和包含SEQ ID NO: 26中顯示的氨基酸序列的 CDR3,并且 所述重鏈可變區(qū)含有包含SEQ ID NO: 27中顯示的氨基酸序列的⑶R1，包含SEQ ID NO: 28中顯示的氨基酸序列的⑶R2,和包含SEQ ID NO: 29中顯示的氨基酸序列的⑶R3， 并且在選自SEQ ID NO: 24、25和26中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取 代、缺失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸，和/或 在選自SEQ ID NO: 27、28和29中顯示的氨基酸序列的至少一條氨基酸序列中取代、 缺失、插入和/或添加1至3個(gè)氨基酸。
[0053] 在（2)、⑷和（6)的實(shí)施方案中，待取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸數(shù)目沒 有特別限制，只要所述抗體具有對(duì)人ADAM28的特異性結(jié)合活性，并且具有抑制人ADAM28 的酶活性的活性。它優(yōu)選為每一個(gè)CDR序列2個(gè)氨基酸以內(nèi)，更優(yōu)選一個(gè)氨基酸。其中取 代、缺失、插入和/或添加氨基酸的CDR序列的數(shù)目沒有特別限制，只要所述抗體具有對(duì)人 ADAM28的特異性結(jié)合活性，并且具有抑制ADAM28的酶活性的活性。它優(yōu)選為每一個(gè)輕鏈可 變區(qū)2以內(nèi)，更優(yōu)選為一，并且優(yōu)選為每一個(gè)重鏈可變區(qū)2以內(nèi)，更優(yōu)選為1?？梢栽谳p鏈可 變區(qū)和重鏈可變區(qū)兩者或它們的任一者中進(jìn)行氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加。
[0054] 在（2)、（4)和（6)的實(shí)施方案中，優(yōu)選僅在輕鏈可變區(qū)中CDR3的氨基酸序列中取 代、缺失、插入和/或添加1 - 3 (優(yōu)選1或2,更優(yōu)選1)個(gè)氨基酸。
[0055] 用于用其它期望的氨基酸取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的方法的實(shí)例包括 定點(diǎn)誘變法(Hashimoto-Gotoh, T, Mizuno, T, Ogasahara, Y, 和 Nakagawa, M. (1995) An oligodeoxyribonucleotide-directed dual amber method for site-directed mutagenesis. Gene 152, 271-275; Zoller, MJ, 和 Smith, M. (1983) Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragments cloned into M13 vectors. Methods EnzymoI. 100, 468-500; Kramer, ff, Drutsa, V, Jansen, HW, Kramer, B, Pflugfelder, M,和 Fritz, HJ (1984) The gapped duplex DNA approach to oligonucleotide-directed mutation construction. Nucleic Acids Res. 12, 9441-9456; Kramer ff,和 Fritz HJ (1987) Oligonucleotide-directed construction of mutations via gapped duplex DNA Methods. EnzymoI. 154, 350-367, KunkeI, TA (1985) Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection. Proc Natl Acad Sci U S A. 82, 488-492)。使用這些方法，抗體中期望的氨 基酸可以被其它目標(biāo)氨基酸取代。此外，使用文庫技術(shù)諸如框架改組（Mol Immunol. 2007 Apr; 44(11):3049-60)和CDR修復(fù)（US2006 /0122377)等，框架或CDR中的氨基酸也可以 被其它適當(dāng)?shù)陌被崛〈?br>[0056] 在本發(fā)明的抗體中，作為待連接至CDR的抗體的框架區(qū)（FR)，選擇使得CDR形成良 好抗原結(jié)合位點(diǎn)的框架。盡管待用于本發(fā)明的抗體的FR沒有特別限制并且可以使用任何 FR，但優(yōu)選使用人抗體的FR。作為人抗體的FR，可以使用具有天然序列的FR，或者可以根據(jù) 需要取代、缺失、添加和/或插入等具有天然序列的框架區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸，從而使 得CDR將形成適當(dāng)?shù)目乖Y(jié)合位點(diǎn)。例如，可以通過測(cè)量和評(píng)價(jià)具有含取代的氨基酸的FR 的抗體與抗原的結(jié)合活性來選擇具有期望特性的突變體FR序列（Sato, K.等人，Cancer Res. (1993)53，851-856)。
[0057] 在⑴和⑵的抗體中，人抗體的Vkl的FR(Kabat數(shù)據(jù)庫）優(yōu)選用于輕鏈，并且 人抗體的VH5的FR(Kabat數(shù)據(jù)庫）優(yōu)選用于重鏈。
[0058] 在⑶和⑷的抗體中，人抗體的Vk2的FR(Kabat數(shù)據(jù)庫）優(yōu)選用于輕鏈，并且 人抗體的VH6的FR(Kabat數(shù)據(jù)庫）優(yōu)選用于重鏈。
[0059] 在（5)和（6)的抗體中，人抗體的Vk2的FR(Kabat數(shù)據(jù)庫）優(yōu)選用于輕鏈，并且 人抗體的VH3的FR(Kabat數(shù)據(jù)庫）優(yōu)選用于重鏈。
[0060] 用于本發(fā)明的抗體的恒定區(qū)沒有特別限制，并且可以使用任何恒定區(qū)。用于本發(fā) 明的抗體的恒定區(qū)的優(yōu)選實(shí)例包括人抗體的恒定區(qū)（源自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM 等的恒定區(qū)）。例如，〇丫1、〇丫2、〇丫3、〇丫4、〇4、〇3、〇(11、〇€[2、06可用于!1鏈中，并 且Ck、CX可用于L鏈中。
[0061] 在（1) - (4)的抗體中，人抗體的CK的恒定區(qū)優(yōu)選用于輕鏈，并且人抗體的Cy 1 的恒定區(qū)優(yōu)選用于重鏈。
[0062] 在（5)和（6)的抗體中，人抗體的C κ的恒定區(qū)優(yōu)選用于輕鏈，并且人抗體的Cy 1 的恒定區(qū)優(yōu)選用于重鏈。
[0063] 優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體包括以下： (1'）包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 17 中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 18中顯示的氨基酸序列； (3'）包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 19 中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 20中顯示的氨基酸序列；和 (5'）包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 30 中顯示的氨基酸序列，并且所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO: 31中顯示的氨基酸序列。
[0064] 分別地，上述（Γ )的抗體對(duì)應(yīng)于上述（1)的抗體的優(yōu)選實(shí)施方案，并且上述（3'） 的抗體對(duì)應(yīng)于上述（3)的抗體的優(yōu)選實(shí)施方案。分別地，上述（5'）的抗體對(duì)應(yīng)于上述（5) 的抗體的優(yōu)選實(shí)施方案。
[0065] 本發(fā)明提供了含有編碼上述本發(fā)明的抗體的核苷酸序列的多核苷酸。所述多核苷 酸可以是DNA或RNA，或DNA/ RNA嵌合體。所述多核苷酸可以是雙鏈或單鏈的。當(dāng)所述多 核苷酸是雙鏈的時(shí)，它可以是雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA = RNA雜合體。
[0066] 本發(fā)明的多核苷酸涵蓋含有編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)兩者 的核苷酸序列的多核苷酸，和含有編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列的多核苷 酸和含有編碼本發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列的多核苷酸的組合。
[0067] 本發(fā)明的多核苷酸可以基于本發(fā)明的抗體的氨基酸序列的信息、已知序列信息和 本說明書中序列表中描述的序列信息并且通過利用已知的基因重組技術(shù)容易地制備。例 如，合適的引物基于序列信息設(shè)計(jì)，編碼構(gòu)成本發(fā)明的抗體的元件的DNA通過PCR反應(yīng)擴(kuò) 增，DNA片段通過適當(dāng)?shù)拿钢T如連接酶等連接，由此可以產(chǎn)生本發(fā)明的多核苷酸?；蛘?，編 碼每個(gè)元件的多核苷酸可以基于本發(fā)明的抗體的氨基酸序列的信息通過多核苷酸合成儀 進(jìn)行合成。
[0068] 獲得的編碼本發(fā)明的抗體的多核苷酸可以，根據(jù)目的，直接使用，或者當(dāng)期望時(shí)用 限制性酶消化或添加接頭后使用。所述多核苷酸可以具有ATG作為5'末端側(cè)上的翻譯起 始密碼子，并且可以具有TAA、TGA或TAG作為3'末端側(cè)上的翻譯終止密碼子。這些翻譯起 始密碼子和翻譯終止密碼子可以使用合適的合成的DNA適配體進(jìn)行添加。
[0069] 本發(fā)明的多核苷酸優(yōu)選是分離的或純化的。本發(fā)明的分離或純化的多核苷酸具有 通常50 %或更高，優(yōu)選70 %或更高，更優(yōu)選90 %或更高，最優(yōu)選95 %或更高（例如，基本上 100%)的純度（本發(fā)明的多核苷酸的重量與總多核苷酸重量的比率）。
[0070] 本發(fā)明提供了包含上述本發(fā)明的多核苷酸的載體。本發(fā)明的載體涵蓋包含含有編 碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)兩者的核苷酸序列的多核苷酸的載體，和包含 含有編碼本發(fā)明的抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列的多核苷酸的載體和包含含有編碼本 發(fā)明的抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列的多核苷酸的載體的組合。所述載體優(yōu)選是分離的 或純化的。所述載體的實(shí)例包括表達(dá)載體、克隆載體等，其可以根據(jù)對(duì)象來選擇。優(yōu)選地， 所述載體是表達(dá)載體。表達(dá)載體可以表達(dá)本發(fā)明的抗體。表達(dá)載體可以通過將本發(fā)明的多 核苷酸可操作地連接至合適的表達(dá)載體中啟動(dòng)子的下游來產(chǎn)生。載體的種類包括，例如，質(zhì) 粒載體、病毒載體等，其可以根據(jù)待使用的宿主適當(dāng)?shù)剡x擇。
[0071] 作為宿主，使用埃希氏菌屬（Escherichia)(大腸桿菌（Escherichia coli)等）、 芽孢桿菌屬（Bacillus)(枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)等）、酵母（釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)等）、昆蟲細(xì)胞（源自甘藍(lán)夜蛾（Mamestra brassicae)的幼 蟲的建立的細(xì)胞系（草地貪夜蛾（Spodoptera frugiperda)細(xì)胞；Sfcell )等）、昆蟲（家 蠶（Bombyx mori)的幼蟲等）、哺乳動(dòng)物細(xì)胞（大鼠神經(jīng)細(xì)胞，猴細(xì)胞（C0S-7等）、中國倉 鼠細(xì)胞（CH0細(xì)胞等）等）等。
[0072] 哺乳動(dòng)物的實(shí)例包括，但不限于，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物諸如嚙齒類動(dòng)物，諸如小鼠、大鼠、倉鼠 和豚鼠等，兔等，家畜動(dòng)物諸如豬、牛、山羊、馬、綿羊、貂等，伴侶動(dòng)物諸如狗、貓等，靈長類 動(dòng)物諸如人、猴、食蟹猴（Macaca fascicularis)、恒河猴（Macaca mulatta)、狨猴、猩猩、黑 猩猩等，等。
[0073] 質(zhì)粒載體的實(shí)例包括源自大腸桿菌的質(zhì)粒載體（例如，pBR322、pBR325、pUC12、 pUC13)，源自枯草芽孢桿菌的質(zhì)粒載體（例如，pUB110、pTP5、pC194)，源自酵母的質(zhì)粒載體 (例如，pSH19、pSH15)等，其可以根據(jù)待使用的宿主種類和使用對(duì)象適當(dāng)?shù)剡x擇。
[0074] 病毒載體的種類可以根據(jù)待使用的宿主種類和使用對(duì)象適當(dāng)?shù)剡x擇。例如，當(dāng)昆 蟲細(xì)胞被用作宿主時(shí)，可以使用桿狀病毒載體等。當(dāng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞被用作宿主時(shí)，可以使用 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，諸如莫洛尼鼠白血病病毒載體、慢病毒載體、辛德畢斯病毒載體等、腺病 毒載體、皰瘆病毒載體、腺伴隨病毒載體、細(xì)小病毒載體、痘苗病毒載體、仙臺(tái)病毒載體等。
[0075] 啟動(dòng)子可以根據(jù)待使用的宿主種類進(jìn)行選擇，并且可以選擇能夠在宿主中起始轉(zhuǎn) 錄的啟動(dòng)子。例如，當(dāng)宿主是埃希氏菌屬時(shí)，trp啟動(dòng)子、Iac啟動(dòng)子、T7啟動(dòng)子等是優(yōu)選的。 當(dāng)宿主是芽孢桿菌屬時(shí)，SPOl啟動(dòng)子、SP02啟動(dòng)子、penP啟動(dòng)子等是優(yōu)選的。當(dāng)宿主是酵 母時(shí)，PH05啟動(dòng)子、PGK啟動(dòng)子等是優(yōu)選的。當(dāng)宿主是昆蟲細(xì)胞時(shí)，多角體蛋白啟動(dòng)子、PlO 啟動(dòng)子等是優(yōu)選的。當(dāng)宿主是哺乳動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，亞基因組（26S)啟動(dòng)子、CMV啟動(dòng)子、SRa 啟動(dòng)子等是優(yōu)選的。
[0076] 本發(fā)明的載體可以含有用于抗體分泌的信號(hào)序列。作為當(dāng)抗體產(chǎn)生于大腸桿菌的 周質(zhì)中時(shí)抗體分泌的信號(hào)序列，可以使用PelB信號(hào)序列（Lei，S. P.等人J. Bacteriol. (1987) 169，4379)。
[0077] 當(dāng)期望時(shí)，本發(fā)明的載體可以各自以可操作方式含有增強(qiáng)子、剪接信號(hào)、多聚腺苷 酸附加信號(hào)、選擇標(biāo)記、SV40復(fù)制原點(diǎn)（以下有時(shí)簡(jiǎn)稱為SV40ori)等。選擇標(biāo)記的實(shí)例包 括二氫葉酸還原酶（以下有時(shí)簡(jiǎn)稱為dhfr)基因[甲氨蝶呤（MTX)抗性]、氨芐青霉素抗性 基因（有時(shí)簡(jiǎn)稱為AmpO、新霉素抗性基因（有時(shí)簡(jiǎn)稱為Neo^G^ilS抗性）等。
[0078] 通過經(jīng)由本身已知的基因轉(zhuǎn)移方法（例如，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、磷酸鈣法、顯微注射 法、原生質(zhì)體（proplast)融合法、電穿孔法、DEAE葡聚糖法、通過基因槍（Gene Gun)的基 因轉(zhuǎn)移法等）將上述本發(fā)明的上述載體引入上述宿主，可以產(chǎn)生具有引入其中的載體的轉(zhuǎn) 化體（本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體）。當(dāng)表達(dá)載體被用作待引入的載體時(shí)，轉(zhuǎn)化體可以表達(dá)本發(fā)明的抗 體。本發(fā)明的轉(zhuǎn)化體可用于產(chǎn)生本發(fā)明的抗體等。
[0079] 本發(fā)明的抗體可以通過經(jīng)由本身已知的方法根據(jù)宿主的種類培養(yǎng)本發(fā)明的轉(zhuǎn)化 體，并從培養(yǎng)物中分離本發(fā)明的抗體來生產(chǎn)。當(dāng)宿主是埃希氏菌屬時(shí)，將轉(zhuǎn)化體在通常約 15-43°C在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基諸如LB培養(yǎng)基、M9培養(yǎng)基等中培養(yǎng)約3-24小時(shí)。當(dāng)宿主是芽孢 桿菌屬時(shí)，將轉(zhuǎn)化體在通常約30-40°C在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中培養(yǎng)約6-24小時(shí)。當(dāng)宿主是酵母 時(shí)，將轉(zhuǎn)化體在通常約20°C -35°C在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基諸如Burkholder氏培養(yǎng)基等中培養(yǎng)約 24-72小時(shí)。當(dāng)宿主是昆