專利名稱：用氟取代唾液酸的9位的神經(jīng)節(jié)苷脂gm3類似物及其中間體的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及已知作為承擔各種生物學現(xiàn)象的生理活性糖脂質神經(jīng)節(jié)苷脂的構成成分的唾液酸的C-9位的羥基用氟原子取代的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物及其中間體。
背景技術：
神經(jīng)節(jié)苷脂是具有唾液酸的鞘氨醇糖脂質的總稱，是由親水性的糖部分和疏水性的神經(jīng)酰胺部分組成的兩親性分子。因其結構、尤其是糖鏈結構的不同，例如命名這GM1、GM2、GM3、GM4、GD2、GD3、GT2、GT3、GT1b等簡寫名，它們作為生物膜的微量成分，遍及各組織。近年來，隨著神經(jīng)節(jié)苷脂作為各種細菌毒素、激素、干擾素、神經(jīng)介質、流感病毒的受體分子承擔的基本作用的明了，它們已引起人們的關注[鈴木康夫，生物體的科學，38卷(4)332-339頁(1987)]。例如在流感病毒膜表面存在識別含唾液酸的糖鏈的血球凝集素和唾液酸酶，它們在流感病毒向動物細胞吸附·侵入中起很大作用。從宿主一方看這種吸附·侵入機理，從為防止病毒感染的觀點來看它們是重要構成成分[鈴木康夫，生物化學，62卷(4)231-260頁(1990)]。
鈴木等人從上述的觀點出發(fā)，用各種神經(jīng)節(jié)苷脂類似物考察對流感神經(jīng)氨酸苷酶活性的影響，得到深感興趣的結果[鈴木等，Glycoconjugate J.)，7頁(1990)]。
這樣，與流感神經(jīng)氨酸苷酶形成強結合，但不形成基質的物質，不僅對該酶的立體活性中心結構的解析是極有用的，而且期待開辟防治病毒感染的途徑。
另一方面，在神經(jīng)節(jié)苷脂中，部分乙?；耐僖核嵋蛲僖核崦傅淖饔帽槐Ｗo，被看作成為對人黑素瘤的抗原性給予癌性變化而且也對細胞多糖的抗原性給予變化的因素。而且在與病毒的結合中起著重要的作用。唾液酸是一組神經(jīng)氨酸衍生物的總稱，氨基的取代基有乙?；鸵掖减；u基的取代基有乙?；?、羥丙?；?、磷酸酯基、硫酸酯基和甲基等，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)30種唾液酸，結構也已確定。
另外，在癌細胞的增殖和轉移的機制中，已發(fā)現(xiàn)神經(jīng)節(jié)苷脂參與。即，天然的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3有抑制細胞增殖的性質，希望對癌細胞選擇性地發(fā)揮此作用。在癌轉移中，癌細胞附著在血管內(nèi)皮細胞上，因為向血管外滲出也是神經(jīng)節(jié)苷脂的作用，所以希望是抑制癌細胞轉移的藥劑。
作為唾液酸涉及的主要功能，可舉出1)對復合糖質的細胞膜給予負電荷，2)對糖脂質、糖蛋白質等的構象的影響，3)信息傳遞，4)抗原部位的遮蔽作用等。今后對唾液酸完成的任務更感興趣。
這樣，神經(jīng)節(jié)苷脂作為功能性分子參與各種生物學現(xiàn)象，認為是其中作為構成成分的唾液酸對其表現(xiàn)活性給予極大影響。
如以上所述，唾液酸是承擔各種生物學現(xiàn)象的神經(jīng)節(jié)苷脂的重要構成成分，為了考察唾液酸結構對其活性的影響，需要合成具有有機化學修飾的唾液酸的各種神經(jīng)節(jié)苷脂。利用這樣合成的化合物得出在神經(jīng)節(jié)苷脂的分子水平上的功能說明。
發(fā)明概要本發(fā)明的一個目的是提供可用作流感病毒的感染抑制劑、癌細胞增殖·轉移抑制劑等的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物。
本發(fā)明的另一個目的是提供在制造這樣的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物中有用的中間體。
即，按照本發(fā)明的第一個要點，提供了以通式(I)表示的用氟取代唾液酸的9位的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物 式中，R表示脂族低級?；?，R1表示氫原子或低級烷基，R2-R5獨立地表示氫原子或脂族低級?；蚍甲艴；?，R11表示直鏈或支鏈的飽和或者不飽和的具有1-30個碳原子的脂族烴基，n是0-20的整數(shù)。但是，R1是氫原子時，R2-R5是氫原子，R1是低級烷基時，R2-R5是脂族低級?；蚍甲艴；?。
按照本發(fā)明的第二個要點，提供了作為以上述通式(I)表示的化合物的中間體的以通式(II)表示的化合物 式中，R6表示N3基或NH2基，R、R1、R2-R5和n如上述定義。但是，R1是氫原子時，R2-R5是氫原子，R1是低級烷基時，R2-R5是脂族低級?；蚍甲艴；?。
按照本發(fā)明的第三個要點，提供了作為以上述通式(II)表示的化合物的中間體的以通式(III)表示的化合物 式中，R1a表示低級烷基，R7表示羥基、氟原子或者-OC(＝NH)CCl3基，R和R2-R4如上述定義。但是，R7是氟原子或-OC(＝NH)CCl3時，R2-R4是脂族低級?；蚍甲艴；?。
按照本發(fā)明的第四個要點，提供了作為以上述通式(III)表示的化合物的中間體的以通式(IV)表示的化合物 式中，TAS表示三烷基甲硅烷基，R、R1a和R2-R4如上述定義。
按照本發(fā)明的第五個要點，提供了作為以上述通式(IV)表示的化合物的中間體的以通式(V)表示的化合物 式中，R8表示低級烷基或脂族?；?，R、R1a和R2如上述定義。
按照本發(fā)明的第六個要點，提供了作為以上述通式(V)表示的化合物的中間體的以通式(VI)表示的化合物 式中，R9表示羥基或鹵原子，R、R1a和R2如上述定義。
發(fā)明的詳細說明在本發(fā)明中，所謂低級烷基是指具有1-4個碳原子為烷基。所謂脂族低級?；侵妇哂?-4個碳原子的脂族?；?。所謂芳香族?；侵妇哂?-8個碳原子的芳族?；?。并且在三烷基甲硅烷基中，烷基有1-4個碳原子。
象可由上述化學結構理解的那樣，本發(fā)明的氟取代神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物的唾液酸衍生物部分由乳糖部分和神經(jīng)酰胺部分構成，唾液酸的9位的羥基相當于氟化的羥基。而且，該神經(jīng)節(jié)苷脂GM3衍生物由下述反應過程合成，即先合成含氟唾液酸衍生物的硫代烷基物，將其和乳糖的2，6，6′-三?；衔锟s合，形成唾液酸乳糖衍生物，然后再導入神經(jīng)酰胺部分。下面說明關于本發(fā)明的氟取代神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物的制備方法。
作為用于制備本發(fā)明的以通式(I)表示的氟取代神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物的原料，例如使用9-脫氧-9-氟-N-乙酰基神經(jīng)氨酸。該化合物例如按照Carbohydrate Research，175卷(1988)25-34頁中記載的方法能很容易地合成，即，以芐基-2-乙酰氨基-2-脫氧-α-D-吡喃葡糖苷(從西格瑪公司得到)作為原料，在進行1)6-O-三苯甲基化，2)3，4-二-O-芐基化，再3)6位的脫三苯甲基化后，4)與二乙氨基硫三氟化物反應，形成芐基-2-乙酰氨基-2，6-二脫氧-3，4-二-O-芐基-α-D-吡喃葡糖苷，使用披鈀木炭催化劑用氫進行脫芐基反應，制成2-乙酰氨基-2，6-二脫氧-6-氟-O-葡萄糖。將其在水溶液中以pH 11進行異構化時，約20％轉變成乙酰氨基-2，6-二脫氧-6-氟-甘露糖。
在丙酮酸鈉存在下，借助N-乙?；窠?jīng)氨酸醛縮酶的作用，將該混合物轉變成9-脫氧-9-氟-N-乙?；窠?jīng)氨酸，用離子交換樹脂進行分離。
首先，用醇使該化合物的1位的羧酸部分酯化，得到以通式(VI-1)表示的化合物 式中，R表示脂族低級酰基，R1a表示低級烷基。
如下述那樣進行酯化反應。例如在甲酯的情況下，向無水甲醇中加入陽離子交換樹脂(H+型)(該陽離子交換樹脂在五氧化二磷存在下在真空干燥器中干燥一夜)和上述原料化合物，在室溫下攪拌1-6小時、優(yōu)選2-3小時進行反應。過濾去除離子交換樹脂，進行濃縮而得到酯化物。
接著，使以上述通式(VI-1)表示的化合物與乙酰氯等以通式R2aX(式中，R2a表示脂族低級?；蚍甲艴；?，X表示鹵原子)表示的酰鹵在約35℃進行反應，使4、7和8位的羥基酰化，而且使2位的OH鹵化，得到以通式(VI-2)表示的化合物 式中，R2a表示脂族低級?；蚍甲艴；?，X表示鹵原子，R、R1a如上述定義。
然后，將上述通式(VI-2)表示的化合物溶解在無水二氯甲烷中，在冰冷卻下加入硫代乙酸，接著加入硫代乙酸鉀，在室溫下進行反應，使2位的鹵原子硫代乙?；玫揭酝ㄊ?VII)表示的化合物 式中，Ac表示乙?；?，R、R1a、R2a如上述定義。
接著，使以上述通式(VII)表示的化合物在醇溶劑中與堿金屬醇鹽(例如甲醇鈉)在低溫下進行反應，餾去溶劑，得到以通式(VIII)表示的化合物 式中，R、R1a、R2a如上述定義。使該化合物在二甲基甲酰胺等非質子性的合適溶劑中與甲基碘等烷基碘在室溫或若干升溫下進行反應，按常法進行處理，得到以通式(V-1)表示的唾液酸衍生物的硫代烷基體。 式中，R8a表示低級烷基，R、R1a和R2a如上述定義。
象上述那樣制備的唾液酸衍生物的硫代烷基體化合物接著與通式(IX)表示的乳糖的2，6，6′-三?；w縮合， 式中，R4a表示脂族低級酰基或芳族?；?，TAS表示三烷基甲硅烷基。通式(IX)表示的化合物例如按照特開平3-101691中記載的方法能很容易地合成，即，先在苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷等非極性溶劑中，利用氧化二正丁基錫、溴化四正丁基銨或芐基溴僅使2-(三烷基甲硅烷基)乙基-β-D-乳糖苷的3′位芐基化，然后按照?；耐ㄓ梅椒?，例如在吡啶等堿存在下，根據(jù)需要在冷卻下使?；瘎?例如苯甲酰氯等)反應，選擇性地使2位、6位和6′位酰化，然后，僅使3′位的芐基脫離，就容易地得到以通式(IX)表示的化合物。
在縮合反應中，將以通式(V-1)表示的唾液酸的硫代烷基體和以通式(IX)表示的乳糖的2，6，6′-三?；w溶解在無水丙腈等溶劑中后，添加活化的分子篩4A，在氬氣氛下攪拌一夜。然后冷卻到低溫，加入N-碘代琥珀酸亞胺，接著添加三氟甲磺酸，在-45～-40℃進行反應。在縮合時，在丙腈溶劑中作為縮合促催劑例如使用N-碘代琥珀酸亞胺和催化量的三氟甲磺酸，以此可以位置和立體選擇性地得到以通式(IV-1)表示的唾液酰乳糖衍生物 式中，R、R1a、R2a、R4a和TAS如上述定義。
使這樣得到的唾液酰乳糖衍生物的游離羥基進行?；Ｗo，得到以通式(IV-2)表示的化合物 式中，R3a表示脂族低級?；蚍甲艴；?，R、R1a、R2a、R4a和TAS如上述定義。
將以通式(IV-1)表示的化合物溶解在例如吡啶中，在室溫下與酰鹵、酸酐等反應而進行酰化。
接著，使上述通式(IV-2)表示的化合物與三氟化硼·醚作用，使葡萄糖的2位的(CH2)2TAS基脫去，得到以通式(III-1)表示的化合物 式中，R和R1a-R4a如上述定義。
例如將以通式(IV-2)表示的化合物溶解在二氯甲烷中，在冰冷卻下滴入三氟化硼·乙醚，在氬氣氛下于室溫反應，進行(CH2)2TAS基的脫去。
然后，為了使以上述通式(III-1)表示的化合物的葡萄糖殘基部分的OH活化，使該基團轉移成OC(＝NH)CCl3基或氟原子。
為了形成三氯乙亞氨酸酯化合物，例如在氬氣氛下將以通式(III-1)表示的化合物溶解在二氯甲烷中，在冷卻到-5℃下加入三氯乙腈和1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一-7-烯，在冰冷卻下進行反應。
為了形成氟化合物，例如使以通式(III-1)表示的化合物在二氯甲烷溶劑中，在-10～30℃、優(yōu)選0～10℃與二乙氨基硫三氟化物進行反應而得到。
這樣得到以通式(III-2)表示的化合物 式中，R7a表示-OC(＝NH)CCl3基或氟原子，R、R1a-R4a如上述定義。
接著，使以上述通式(III-2)表示的化合物與以通式(X)表示的疊氮基鞘氨醇衍生物進行縮合。 式中，R5表示脂族低級酰基或芳族?；琻是0-20的整數(shù)。
按照Carbohydrate Research，202卷(1990)177-191頁中記載的方法很容易得到疊氮基鞘氨醇衍生物。即，合成疊氮基鞘氨醇，用適當?shù)谋Ｗo基例如三苯甲基等將疊氮基鞘氨醇的1位的伯羥基保護后，使用例如苯甲酰氯等酰氯按照常規(guī)方法保護3位的羥基，然后，例如用三氟化硼·乙醚進行1位的脫保護。
在R7a是-OC(＝NH)CCl3基的情況下，例如將以通式(III-2)表示的化合物和以通式(X)表示的化合物溶解在二氯甲烷中，加入活化的粉末分子篩4A，在氬氣氛下攪拌30分鐘，接著在冰冷卻下滴入三氟化硼·乙醚，在0℃下反應來進行縮合反應。
在R7a是氟原子的情況下，例如使以通式(III-2)表示的化合物和以通式(X)表示的化合物在二氯甲烷中，在氯化亞錫和過氯酸銀存在下，在15-25℃下反應來進行縮合反應。
這樣得到以通式(II-1)表示的化合物 式中，R、R1a-R5a和n如上述定義。
接著，用三丁基膦或三苯基膦/水系，或者硫化氫/吡啶系將該化合物的疊氮基還原成氨基，得到以通式(II-2)表示的化合物 式中，R、R1a-R5a和n如上述定義。
然后，使用二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、二異丙基碳二亞胺(DIPC)、N-乙基-N′-3-二甲氨基丙基碳二亞胺(WSCI)等脫水試劑，使該化合物的氨基和以通式(XI)表示的化合物的羧基進行縮合，形成酰胺鍵，得到以通式(I-1)表示的化合物。R11COOH(XI)式中，R11表示直鏈或支鏈的飽和或不飽和的1-30個碳原子的脂族烴基。 式中，R、R1a-R5a、R11和n如上述定義。
在該反應中，以通式(II-2)表示的化合物與通式以(XI)表示的化合物的摩爾比是1∶0.5-1∶2.0，優(yōu)選1∶1-1∶1.1。相對于1mol的以通式(II-2)表示的化合物而言，使用1-2mol、優(yōu)選1-1.1mol脫水試劑。作為理想的溶劑，可例舉出二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、二甲基甲酰胺等。反應溫度通常是15-25℃。反應終了后，進行萃取、餾出溶劑等后處理，根據(jù)需要，用柱色譜法進行純化。
接著，使如此得到的以通式(I-1)表示的化合物的羥基和羧基的保護基脫去，得到本發(fā)明的以通式(I-2)表示的以氟原子取代唾液酸的9位羥基的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物。該反應例如按以下方法進行。 式中，R、R11和n如上述定義。
將以通式(I-1)表示的化合物溶解在無水甲醇中，添加2-4倍量的甲醇鈉，從室溫至50℃反應30分至10小時，脫去羥基的保護基，接著冷卻到0℃，添加水，在同一溫度下攪拌1-6小時，脫去羧基的保護基。用陽離子交換樹脂的H-型脫鹽后，使用葡聚糖凝膠LH-20進行柱純化，得到以通式(I-2)表示的以氟原子取代唾液酸的9位神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物。
由以通式(IV-1)、(IV-2)、(III-1)、(III-2)、(II-1)和(II-2)表示的化合物按與上述相同的條件也能使其羥基和羧基的保護基脫去。
如上所述，唾液酸是承擔各種生物學現(xiàn)象的神經(jīng)節(jié)苷脂的重要組成成分，在其表現(xiàn)活性中，為了考察唾液酸結構給予的影響，合成了具有用氟進行有機化學修飾的唾液酸的各種神經(jīng)節(jié)苷脂是有用的。
按照本發(fā)明的氟取代的神經(jīng)節(jié)苷脂除了對神經(jīng)氨酸苷酶抵抗性大、阻礙神經(jīng)節(jié)苷脂分子在生物體中的代謝分解外，還有識別細胞等生理活性方面的機能。并且在作為流感病毒的感染抑制劑、癌細胞的增殖·轉移抑制劑、抑制白血球或者癌細胞與血管壁粘著的物質等實用藥品的開發(fā)及臨床應用中也是有用的。
實施例下面，根據(jù)實施例具體地說明本發(fā)明，但是這些實施例并不是對本發(fā)明的任何限定。
按照以下的流程圖合成本發(fā)明的以氟取代取代9位的神經(jīng)節(jié)苷脂類似物。
反應流程

圖1 實施例1(5-乙酰氨基-3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-β-半乳-2-吡喃壬糖苷)甲酯(化合物(1))的合成在100ml無水甲醇中溶解1.09g(3.5mmol)9-脫氧-9-氟-N-乙酰神經(jīng)氨酸，添加6.2g離子交換樹脂(Dewex)50W-X8，在氬氣氛下，在室溫(22℃)攪拌2.5小時。潷析分離溶液后，用甲醇(50ml×3)洗滌不溶部分，合并甲醇可溶部分，進行減壓濃縮。用甲醇-乙酸乙酯將殘渣重結晶，得到化合物(1)(0.71g)，收率62.5％。
熔點128-131.5℃C12H20NO8F(325.30)[α]D＝+21.0°(c 0.20，CHCl3)IRKBrmaxcm-13700～3150(OH，NH)，1750(酯)，1650，1540(酰胺)。
1H-NMR(D2O；TSP)δ1.93(1H，dd，J3a，4＝11.7Hz，J3a，3e＝11.8Hz，H-3a)，2.33(1H，dd，J3e，4＝4.9Hz，J3a，3e＝13.2Hz，H-3e)，3.85(3H，s，CO2Me).
19F-NMR(D2O；CFCl3)δ-208(dt，JF，9H＝50.5Hz，JF，8H＝29.5Hz，1F，9-F)實施例2(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙酰基-2-氯-3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-β-D-半乳-2-吡喃壬糖苷)甲酯(化合物(2))的合成向100ml乙酰氯中加入3.40g(10.5mmol)化合物(1)，在38℃攪拌22.5小時。用TLC(氯仿∶丙酮＝7∶3)確認反應結束后，在低于30℃減壓濃縮，將得到的殘渣溶于苯中，減壓濃縮得到粗化合物(2)(4.80g)收率97.7％。
C18H25NO10ClF(469.86)IRKBrmaxcm-13700～3150(NH)，1750(酯)，1650，1540(酰胺)。1H-NMR(CDCl3；TMS)δ1.92～2.14(12H，s，30Ac，NHAc)，2.79(1H，dd，J3e，4＝4.8Hz，J3a，3e＝13.9Hz，H-3e)，3.89(3H，s，CO2Me).19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-234(dt，JF，9H＝50.0Hz，JF，8H＝24.5Hz，1F，9-F)。
實施例3(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙?；?2-S-乙?；?3，5，9-三脫氧-9-氟-2-硫代-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷)甲酯(化合物(3))的合成在3ml無水二氯甲烷中溶解338mg(0.72mmol)化合物(2)，在冰冷卻下，添加4μl(0.06mmol)硫代乙酸，接著添加357mg(3.13mmol)硫代乙酸鉀，在室溫攪拌21小時。用TLC(氯仿∶乙酸乙酯＝1∶1)確認反應結束后，進行濃縮，將殘渣溶于氯仿中，用水洗滌后，用硫酸鎂干燥，將其過濾，用氯仿洗滌后，合并濾液和洗液，進行減壓濃縮。將所得殘渣進行快速色譜法純化(洗脫液氯仿∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到化合物(3)(240mg)。收率65.4％。
C20H28NO11FS(509.52)1H-NMR(CDCl3；TMS)δ1.88(s，3H，NAc)，1.94(dd，1H，J3a，3e＝J3a，4＝12.8Hz，H-3a)，2.02，2.14，2.17，2.29(4s，12H，30Ac，SAc)，2.67(1H，dd，J3e，4＝4.6Hz，J3a，3e＝13.0Hz，H-3e)，3.80(3H，s，CO2Me)，4.59(dd，1H，J5，6＝10.8Hz，J6，7＝2.3Hz，H-6)，4.94(ddd，1H，J3e，4＝4.6Hz，J4，5＝10.5Hz，J3a，4＝11.6Hz，H-4)，5.15(m，1H，H-8)，5.48(d，1H，J5，NH＝8.9Hz，NH)19F-NMR(CDCl3CFCl3)δ-234(dt，JF，9H＝50.5Hz，JF，8H＝24.5Hz，1F，9-F)
實施例4(甲基5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙酰基-3，5，9-三脫氧-9-氟-2-硫代-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷)甲酯(化合物(4))的合成在25ml無水甲醇中溶解1.01g(1.98mmol)化合物(3)，在-40～-45℃滴入在10ml甲醇中溶解34.6mg(1.51mmol)金屬鈉所得的溶液，攪拌7分鐘。然后邊在冰冷卻下邊在真空下濃縮，充分干燥后，溶解在8ml無水二甲基甲酰胺中，添加0.30ml(4.8mmol)甲基碘，在室溫下攪拌17小時。進行減壓濃縮，將所得的殘渣進行柱色譜法純化(洗脫液二氯甲烷∶甲醇＝100∶1→90∶1)，得到化合物(4)(695mg)。收率72.9％。
C19H28NO10FS(481.51)[α]D＝+36.5°(c 0.38，CHCl3)IRKBrmaxcm-13700～3150，3150～2800，1750，1650，1540.
1H-NMR(CDCl3；TMS)δ1.88(s，3H，NAc)，1.99(dd，1H，J3a，3e＝J3a，4＝12.1Hz，H-3a)，2.03，2.12，2.16，2.19(4s，12H，30Ac，SAc)，2.74(1H，dd，J3e，4＝4.7Hz，J3a，3e＝12.7Hz，H-3e)，3.84(dd，1H，J5，6＝10.7Hz，J6，7＝2.0Hz，H-6)，3.82(3H，s，CO2Me)，4.12(ddd，1H，J4，5＝J5，6＝J5，NH＝10.5Hz，H-5)，4.90(ddd，1H，J3e，4＝4.6Hz，J4，5＝10.4Hz，J3a，4＝11.6Hz，H-4)，5.3～5.4(m，2H，H-7，H-8)，5.13(d，1H，J5，NH＝10.2Hz，NH)19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-235(dt，JF，9H＝50.0Hz，JF，8H＝23.5Hz，1F，9-F)
反應流程圖2
實施例52-(三甲基甲硅烷基)乙基O-(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙酰基-3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷甲酯)-(2→3)-O-(6-O-苯甲?；?β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2，6-二-O-苯甲?；?β-D-吡喃葡糖苷(化合物(5))的合成將846mg(1.76mmol)化合物(4)和614mg(0.81mmol)2-(三甲基甲硅烷基)乙基O-(6-0-苯甲?；?β-吡喃半乳糖基)-(1→4)-2，6-二-O-苯甲?；?β-D-吡喃葡糖苷溶解在8ml無水丙腈中，然后在真空下于180℃干燥6小時，添加3g活化的分子篩4A，在氬氣氛下攪拌一夜。然后冷卻到-45℃，添加1.08g(4.80mmol)N-碘代琥珀酸亞胺，接著添加24μl(0.27mmol)三氟甲磺酸，在-45～-40℃攪拌2小時，用氯仿稀釋反應液后，用硅藻土過濾，用氯仿洗滌不溶物。合并濾液和洗滌液，用5％碳酸氫鈉水溶液、水洗滌有機層。用無水硫酸鎂干燥后，將其過濾，用氯仿洗滌，合并濾液和洗滌液，將所得殘渣進行閃式色譜法純化(洗脫液乙酸乙酯∶己烷＝3∶1)，得到化合物(5)(556mg)。收率57.6％。
C56H70NO24FSi(1188.25)[α]D＝+12.3°(c 0.64，CHCl3)IRKBrmaxcm-13600～3100(OH，NH)，1730，1250(酯)，1670，1540(酰胺)，860，840(Me3Si)，710(苯基)。
500MHz1H-NMR(CDCl3；TMS)
乳糖部分δ8.1～7.2(m，15H，3Bz)，5.36(dd，1H，J1，2＝8.1Hz，J2，3＝9.5Hz，H-2)，4.87(dd.1H，Jgem＝11.9Hz，J5，6＝2.9Hz，H-6)，4.65(d，1H，J1，2＝8.0Hz，H-1)，4.56(d，1H，J1’，2’＝7.8Hz，H-1’)，4.62(dd，1H，Jgem＝11.9Hz，J5，6＝2.9Hz，H-6)，3.68(m，1H，1H，CHCH2SiMe3)，0.85(m，2H，CH2SiMe3)，0.00(s，9H，Me3Si)唾液酸部分δ5.22(dd，1H，J6，7＝1.7Hz，J7，8＝9.3Hz，H-7)，3.81(s，3H，CO2Me)，2.70(dd，1H，J3a，3e＝12.5Hz，J3e，4＝5.6Hz，H-3e)，2.04，2.08，2.16(3s，9H，30Ac)，1.90(s，3H，NAc).19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-234(m，1F，9-F).
實施例62-(三甲基甲硅烷基)乙基O-(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙酰基-3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷甲酯)-(2→3)-O-(2，4-二-O-乙酰基-6-O-苯甲?；?β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖苷(化合物(6))的合成在30ml吡啶中溶解550mg(0.46mmol)化合物(5)后，添加15ml無水乙酸，在室溫攪拌一夜。接著減壓濃縮，將所得殘渣進行閃式色譜法純化(洗脫液乙酸乙酯∶己烷＝5∶1)，得到化合物(6)(461mg)。收率75.7％。
C62H76NO27FSi(1314.36)[α]D＝+5.18°(c 0.89，CHCl3)IRKBrmaxcm-13380(NH)，1750，1230(酯)，1690，1540(酰胺)，860，840(Me3Si)，710(苯基)。
500MHz1H-NMR(CDCl3；TMS)乳糖部分δ8.2～7.4(m，15H，3Bz)，5.58(dd，1H，J2，3＝J3，4＝9.5Hz，H-3)，5.34(dd，1H.H-4’)，5.11(dd，1H，J1，2＝7.9Hz，J2，3＝9.5Hz，H-2)，4.90(d，1H，J1’，2’＝8.0Hz，H-1’)，4.77(d，1H，J1，2＝7.9Hz，H-1)，4.67(dd，1H，J2’，3’＝10.3Hz，J3’，4’＝3.3Hz，H-3’)，3.68(m，1H，1H，CH CH2SiMe3)，0.95(m，2H，CH2SiMe3)，0.00(s，9H，Me3Si)唾液酸部分δ5.47(m，1H，H-8)，5.32(dd，1H，J6，7＝1.8Hz，J7，8＝9.9Hz，H-7)，3.81(s，3H，CO2Me)，2.69(dd，1H，J3a，3e＝12.6Hz，J3e，4＝4.6Hz，H-3e)，2.07，2.09，2.11，2.18，2.22，2.30(6s，18H，6OAc)，1.96(s，3H，NAc)，.1.78(dd，1H，J3a，3e＝J3a，4＝12.4Hz，H-3a).19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-234(dt，lF，JF，8H＝25.5Hz，JF，9H＝50.5Hz，9-F).
實施例7O-(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙酰基-3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷甲酯)-(2→3)-O-(2，4-二-O-乙?；?6-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二-O-苯甲?；?D-吡喃葡糖苷(化合物(7))的合成在10ml無水二氯甲烷中溶解456mg(0.35mmol)化合物(6)，在冰冷卻下滴入0.43ml(4.3mmol)三氟化硼·乙醚，在氬氣氛下、在室溫攪拌7小時。用二氯甲烷稀釋，用5％碳酸氫鈉水溶液、水洗滌。用無水硫酸鈉干燥后，進行過濾，減壓濃縮濾液。將所得殘渣進行閃式色譜法純化(洗脫液乙酸乙酯∶己烷＝5∶1)，得到化合物(7)(314mg)。收率74.6％。
C57H64NO27F(1214.12)[α]D＝+31.9°(c 1.08，CHCl3)IRKBrmaxcm-13600～300(OH，NH)，1750，1230(酯)，1670，1540(酰胺)，715(苯基)19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-234(dt，1F，JF，8H＝26.0Hz，JF，9H＝50.0Hz，9-F).
實施例8O-(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙?；?3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷甲酯)-(2→3)-O-(2，4-二-O-乙?；?6-O-苯甲?；?β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3-O-乙?；?2，6-二-O-苯甲酰基-α-D-吡喃葡糖基三氯乙亞氨酸酯(化合物(8))的合成在氬氣氛下將304mg(0.25mmol)化合物(7)溶解于3ml無水二氯甲烷中，在冷卻到-5℃下，添加0.75ml(7.5mmol)三氯乙腈和0.02ml(0.13mmol)1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一-7-烯，在冰冷卻下攪拌2小時。進行減壓濃縮，將所得殘渣進行閃式色譜法純化(洗脫液乙酸乙酯∶己烷＝5∶1)，得到化合物(8)(206mg)。收率60.6％。
C59H64N2O27FCl3(1358.51)[α]D＝+37.7°(c 0.52，CHCl3)IRKBrmaxcm-13600～3100(NH)，1750，1230(酯)，1680，1540(酰胺)，710(苯基)500MHz1H-NMR(CDCl3；TMS)乳糖部分δ8.56(s，1H，C＝NH)，8.1～7.4(m，15H，3Bz)，6.67(d，1H，J1，2＝3.6Hz，H-1)，5.85(dd，1H，J2，3＝J3，4＝8.9Hz，H-3)，5.28(dd，1H，J1，2＝3.6Hz，J2.3＝8.9Hz，H-2)，5.06(dd，1H，J1’，2’＝5.8Hz，J2’，3’＝9.0Hz，H-2’)，4.88(br，d，1H，H-4’)，4.58(dd，1H，J2’，3’＝9.0Hz，J3’，4’＝2.5Hz，H-3’).
唾液酸部分δ5.48(m，1H，H-8)，5.43(m，1H，H-7)，3.74(s，3H，CO2Me)，2.58(dd，1H，J3a，3e＝12.8Hz，J3e，4＝4.6Hz，H-3e)，1.94，2.00，2.03，2.05，2.12，2.19(6s，18H，60Ac)，1.84(s，3H，NAc)，.1.66(dd，1H，J3a，3e＝J3a，4＝12.4Hz，H-3a).
19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-234(dt，lF，JF，8H＝26.5Hz，JF，9H＝49.5Hz，9-F).
反應流程圖3 實施例9O-(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙?；?3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷甲酯)-(2→3)-O-(2，4-二-O-乙?；?6-O-苯甲酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-O-(3-O-乙?；?2，6-二-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)(2S，3R，4E)-2-疊氮基-3-苯甲酰氧基-4-十八碳烯-1，3-二醇(化合物(9))的合成在8ml二氯甲烷中溶解205mg(0.15mmol)化合物(8)和155mg(0.36mmol)(2S，3R，4E)-2-疊氮基-3-苯甲酰氧基-4-十八碳烯-1，3-二醇(化合物(B))，在真空下于180℃下干燥6小時，添加活化的粉末分子篩4A(3.1g)，在氬氣氛下于室溫攪拌30分鐘。接著在冰冷卻下滴入43μl(0.35mmol)三氟化硼·乙醚，在0℃攪拌2.5小時。用二氯甲烷稀釋反應液，用硅藻土過濾，用碳酸氫鈉水溶液、水洗滌二氯甲烷層。用硫酸鈉干燥，進行減壓濃縮，將所得殘渣進行閃式色譜法純化(洗脫液乙酸乙酯∶己烷＝4∶1)，得到化合物(9)(208mg)。收率84.9％。
C82H101N4O29F(1625.71)[α]D＝-2.6°(c 0.54，CHCl3).
IRKBrmaxcm-13650～3180(NH)，2110(酰胺)，1750，1230(酯)，1690，1540(酰胺)，710(苯基).500MHz1H-NMR(CDCl3；TMS)乳糖部分δ8.1～7.3(m，20H，4Bz)，5.26(dd，1H，J1，2＝7.8Hz，J2，3＝9.6Hz，H-2)，5.03(dd，1H，J1’，2’＝8.0Hz，J2’，3’＝10.1Hz，H-2’)，4.99(br.d，1H，H-4’)，4.79(d，1H，Jl’，2’＝8.0Hz，H-1’)，4.68(d，1H，J1，2＝7.8Hz，H-1).
唾液酸部分δ3.74(s，3H，CO2Me)，3.58(dd，1H，J5.6＝10.9Hz，J6，7＝2.0Hz，H-6)，2.57(dd，1H，J3a，3e＝12.4Hz，J3e.4＝4.6Hz，H-3e).1.96，1.99，2.00，2.06，2.11，2.18(6s，18H，60Ac)，1.85(s，3H.NAc)，.1.67(dd，1H，J3a，3e＝J3a，4＝12.4Hz，H-3a)鞘氨醇部分 δ5.70(dt，1H，J4，5＝14.7Hz，J5，6＝J5，6’＝8.2Hz.H-5)，1.2(m，22H，11CH2)，0.86(t，3H，J＝5.7Hz，CH3).19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-234(dt，1F，JF，8H＝25.5Hz，JF，9H＝50.0Hz，9-F).
實施例10O-(5-乙酰氨基-4，7，8-三-O-乙?；?3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖苷甲酯)-(2→3)-O-(2，4-二-O-乙?；?6-O-苯甲?；?β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-O-(3-O-乙?；?2，6-二-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)(2S，3R，4E)-3-苯甲酰氧基-2-二十四烷酰氨基-4-十八碳烯-1，3-二醇(化合物(10))的合成將92mg(0.06mmol)化合物(9)溶解在12ml吡啶∶水＝5∶1的混合溶劑中，邊吹入硫化氫氣體邊在室溫攪拌52小時，然后減壓干固。將殘渣溶解在4.5ml二氯甲烷中，添加33mg(0.09mmol)二十四酸和50mg(0.26mmol)1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在室溫下攪拌-夜。用30ml二氯甲烷稀釋，用水洗滌后，用無水硫酸鎂干燥，將其過濾，用二氯甲烷洗滌，進行減壓濃縮。將所得殘渣進行閃式色譜法純化(洗脫液乙酸乙酯∶己烷＝3∶1)，得到化合物(10)(52mg，47.3％)。
C106H149N2O30F(1950.34)[α]D＝+7.13°(c 1.15，CHCl3)IRKBrmaxcm-13600～3200(NH)，2920(甲基，亞甲基)，1750，1230(酯)，1650，1540(酰胺)，710(苯基)。
500MHz1H-NMR(CDCl3；TMS)乳糖部分δ8.1～7.3(m，20H，4Bz)，5.19(dd，1H，J1，2＝7.9Hz，J2，3＝9.9Hz，H-2)，5.01(dd，1H，J1’，2’＝8.0Hz，J2’，3’＝10.3Hz，H-2’)，4.75(d，1H，J1’，2’＝8.0Hz，H-1’)，4.60(d，1H，J1，2＝7.9Hz，H-1)，4.55(dd，1H，J2’，3’＝10.3Hz，J3’，4’＝3.3Hz，H-3’).
唾液酸部分δ3.74(s，3H，CO2Me)，3.63(dd，1H，J5，6＝10.9Hz，J6，7＝2.4Hz，H-6)，2.57(dd，1H，J3a，3e＝12.5Hz，J3e，4＝4.6Hz，H-3e)，1.98，1.99，2.00，2.06，2.10，2.16(6s，18H，60Ac)，1.84(s，3H，NAc)，.1.66(dd，1H，J3a，3e＝J3a，4＝12.5Hz，H-3a).
神經(jīng)酰胺部分δ5.76(dt，1H，J4，5＝15.3Hz，J5，6＝J5，6’＝6.9Hz，H-5)，5.26(d，1H，JNH，2＝9.2Hz，NH)，1.2(m，62H，31CH2)，0.88(t，6H，J＝5.7Hz，2CH3).
19F-NMR(CDCl3；CFCl3)δ-234(dt，1F，JF，8H＝26.0Hz，JF，9H＝51.OHz，9-F).
實施例11O-(5-乙酰氨基-3，5，9-三脫氧-9-氟-D-甘油-α-D-半乳-2-吡喃壬糖酸)-(2→3)-O-(β-D-吡喃半乳糖基)(1→4)-O-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S，3R，4E)-2-二十四烷酰氨基-4-十八碳烯-1，3-二醇(化合物(11))的合成在3ml無水甲醇中溶解48mg(0.025mmol)化合物(10)，添加11mg(0.20mmol)甲醇鈉，在室溫下攪拌15小時，在冰冷卻后，加入0.5ml水，在冰冷卻下攪拌1.5小時，再在室溫下攪拌2.5小時。用T.L.C.(乙酸∶丁醇∶水＝2∶1∶1)確認反應結束后，通過離子交換樹脂IR-120(H+)的柱(洗脫液∶甲醇)，進行減壓濃縮。利用葡聚糖凝膠LH-20對殘渣進行凝膠過濾(洗脫液∶甲醇)，得到27mg化合物(11)。收率86.5％。
C65H119N2O20F(1267.66)[α]D＝+1.32°(c 0.56，CHCl3∶MeOH＝1∶1).
RIKBrmaxcm-13700～3300(OH，NH)，2940，2850(甲基，亞甲基)，1720(酯)，1660，1540(酰胺).
500MHz1H-NMR(CDCl3-CD3OD＝1∶1；TMS)ラクト-スユニツトδ4.41(d，1H，J1’，2’＝7.9Hz，H-1’)，4.29(d，1H，J1，2＝7.8Hz，H-1).
唾液酸部分δ2.84(m，1H，H-3e)，2.04(s，3H，NAc)，神經(jīng)酰胺部分δ5.70(dt，1H，J4，5＝14.9Hz，J5，6＝J5，6’＝6.8Hz，H-5)，5.45(dd，1H，J3，4＝7.4Hz，J4，5＝15.2Hz，H-4)，1.27(m，62H，31CH2)，0.89(t，6H，J＝6.6Hz，2CH3).
19F-NMR(CDCl3-CD3OD＝1∶1；CFCl3)δ-234(dt，0.9F，JF，8H＝26，0Hz，JF，9H＝51.0Hz，9-F)，-235(dt，0.1F，.JF，8H＝26.0Hz，JF，9H＝51.0Hz.9-F).
權利要求
1.以通式(I)表示的唾液酸的9位用氟取代的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物， 式中，R表示脂族低級?；琑1表示氫原子或低級烷基，R2-R5獨立地表示氫原子或脂族低級酰基或芳族?；琑11表示直鏈或支鏈的飽和或不飽和的具有1-30個碳原子的脂族烴基，n是0-20的整數(shù)，但R1是氫原子時，R2-R5是氫原子，R1是低級烷基時，R2-R5是脂族低級?；蚍甲艴；?。
2.以通式(II)表示的化合物， 式中，R6表示N3基或NH2基，R、R1-R5和n如上所定義。但R1是氫原子時，R2-R5是氫原子，R1是低級烷基時，R2-R5是脂族低級?；蚍甲艴；?br> 3.以通式(III)表示的化合物， 式中，R1a表示低級烷基，R7表示羥基、氟原子或-OC(＝NH)CCl3基，R和R2-R4如上所定義；但R7是氟原子或-OC(＝NH)CCl3基時，R2-R4是脂族低級?；蚍甲艴；?。
4.以通式(IV)表示的化合物， 式中，TAS表示三烷基甲硅烷基，R、R1a和R2-R4如上所定義。
5.以通式(V)表示的化合物， 式中，R8表示低級烷基或脂族酰基，R、R1a和R2如上所定義。
6.以通式(VI)表示的化合物， 式中，R9表示羥基或鹵原子，R、R1a和R2如上所定義。
全文摘要
以式(I)表示的唾液酸的9位用氟取代的神經(jīng)節(jié)苷脂GM3類似物和中間體，式中，R表示脂族低級?；琑
文檔編號C07H13/00GK1135756SQ95190908
公開日1996年11月13日 申請日期1995年8月10日 優(yōu)先權日1994年8月16日
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