一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物來源生物活性肽的制備領(lǐng)域，尤其是一種紫花苜蓿生物活性肽的 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫花苜蓿系豆科，屬于多年生草本植物，是世界上種植最廣、栽培最早的牧草，具 有產(chǎn)量高、適口性好、營養(yǎng)豐富等特點(diǎn)所以被譽(yù)為"牧草之王"，在我國東北、華北、西北等地 區(qū)已經(jīng)普遍種植。紫花苜蓿的氨基酸種類較為齊全且均衡，營養(yǎng)價值較高，是一種優(yōu)良的植 物性蛋白資源。
[0003] 目前，國內(nèi)外對于紫花苜蓿的研究主要集中在育種、種植、篩選及黃酮類化合物、 葉蛋白的提取等方面，現(xiàn)有技術(shù)中對紫花苜蓿生物活性肽的研究很少。其中，張勇等對堿性 蛋白酶水解苜蓿葉蛋白制備寡肽的最佳條件進(jìn)行了研究，最佳條件下水解度為27.50%，寡 肽的平均肽鏈長度為3.64(中國飼料，2007，18:15-17);在中國發(fā)明專利申請公開說明書 CN104195204A中公開了一種紫花苜蓿多肽的制備方法，采用加熱法獲得紫花苜蓿粗蛋白， 再經(jīng)乙醇浸提脫色脫腥，后用Protamex酶和FlavourzymelOOOL酶酶解紫花苜蓿粗蛋白，最 后經(jīng)噴霧干燥得到紫花苜蓿多肽，多肽含量達(dá)70%~75%，所得的肽粉無苦澀感，可直接 服用。但是上述兩種方法均是先從苜蓿草中提取出葉蛋白后再將其酶解進(jìn)行多肽制備的， 葉蛋白提取率低，能耗大，此兩種方法均存在工藝繁雜、生產(chǎn)成本高的缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種工藝簡便、生產(chǎn)成 本低、成品具有較強(qiáng)抗氧化活性的紫花苜蓿生物活性肽的制備方法。
[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種紫花 苜蓿生物活性肽的制備方法，其特點(diǎn)是，其步驟如下： (1) 原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機(jī)粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:9~1:11加水勻漿，得到原料液； (2) 酶解:將上述原料液栗入酶解罐，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，并不斷攪拌， 按加酶量800~1200U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解工藝參數(shù)為： 酶解時間3~5 · 5h，酶解溫度45~60 °C，酶解pH 6~7 · 5; (3 )滅酶:酶解結(jié)束后升溫至90 °C以上，保持1 Omin，滅酶，冷卻，對滅酶后的混合物進(jìn)行 離心處理，得上清液，或?qū)⑺鰷缑负蟮幕旌衔镞^濾，得濾液； (4)真空濃縮:對上述清液或?yàn)V液抽入濃縮罐進(jìn)行濃縮處理，濃縮溫度為50~65°C，濃縮 至最終水分含量在40~60%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0006] (5)冷凍干燥:對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進(jìn)行冷凍干燥處理，干燥溫度為-60 ~-40°C，干燥至最終水分含量在10%以下，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0007] 本發(fā)明所述的紫花苜蓿生物活性肽的制備方法中，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方案或者技 術(shù)特征是： 1、在步驟(1)中：勻漿時原料與水的質(zhì)量比為1:10。
[0008] 2、在步驟(2 )中：按加酶量900U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進(jìn)行酶， 酶解工藝參數(shù)為:酶解時間4h，酶解溫度55 °C，酶解pH 6.5。
[0009] 3、在步驟(4)中：對上述上清液或?yàn)V液抽入濃縮罐進(jìn)行濃縮處理，濃縮溫度為55 °C，濃縮至最終水分含量為50%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0010] 4、在步驟(5)中：對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進(jìn)行冷凍干燥處理，干燥溫度為-50°C，干燥至最終水分含量為8%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明直接用胰蛋白酶對紫花苜蓿進(jìn)行酶解，肽得率高，水解度 可達(dá)到32.56%，肽段分子量主要集中在lOOODa以下，而且制得的紫花苜蓿生物活性肽具有 較強(qiáng)的二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)清除能力;在制備過程中省去了提取粗蛋白及脫色 脫腥步驟，不僅簡化了生產(chǎn)工藝，還進(jìn)一步降低了生產(chǎn)成本，提升了產(chǎn)品的使用效價。本發(fā) 明獲得的紫花苜蓿生物活性肽是植物天然提取物，呈淡綠色，有淡淡的青草香，風(fēng)味倶佳， 同時具有較強(qiáng)的抗氧化活性，可在食品、保健品、化妝品及飼料加工等領(lǐng)域推廣應(yīng)用，而且 工藝簡便、生產(chǎn)成本低，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0012]圖1為抗壞血酸(Vc)對DPPH ·清除能力的測定結(jié)果； 圖2為采用本發(fā)明實(shí)施例4所述的方法制備得到的紫花苜蓿生物活性肽粉對DPPH ·清 除能力的測定結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 以下參照附圖，進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn) 一步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。
[0014] 實(shí)施例1，一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法，其步驟如下： (1) 原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機(jī)粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:9加水勻漿，得到原料液； (2) 酶解:將上述原料液栗入酶解罐，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，并不斷攪拌， 按加酶量800U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解工藝參數(shù)為:酶解 時間3h，酶解溫度45 °C，酶解pH 6; (3 )滅酶:酶解結(jié)束后升溫至90 °C以上，保持1 Omin，滅酶，冷卻，對滅酶后的混合物進(jìn)行 離心處理，得上清液，或?qū)⑺鰷缑负蟮幕旌衔镞^濾，得濾液； (4)真空濃縮:對上述清液或?yàn)V液抽入濃縮罐進(jìn)行濃縮處理，濃縮溫度為50°C，濃縮至 最終水分含量為40%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0015] (5)冷凍干燥:對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進(jìn)行冷凍干燥處理，干燥溫度為-60 °C，干燥至最終水分含量為10%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0016] 實(shí)施例2,一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法，其步驟如下： (1)原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機(jī)粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:11加水勻漿，得到原料液； (2)酶解:將上述原料液栗入酶解罐，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，并不斷攪拌， 按加酶量1200U/g底物蛋白向上述原料液中加入胰蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解工藝參數(shù)為:酶解 時間5.5h，酶解溫度60 °C，酶解pH 7.5; (3 )滅酶:酶解結(jié)束后升溫至90 °C以上，保持1 Omin，滅酶，冷卻，對滅酶后的混合物進(jìn)行 離心處理，得上清液，或?qū)⑺鰷缑负蟮幕旌衔镞^濾，得濾液； (4)真空濃縮:對上述清液或?yàn)V液抽入濃縮罐進(jìn)行濃縮處理，濃縮溫度為65°C，濃縮至 最終水分含量為60%，即得到紫花苜蓿生物活性肽膏。
[0017] (5)冷凍干燥:對上述紫花苜蓿生物活性肽膏進(jìn)行冷凍干燥處理，干燥溫度為-40 °C，干燥至最終水分含量為6%，即得到紫花苜蓿生物活性肽粉。
[0018] 實(shí)施例3,一種紫花苜蓿生物活性肽的制備方法，其步驟如下： (1) 原料處理:取紫花苜蓿鮮草或干草，篩選去雜、清洗、瀝干后投入粉碎機(jī)粉碎，粉碎 后按料水質(zhì)量比1:10加水勻漿，得到原