shù)據(jù)證實(shí) 化合物中存在羥基(3387 cm-4和芳環(huán)（1610、1574、1456 cm-4功能團(tuán)。從1Η和13C NMR譜(數(shù) 據(jù)歸屬見表-1)信號可以看出化合物的12個(gè)碳包括五個(gè)亞甲基（C-8、C-9、C-1、C-2、C-3 )、兩個(gè)烯碳次甲基(C-3、C-6 )以及五個(gè)季碳(包括一個(gè)羰基C-7和四個(gè)烯碳C-l、C-2、C-4、 C-5)，這些信號表明化合物為苯丙素類化合物。根據(jù)H-1和C-l、C-2、C-3的HMBC相關(guān)（圖3) 可證實(shí)羥甲基取代在苯環(huán)的C-2位;H-8和C-l、C-7、C-9的HMBC相關(guān)顯示丙基取代在苯環(huán)的 C-1位;根據(jù)不飽和度計(jì)算發(fā)現(xiàn)，化合物中還有另外一個(gè)環(huán)存在，HMBC譜中，H-3和(：-2工- 4、C-5、C-6的相關(guān)以及H-2 和C-3、03、(：-4、(：-5的相關(guān)證實(shí)(：-2、(：-3、(：-4、(：-5形成一個(gè) 呋喃環(huán);根據(jù)H-6、H-8、H-9與羰基有HMBC相關(guān)，可證實(shí)羰基位于C-7位，至此本化合物的結(jié)構(gòu) 得以確定。
[0026] 表-1.化合物的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)（溶劑為CDC13)_ 買施例4
取實(shí)施例1中制備的苯丙素類化合物進(jìn)行5 σ-還原酶抑制活性測試，測試情況如下： 活性測試采用分散液液微萃取-氣質(zhì)連用的方法進(jìn)行測試，具體操作為:將50 前列 腺微粒體蛋白，500 /3M睪酮(T)，l 二硫蘇糖醇(DTT)，25 DMS0溶于40 磷酸鈉緩 沖溶液（pH 6.5)配置成反應(yīng)液，并定溶至0.5 ml，反應(yīng)液中加入250 還原輔酶Π (NADPH)開始酶促反應(yīng)，并在37°C振動(dòng)水浴中培養(yǎng)60分鐘。之后在冰浴中向反應(yīng)液加入500 M MeCN停止酶促反應(yīng)。制備的苯丙素類化合物、睪酮和二氫睪酮用分散液液微萃取的方式 進(jìn)行萃取。反應(yīng)液繼續(xù)加入50 Μ內(nèi)標(biāo)物T-d3(175 nM)和DHT-13C3(175 nM)以及50辺三氯 乙烯，并轉(zhuǎn)移至裝有3 ml水的錐形管中。封閉錐形管，手動(dòng)震蕩后，以5000 X g離心3分鐘， 離心完成后，將包含制備的苯丙素類化合物在內(nèi)的30 Μ下層物質(zhì)轉(zhuǎn)移到新的小瓶中，使用 溫和的氮流在室溫下干燥。干燥完成后加入30 /d MSTFA+NH4l+DTE(500:4:2 vol/wt/wt) 在家用微波(600 w)下反應(yīng)5分鐘使化合物進(jìn)行甲硅烷基化反應(yīng)。反應(yīng)完成后，抽取1 #1反 應(yīng)物進(jìn)行GC/MS分析。T/ T-d3與DHT/ DHT-13C3之間的比值可以對睪酮和經(jīng)過5 σ-還原酶反 應(yīng)生成的二氫睪酮進(jìn)行量化，通過對比酶促反應(yīng)后生成的二氫睪酮的量來確定被測化合物 的5 σ-還原酶抑制活性。
[0027]使用finasteride為測試制備的苯丙素類化合物5 σ-還原酶抑制活性的陽性對 照，將finasteride溶于DMS0,并用40 ?Μ磷酸鈉緩沖溶液(pH 6.5)進(jìn)行稀釋，抽取1 的 稀釋液進(jìn)行酶促反應(yīng)。為確定finasteride對5α-還原酶抑制活性的IC5Q值，采用不同濃度的 finasteride (0.01~1 /Μ)進(jìn)行測試，每個(gè)濃度均平行測定3次。
[0028]通過以上測試方法，確定制備的苯丙素類化合物的5 σ-還原酶抑制率為45.6土 2.85%，顯示化合物具有一定的5 σ -還原酶抑制活性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種苯丙素類化合物，其特征在于所述苯丙素類化合物是從干燥的黑紫獐牙菜 (5Veriia a ircmWacea)全草中分離得到，命名為3-羥基-1-(6-輕甲基-1，3-二氫異苯并 口夫喃 _5_基）丙烷_1_酉同，英文名為：3_hydroxy_l_(6_hyd;roxymethyl_l，3_ dihydroisobenzofuran-5-y I )propan-l_one，其分子式為 C12H14O4，具有下述結(jié)構(gòu)式：2. -種權(quán)利要求1所述苯丙素類化合物的制備方法，其特征在于以干燥的黑紫獐牙菜 全草為原料，經(jīng)浸膏提取、MCI脫色、硅膠柱層析、高壓液相色譜步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒑谧镶啦说娜莘鬯?，用95%乙醇室溫下提取3~5次，每次3天，合并 提取液、過濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀物，濃縮成浸膏a; B、 MCI脫色:浸膏a用MCI柱脫色，用80%-95%甲醇/水洗脫，合并有機(jī)相，減壓濃縮成浸膏 b； C、 硅膠柱層析:浸膏b用重量比8~10倍量的100~200目硅膠干法裝柱進(jìn)行硅膠柱層析； 以體積配比為1:0、9 :1、8:2、7:3、6:4、1:1和0:1的氯仿/丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集梯度 洗脫液、濃縮，合并相同的部分； D、 高壓液相色譜分離:C步驟洗脫液的8:2部分經(jīng)反相C18中壓液相色譜分離純化，所得 14~18 min色譜峰對應(yīng)的洗脫液，進(jìn)一步經(jīng)高壓液相色譜分離純化，即得所述的苯丙素類化 合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的苯丙素類化合物的制備方法，其特征在于所述C步驟的浸膏b 在經(jīng)硅膠柱層析前，用重量比1.5~3倍量的氯仿/甲醇混合溶劑溶解，然后用浸膏重1~1.5 倍的80~100目硅膠拌樣。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的苯丙素類化合物的制備方法，其特征在于所述D步驟的反相C18 中壓液相色譜分離純化是以21.2 mm X 250 mm、5 μπι的C18色譜柱為固定相，以45%的乙腈 為流動(dòng)相，流速為20 mL/min，紫外檢測器檢測波長為210~230 nm，每次進(jìn)樣2 mL，收集14~ 18 min的色譜峰。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的苯丙素類化合物的制備方法，其特征在于所述D步驟的14~18 min色譜峰對應(yīng)的洗脫液在經(jīng)高壓液相色譜分離純化前，脫除溶劑后用甲醇溶解。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的苯丙素類化合物的制備方法，其特征在于所述D步驟的高壓液 相色譜分離純化是以40%的乙腈為流動(dòng)相，流速3 mL/min，9.4 mm X 250 mm、5 μπι的Cis色 譜柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為210~280 nm，每次進(jìn)樣50 yL，收集15.2 min的色譜 峰，多次累加后蒸干。7. -種權(quán)利要求1所述的苯丙素類化合物在制備5 σ -還原酶抑制劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P17/10GK106008423SQ201610467667
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月24日
【發(fā)明人】吳海燕, 李干鵬, 周敏, 蔣薇, 左馬怡, 楊青松, 胡秋芬
【申請人】云南民族大學(xué)