一種復合微生物液體飼料添加劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于飼料添加劑領域，特別涉及一種復合微生物液體飼料添加劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]為了完善飼料的營養(yǎng)性，提高飼料的利用率，促進動物的生長、疾病的預防和完善飼料的品質，而在飼料中添加了飼料添加劑。目前，飼料添加劑可分為維生素添加劑、微量元素添加劑、氨基酸添加劑、香料及引誘劑、酶制劑、微生態(tài)制劑等。微生態(tài)制劑主要包括乳酸桿菌，芽孢桿菌，酵母菌等經培養(yǎng)而生產出的一種活菌制劑。微生態(tài)制劑種類較多，市場潛力巨大，但對于微生態(tài)制劑中液體復合微生物添加劑的研究報道很少。

【發(fā)明內容】

[0003]發(fā)明目的:本發(fā)明是針對現(xiàn)有技術的不足，提出的一種復合微生物液體飼料添加劑及其制備方法。該復合微生物液體飼料添加劑能抑制和阻止腸內有害菌的繁殖，使腸內菌群保持平衡，能使動物糞便中有害氣體的濃度得到了有效降低，改善了飼養(yǎng)環(huán)境，優(yōu)化生態(tài)環(huán)境，通過刺激腸道內免疫系細胞，增強了免疫作用，調節(jié)了動物胃腸道的微生態(tài)平衡，增強食欲，促進消化，預防疾病。
[0004]技術手段:為實現(xiàn)上述技術目的，本發(fā)明提出了一種復合微生物液體飼料添加劑，它是將植物乳桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌和側孢短芽孢桿菌分別進行單菌種培養(yǎng)，得到的種子培養(yǎng)液再分別進行發(fā)酵罐培養(yǎng)，最后把它們的培養(yǎng)液按重量百分比混合得到，所述制劑中植物乳桿菌的菌數(shù)彡3.0X109cfu/ml，糞腸球菌的菌數(shù)多3.0 X 109cfu/ml，嗜酸乳桿菌的菌數(shù)多3.0 X 109cfu/ml，凝結芽孢桿菌的菌數(shù)^ 3.0X 109cfu/ml，側孢短芽孢桿菌的菌數(shù)多3.0X 109cfu/ml, pH值為3.5?4.0。
[0005]其中，所述各菌種的種子培養(yǎng)液的重量百分數(shù)為:植物乳桿菌的種子培養(yǎng)液25 %?35 %，糞腸球菌的種子培養(yǎng)液15 %?20 %，嗜酸乳桿菌的種子培養(yǎng)液25 %?35 %，凝結芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液15 %?25 %，側孢短芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液10 %?15 %。
[0006]本發(fā)明進一步提出了上述的復合微生物液體飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟:
[0007](1)種子培養(yǎng)液的制備:
[0008]植物乳桿菌、奠腸球菌、嗜酸乳桿菌種子培養(yǎng)液的制備:分別將植物乳桿菌、奠腸球菌、嗜酸乳桿菌在無菌條件下接種于第一液體培養(yǎng)基中，pH調至7.2?7.5，35°C?37°C培養(yǎng)15?18小時，分別得到培養(yǎng)后的的植物乳桿菌的種子培養(yǎng)液含量多3.0X 109cfu/ml,培養(yǎng)后的奠腸球菌的種子培養(yǎng)液含量多3.0X 109cfu/ml，培養(yǎng)后的嗜酸乳桿菌的種子培養(yǎng)液含量彡 3.0X109cfu/ml ；
[0009]凝結芽孢桿菌種子培養(yǎng)液的制備:將凝結芽孢桿菌在無菌條件下接種于第二液體培養(yǎng)基中pH調至7.2?7.5，40°(:?45°(:培養(yǎng)42?44小時，得到培養(yǎng)后的凝結芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液含量彡3.0X109cfu/ml ;
[0010]側孢短芽孢桿菌種子培養(yǎng)液的制備:將側孢短芽孢桿菌在無菌條件下接種于第三液體培養(yǎng)基中，pH調至7.2?7.5，35°C?37°C培養(yǎng)46?48小時，得到的培養(yǎng)后的側孢短芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液含量彡3.0X109cfu/ml ;
[0011](2)復合微生物液體飼料添加劑的制備
[0012]分別將步驟(1)制備得到的植物乳桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌在無菌條件下分別接種于第一培養(yǎng)基中，pH調至7.2?7.5，接種量為培養(yǎng)基重量的2%，在35°C?37°C的發(fā)酵罐中靜置培養(yǎng)24?26小時；
[0013]凝結芽孢桿菌種子液在無菌條件下接種于第二液體培養(yǎng)基中，接種量為培養(yǎng)基重量的2%，在溶氧度為30%即發(fā)酵罐中氧氣的體積與發(fā)酵液的體積比為30%的條件下，40°C?45°C培養(yǎng)40?44小時，使菌體芽孢出孢率達40%，pH值為4.0?4.5，側孢短芽孢桿菌的種子液在無菌條件下接種于第三液體培養(yǎng)基中，pH調至7.2?7.5，接種量為培養(yǎng)基重量的2%，在溶氧度為30%即發(fā)酵罐中氧氣的體積與發(fā)酵液的體積比為30%的條件下，35°C?37°C培養(yǎng)36?40小時，使菌體芽孢出孢率達40%，pH值為6.0?7.0 ;
[0014]把制備得到的植物乳桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌和側孢短芽孢桿菌的培養(yǎng)液按其重量百分數(shù)為:植物乳桿菌的培養(yǎng)液25 %?35 %，奠腸球菌的培養(yǎng)液15%?20%，嗜酸乳桿菌的培養(yǎng)液25%?35%，凝結芽孢桿菌的培養(yǎng)液15%?25%，側孢短芽孢桿菌的培養(yǎng)液10%?15%混合得到的一種復合微生物液體飼料添加劑。
[0015]具體地，所述的第一液體培養(yǎng)基的各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸鈉5.0g、梓檬酸氫二錢2.0g、磷酸氫二鉀2.0g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25go
[0016]所述的第二液體培養(yǎng)基的各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸鎂1.0g、磷酸二氫鉀2.0g。
[0017]所述的第三液體培養(yǎng)基的各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g。
[0018]本發(fā)明所使用的菌種功能如下:
[0019](1)植物乳桿菌，促進糖類、蛋白質、微量元素的吸收；抑制致病菌的生長，維持腸道內菌群平衡；有一定的免疫調節(jié)作用。
[0020](2)糞腸球菌，能夠改善腸道內微生態(tài)平衡，防治動物腸道菌叢區(qū)系紊亂；能夠將飼料中的纖維變軟，提高飼料的轉化率；能夠產生多種抗菌物質，這些抗菌物質對動物體內常見的致病菌具有良好的抑制作用。
[0021](3)嗜酸乳桿菌，調整腸道菌群平衡，抑制腸道不良微生物的增殖，能分泌抗生物素類物質(嗜酸乳菌素、嗜酸桿菌素、乳酸菌素)，對腸道致病菌產生的拮抗作用。
[0022](4)凝結芽孢桿菌，凝結芽孢桿菌在腸道中定植，發(fā)酵產生大量抗菌凝固素、乳酸、氨基酸、維生素和多種消化酶；提高飼料品質，促進飼料的消化吸收，降低料重比；有效改善動物由于應激、過敏反應引起的菌群失調性腹泄。
[0023](5)側孢短芽孢桿菌，對輕型或重型急性腸炎等，均有明顯療效；能分泌大量幾丁質酶，分解病原真菌的細胞壁；能產生抗活性物質，并具有獨特的生物奪氧作用機制，抑制致病菌的生長繁殖。
[0024]有益效果:與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明利用五種有益微生物菌株制備的復合微生物液體飼料添加劑，在經過動物飲食攝取后，制劑中的有益微生物菌體在動物腸道內定植，促進動物腸道內有益菌的生長，維持腸道內平衡。制劑中的植物乳桿菌抑制病原菌的生長，糞腸球菌能產生多種抗菌物質，嗜酸乳桿菌能分敏抗生素類物質，側孢短芽孢桿菌能夠分泌幾丁質酶分解病原菌的細胞壁，抑制病原微生物。所以這種復合微生物液體飼料添加劑不僅能促進動物腸道內有益菌的生長，抑制病原微生物，能利用它們各自的優(yōu)點，使腸道內的微生物物達到一個平衡狀態(tài)，增強食欲，調節(jié)免疫功能并預防各類腸道疾病。
【具體實施方式】
[0025]下面結合以下具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但本發(fā)明不僅僅局限于以下實施例。
[0026]實施例1
[0027]—種復合微生物液體飼料添加劑及其制備方法，包括以下步驟:
[0028](1)種子培養(yǎng)液的制備
[0029]植物乳桿菌、奠腸球菌、嗜酸乳桿菌種子培養(yǎng)液的制備:分別將植物乳桿菌、奠腸球菌、嗜酸乳桿菌在無菌條件下接種于液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng)基的各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸鈉5.0g、檸檬酸氫二銨2.0g、磷酸氫二鉀2.0g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25g，pH調至7.2?7.5，35°C?37°C單菌種培養(yǎng)15?18小時，分別得到含量彡3.0 X 109cfu/ml的培養(yǎng)后的植物乳桿菌的種子培養(yǎng)液，含量多3.0X 109cfu/ml培養(yǎng)后的奠腸球菌的種子培養(yǎng)液，含量彡3.0X 109cfu/ml培養(yǎng)后的嗜酸乳桿菌的種子培養(yǎng)液。
[0030]凝結芽孢桿菌種子培養(yǎng)液的制備:將凝結芽孢桿菌在無菌條件下接種于液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng)基為:各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸鎂lg、磷酸二氫鉀2g，pH調至7.2?7.5，40°C?45°C培養(yǎng)46?48小時，含量多3.0X 109cfu/ml培養(yǎng)后的凝結芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液；
[0031]側孢短芽孢桿菌種子培養(yǎng)液的制備:將側孢短芽孢桿菌在無菌條件下接種于液體培養(yǎng)基中，所述的液體培養(yǎng)基為:各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g，PH調至7.2?7.5，35 °C?37 °C培養(yǎng)46?48小時，得到含量彡3.0X109cfu/ml培養(yǎng)后的側孢短芽孢桿菌的種子培養(yǎng)液。
[0032](2)復合微生物液體飼料添加劑的制備
[0033]分別將步驟(1)制備得到的植物乳桿菌、糞腸球菌、嗜酸乳桿菌、凝結芽孢桿菌和側孢短芽孢桿菌的種子液在無菌條件下分別接種于同一培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸鈉5.0g、檸檬酸氫二銨2.0g、磷酸氫二鉀2.0g、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.25g，接種量為培養(yǎng)基重量的2%，在35°C?37°C的發(fā)酵罐中靜置培養(yǎng)24-26小時，凝結芽孢桿菌的種子液無菌條件下接種于液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸鎂lg、磷酸二氫鉀2g，pH調至7.2?7.5，在溶氧度為30%即發(fā)酵罐中氧氣的體積與發(fā)酵液的體積比為30%的條件下，40 °C?45 °C培養(yǎng)40?44小時，使菌體芽孢出孢率達40 %，pH值為4.0?4.5，側孢短芽孢桿菌的種子液在無菌條件下接種于液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基各組分在1.0L蒸餾水中的含量為:蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、氯化鈉3.0g，pH調至7.2?7.5，在溶氧度為30%即發(fā)酵罐中氧氣的體積與發(fā)酵液的體積比為30%的條件下，35°C?37°C培養(yǎng)26?30小時，