漿菌病、副球孢子菌病、孢子絲 菌病、或竇眼眶接合菌病。這些疾病的治療可以是通過(guò)給予本發(fā)明的一種重組sAd載體，該 載體在其表面上編碼或表達(dá)來(lái)自所選擇的感染物的免疫反應(yīng)刺激抗原。
[0021] 在一些實(shí)施例中，重組腺病毒或腺病毒載體按以下方式給予：肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、 經(jīng)皮、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、病灶內(nèi)、顱內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、前列腺內(nèi)、胸腔內(nèi)、氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、玻璃體內(nèi)、陰 道內(nèi)、直腸內(nèi)、局部、瘤內(nèi)、腹膜、皮下、結(jié)膜下、囊內(nèi)、粘膜、心包內(nèi)、臍內(nèi)、眼內(nèi)、□服、外用、 局部、通過(guò)吸入、通過(guò)注射、通過(guò)輸注、通過(guò)連續(xù)輸注、通過(guò)直接局部灌注浸浴靶細(xì)胞、通過(guò) 導(dǎo)管、通過(guò)灌洗、通過(guò)強(qiáng)飼、以霜?jiǎng)┬问健⒒蛞灾|(zhì)組合物形式。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，重組 腺病毒或腺病毒載體作為一種藥物組合物給予，該藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的載體、 稀釋劑或賦形劑，并且可以任選地包括一種佐劑。在一些實(shí)施例中，給予受試者至少一個(gè)劑 量（例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)劑量）的該組合物。在其他實(shí)施例中，給予受 試者至少兩個(gè)劑量（例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)劑量）的該組合物。在又一個(gè)實(shí) 施例中，該藥物組合物作為一種初免加強(qiáng)物或以一種初免加強(qiáng)方案給予受試者?？梢灾辽?約lx103病毒顆粒（vp)/劑量或介于lx10 1與lx10 14vp/劑量之間，優(yōu)選介于lx103與 lx1012vp/劑量之間，并且優(yōu)選介于lx105與lx10nvp/劑量之間給予受試者。該藥物組 合物可以在暴露前或診斷前例如 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、35、40、45、50、55 或 60 分鐘，2、4、6、10、15或24小時(shí)，2、3、5或7天，2、4、6或8周或甚至3、4或6個(gè)月給予，或可 以在診斷后或暴露于感染物后15-30分鐘，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、20、24、48或72小 時(shí)、2、3、5 或 7 天，2、4、6 或 8 周，3、4、6、或 9 個(gè)月，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20 年或更長(zhǎng) 時(shí)間給予受試者。當(dāng)治療疾?。ɡ?，AIDS或癌癥）時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物可以在癥狀 出現(xiàn)或最終診斷之前或者在診斷或癥狀明顯之后給予受試者?？梢栽诶缭\斷或臨床識(shí)別 癥狀之后立即給予藥物組合物，或者在診斷或檢測(cè)癥狀之后2、4、6、10、15或24小時(shí)，2、3、5 或7天、2、4、6或8周，或甚至3、4或6個(gè)月給予藥物組合物。
[0022] 在第四方面，本發(fā)明的特征在于一種產(chǎn)生本發(fā)明的重組腺病毒的方法，該方法包 括：在一種合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞；用本發(fā)明的第一方面的分離多核苷酸或本發(fā)明的第 二方面的重組載體轉(zhuǎn)染該細(xì)胞；允許多核苷酸或載體在該細(xì)胞中復(fù)制；以及從該培養(yǎng)基和 /或細(xì)胞收集所產(chǎn)生的重組腺病毒。在一些實(shí)施例中，該細(xì)胞是細(xì)菌細(xì)胞、植物細(xì)胞或哺乳 動(dòng)物細(xì)胞。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，哺乳動(dòng)物細(xì)胞是PER. 55K細(xì)胞或中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CH0)細(xì) 胞。
[0023] 定義
[0024] "腺病毒"意指中等大小的（90-100nm)、無(wú)包膜二十面體病毒，其包括衣殼和雙鏈 線性DNA基因組。腺病毒可以是天然存在的、但分離的腺病毒（例如，sAd4287、sAd4310A或 sAd4312)或者重組腺病毒（例如，復(fù)制缺陷型或可復(fù)制型sAd4287、sAd4310A或sAd4312， 或其嵌合變體）。
[0025] 如在此所用，"給予"意指一種向受試者給予一個(gè)劑量的藥物組合物（例如，本發(fā) 明的重組腺病毒）的方法。于在此所述的方法中利用的組合物可以例如以下方式給予：肌 內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、經(jīng)皮、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、病灶內(nèi)、顱內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、前列腺內(nèi)、胸腔內(nèi)、氣管內(nèi)、 鼻內(nèi)、玻璃體內(nèi)、陰道內(nèi)、直腸內(nèi)、局部、瘤內(nèi)、腹膜、皮下、結(jié)膜下、囊內(nèi)、粘膜、心包內(nèi)、臍內(nèi)、 眼內(nèi)、口服、外用、局部、通過(guò)吸入、通過(guò)注射、通過(guò)輸注、通過(guò)連續(xù)輸注、通過(guò)直接局部灌注 浸浴靶細(xì)胞、通過(guò)導(dǎo)管、通過(guò)灌洗、通過(guò)強(qiáng)飼、以霜?jiǎng)┬问?、或以脂質(zhì)組合物形式。優(yōu)選給予 方法可以根據(jù)不同因素（例如，正在給予的組合物的組分以及正在治療的病狀的嚴(yán)重度） 而改變。
[0026] 在整個(gè)說(shuō)明書(shū)以及權(quán)利要求中，詞語(yǔ)"包括"或變體例如"包括了"或"已包括"應(yīng) 當(dāng)被理解為是指包含了一個(gè)提到的整體或多個(gè)整體的組，但不是排除任何其他的整體或多 個(gè)整體的組。
[0027] 腺病毒基因組區(qū)域的"缺失"意指一個(gè)指定基因組區(qū)域（例如，El、E2、E3和/或 E4區(qū)），或該指定區(qū)域內(nèi)任何特定開(kāi)放閱讀框的部分或完全去除、破壞（例如，通過(guò)插入突 變）或功能失活（例如，通過(guò)錯(cuò)義突變）。
[0028] "基因產(chǎn)物"意指包括mRNA或由基因轉(zhuǎn)錄的其他核酸（例如，微RNA)以及由這 些mRNA翻譯的多肽。在一些實(shí)施例中，基因產(chǎn)物是來(lái)自病毒（例如，HIV)并且許多包括 例如描述于例如待決的美國(guó)公開(kāi)號(hào)2012/0076812中的病毒蛋白或其片段的任何一種或多 種。在一些實(shí)施例中，基因產(chǎn)物是治療性基因產(chǎn)物，包括但不限于干擾素蛋白、因子VIII、因 子IX、促紅細(xì)胞生成素、a-1抗胰蛋白酶、降鈣素、葡糖腦苷脂酶、生長(zhǎng)激素、低密度脂蛋白 (LDL)、受體IL-2受體及其拮抗劑、胰島素、珠蛋白、免疫球蛋白、催化抗體、白介素、胰島素 樣生長(zhǎng)因子、超氧化物歧化酶、免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑、甲狀旁腺激素和干擾素、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、組 織纖溶酶原激活劑以及集落刺激因子。
[0029] "異源核酸分子"意指可以結(jié)合到例如本發(fā)明的腺病毒或其多核苷酸或載體中，以 用于隨后表達(dá)由異源核酸分子編碼的感興趣的基因產(chǎn)物或其片段的任何外源核酸分子。在 一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，異源核酸分子編碼一種抗原性或治療性基因產(chǎn)物或其片段，該基因產(chǎn) 物或其片段為細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)或真菌蛋白或其片段（例如，編碼一種或多種HIV或SIV Gag、Pol、Env、Nef、Tat、Rev、Vif、Vpr或Vpu基因產(chǎn)物或其片段的核酸分子）。異源核酸 分子是通常不與野生型腺病毒中發(fā)現(xiàn)的其他核酸分子相關(guān)聯(lián)的分子。
[0030] "分離的"意指從其天然環(huán)境的組分中分開(kāi)的、回收的或純化的。
[0031] "藥物組合物"意指含有一種藥學(xué)或生物學(xué)活性劑（如本發(fā)明的重組腺病毒載體， 優(yōu)選包括編碼感興趣的抗原性或治療性基因產(chǎn)物或其片段的異源核苷酸序列）的任何組 合物，該組合物適于給予受試者并且治療疾病（例如，癌癥或AIDS)或減少或改善該疾病的 一個(gè)或多個(gè)癥狀。出于本發(fā)明的目的，藥物組合物包括疫苗，并且適于遞送治療或生物活性 劑的藥物組合物可以包括例如片劑、軟膠囊、膠囊、丸劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、乳劑、溶液、 凝膠、水凝膠、□服凝膠、糊劑、滴眼劑、軟膏劑、霜?jiǎng)⒏嗨?、浸液、遞送裝置、栓劑、灌腸劑、 注射劑、植入物、噴劑或氣霧劑。任何這些配制物可以通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知的且認(rèn)可的方法 制備。參見(jiàn)，例如雷明頓：制藥科學(xué)與實(shí)踐（第21版），A.R.熱那羅編，利平科特?威廉姆斯 & 威爾金斯出版，2005(Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(21sted.)，ed. A.R.Gennaro，LippincottWilliams&Wilkins，2005);和制劑技術(shù)百科全書(shū)，J?斯沃布里克 編，InformaHealthcare出片反，2006(EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology,ed. J.Swarbrick,InformaHealthcare, 2006)，各自通過(guò)引用結(jié)合在此。
[0032] "藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑、載體或佐劑"意指為受試者生理上可接受的同 時(shí)保留與其一起給予的藥物組合物的治療特性的稀釋劑、賦形劑、載體或佐劑。一種示例性 藥學(xué)上可接受的載體是鹽水。其他生理上可接受的稀釋劑、賦形劑、載體或佐劑以及它們的 配制物是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的（參見(jiàn)，例如美國(guó)公開(kāi)號(hào)2012/0076812)。
[0033] "部分"和"片段"意指一個(gè)整體的一部分。一部分可以包括一個(gè)多核苷酸或多肽 序列區(qū)域的全長(zhǎng)的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。對(duì)于 多核苷酸，例如，一部分可以包括一個(gè)參考多核苷酸分子的至少5、6、7、8、9、10、20、30、40、 50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、 6000、7000、8000、9000、10000、15000、20000、25000、30000、35000或更多個(gè)連續(xù)的核苷酸。 對(duì)于多肽，例如，一部分可以包括一個(gè)參考多肽分子的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、25、50、75、90、100、125、150、175、200、225、250、275、300或350或更多 個(gè)連續(xù)的氨基酸。
[0034] "促進(jìn)免疫反應(yīng)"意指在藥物組合物（例如，疫苗）所給予的受試者中引發(fā)針對(duì)例 如一種或多種感染物（例如，細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)、真菌或其組合）或蛋白靶標(biāo)的體液反應(yīng) (例如，抗體的產(chǎn)生）或細(xì)胞反應(yīng)（例如，T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的 活化）。
[0035] 關(guān)于載體或病毒的"重組"，意指已在體外操縱的載體或病毒，如包括異源核苷酸 序列（例如，編碼抗原性或治療性基因產(chǎn)物的序列）的載體或病毒或相對(duì)于野生型病毒E1、 E3和/或E4區(qū)具有病毒El、E3和/或E4區(qū)中的改變、破壞或缺失的載體或病毒。
[0036] "序列一致性"或"序列相似性"意指兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸序列、或兩個(gè)或更多個(gè) 核苷酸序列之間的一致性或相似性以這些序列之間的一致性或相似性來(lái)表示。序列一致 性可以以"一致性百分比（％)"來(lái)測(cè)量，其中百分比越高，序列之間共享的一致性越多。序 列相似性可以以相似性百分比（考慮保守的氨基酸取代）來(lái)測(cè)量；百分比越高，序列之間 共享的相似性越多。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)方法排列時(shí)，核酸或氨基酸序列的同系物或直系同源物具 有相對(duì)高程度的序列一致性/相似性。使用默認(rèn)設(shè)置的序列分析軟件（例如，威斯康星大 學(xué)生物技術(shù)中心（麥迪遜大學(xué)道1710,威斯康星州53705,遺傳計(jì)算組的序列分析軟件包 (SequenceAnalysisSoftwarePackageoftheGeneticsComputerGroup,University ofWisconsinBiotechnologyCenter, 1710UniversityAvenue,Madison,ffI53705))典型 地測(cè)量序列同一性。這種軟件可以通過(guò)對(duì)不同的取代、缺失、及其他修飾的同源性的程度進(jìn) 行賦值而將相似的序列進(jìn)行匹配。
[0037] "受試者"是脊椎動(dòng)物，如哺乳動(dòng)物（例如，靈長(zhǎng)類(lèi)和人類(lèi)）。哺乳動(dòng)物還包括但不 限于農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物（如牛）、運(yùn)動(dòng)動(dòng)物（例如馬）、寵物（如貓和狗）、小鼠以及大鼠。有待根據(jù) 在此所述的方法進(jìn)行治療的受試者（例如，患有如癌癥的疾病和/或由感染物例如細(xì)菌、病 毒、真菌或寄生蟲(chóng)引起的疾病的受試者）可以是已經(jīng)過(guò)醫(yī)師診斷患有這種病狀的受試者。 可以通過(guò)任何適合的手段進(jìn)行診斷。體內(nèi)感染發(fā)展正受到阻止的受試者可能或可能未接收 這種診斷。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，有待根據(jù)本發(fā)明治療的受試者可以是已經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)測(cè) 試或可以是由于存在一種或多種風(fēng)險(xiǎn)因素（例如，暴露于生物劑如病毒）而已被鑒別（未 檢查）為處于高風(fēng)險(xiǎn)的人。
[0038] 如在此所使用，并且如在本領(lǐng)域中很好地理解，"治療"是一種用于獲得有益的或 所希望的結(jié)果（如臨床結(jié)果）的途徑。有益的或所希望的結(jié)果可以包括但不限于一種或多 種癥狀或病狀的緩和或改善；疾病、病癥或病狀的程度的縮減；疾病、病癥或病狀的狀態(tài)的 穩(wěn)定（即，未惡化）；疾病、病癥或病狀的傳播的阻止；疾病、病癥或病狀的進(jìn)展的延遲或減 緩；疾病、病癥或病狀的改善或減輕；以及緩解（不管是部分緩解還是完全緩解），不管是可 檢測(cè)的還是不可檢測(cè)的。"減輕"疾病、病癥或病狀意指與缺乏治療下的程度或時(shí)間進(jìn)程相 比，該疾病、病癥或病狀的程度和/或不良臨床表現(xiàn)減少和/或進(jìn)展的時(shí)間進(jìn)程被減緩或加 長(zhǎng)。
[0039] 如在此所用，術(shù)語(yǔ)"疫苗"被定義為用于激起免疫反應(yīng)的物質(zhì)，并且可以在將該疫 苗給予受試者之后賦予免疫力。
[0040] "載體"意指包括來(lái)自一種病毒物種如腺病毒物種（例如，sAd4287、sAd4310A或 sAd4312)的一種或多種基因（非結(jié)構(gòu)性的或結(jié)構(gòu)性的）或其片段的組合物，其可以用于將 來(lái)自病毒源或非病毒源的一種或多種異源基因傳遞到一種宿主或受試者中。病毒載體的核 酸物質(zhì)可以包裹在例如脂質(zhì)膜中或被結(jié)構(gòu)蛋白（例如，衣殼蛋白）包裹，這些結(jié)構(gòu)蛋白可以 包括一種或多種病毒多肽（例如，糖蛋白）。病毒載體可以用于感染受試者的細(xì)胞，這進(jìn)而 促進(jìn)病毒載體的一種或多種異源基因翻譯為蛋白質(zhì)產(chǎn)物。
[0041] 如在此所用，術(shù)語(yǔ)"病毒"被定義為在宿主細(xì)胞外不能生長(zhǎng)或再生并且感染哺乳動(dòng) 物（例如，人類(lèi)）或鳥(niǎo)類(lèi)的感染物。
[0042] 本發(fā)明的其他特征與優(yōu)點(diǎn)從以下詳細(xì)說(shuō)明、附圖以及權(quán)利要求中將會(huì)是清楚的。
[0043] 附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明
[0044] 圖1為sAd4287的基因組組織的示意性圖譜。
[0045] 圖2為質(zhì)粒sAdApt4287.Empty的示意性圖譜。
[0046] 圖3為質(zhì)粒pBr/sAd4287.pIX-pV的示意性圖譜。
[0047] 圖4為質(zhì)粒pBr/sAd4287.Psil-rlTR的示意性圖譜。
[0048] 圖5示出用于獲得質(zhì)粒PBr/sAd4287.PsiI-rITR.dE3的克隆策略以及pBr/ sAd4287.Psil-rlTR.dE3 相對(duì)于其親本質(zhì)粒pBr/sAd4287.Psil-rlTR的示意性圖譜。
[0049]圖 6 示出質(zhì)粒pBr/sAd4287.Psil-rlTR.dE3.dE4相對(duì)于其親本質(zhì)粒pBr/sAd4287. Psil-rlTR.dE3的示意性圖譜。
[0050] 圖7示出用于獲得質(zhì)粒sAdApt4287.Elbtg.Empty的克隆策略以及sAdApt4287. Elbtg.Empty相對(duì)于其親本質(zhì)粒sAdApt4287.Empty的示意性圖譜。
[0051] 圖8為sAd4310#13-l(sAd4310A)的基因組組織的示意性圖譜。
[0052] 圖9為質(zhì)粒sAdApt4310A.Empty的示意性圖譜。
[0053] 圖10為質(zhì)粒pBr/sAd4310A.pIX-pV的示意性圖譜。
[0054]圖 11 為質(zhì)粒pBr/sAd4310A.RsrII-rlTR的示意性圖譜。
[0055]圖12示出pBr/sAd4310A.RsrII-rlTR.dE3相對(duì)于其親本質(zhì)粒pBr/sAd4310A. RsrII-rlTR的示意性圖譜。
[0056]圖13不出質(zhì)粒pBr/sAd4310A.RsrII-rlTR.dE3.dE4相對(duì)于其親本質(zhì)粒pBr/ sAd4310A.RsrII-rlTR.dE3的示意性圖譜。
[0057] 圖14示出用于獲得質(zhì)粒sAdApt4310A.Elbtg.Empty的克隆策略以及 sAdApt4310A.Elbtg.Empty相對(duì)于其親本質(zhì)粒sAdApt4310A.Empty的不意性圖譜。
[0058] 圖15為sAd4312的基因組組織的示意性圖譜。
[0059] 圖16為質(zhì)粒sAdApt4312.Empty的示意性圖譜。
[0060] 圖17為質(zhì)粒pBr/sAd4312.pIX-pV的示意性圖譜。
[0061] 圖18為質(zhì)粒pBr/sAd4312.pV-rITR的示意性圖譜。
[0062] 圖19示出用于獲得質(zhì)粒pBr/sAd4312.pV-rITR.dE3的克隆策略以及pBr/ sAd4312.pV-rITR.dE3相對(duì)于其親本質(zhì)粒pBr/sAd4312.pV-rITR的示意性圖譜。
[0063]圖 20 示出質(zhì)粒pBr/sAd4312.pV-rITR.dE3.dE4 相對(duì)于其親本質(zhì)粒pBr/sAd4312. pV-rITR.dE3的示意性圖譜。
[0064]圖 21 為質(zhì)粒sAdApt4312.Elbtg.Empty的示意性圖譜。
[0065] 圖22A是示出在撒哈拉以南人（n= 144;上）和獼猴（n= 108;下）中的相對(duì) sAd4287特異性中和抗體（NAb)反應(yīng)的餅圖。示出如通過(guò)基于熒光素酶的病毒中和測(cè)定所 評(píng)定的，落入四個(gè)NAb滴度類(lèi)別（〈18 =陰性，18-200 =低，201-1000 =高，且>1000 =高） 中每一個(gè)的個(gè)體的相對(duì)數(shù)目。
[0066] 圖22B是示出在撒哈拉以南人（n= 144;上）和獼猴（n= 108;下）中的相對(duì) sAd4310A特異性中和抗體（NAb)反應(yīng)的餅圖。示出如通過(guò)基于熒光素酶的病毒中和測(cè)定所 評(píng)定的，落入四個(gè)NAb滴度類(lèi)別（〈18 =陰性，18-200 =低，201-1000 =高，且>1000 =高） 中每一個(gè)的個(gè)體的相對(duì)數(shù)目。
[0067] 圖22C是示出在撒哈拉以南人（n= 144;上）和獼猴（n= 108;下）中的相對(duì) sAd4312特異性中和抗體（NAb)反應(yīng)的餅圖。示出如通過(guò)基于熒光素酶的病毒中和測(cè)定所 評(píng)定的，落入四個(gè)NAb滴度類(lèi)別（〈18 =陰性，18-200 =低，201-1000 =高，且>1000 =高） 中每一個(gè)的個(gè)體的相對(duì)數(shù)目。
[0068] 圖23A是示出如通過(guò)在免疫后第0、7、14、21和28天經(jīng)由Db/AL11四聚物結(jié)合測(cè)定 測(cè)量008+1'細(xì)胞反應(yīng)所評(píng)定的，在用107、10 8和109個(gè)病毒顆粒（叩）的載體免疫的0578176 小鼠中由具有SIVmac239Gag的sAd4287載體誘導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)的圖。
[0069] 圖23B是示出如通過(guò)在免疫后第0、7、14、21和28天經(jīng)由Db/AL11四聚物結(jié)合測(cè)定 測(cè)量008+1'細(xì)胞反應(yīng)所評(píng)定的，在用107、10 8和109個(gè)病毒顆粒（叩）的載體免疫的0578176 小鼠中由具有SIVmac239Gag的sAd4310A載體誘導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)的圖。
[0070] 圖24A是示出如在免疫后第28天通過(guò)IFN-丫ELISP0T測(cè)定使用來(lái)自C57BL/6小 鼠的脾細(xì)胞所測(cè)定的，由l〇Vp的sAd4287、sAd4310A以及可復(fù)制型sAd4287(rcsAd4287)誘 導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)的圖。測(cè)量針對(duì)重疊Gag肽（Gag)、顯性⑶8+T細(xì)胞表位AL11、亞顯性⑶8+T 表位KV9、以及CD4+T細(xì)胞表位DD13的IFN-yELISP0T反應(yīng)。
[0071] 圖24B是示出如在免疫后第28天通過(guò)IFN-丫ELISP0T測(cè)定使用來(lái)自C57BL/6小 鼠的脾細(xì)胞所測(cè)定的，由l〇svp的sAd4287、sAd4310A以及rcsAd4287誘導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)的圖。 測(cè)量針對(duì)Gag、顯性⑶8+T細(xì)胞表位AL11、亞顯性⑶8+T表位KV9、以及⑶4+T細(xì)胞表位DD13 的IFN-yELISPOT反應(yīng)。
[0072] 圖24C是示出如在免疫后第28天通過(guò)IFN-丫ELISP0T測(cè)定使用來(lái)自C57BL/6小 鼠的脾細(xì)胞所測(cè)定的，由l〇7vp的sAd4287、sAd4310A以及rcsAd4287誘導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)的圖。 測(cè)量針對(duì)Gag、顯性⑶8+T細(xì)胞表位AL11、亞顯性⑶8+T表位KV9、以及⑶4+T細(xì)胞表位DD13 的IFN-yELISPOT反應(yīng)。
[0073] 詳細(xì)說(shuō)明
[0074] 作為宏基因組學(xué)研究的一部分，先前我們已鑒別出多種新型病毒，包括來(lái) 自獼猴的若干新型腺病毒（漢德利等人，細(xì)胞，151 (2) : 253-266, 2012(Handleyet al.Cell. 151 (2) :253-266, 2012))。在本發(fā)明中，我們分離、擴(kuò)增并且純化出三種新型猿猴 腺病毒（sAds)，即sAd4287、sAd4310#13-l(sAd4310A)和sAd4312。這三種sAd是獲自上述 獼猴宏基因組學(xué)研究。這些病毒完全是新型的，并且它們的全序列先前從未被報(bào)道過(guò)。鑒 于這些病毒還未被官方"命名"，它們還未具有官方腺病毒號(hào)。因此，通篇使用的命名代表我 們內(nèi)部的實(shí)驗(yàn)室名稱(chēng)。
[0075] 新型sAd的完整基因組序列以及我們針對(duì)每種病毒生成的載體系統(tǒng)在以下進(jìn)行 詳細(xì)描述。我們生成表達(dá)多種轉(zhuǎn)基因（包括熒光素酶和SIVGag)的重組sAd4287、sAd4310A 和sAd4312載體。另