一種促凝血肉豆蔻外殼有效成分及其提取分離方法、應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物提取技術領域，具體涉及一種促凝血肉豆蔻外殼有效成分及其提 取分離方法、應用。
【背景技術】
[0002] 肉豆蔻科植物肉豆蔻Houtt.)，又名迦拘勒、豆蔻等，為常 綠喬木，熱帶著名的香料和藥用植物，其種仁與假種皮皆可入藥。種仁味辛、微苦、性溫，具 有溫中澀腸、行氣消食功能，主治虛瀉、冷痢、脘腹脹痛等癥。假種皮味辛、性溫，主治脘腹脹 痛、不思飲食、吐瀉?，F(xiàn)代研究表明，肉豆蔻主要化學成分為木脂素類、苯丙素類和揮發(fā)油， 此外還含有黃酮、酚類、三萜及留體等。其具有止瀉、鎮(zhèn)靜、抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、抗腫瘤、降血 糖、保肝、抗氧化及免疫調節(jié)等作用。
[0003] 血液凝固簡稱凝血，是在內源性或（和）外源性凝血途徑下產(chǎn)生凝血酶原激活物， 凝血酶原激活物在凝血因子的作用下產(chǎn)生凝血酶，最后凝血酶使纖維蛋白原轉變?yōu)槔w維蛋 白，血液由溶膠狀態(tài)轉變?yōu)槟z狀態(tài)。凝血過程通常分為：①內源性凝血途徑；②外源性 凝血途徑；③共同凝血途徑。外源性凝血途徑是從組織因子暴露于血液而啟動，到因子X被 激活的過程；臨床上以凝血酶原時間（PT)測定來反映外源性凝血途徑的狀況。內源性凝血 途徑是指從因子XII激活，到因子X激活的過程；臨床上以活化部分凝血活酶時間（APTT) 來反映體內內源性凝血途徑的狀況。從因子X被激活至纖維蛋白形成，是內、外源共同凝血 途徑；主要包括凝血酶生成和纖維蛋白形成兩個階段。
[0004] 機體凝血系統(tǒng)包括凝血和抗凝兩個方面，兩者間的動態(tài)平衡是正常機體維持體內 血液流動狀態(tài)和防止血液丟失的關鍵。促凝血藥主要通過增強體內凝血因素或抑制抗凝血 因素，促使凝血，以達到凝血目的，用于治療各種出血疾病以及創(chuàng)傷性出血等。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種促凝血肉豆蔻外殼有效成分，同時提供一種促凝血肉 豆蔻外殼有效成分的提取分離方法和應用。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案： 一種促凝血肉豆蔻外殼有效成分的提取分離方法，包括以下步驟：1)以肉豆蔻外殼（肉 豆蔻科植物肉豆 Houtt.的干燥外殼)為原料，粉碎后70%乙醇60°C提取2次，每次lh，合并提取液，過 濾，減壓回收溶劑得乙醇總浸膏；乙醇總浸膏加入水溶解后，D-101大孔樹脂吸附上樣，靜 置過夜，后依次用水、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇和甲醇梯度洗脫，每個比例溶劑洗脫5個 柱體積，每次2000 mL，回收溶劑后，得到相應洗脫部分； 甲醇洗脫部分經(jīng)TLC薄層色譜檢測合并，得2個組分，按照所得組分極性由小到大（極 性判斷時所用體系為石油醚-丙酮系統(tǒng)）依次標記為組分1、2,組分1先進行硅膠H中壓液 相制備色譜，后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜、硅膠H柱色譜，得到化合物1、2;組分2先 進行硅膠H中壓液相制備色譜，后經(jīng)反復Sephadex LH-20凝膠柱色譜、硅膠H柱色譜，得到 化合物3。
[0007] 按照以上提取分離方法得到的促凝血肉豆蔻外殼有效成分。
[0008] 促凝血肉豆蔻外殼有效成分在制備促凝血藥物方面的應用。
[0009] 化合物1-3分別為（7S)_8' _(1'-苯并[3'，4']二氧雜環(huán)）_7_羥丙 基）苯 _2,4_ 二醇（75)_8 ' _(benzo[3 '，4 ' ]dioxol_l ' -yl)-7-hydroxypropyl) benzene-2, 4_diol)、0doratisol A、赤式-2_(4-稀丙基-2, 6-二甲氧基苯氧基）-1-(4_輕 基-3-甲氧基苯）丙烷-1-醇（￡>_/'7(^/'〇-2-(4-&1171-2,6-(1;[11161:11(?5^11611(?50-1-(4-117(11'0 xv-3-methoxvnhenvl)nrona.n-1-01)
! 本發(fā)明采用特殊的方法從肉豆蔻的外殼中分離得到了三個化合物，并對三個化合物的 體外促凝血效果的考察，結果表明，三個化合物具有良好的促凝血效果，可見，它們可以單 獨或組合用于制備促凝血劑。
【附圖說明】
[0010] 圖1為效果實驗時的凝血機制圖。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1 來源植物 肉豆蔻采集于海南省萬寧市興隆鎮(zhèn)南藥種植基地，為肉豆蔻科植物肉豆蔻fragransHoutt.的外殼。
[0012] 本文中的乙醇、甲醇濃度均為體積濃度。
[0013] 活性化合物的提取分離方法 (1) 肉豆蔻外殼粉碎后，用70%乙醇60°C微沸提取，共2次，每次1 h，合并提取液， 過濾，減壓回收溶劑得乙醇總浸膏；乙醇總浸膏加入適量水溶解后，D-101大孔樹脂吸附上 樣，靜置過夜，后依次用水、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇和甲醇梯度洗脫，每個比例溶劑洗 脫5個柱體積，每次2000 mL，回收溶劑后，得到相應洗脫部分； (2) 甲醇洗脫部分經(jīng)TLC薄層色譜檢測合并，得2個組分，按照所得組分極性由小到大 (極性判斷時所用體系為石油醚-丙酮系統(tǒng)）依次標記為組分1、2,組分1先進行硅膠H中 壓液相制備色譜，后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜、硅膠H柱色譜，得到化合物1、2;組分 2先進行硅膠H中壓液相制備色譜，后經(jīng)反復Sephadex LH-20凝膠柱色譜、硅膠H柱色譜， 得到化合物3。
[0014] 運用多種譜學技術鑒定結構如下： 化合物1，（75)-8'-(1'-苯并[3'，4']二氧雜環(huán)）-7-羥丙基）苯-2,4-二 醇，無色油狀物，已1-]\^餘々：288[]\1] +。111-匪1?(0)(：13,400 11〇心6.38(111，（1，方6.8 Hz, H-5), 6.80(1H, d,方8.0 Hz, H-5，），6.86(1H, d,方8.0 Hz, H-6), 6.92(1H， d，方8.0 Hz, H-6，），4.93(1H, d,方9.6 Hz, H-7), 2.12(1H, m, H-8), 1.98(1H， m，H-8)，2.85(lH，m，H-8，），2.70(lH，d，^1.6Hz，H-8，），5.96(2H，s，0-CH 2-0)。 13C-NMR(CDC13, 100 MHZ)8： 135.7 (C-l), 156.0 (C-2), 103.7 (C-3), 156.0 (C-4), 108.3 (C-5), 130.3 (C-6), 77.9 (C-7), 30.2 (C-8), 114.3 (C-n, 106.9 (CU, 148.0 (C-3'），147.4 (C-4'），108.3 (C-5'），119.7 (C-6'），25.4 (C-8'），0CH20 (101.2)〇
[0015] 化合物 2, Odoratisol A :黃色油狀物，EI-MS 餘々：356[M]+。iH-NMlUCDClh 400 MHZ)8：6.67(2H, s, H-2,6),5.06(1H, d, ^9.6 Hz, H-7),6. 34(1H, d, ^16.0 Hz, H-7，），3.45(1H, m, H-8), 6.08(1H, m, H-8，），1.38(3H, d,方6.8 Hz, H-9), 1.86(3H, d,方6.0 Hz, H-9，），3.89(6H, s, Me〇-3 和 Me〇-5), 3.88(3H, s, Me〇-3，）。 13C-NMR(CDC13, 100 MHZ)8： 133.2 (C-l), 103.5 (C-2), 147.1 (C-3), 134.9 (C-4), 147.1 (C-5), 103.5 (C-6), 93.9 (C-7), 45.6 (C-8), 17.5 (C-9), 132.2 (C-l，）， 109.4 (CU, 144.1 ((XT), 146.5 (C-f), 13