高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 2011年日本的糖尿病患病者超過(guò)1000萬(wàn)人，人數(shù)較多排世界第6名。糖尿病是在 嚴(yán)重階段引起視網(wǎng)膜病變、壞疽等并發(fā)癥，由于該并發(fā)癥存在喪命的危險(xiǎn)性的嚴(yán)重的癥狀。 日本人的體質(zhì)是難以消耗所吃食物易于儲(chǔ)藏的體質(zhì)，因此被認(rèn)為易患糖尿病，推薦通過(guò)對(duì) 食物的攝取方法的研宄和/或運(yùn)動(dòng)的堅(jiān)持，從而預(yù)防糖尿病的患病、嚴(yán)重化。
[0003] 作為糖尿病的預(yù)備軍，可列舉高血糖狀態(tài)。根據(jù)高血糖狀態(tài)的階段掌握定期的血 糖狀態(tài)、維持使血糖值不上升的生活習(xí)慣或改善使血糖值上升的生活習(xí)慣是必要的。若能 通過(guò)非侵襲性且可隨時(shí)采集的樣品進(jìn)行定期的血糖狀態(tài)的掌握，則能在家中進(jìn)行自我藥 療。
[0004] 半胱氨酸蛋白酶抑制劑是具有抗氧化作用的一系列的肽群。專利文獻(xiàn)1中記載了 可以使用半胱氨酸蛋白酶抑制劑-c作為糖尿病檢測(cè)時(shí)的生物標(biāo)記。專利文獻(xiàn)2中記載了可 以使用半胱氨酸蛋白酶抑制劑-C作為糖尿病的檢查參數(shù)。專利文獻(xiàn)3中記載了含有抗半胱 氨酸蛋白酶抑制劑-SN抗體的大腸癌和/或大腸息肉的診斷藥。半胱氨酸蛋白酶抑制劑-C 多存在于精液、骨髓液中，僅少量存在于唾液中。另一方面，半胱氨酸蛋白酶抑制劑-SN主 要存在于唾液、淚液中。
[0005] 喊性唾液腫氨酸豐富蛋白（Basicsalivaryprolin-richprotein) 1和喊性唾液 脯氨酸豐富蛋白2是包含脯氨酸中富含的非周期性的氨基酸序列部分的富含脯氨酸蛋白 質(zhì)（富含脯氨酸肽）中的一種。非專利文獻(xiàn)1中記載了，相比于對(duì)照組，糖尿病模型大鼠的 唾液腺內(nèi)富含脯氨酸肽的表達(dá)下降，以及通過(guò)胰島素給藥糖尿病模型大鼠的富含脯氨酸肽 表達(dá)下降的情況得到改善。 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)
[0006] 專利文獻(xiàn)1 :日本專利特表2011-515680號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)2 :日本專利特表2012-507020號(hào)公報(bào) 專利文獻(xiàn)3 :國(guó)際公開(kāi)第06/064844號(hào) 非專利文獻(xiàn)
[0007] 非專利文獻(xiàn)1 :《國(guó)際實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志》（IntJExpPath)，90,412-422

【發(fā)明內(nèi)容】
發(fā)明要解決的課題
[0008] 然而，不論采集部位，從唾液中也能正確檢出的高血糖風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)記肽，以及使用它的 高血糖風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)方法，現(xiàn)在都是未知的。此外，半胱氨酸蛋白酶抑制劑-SN、堿性唾液脯氨 酸豐富蛋白1以及堿性唾液脯氨酸豐富蛋白2與高血糖有關(guān)，在此之前也未知。半胱氨酸 蛋白酶抑制劑-SN相對(duì)于半胱氨酸蛋白酶抑制劑-C的同源性分?jǐn)?shù)只有54. 6099,因此，可以 說(shuō)半胱氨酸蛋白酶抑制劑-SN和半胱氨酸蛋白酶抑制劑-C是結(jié)構(gòu)上大不相同的蛋白質(zhì)。
[0009] 本發(fā)明的目的是提供能高精度判定生物體內(nèi)的高血糖風(fēng)險(xiǎn)的標(biāo)記物。 解決課題的手段
[0010] 本發(fā)明提供以下的〔1〕~〔10〕。 〔1〕一種高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽，選自下述（A)~（0)形成的群。 (A) 包含序列號(hào)1的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基的多肽； (B) 包含序列號(hào)1的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基中缺失、附加、置換或插 入了 1個(gè)或多個(gè)氨基酸的氨基酸序列，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (C) 包含與序列號(hào)1的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基有90%以上同源性的 氨基酸序列，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (D) 包含序列號(hào)1的氨基酸序列中缺失、附加、置換或插入了 1個(gè)或多個(gè)氨基酸的氨基 酸序列中的連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (E) 包含與序列號(hào)1的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的連續(xù)5個(gè)以上 的氨基酸殘基，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (F) 包含序列號(hào)2的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基的多肽； (G) 包含序列號(hào)2的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基中缺失、附加、置換或插 入了 1個(gè)或多個(gè)氨基酸的氨基酸序列，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (H) 包含與序列號(hào)2的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基有90%以上同源性的 氨基酸序列，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (I) 包含序列號(hào)2的氨基酸序列中缺失、附加、置換或插入了 1個(gè)或多個(gè)氨基酸的氨基 酸序列中的連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (J) 包含與序列號(hào)2的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的連續(xù)5個(gè)以上 的氨基酸殘基，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (K) 包含序列號(hào)3的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基的多肽； (L) 包含序列號(hào)3的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基中缺失、附加、置換或插 入了 1個(gè)或多個(gè)氨基酸的氨基酸序列，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (M) 包含與序列號(hào)3的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基有90%以上同源性的 氨基酸序列，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽； (N) 包含序列號(hào)3的氨基酸序列中缺失、附加、置換或插入了 1個(gè)或多個(gè)氨基酸的氨基 酸序列中的連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽；以及 (〇)包含與序列號(hào)3的氨基酸序列有90%以上同源性的氨基酸序列中的連續(xù)5個(gè)以上 的氨基酸殘基，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多肽。 〔2〕一種抗體或適體，其結(jié)合于上述〔1〕所述的高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽。 〔3〕一種微陣列，其是將結(jié)合于上述〔1〕所述的高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽結(jié)合的抗體或 適體固定于載體而成的。 〔4〕一種高血糖風(fēng)險(xiǎn)的判定方法，其測(cè)定從受試者采集到的生物樣品中的上述〔1〕所述 的高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽的量或其有無(wú)。 〔5〕上述〔4〕所述的判定方法，當(dāng)從受試者采集到的生物樣品中的上述〔1〕所述的高血 糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽的量，低于從健康者采集到的生物樣品中的該量時(shí)，判定高血糖風(fēng)險(xiǎn) 尚。 〔6〕上述〔4〕所述的判定方法，當(dāng)從受試者采集到的生物樣品中的上述〔1〕所述的高血 糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽的量，等同于或低于從高血糖人群采集到的生物樣品中的該量時(shí)，判 定尚血糖風(fēng)險(xiǎn)尚。 〔7〕如上述〔4〕~〔6〕的任一項(xiàng)所述的判定方法，通過(guò)從質(zhì)譜分析法、使用〔2〕所述的 抗體或適體的免疫測(cè)定法和使用〔3〕所述的微陣列的免疫測(cè)定法中選出的方法進(jìn)行上述〔 1〕所述的高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽的量的測(cè)定。 〔8〕如上述〔4〕~〔7〕的任一項(xiàng)所述的判定方法，其中，生物樣品為唾液。 〔9〕高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用試劑盒，其包含上述〔2〕的抗體或適體，或者上述〔3〕的微陣列。 〔10〕上述〔9〕所述的試劑盒，其進(jìn)一步包含口香糖。 發(fā)明的效果
[0011] 根據(jù)本發(fā)明，能夠高精度判定高血糖風(fēng)險(xiǎn)。若利用本發(fā)明在醫(yī)生的診斷之前進(jìn)行 高血糖風(fēng)險(xiǎn)的判定，則可以及早尋求高血糖的預(yù)防策略，能對(duì)高血糖癥、糖尿病等疾病防范 于未然，對(duì)于維持健康是有用的。
【附圖說(shuō)明】
[0012] [圖1]圖1是表示各受試者組的半胱氨酸蛋白酶抑制劑-SN肽片段的峰強(qiáng)度的 圖。
[圖2]圖2是表示各受試者組的堿性唾液脯氨酸豐富蛋白2肽片段的峰強(qiáng)度的圖。 [圖3]圖3是表示各受試者組的堿性唾液脯氨酸豐富蛋白1肽片段的峰強(qiáng)度的圖。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 本發(fā)明中高血糖風(fēng)險(xiǎn)的判定，是指對(duì)受試者是否為高血糖、是否已經(jīng)恢復(fù)正常水 平、或者今后有無(wú)變?yōu)楦哐堑目赡苄赃M(jìn)行判定（評(píng)價(jià)、判別、鑒別、推測(cè)），或者進(jìn)行受試 者是否具有變?yōu)楦哐秋L(fēng)險(xiǎn)的可能性的區(qū)別（分類）。高血糖風(fēng)險(xiǎn)的判定，是指受試者是否 高血糖、是否已經(jīng)恢復(fù)正常水平、以及是否有今后變?yōu)楦哐堑目赡苄缘呐卸ā８哐秋L(fēng)險(xiǎn) 的判定精度，是受試者中，通常，是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的比例的受試者中，能夠正確判定高血糖 風(fēng)險(xiǎn)的程度，例如，能夠正確判定50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、85%以上、90% 以上的受試者中高血糖風(fēng)險(xiǎn)的程度。本發(fā)明的判定方法，作為醫(yī)生的診斷前的預(yù)備判定方 法是有用的。
[0014] 本發(fā)明中，高血糖是指空腹時(shí)血糖在110mg/dL以上和/或血紅蛋白Ale在5. 8% 以上的狀態(tài)。
[0015] 本發(fā)明中的受試者，通常為動(dòng)物，優(yōu)選人、試驗(yàn)用動(dòng)物（小鼠、大鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、兔 子等），更優(yōu)選人。
[0016] (1)本發(fā)明的標(biāo)記肽 本發(fā)明的高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽，是選自上述（A)~（0)組成的群中的1種以上。本 發(fā)明的肽，作為高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記是有用的。
[0017] 使用本發(fā)明的高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記肽判定高血糖風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，可以使用選自（A)~ (〇)的1種，但2種以上組合時(shí)能更高精度地判定。2種以上的組合，優(yōu)選從選自（A)~（E) 的1種以上、選自（F)~（J)的1種以上、和選自⑷~（0)的1種以上中選出的2種以上 的組合。
[0018] (1-1)關(guān)于⑷~（C) (A)~（C)中，序列號(hào)1的氨基酸序列，是編碼人半胱氨酸蛋白酶抑制劑-SN肽的氨 基酸序列（全長(zhǎng)141氨基酸），在數(shù)據(jù)庫(kù)中登記為入藏登記號(hào)（7夕七7シ3 >番號(hào)） P01037. 3。半胱氨酸蛋白酶抑制劑-SN的相對(duì)于半胱氨酸蛋白酶抑制劑家族中所含的其 它的類型的同源性分?jǐn)?shù)如下所示都較低：半胱氨酸蛋白酶抑制劑_C(54. 6099% )、半胱氨 酸蛋白酶抑制劑_M(27. 6596% )、半胱氨酸蛋白酶抑制劑-E(27. 6596% )、半胱氨酸蛋白 酶抑制劑_F(26. 2411 % )、半胱氨酸蛋白酶抑制劑-A(17. 3469% )、半胱氨酸蛋白酶抑制 劑-B(14. 2857% )(括號(hào)內(nèi)是同源性分?jǐn)?shù)）。另外，上述同源性分?jǐn)?shù)是在CLUSTALW軟件的 多序列比對(duì)分析（MultipleSequenceAlignmentbyCLUSTALW)(http://www.genome,jp/ tools/clustalw/)中輸入氨基酸序列算出的值。
[0019] (A)~（C)中，序列號(hào)1的氨基酸序列中的連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基，優(yōu)選序列 號(hào)1的氨基酸序列中的連續(xù)7個(gè)以上的氨基酸殘基，更優(yōu)選連續(xù)10個(gè)以上的氨基酸殘基， 進(jìn)一步優(yōu)選連續(xù)12個(gè)以上的氨基酸殘基，更進(jìn)一步優(yōu)選連續(xù)14個(gè)以上的氨基酸殘基，特別 優(yōu)選連續(xù)15個(gè)以上的氨基酸殘基。沒(méi)有特別的上限規(guī)定，也可以是序列號(hào)1的氨基酸序列 的全長(zhǎng)（141個(gè)殘基）或超過(guò)該全長(zhǎng)，例如200個(gè)以下、100個(gè)以下、90個(gè)以下、80個(gè)以下、70 個(gè)以下、60個(gè)以下、50個(gè)以下、40個(gè)以下、30個(gè)以下、20個(gè)以下。
[0020] (A)~（C)中，序列號(hào)1的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基中，優(yōu)選上述 5個(gè)以上的氨基酸殘基中含有氨基酸殘基號(hào)25位~39位的至少一部分，更優(yōu)選上述5個(gè)以 上的氨基酸殘基為序列號(hào)1的氨基酸殘基號(hào)25位~39位中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基。 優(yōu)選上述5個(gè)以上的氨基酸殘基為序列號(hào)1的氨基酸殘基號(hào)25位~39位的氨基酸序列， 或序列號(hào)1的氨基酸序列。
[0021] (A)只要是包含序列號(hào)1的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基的多肽即可， 優(yōu)選序列號(hào)1的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基構(gòu)成的多肽。
[0022] (B)只要是包含序列號(hào)1的氨基酸序列中連續(xù)5個(gè)以上的氨基酸殘基中缺失、附 加、置換或插入了 1個(gè)或多個(gè)氨基酸的氨基酸序列，能夠用作高血糖風(fēng)險(xiǎn)判定用標(biāo)記的多 肽即