一種采用逆流色譜技術(shù)分離大蒜中含硫化合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種分離大蒜中含硫化合物的方法，特別是一種采用逆流色譜技術(shù)分離大蒜中含硫化合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]大蒜的主要功效成分是大蒜素，被稱為天然廣譜抗生素。一般認(rèn)為大蒜素是一類有活性的含硫化合物，主要包括二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚和二烯丙基硫代亞磺酸酯等烯丙基硫醚、硫酯化合物。
[0003]大蒜中大蒜素的含量很低，若要達(dá)到藥用效果需要使用的量卻很大，因此大蒜素的提取與合成是一個重要的研究方向。目前，大蒜素的提取方法主要有有機溶劑提取、水蒸氣蒸餾、超聲波輔助提取、超臨界萃取及納濾提取法。有溶劑提取法是利用大蒜素易溶于有機溶劑的性質(zhì)，以有機溶劑浸泡大蒜泥來提取大蒜素的方法。該法不需要加壓、蒸餾，具有能耗小的優(yōu)點，但是容易引入雜質(zhì)，提取效率低，提取時間長。水蒸氣蒸餾法是將水蒸氣通入搗碎經(jīng)酶解的大蒜中，因大蒜素較難溶于水且具有一定的揮發(fā)性，便可隨水蒸氣一起被蒸出，再進(jìn)一步萃取得到大蒜素，但這種方法得到的并不是純的大蒜精油，而是大蒜中植物混合油。超聲波輔助提取法是利用超聲波能打破細(xì)胞邊界層，使擴散速度增大，提高提取效率，但是這種方法易使穩(wěn)定性差的大蒜含硫活性成分分解，同時還易引入過多雜質(zhì)，后續(xù)處理麻煩。超臨界流體萃取技術(shù)就是利用超臨界條件下的氣體作萃取劑，從液體或固體中萃取出某些成份并進(jìn)行分離的技術(shù)，該技術(shù)高效節(jié)能、工藝簡單、安全可靠，但因其對設(shè)備要求較高，不易普及。納濾是介于超濾和滲透之間的膜分離技術(shù)，能有效地分離小分子有機物納濾提取法操作程序簡單、操作條件溫和、提取效率高，但這種方法也存在時提取時間長，不易擴大產(chǎn)量等瓶頸問題亟待解決。因此，開發(fā)高效的大蒜中含硫化合物的提取方法是非常必要的。
[0004]高速逆流色譜技術(shù)(high-speedcounter-current chromatography, HSCCC)是一種連續(xù)高效的無固相載體的液-液分配色譜技術(shù)，最初由美國國立健康研究院Ito教授研制開發(fā)。由于不需要固相載體，物質(zhì)的分離依據(jù)其在互不相溶的兩相液體中的分配系數(shù)的差異而實現(xiàn)，因而避免了物質(zhì)在固定相不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等問題，分離到的樣品更能反映其本來的特性，特別適合于天然產(chǎn)物中有效成分的分離。高速逆流色譜因其不使用固體固定相，不存在不可逆吸附現(xiàn)象，并且有廣泛的溶劑體系可供選擇。從理論上講HSCCC可以適用于任何極性范圍樣品的分離，甚至可以分離多糖和蛋白之類物質(zhì)，因此應(yīng)用范圍很廣，具有很好的適應(yīng)性，在分離天然化合物方面有其獨到之處。但是，尚未有關(guān)于應(yīng)用此技術(shù)進(jìn)行大蒜素提取方法的研究報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的:為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，針對目前大蒜素提取過程中的工藝時間長、價格較高、條件比較苛刻或提取效率較低的問題，本發(fā)明提供一種采用逆流色譜技術(shù)分離大蒜中含硫化合物的方法，采用逆流色譜技術(shù)提取大蒜中的含硫化合物，實現(xiàn)了提取效率高、操作簡單、價格低廉的目標(biāo)，為規(guī)模化生產(chǎn)大蒜含硫化合物提供了技術(shù)支持，有很好的推廣應(yīng)用價值。
[0006]技術(shù)方案:為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
[0007]—種采用逆流色譜技術(shù)分離大蒜中含硫化合物的方法，包括如下步驟:
[0008]1)洗滌去雜:將新鮮大蒜去皮，洗去雜質(zhì)；
[0009]2)破碎酶解:將洗凈的大蒜破碎打漿，酶解；
[0010]3)漿料過濾:將步驟2)所得漿料加入水，混合并過濾，得澄清大蒜汁；
[0011]4)大孔樹脂吸附:用D101大孔樹脂對所述澄清大蒜汁進(jìn)行吸附，過濾后將吸附有大蒜汁的樹脂裝柱，用95%乙醇淋洗，得淋洗液；
[0012]5)逆流色譜技術(shù)純化大蒜含硫化合物:逆流色譜溶劑系統(tǒng)為正丁醇、乙醇、水，體積百分含量分別為40?45 %、9 %?11 %、50 %;所述溶劑系統(tǒng)靜置后，取上相作為固定相，下相作為流動相，逆流色譜條件為:柱溫為25°C，轉(zhuǎn)速為800-1000r/min，轉(zhuǎn)向為正向；
[0013]將所述淋洗液作為樣品，上樣體積為柱體積的1/10?1/20，進(jìn)行收集含硫化合物溶液。收集過程按定時或定量進(jìn)行，根據(jù)上樣量及保留體積而定。
[0014]6)溶劑揮發(fā)后得大蒜含硫化合物。
[0015]進(jìn)一步的，在本發(fā)明中，所述步驟2)中，所述酶解條件為:35?40°C下酶解30?60mino此處保溫放置的作用是利用大蒜本身所含有的酶進(jìn)行酶解將大蒜中蒜氨酸轉(zhuǎn)化為大蒜素，我們平時吃蒜說搗碎后放一會再吃營養(yǎng)高就是這個過程。
[0016]進(jìn)一步的，在本發(fā)明中，所述步驟2)中打漿時大蒜與水的質(zhì)量比為1:1。
[0017]進(jìn)一步的，在本發(fā)明中，所述含硫化合物溶液收集后，采用分光光度法在412nm處測定含硫化合物含量。
[0018]進(jìn)一步的，在本發(fā)明中，所述含硫化合物溶液收集后，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，色譜條件為:
[0019]0DS 色譜柱:4.6mm*250mm、5 μ m,
[0020]流動相:體積比為50:50的甲醇-1 %甲酸，
[0021]流速:1.0mL/min,
[0022]柱溫:25°C，
[0023]檢測波長:240nm，
[0024]進(jìn)樣量:20μ L。
[0025]進(jìn)一步的，在本發(fā)明中，收集到的所述含硫化合物為包括至少四種含硫化合物的混合物，包括二烯丙基硫代亞磺酸酯、二甲基硫代亞磺酸酯和甲基烯丙基硫代亞磺酸酯。還包括相應(yīng)的同分異構(gòu)體。
[0026]有益效果:本發(fā)明提供的采用逆流色譜技術(shù)分離大蒜中含硫化合物的方法，是一種新的分離提取方法，采用逆流色譜技術(shù)分離大蒜中含硫化合物實現(xiàn)了操作簡單、效率高、價格低廉的目的，為規(guī)?；蛛x純化大蒜含硫化合物提供了技術(shù)支持，有很好的推廣應(yīng)用價值。
【附圖說明】
[0027]附圖1為本發(fā)明分離所得含硫化合物的高效液相色譜法檢測結(jié)果圖。
【具體實施方式】
[0028]下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的闡述。
[0029]實施例1
[0030]A.洗漆去雜:將新鮮大蒜去皮，洗去雜質(zhì)。
[0031 ] B.破碎酶解:將洗凈的大蒜破碎打漿，打漿時蒜:水=1:1，35°C下酶解30min。
[0032]C.漿料過濾:將得到的漿料加入一倍體積的水，充分?jǐn)噭?，過濾，得澄清大蒜汁。
[0033]D.大孔樹脂吸附:用D101大孔樹脂對澄清大蒜汁進(jìn)行充分吸附，過濾后將吸附了樣品的樹脂裝柱，用適量的95 %的乙醇淋洗，得淋洗液。
[0034]E.逆流色譜技術(shù)純化大蒜含硫化合物:逆流色譜溶劑系統(tǒng)為正丁醇:乙醇:水體積比為40:10:50 ;配置好的溶劑放入分液漏斗中，靜止過夜，取上相作為固定相，下相作為流動相；逆流色譜儀柱溫為25°C，轉(zhuǎn)速為800-1000r/min，轉(zhuǎn)向為正向；將得到的淋洗液作為樣品，上樣體積為柱體積的1/10，定時收集，對收集到的各管采用分光光度法測定含硫化合物