一種非接觸式顯微測量輔助裝置及其測量方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物顯微領(lǐng)域，尤其涉及一種非接觸式顯微測量輔助裝置及其測量方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在動物學(xué)、植物學(xué)、細(xì)胞學(xué)和微生物學(xué)實驗和研宄中，經(jīng)常測定細(xì)胞、微生物孢子、菌絲的大小，其中包括其寬度和長度，特別是進(jìn)行真核生物研宄時，要求測定30個或者更多細(xì)胞或者孢子的平均寬度和長度。這就給使用繪圖顯微鏡或者利用顯微電腦操作系統(tǒng)的人帶來測量數(shù)據(jù)的麻煩。
[0003]目前，測定孢子或者細(xì)胞大小的方法主要有以下幾種:1、利用繪圖顯微鏡，手動繪出孢子的草圖，然后再計算一定數(shù)量的孢子的大小平均數(shù)；2、利用電腦和數(shù)碼成像系統(tǒng)系統(tǒng)，將顯微鏡視野中的圖像傳輸?shù)诫娔X中，并通過處理軟件顯示出來，然后再去操作和計算孢子的大小；3、利用目鏡測微尺對孢子進(jìn)行測定；4、用數(shù)碼相機(jī)拍出孢子圖片后再測量細(xì)胞或者孢子的大小。
[0004]以上測定孢子的方法，存在的缺點是:1、繪圖測量法太麻煩，操作時要不停前后和左右移動顯微鏡載物臺，而且玻片種細(xì)胞等位置形態(tài)各異，有時造成從任何角度都不能很好測量細(xì)胞大小的情況；2、利用顯微成像系統(tǒng)專業(yè)軟件處理和計算孢子大小，也存在鼠標(biāo)頻繁移動、定位不準(zhǔn)和無法處理特殊細(xì)胞大小的問題，費時、費力，而且配合顯微鏡的操作；
3、目鏡測微尺測定細(xì)胞大小時，需要前后、左右頻繁移動載物臺，而且測定角度不正的細(xì)胞時，要移動載物臺數(shù)次，才能定位準(zhǔn)確，非常麻煩；4、用數(shù)碼相機(jī)拍出孢子圖片后再測量的方法，存在一次性要選取大量孢子的麻煩，再者還要把相關(guān)圖像打印或者洗出來，費時費力。
[0005]從手動繪圖或測定的角度來看，目前的測定方式要么利用手動，要么利用電腦測繪，手動方法自動性差，耗時長，容易出錯，記錄不準(zhǔn)確，但是存在可選擇性，靈活性等優(yōu)點，利用輔助測繪裝置的話，一般又不夠靈活，方式較死板，電腦測繪的話，自動性強(qiáng)，但是在識別和計算所需數(shù)據(jù)時，人工識別往往又不可替代，尤其是所測定樣本本身有多種雜質(zhì)或是有選擇地測定特殊細(xì)菌或孢子的時候。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明屬于多功能繪圖顯微鏡的配套儀器，利用手動繪制或者測量細(xì)胞或者孢子時，可以克服目前細(xì)胞或者孢子大小測定的缺點和麻煩，快速、有效和準(zhǔn)確的解決該問題，具體優(yōu)點如下:1、該產(chǎn)品屬于外置式和手持式，使用方便，移動靈活，不需要像目鏡測量尺一樣反復(fù)移動；2、可測量任意角度的細(xì)胞大小，測定培養(yǎng)樣本中的何種細(xì)菌或孢子可以方便選擇；3、不需要校正和換算，可以直接讀出近似讀數(shù)；4、廉價、簡易；5、配置專用記錄板，可實現(xiàn)數(shù)據(jù)及時記錄，可換紙利用，也可利用可擦寫紙，用后一擦即凈；7、使用可根據(jù)視野光線情況，靈活選用各種外源燈光等。
[0007]本發(fā)明要求保護(hù)一種非接觸式細(xì)菌或孢子顯微測量輔助裝置，其特征在于，組成如下:
由透明測定盤和套板，計數(shù)紙配件三部分組成；
透明測定盤由透明材料制成，其為圓形板狀，具有一定厚度，從圓心向外繪有若干條半徑線，該若干條半徑線均與接觸圓周處的法線垂直，該若干條半徑線上有垂直于該半徑線自身的均勻刻度線，每條半徑線上的均勻刻度線所對應(yīng)的單位刻度均不同，每隔一定數(shù)量刻度線設(shè)置一個數(shù)值用于示意性讀數(shù)，在每個半徑線靠近圓心處都注以標(biāo)示，以標(biāo)明該半徑線上的單位刻度為何種大小，這里的標(biāo)示可以是特定的形狀的符號，也可以是特定顏色的符號；
所述單位刻度可以為 lmm、0.5mm、0.2mm、0.1mm、0.05mm、0.02mm、0.01mm.0.005mm 尺寸，可以每2、5、10、20個單位刻度給出示意性讀數(shù)，標(biāo)明該半徑線上的單位刻度為何種大小的標(biāo)示可以為文字，厘米/毫米/十分之一毫米/百分之一毫米/微米，也可以為，英文簡稱，，cm/mm/1/lOmm/l/OOmm/um也可以為自行約定的符號，如α、β、γ等；
套板為長方形，在其長度方向相對的兩側(cè)，一側(cè)有用于放置透明測定盤的圓形槽，另一側(cè)有放置計數(shù)紙配件的計數(shù)紙槽，計數(shù)紙槽為正方形，圓形槽的厚度與透明測定盤相當(dāng)；計數(shù)紙槽的厚度也可以較圓形槽為淺；
計數(shù)紙配件包括設(shè)在計數(shù)紙槽上下兩端的上卡槽和下卡槽，以及由上卡槽和下卡槽共同夾持的計數(shù)紙若干張，上卡槽、下卡槽、計數(shù)紙高度均低于計數(shù)紙槽的深度；
透明測定盤和套板的表面光滑或是有一定摩擦性，透明測定盤和套板表面均平整，透明測定盤和套板上的用于放置透明測定盤的圓形槽大小相適應(yīng)，透明測定盤剛好可以卡入轉(zhuǎn)動并且不明顯松動；
所夾持的計數(shù)紙可以為長方形或正方形，計數(shù)紙上印有計數(shù)格，計數(shù)紙可以適于普通筆書寫或者適于熒光筆書寫；
前述的一種測量輔助裝置，利用其進(jìn)行的非接觸式細(xì)菌或孢子顯微測量方法，其特征在于；
1)根據(jù)需要制備適合的裝置:
按用于測量的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)平板的情況，選擇適合的透明測定盤的大小，并由此決定相配的套板和計數(shù)紙配件的尺寸:透明測定盤的尺寸可以比圓形槽尺寸小0.1mm-1mm距離不等。
[0008]三步滅菌:用環(huán)氧乙烷將透明測定盤、套板和計數(shù)紙槽中的上卡槽和下卡槽用環(huán)氧乙烷滅菌處理，并除去殘留；再用高溫蒸汽進(jìn)行二次滅菌，干燥，然后將透明測定盤、套板和計數(shù)紙槽中的上卡槽和下卡槽和測定用的計數(shù)紙一起用紫外燈照射2-10min滅菌；
將透明測定盤卡入圓形槽、將所需數(shù)量的計數(shù)紙卡入上卡槽和下卡槽固定；即制得所需測量輔助裝置；圓形槽邊緣可以設(shè)有復(fù)數(shù)個沿圓形槽邊緣均勻分布的卡扣以固定透明測定盤;
2)利用顯微鏡針對培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)平板上的細(xì)菌或孢子進(jìn)行顯微測定，先選擇合適的培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)平板，然后根據(jù)使用的培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)平板的規(guī)格或尺寸，選擇或制備尺寸相符的測量輔助裝置；
3)根據(jù)培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)平板上細(xì)菌或孢子處于靠上或靠下的位置，將測量輔助裝置放置在培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)平板之上或之下，以便于測量；
根據(jù)放置在培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)平板之上或之下的不同，圓形槽可以向上面開或者向下面開，透明測定盤可以是從上向下放置或者從下向上放置；
4)開啟顯微鏡，將培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)平板與疊合的測量輔助裝置一并放置于載物臺上，調(diào)節(jié)顯微鏡，在視野中觀察尋找欲測量尺寸的種類的細(xì)菌或孢子；
這里的細(xì)菌或者孢子，可以是某一類或者某幾類，或者是某一類中尺寸在要求范圍內(nèi)的，如革蘭氏陽性菌，或孢子尺寸在1um-1um之間的；
5)可借助外界光源輔助，調(diào)節(jié)顯微鏡視野內(nèi)的光線強(qiáng)弱，針對視野中找到的欲測量尺寸的種類的細(xì)菌或孢子，調(diào)節(jié)顯微鏡，使得其清晰可辨，在此前提下，轉(zhuǎn)動透明測定盤，將符合顯微鏡放大倍數(shù)觀測需要的單位刻度的半徑線轉(zhuǎn)動到欲測量尺寸的種類的細(xì)菌或孢子附近，并依據(jù)該單位刻度及其上的標(biāo)示將欲測量尺寸的種類的細(xì)菌或孢子的尺寸大致讀出，用筆記載在計數(shù)紙上；
6)在套板的圓形槽底部設(shè)置網(wǎng)格，網(wǎng)格線是水平垂直交叉的，或者是以圓形槽圓心處放射線與以該圓心為圓心的半徑不同的圓形線，網(wǎng)格線有反光特性，網(wǎng)格給予編號，在步驟4中欲測量尺寸的種類的細(xì)菌或孢子清晰可辨的前提下，確認(rèn)其處于的網(wǎng)格編號，在登記其尺寸時一并登記；
在此，如果是以圓形線和半徑線切割成的區(qū)域，則可以以字母+數(shù)字來命名，例如最小圓與圓心之間切割成的扇形，最內(nèi)圈區(qū)域以A1-A9編號，外一層用B1-B9編號，再外一層用C1-C9編號，依次類推，數(shù)字依半徑線