頭孢氨芐的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了頭孢氨芐的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的頭孢氨芐的藥物組合物中含有頭孢氨芐和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，頭孢氨芐和化合物(Ⅰ)均具有明顯的抗抑郁作用，并且兩者合用抗抑郁效果顯著增強(qiáng)，可以開發(fā)成抗抑郁的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
頭孢氨芐的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及頭孢氨芐的新用途，具體涉及頭孢氨芐的藥物組 合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 頭孢氨芐能抑制細(xì)胞壁的合成，使細(xì)胞內(nèi)容物膨脹至破裂溶解，殺死細(xì)菌。
[0003] 迄今為止，尚未見頭孢氨芐及其藥物組合物與抑郁癥的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種頭孢氨芐的藥物組合物，該藥物組合物中含有頭孢氨 芐和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，頭孢氨芐和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療抑郁癥。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008] -種頭孢氨芐的藥物組合物，包括頭孢氨芐、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤(rùn)滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011]上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將穿心蓮粉碎，用65~85%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集70%洗 脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化 合物(I)。
[0012]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0014]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0015] 上述化合物(I)在制備治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 上述頭孢氨芐的藥物組合物在制備治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的頭孢氨芐的藥物組合物中含有頭孢氨芐和一種結(jié)構(gòu) 新穎的天然產(chǎn)物，頭孢氨芐和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)抑郁癥具有治療作用;二者聯(lián)合作 用時(shí)，對(duì)抑郁癥的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療抑郁癥的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019]分離方法：（a)將穿心、蓮(3kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫8個(gè) 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (8個(gè)柱體 積)和5:1(10個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正 相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1(8個(gè)柱體積）、5:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結(jié)構(gòu)確證:冊(cè)431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 473.2153，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C24H34〇8，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)SH(ppm，CDC1 3，500MHz): H-la(1 ? 27，m)，H-lb (1.51，m)，H-2a(1.81，m)，H-2b(1.93，m)，H-3(5.91，br，s)，H-5(3.02，d，J=1.3Hz)，H-6 (6.83，d，J=1.3Hz)，H-9(2.36，m，2H)，H-12(1.44，s)，H-13(1.47，s)，H-14(0.99，s)，H-15 (1.56，s)，H-3'（5.14，q，J = 6.3Hz)，H-4'（1.32，d，J = 6.3Hz)，H-5a'（6.33，d，J=12.3Hz)， H-5b '（6 ? 62，d，J = 12 ? 3Hz)，4-AcO(1 ? 96，s)，3 ' -AcO(1 ? 99，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)(ppm， CDC13，125MHz):31 ? 8(CH2，1-C)，22.8(CH2,2-C)，73.6(CH，3-C)，83.0(C，4-C)，47.9(CH，5-C)，145.7(CH，6-C)，140.6(C，7-C)，201.1(C，8-C)，57.8(CH2,9-C)，39.4(C，10-C)，71.4(C， n-C)，29.3(CH3，12-C)，28.5(CH 3，13-C)，18.3(CH3，14-C)，18.9(CH3，15-C)，167.8(C，r-C)，138.6(C，2，-C)，65.1(CH，3，-C)，19.3(CH 3,4，-C)，127.2(CH2,5，-C)，169.9(C，4-Ac0)， 21.5(CH3,4-Ac0)，170.4(C，3'-Ac0)，22.4(CH 3,3'-Ac0)。紅外波譜中的1757cm-1 與1648cm-1 吸收帶表明結(jié)構(gòu)中存在羰基與雙鍵片段。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有24個(gè)碳信號(hào)，包括 七個(gè)甲基，四個(gè)亞甲基(一個(gè)烯烴碳），四個(gè)次甲基(兩個(gè)連氧碳和一個(gè)烯烴碳），以及九個(gè)季 碳（四個(gè)羰基碳，兩個(gè)烯烴碳和兩個(gè)含氧季碳）。以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合 物為雙環(huán)結(jié)構(gòu)。 1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示五個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)SH 〇.99(3H，s)、1.32(3H，d，J = 6.3抱）、1.44(311，8)、1.47(311，8)、1.56(311，8)，兩個(gè)乙酰基甲基質(zhì)子信號(hào)知1.96(311，8)與 1.99(3H，s)，一個(gè)烯屬亞甲基質(zhì)子信號(hào)S H 6.33(111，(1，1=12.3泡）與6.62(111，(1，了 = 12.3他），兩個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號(hào)知5.91(111，8)與5.14(1114，1 = 6.311)，一個(gè)烯屬次甲 基質(zhì)子信號(hào)Sh6.83 (1H，d，J = 1.3Hz)，以上匪R數(shù)據(jù)可以確認(rèn)該化合物為闊苞菊酮衍生物。 HMBC譜中H3-12與C-11、H 3-13與C-11、H3-14與C-10、H3-15與C-4的相關(guān)信號(hào)可以歸屬為闊苞 菊酮上的片段，C-3位質(zhì)子信號(hào)移向低場(chǎng)說明C-3羥基被酯化，而通過HMBC譜中的H-3與C-1' 相關(guān)信號(hào)得到進(jìn)一步確認(rèn)。通過HMBC譜中H-3 '與3 ' -AcO、C-2 '和C-4 '以及H2-5 '與C-2 '和C-1'相關(guān)信號(hào)可以確認(rèn)結(jié)構(gòu)中存在3 ' -乙?；?2 ' -烯-丁酰氧基邊鏈結(jié)構(gòu)。C-l 1 (SC71.4)位的 化學(xué)位移表明其連有一個(gè)羥基。NOESY譜中He-l/H 3-14，Hf!-l/H-3，H-3/H3-15以及H3-14/H3-15的相關(guān)信號(hào)表明H-3，H 3-14與H3-15在闊苞菊酮骨架的同側(cè)，此外Ha-l/H-5相關(guān)信號(hào)暗示 H-5在H-3和H 3-14的異側(cè)。該化合物的相對(duì)構(gòu)型進(jìn)一步通過X-單晶衍射確認(rèn)，C-3位的絕對(duì) 構(gòu)型通過酸解反應(yīng)與Mosher法可以確認(rèn)為R構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及 文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn) 確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0022] 實(shí)施例2:藥理作用
[0023] 1、材料與方法
[0024] 1.1動(dòng)物
[0025]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，體重18~22g，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心。
[0026] 1.2藥物與試劑
[0027] 頭孢氨芐購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，化合物（I)自制，制備方法見實(shí)施例1。鹽 酸氟西汀膠囊（百憂解）（禮來蘇州制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格:20mg/片）；重酒石酸去甲腎上 腺素(NE);腎上腺素(E);鹽酸多巴胺(DA); 5-羥色胺鹽酸鹽(5-HT);以上5種對(duì)照品均購(gòu)自 中國(guó)藥品生物制品檢定所(供含量測(cè)定用）；乙腈(色譜純，澳洲移民局科技有限公司）；辛烷 磺酸鈉(B8,分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；高氯酸(分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；磷酸二氫 鈉(分析純，廣州化學(xué)試劑廠）。
[0028] 1.3主要儀器
[0029]懸尾實(shí)驗(yàn)裝置自制，木棒上用紙板隔離成2個(gè)區(qū)，用膠布固定鼠尾;游泳實(shí)驗(yàn)裝置 為矩形玻璃缸（19.4cmX20.4cm);鉆石牌機(jī)械秒表3個(gè)，上?；使虄x器有限公司；庫侖陣列 電化學(xué)高效液相色譜儀（美國(guó)ESA公司：Model5600A-16通道檢測(cè)器，Model 582solvent Delivery System，Mode 1542 自動(dòng)進(jìn)樣器，Coularray Win工作站）；Dionex-Tcc_100 型柱溫 箱(美國(guó)戴安公司）；Thermo D-37520型高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Heraeus公司）；Phs-25型pH計(jì) (上海精密科學(xué)儀器有限公司）；GenPure超純水系統(tǒng)(德國(guó)TKA公司）；KQ-500型超聲波清洗 器(昆山市超聲儀器有限公司）；3K超濾管(PALL公司）；BP211D電子天平(德國(guó)Sartorious); 佳美SK-r決速混勾器(江蘇金壇市佳美儀器廠）。
[0030] 1.4小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)
[0031] 取小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只。分別為空白對(duì)照組(生理鹽水）、陽性對(duì)照組 (鹽酸氟西汀4mg/mL)及頭孢氨節(jié)組(80mg/kg)、化合物（I)組(80mg/kg)、頭孢氨節(jié)與化合物 (I)組合物組【（40mg/kg)頭孢氨芐+ (40mg/kg)化合物（I)】，自由飲水進(jìn)食灌胃1次/d， 〇.2mL/只，連續(xù)灌胃15d，第1、3、5、7天給藥lh后，將小鼠尾部距末端約2cm處用膠布黏住固 定，使其頭部向下懸掛呈倒懸狀，離箱底約5cm。中間以擋板隔離小鼠視線?？傆^察6min，前 2min為適應(yīng)時(shí)間，觀察后4min內(nèi)小鼠的不動(dòng)（小鼠在空中停止掙扎，或僅有細(xì)小的肢體運(yùn) 動(dòng))時(shí)間。
[0032] 1 ? 5小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST)
[0033] 實(shí)驗(yàn)前24h進(jìn)行游泳訓(xùn)練15min，禁食不禁水，實(shí)驗(yàn)前12h禁食。第15天給藥lh后進(jìn) 行游泳實(shí)驗(yàn)。將小鼠單只放入水深l〇cm，水溫（27±3)°C的矩形容器內(nèi)，總觀察6min，適應(yīng) 2min后開始計(jì)算后4min內(nèi)累計(jì)不動(dòng)(漂浮不動(dòng)狀態(tài)，僅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶爾劃動(dòng)以 保持身體不至于沉下去)時(shí)間。
[0034] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0035] 2.1對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響
[0036]結(jié)果如表1所示。小鼠在懸尾模型中出現(xiàn)的不動(dòng)狀態(tài)反映了其絕望行為，給藥組抗 抑郁活性從第3天開始體現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，頭孢氨芐與化合物（I)組合物顯著減少小 鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間(P〈〇.01)，頭孢氨芐組、化合物（I)組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間降低(P<〇.05)。 [00 37] 表1對(duì)懸尾小鼠不動(dòng)時(shí)間的影響（s，x土 s，n = 8)
[0039] 2.2對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響
[0040] 結(jié)果如表2所示。與空白對(duì)照組比較，頭孢氨芐與化合物（I)組合物組小鼠游泳的 不動(dòng)時(shí)間均顯著縮短（P<0.01)，頭孢氨芐組、化合物（I)組小鼠游泳不動(dòng)時(shí)間降低（P〈 0.05)〇
[0041 ] 表2對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(x 土 s，n = 10)

[0043] 以上結(jié)果表明，頭孢氨芐和化合物（I)均具有明顯的抗抑郁作用，并且兩者合用抗 抑郁效果顯著增強(qiáng)，可以開發(fā)成抗抑郁的藥物。
[0044] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物α)，2. -種頭孢氨芐的藥物組合物，其特征在于:包括頭孢氨芐、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的頭孢氨芐的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體 或潤(rùn)滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的頭孢氨芐的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將穿 心蓮粉碎，用65~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫 8個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的頭孢氨芐的藥物組合物在制備治療抑郁癥的藥物中的應(yīng) 用。
【文檔編號(hào)】A61K31/545GK105820053SQ201610258255
【公開日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年4月23日
【發(fā)明人】黃亦瓊
【申請(qǐng)人】黃亦瓊