一種神經(jīng)節(jié)苷脂提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物提取領(lǐng)域，具體的說，涉及一種神經(jīng)節(jié)苷脂提取物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 神經(jīng)節(jié)苷脂是一種含有N-乙酰神經(jīng)氨酸的膜糖脂，具有增強(qiáng)人腦功能的發(fā)育和增 強(qiáng)記憶的功能，神經(jīng)節(jié)苷脂也是神經(jīng)系統(tǒng)中的信息調(diào)節(jié)因子，它在治療和生物的保護(hù)方面， 具有明顯的療效和作用。
[0003]神經(jīng)節(jié)苷脂對神經(jīng)再生有重大促進(jìn)作用。加拿大金爵集團(tuán)腦科學(xué)研究室首席科學(xué) 家GatteWalker博士進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)生長因子(NGF)和神經(jīng)節(jié)苷脂是腦神經(jīng)再生發(fā) 育必需物質(zhì)，神經(jīng)節(jié)苷脂介導(dǎo)NGF數(shù)十倍增強(qiáng)其活性，形成新的豐富的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，修復(fù)并促 使腦神經(jīng)再次發(fā)育。
[0004]神經(jīng)節(jié)苷脂能夠介導(dǎo)神經(jīng)生長因子NGF促進(jìn)腦神經(jīng)細(xì)胞再生，表現(xiàn)出良好的生物 效應(yīng)。
[0005]NGF和神經(jīng)節(jié)苷脂目前無論在試驗(yàn)中，還是臨床實(shí)踐里都顯示出對神經(jīng)系統(tǒng)促進(jìn) 恢復(fù)效果，已成為研究的熱點(diǎn)。如這兩種藥物協(xié)同作用能得到充分應(yīng)用，必將能為中樞神經(jīng) 疾病患者帶來更大希望。
[0006] 專利申請01126341.5公開了一種從動物組織中提取神經(jīng)節(jié)苷脂的方法，該方法采 用一種或多種與神經(jīng)節(jié)苷脂的極性相匹配的極性溶劑，采用反相萃取的方法去除提取物中 的雜質(zhì)。
[0007] 專利申請200610011529.9公開了一種腦苷肌肽溶液的制備方法，其中包括神經(jīng)節(jié) 苷脂的制備：以非牛源動物腦組織為原料，以氯仿/甲醇混合溶劑從動物腦組織中制備含神 經(jīng)節(jié)苷脂的提取物溶液，其中氯仿/甲醇混合溶劑的體積比為氯仿：甲醇=(1~2) :1。
[0008]上述方法制備神經(jīng)節(jié)苷脂均存在收率低、神經(jīng)節(jié)苷脂純度不高的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的一個目的在于提供一種神經(jīng)節(jié)苷脂提取物的制備方法；
[0010] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述制備方法制備得到的神經(jīng)節(jié)苷脂提取物。
[0011] 為達(dá)上述目的，一方面，本發(fā)明提供了一種神經(jīng)節(jié)苷脂提取物的制備方法，所述方 法包括如下步驟：
[0012] (1)以豬腦為原料，將豬腦加入質(zhì)量濃度為60 %~65 %的乙醇水溶液中，在轉(zhuǎn)速 1000-1500轉(zhuǎn)/min下攪拌30-60min，得到腦漿液；
[0013] (2)在25-30kHz的超聲波處理下，將步驟（1)得到的腦漿液在攪拌下加入到液氮 中，攪拌轉(zhuǎn)速為500-700轉(zhuǎn)/min，加畢，繼續(xù)攪拌20-90min，得到混合溶液；
[0014] (3)將步驟(3)的混合溶液置于加熱至40-50°C的敞口容器中并攪拌，使得混合溶 液揮發(fā)完全，得到殘余物；
[0015](4)將步驟(3)得到的殘余物加入丙酮中，攪拌勻漿后過濾，濾餅用體積比為2-5:1 的氯仿/甲醇提取三次，合并提取液，在30-40°C下減壓濃縮至干，得到所述神經(jīng)節(jié)苷脂提取 物。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其中，步驟（1)所述乙醇水溶液質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的 30-50倍。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其中，步驟（1)所述豬腦在加入乙醇水溶液前，先剝 離腦膜血管，并用水清洗處理。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其中，步驟(2)腦漿液加入時(shí)間控制為5-1Omin。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其中，步驟(2)液氮質(zhì)量為腦漿液質(zhì)量的40-60倍。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其中，步驟(3)的攪拌速度為800-1000轉(zhuǎn)/min。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其中，步驟(4)中丙酮質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的2-3倍。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其中，步驟(4)中每次氯仿/甲醇質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的 2-5 倍。
[0023] 另一方面，本發(fā)明還提供了所述制備方法制備得到的神經(jīng)節(jié)苷脂提取物。
[0024] 綜上所述，本發(fā)明提供了一種神經(jīng)節(jié)苷脂提取物及其制備方法。本發(fā)明的方法具 有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0025] 本發(fā)明方法制備得到的提取物中神經(jīng)節(jié)苷脂純度高，且避免使用制備柱，使得收 率得到較大幅度提高。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下通過具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施過程和產(chǎn)生的有益效果，旨在幫助閱 讀者更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和特點(diǎn)，不作為對本案可實(shí)施范圍的限定。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] (1)以市售新鮮豬腦為原料，將豬腦除去血膜后用水洗凈，加入質(zhì)量濃度為60 %的 乙醇水溶液中，乙醇水溶液質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的40倍，在轉(zhuǎn)速1300轉(zhuǎn)/min下攪拌40min，得到 腦漿液；
[0029] (2)在25kHz的超聲波處理下，將步驟（1)得到的腦漿液在攪拌下加入到液氮中，液 氮質(zhì)量為腦漿液質(zhì)量的50倍，控制加入速度，使得腦漿液在8min左右加完，其中攪拌轉(zhuǎn)速為 600轉(zhuǎn)/min，加畢，繼續(xù)攪拌50min，得到混合溶液；
[0030] (3)將步驟(3)的混合溶液置于加熱至45°C左右的敞口容器中并攪拌，攪拌速度約 為900轉(zhuǎn)/min，使得混合溶液揮發(fā)完全，得到殘余物；
[0031] (4)將步驟(3)得到的殘余物加入丙酮中，丙酮質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的2倍，攪拌勻漿后 過濾，濾餅用體積比為3:1的氯仿/甲醇提取三次，每次氯仿/甲醇質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的3倍，合 并提取液，在30°C下減壓濃縮至干，得到所述神經(jīng)節(jié)苷脂提取物。
[0032] 實(shí)施例2
[0033] (1)以市售新鮮豬腦為原料，將豬腦除去血膜后用水洗凈，加入質(zhì)量濃度為65 %的 乙醇水溶液中，乙醇水溶液質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的35倍，在轉(zhuǎn)速1300轉(zhuǎn)/min下攪拌45min，得到 腦漿液；
[0034] (2)在25kHz的超聲波處理下，將步驟（1)得到的腦漿液在攪拌下加入到液氮中，液 氮質(zhì)量為腦漿液質(zhì)量的50倍，控制加入速度，使得腦漿液在8min左右加完，其中攪拌轉(zhuǎn)速為 500轉(zhuǎn)/min，加畢，繼續(xù)攪拌40min，得到混合溶液；
[0035] (3)將步驟(3)的混合溶液置于加熱至45°C左右的敞口容器中并攪拌，攪拌速度約 為800轉(zhuǎn)/min，使得混合溶液揮發(fā)完全，得到殘余物；
[0036] (4)將步驟(3)得到的殘余物加入丙酮中，丙酮質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的2倍，攪拌勻漿后 過濾，濾餅用體積比為3:1的氯仿/甲醇提取三次，每次氯仿/甲醇質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的2倍，合 并提取液，在30-40°C下減壓濃縮至干，得到所述神經(jīng)節(jié)苷脂提取物。
[0037]實(shí)施例3
[0038] (1)以市售新鮮豬腦為原料，將豬腦除去血膜后用水洗凈，加入質(zhì)量濃度為60 %的 乙醇水溶液中，乙醇水溶液質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的30倍，在轉(zhuǎn)速1100轉(zhuǎn)/min下攪拌30min，得到 腦漿液；
[0039] (2)在25kHz的超聲波處理下，將步驟（1)得到的腦漿液在攪拌下加入到液氮中，液 氮質(zhì)量為腦漿液質(zhì)量的40倍，控制加入速度，使得腦漿液在6min左右加完，其中攪拌轉(zhuǎn)速為 600轉(zhuǎn)/min，加畢，繼續(xù)攪拌20min，得到混合溶液；
[0040] (3)將步驟(3)的混合溶液置于加熱至40°C左右的敞口容器中并攪拌，攪拌速度約 為900轉(zhuǎn)/min，使得混合溶液揮發(fā)完全，得到殘余物；
[0041] (4)將步驟(3)得到的殘余物加入丙酮中，丙酮質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的2倍，攪拌勻漿后 過濾，濾餅用體積比為3:1的氯仿/甲醇提取三次，每次氯仿/甲醇質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的3倍，合 并提取液，在35°C下減壓濃縮至干，得到所述神經(jīng)節(jié)苷脂提取物。
[0042]實(shí)施例4
[0043] (1)以市售新鮮豬腦為原料，將豬腦除去血膜后用水洗凈，加入質(zhì)量濃度為63 %的 乙醇水溶液中，乙醇水溶液質(zhì)量為豬腦質(zhì)量的45倍，在轉(zhuǎn)速1500轉(zhuǎn)/min下攪拌60min，得到 腦漿液；
[0044] (2)在30kHz的超聲波處理下，將步驟(1)得到的腦漿液在攪拌下加入到液氮中，液 氮質(zhì)量為腦漿液質(zhì)量的50倍，控制加入速度，使得腦漿液在lOmin左右加完，其中攪拌轉(zhuǎn)速 為700轉(zhuǎn)/min，加畢，繼續(xù)攪拌50min，得到混合溶液；
[0045] (3)將步驟(3)的混合溶液置于加熱至50°C左右的敞口容器中并攪拌，攪拌速度約 為900轉(zhuǎn)/min，使得混合溶液揮發(fā)完全，得到殘余物；
[0046] (4)將步驟(3)得到的殘余物加