基酸取代，上述中 的每一篇在本文通過提述并入。在一個典型的實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合多肽可包括在EU 268位點(diǎn)包含氨基酸取代（例如，H268D或H268E)的Fc變體。在另一典型的實(shí)施方案中， 本發(fā)明的結(jié)合多肽可在EU239位點(diǎn)（例如，S239D或S239E)和/或EU332位點(diǎn)（例如， I332D或I332Q)包含氨基酸取代。
[0120] 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合多肽可包含含有改變抗體的抗原依賴性效應(yīng)物 功能特別是結(jié)合多肽的循環(huán)半衰期的氨基酸取代的Fc變體。當(dāng)與缺乏這些取代的結(jié)合多 肽比較時，這樣的結(jié)合多肽展示出與FcRn升高的或降低的結(jié)合，因此，在血清中分別具有 升高或降低的半衰期。具有對于FcRn改進(jìn)的親和力的Fc變體預(yù)期具有更長的血清半衰期， 且這些分子如下治療處理哺乳動物的方法中具有有效應(yīng)用，在該方法中期望施用的抗體具 有長半衰期，例如，用于治療慢性疾病或病癥。相反，具有降低的FcRn結(jié)合親和力的Fc變 體預(yù)期具有較短的半衰期，且這種分子也可用于，舉例來說，向哺乳動物施用，在所述哺乳 動物中縮短的循環(huán)時間可能是有利的，例如，用于體內(nèi)診斷成像或在初始抗體當(dāng)長時間存 在于循環(huán)中時具有毒性副作用的情況下。具有降低的FcRn結(jié)合親和力的Fc變體也不太可 能穿過胎盤，并因此可用于在孕婦中治療疾病或病癥。此外，可能期待降低的FcRn結(jié)合親 和力的其他應(yīng)用包括那些預(yù)期定位于腦、腎和/或肝的應(yīng)用。在一個典型的實(shí)施方案中，本 發(fā)明的改變的結(jié)合多肽（例如，抗體或其抗原結(jié)合片段）展示出從血管系統(tǒng)穿越腎小球上 皮的運(yùn)輸?shù)慕档?。在另一?shí)施方案中，本發(fā)明的改變的結(jié)合多肽（例如，抗體或其抗原結(jié)合 片段）展示出從腦穿越血腦屏障（BBB)進(jìn)入血管間隙的運(yùn)輸?shù)慕档汀Ｔ谝粋€實(shí)施方案中， 具有改變的FcRn結(jié)合的抗體包括在Fc結(jié)構(gòu)域的"FcRn結(jié)合環(huán)"內(nèi)具有一個或多個氨基酸 取代的Fc結(jié)構(gòu)域。FcRn結(jié)合環(huán)包括氨基酸殘基280-299(根據(jù)EU編號）。改變FcRn結(jié)合 活性的典型的氨基酸取代公開于國際PCT公開NO.W005/047327中，其在本文通過提述并 入。在一些典型的實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合多肽（例如，抗體或其抗原結(jié)合片段）包括具 有一個或多個下列取代的Fc結(jié)構(gòu)域：V284E、H285E、N286D、K290E和S304D(EU編號）。在 另外的其他典型實(shí)施方案中，本發(fā)明的結(jié)合分子包含具有雙突變H433K/N434F的人Fc結(jié)構(gòu) 域（參見，例如，美國專利No. 8, 163,881)。
[0121] 在其他實(shí)施方案中，描述于本文的用于診斷和治療方法的結(jié)合多肽具有恒定區(qū)， 例如，IgGl或IgG4重鏈恒定區(qū)，其經(jīng)改變來降低或消除糖基化。舉例來說，本發(fā)明的結(jié)合 多肽（例如，抗體或其抗原結(jié)合片段）也可包含含有改變抗體Fc糖基化的氨基酸取代的Fc 變體。舉例來說，所述Fc變體可具有降低的糖基化（例如，N-或0-連接糖基化）。在典 型的實(shí)施方案中，F(xiàn)c變體包含正常存在于氨基酸位點(diǎn)297 (EU編號）處的N-連接聚糖降低 的糖基化。在另一實(shí)施方案中，所述抗體在糖基化基序附近或之內(nèi)具有氨基酸取代，舉例來 說，包含氨基酸序列NXT或NXS的N-連接糖基化基序。在具體的實(shí)施方案中，所述抗體包 含在第228或229 (EU編號）氨基酸位點(diǎn)具有氨基酸取代的Fc變體。在更多具體的實(shí)施方 案中，所述抗體包含含有S228P和T299A突變（EU編號）的IgGl或IgG4恒定區(qū)。
[0122] VIII.效應(yīng)物部分
[0123] 在某些實(shí)施方案中，本公開的結(jié)合多肽包括效應(yīng)物部分?？偟膩碚f，這些效應(yīng)物 部分與結(jié)合多肽上的N-連接聚糖偶聯(lián)（直接或通過接頭部分），（例如，與CH2結(jié)構(gòu)域的 N298(EU編號）和/或CH1結(jié)構(gòu)域的N114(Kabat編號）連接的N-連接聚糖）。在某些實(shí) 施方案中，結(jié)合多肽是包含兩個在114Kabat位點(diǎn)具有聚糖的CH1結(jié)構(gòu)域的全長抗體，其中 兩個聚糖都與一個或多個效應(yīng)物部分偶聯(lián)。
[0124] 任何效應(yīng)物部分均可被添加至本文公開的結(jié)合多肽。效應(yīng)物部分優(yōu)選向改變的抗 體或其片段添加非天然功能，而不顯著改變結(jié)合多肽的固有活性。效應(yīng)物部分可以是，舉例 來說但不限于，治療劑或診斷劑。本公開的修飾的結(jié)合多肽（例如，抗體）可包括一個或多 個效應(yīng)物部分，其可以相同或不同。
[0125] 在一個實(shí)施方案中，所述效應(yīng)物部分可為式（I)所示：
[0126]H2N-Q-C0N-X
[0127] 式（I)，
[0128] 其中：
[0129] 八)〇是順或0;且
[0130]B)C0N是連接部分；且
[0131]C)X是如本文定義的治療劑。
[0132] 連接體（connector)部分連接治療劑與H2N-Q_。連接體部分可包括至少任何本領(lǐng) 域的技術(shù)人員已知的合適的組分之一，包括，舉例來說，亞烷基組分、聚乙二醇組分、聚（甘 氨酸）組分、聚（噁唑啉）組分、羰基組分、從半胱氨酰胺衍生的組分、從與瓜氨酸偶聯(lián)的纈 氨酸衍生的組分，以及從4-氨基芐基氨基甲酸酯衍生的組分或其任意組合。
[0133] 在另一實(shí)施方案中，式（I)的效應(yīng)物部分可以是式（la):
[0134] H2N-Q-CH2-C(0) -Z-X
[0135] 式（la)
[0136] 其中：
[0137] 八)〇是順或0;且
[0138] B)Z是Cys- (MC) a_ (VC) b_ (PABC) c_ (C16H3208C2H4) f，
[0139] 其中
[0140] i.Cys是源自半胱氨酰胺的組分；
[0141] ii.MC是源自馬來酰亞胺的組分；
[0142] iii.VC是源自與瓜氨酸偶聯(lián)的纈氨酸的組分；
[0143] iv.PABC是源自4-氨基芐基氨基甲酸酯的組分；
[0144] V.X是如本文所定義的治療劑；
[0145] vi.a是0或 1;
[0146] vii.b是0或 1;
[0147] viii.c是 0 或 1 ;且
[0148] ix.f是0或 1
[0149] "源自半胱氨酰胺的組分"是與H2N-Q-CH2-C(0)_附著的點(diǎn)。在一個實(shí)施方案中，所 述"源自半胱氨酰胺的組分"可指具有如下結(jié)構(gòu)的效應(yīng)物部分的一個或多個部分：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種分離的結(jié)合多肽，其包含具有改變的糖基化的Fe結(jié)構(gòu)域，其中所述Fe結(jié)構(gòu)域包 含：根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)298的天冬酰胺殘基；和根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)300的絲 氨酸或蘇氨酸，且其中所述結(jié)合多肽由于所述改變的糖基化展示降低的效應(yīng)物功能。
2. 權(quán)利要求1的結(jié)合多肽，進(jìn)一步包含根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)299的丙氨酸殘基。
3. 權(quán)利要求1的結(jié)合多肽，進(jìn)一步包含根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)297的谷氨酰胺殘 基。
4. 在先權(quán)利要求任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述Fe結(jié)構(gòu)域是IgGlFc結(jié)構(gòu)域。
5. 在先權(quán)利要求任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述Fe結(jié)構(gòu)域是人的。
6. 在先權(quán)利要求任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述天冬酰胺殘基的側(cè)鏈與聚糖通過0 _糖 基酰胺連接基連接。
7. 權(quán)利要求4的結(jié)合多肽，其中所述聚糖是雙觸角聚糖。
8. 權(quán)利要求4或5的結(jié)合多肽，其中所述聚糖是天然存在的哺乳動物糖形。
9. 在先權(quán)利要求任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其與具有天然Fe結(jié)構(gòu)域的結(jié)合多肽相比具有較 低的對于Fcy受體的親和力。
10. 所述結(jié)合多肽，其中所述FeY受體是FeYRI和/或FeYRllla。
11. 在先權(quán)利要求任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其具有與具有天然Fe結(jié)構(gòu)域的結(jié)合多肽相比具 有相似的對于FcRn受體的親和力。
12. 權(quán)利要求6-11任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述聚糖包含具有反應(yīng)性的醛基。
13. 權(quán)利要求6-11任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述聚糖包含氧化的糖類殘基，所述氧化 的糖類殘疾包含具有反應(yīng)性的醛基。
14. 權(quán)利要求13的結(jié)合多肽，其中所述氧化的糖類殘基是末端唾液酸或半乳糖。
15. 權(quán)利要求6-11任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述聚糖與效應(yīng)物部分連接。
16. 權(quán)利要求15的結(jié)合多肽，其中所述效應(yīng)物部分是細(xì)胞毒素。
17. 權(quán)利要求16的結(jié)合多肽，其中所述細(xì)胞毒素選自列于表1的細(xì)胞毒素組。
18. 權(quán)利要求17的結(jié)合多肽，其中所述效應(yīng)物部分是檢測劑。
19. 權(quán)利要求15-18任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述效應(yīng)物部分與聚糖的糖類殘基通過 肟或腙連接基連接。
20. 權(quán)利要求19的結(jié)合多肽，其中所述糖類殘基是聚糖的末端唾液酸或半乳糖殘基。
21. 權(quán)利要求15-20任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述效應(yīng)物部分包括pH-敏感的接頭、二 硫化物接頭、酶-敏感的接頭或其它可裂解的接頭部分。
22. 權(quán)利要求15-20任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，其中所述效應(yīng)物部分包括選自表2或14中描 述的接頭部分的組的接頭部分。
23. 在先權(quán)利要求任一項(xiàng)的結(jié)合多肽，所述結(jié)合多肽為抗體或免疫粘附素。
24. -種分離的結(jié)合多肽，其包含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域，其中所述Fe結(jié)構(gòu)域包含：根據(jù)EU編號在 氨基酸位點(diǎn)298的游離的天冬酰胺殘基；和根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)300的游離的絲氨酸 或蘇氨酸殘基。
25. -種分離的結(jié)合多肽，其包含F(xiàn)e結(jié)構(gòu)域，其中所述Fe結(jié)構(gòu)域包含：根據(jù)EU編號在 氨基酸位點(diǎn)298的修飾的天冬酰胺殘基；和根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)300的游離的絲氨酸 或蘇氨酸殘基。
26. 權(quán)利要求25的結(jié)合多肽，其中效應(yīng)物部分與聚糖的糖類殘基通過修飾的天冬酰胺 殘基的側(cè)鏈連接。
27. 權(quán)利要求25的結(jié)合多肽，其中所述糖類是聚糖的末端唾液酸或半乳糖殘基。
28. 權(quán)利要求25的結(jié)合多肽，其中所述效應(yīng)物部分與聚糖的糖類殘基通過肟或腙連接 基連接。
29. 權(quán)利要求25的結(jié)合多肽，其中所述糖類是聚糖的末端唾液酸或半乳糖殘基。
30. 權(quán)利要求25的結(jié)合多肽，其中所述修飾的天冬酰胺殘基與藥物效應(yīng)物部分連接以 形成抗體藥物偶聯(lián)物（ADC)。
31. -種組合物，其包含在先權(quán)利要求任一項(xiàng)的結(jié)合多肽和藥學(xué)上可接受的載劑或賦 形劑。
32. -種治療患者的方法，其中包括施用有效量的權(quán)利要求31的組合物。
33. -種分離的多核苷酸，其編碼權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)的結(jié)合多肽。
34. -種載體，其包含權(quán)利要求33的多核苷酸。
35. -種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求33的多核苷酸或權(quán)利要求34的載體。
36. -種制造結(jié)合多肽的方法，其包括在細(xì)胞中表達(dá)權(quán)利要求33的多核苷酸或權(quán)利要 求34的載體。
【專利摘要】提供了結(jié)合多肽(例如，抗體)及其藥物偶聯(lián)物，其包含具有改變的糖基化概貌和降低的效應(yīng)物功能的Fc結(jié)構(gòu)域。在具體的實(shí)施方案中，所述Fc結(jié)構(gòu)域包含：根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)298的天冬酰胺殘基；和根據(jù)EU編號在氨基酸位點(diǎn)300的絲氨酸或蘇氨酸殘基。還提供了編碼抗原結(jié)合多肽的核酸、用于制造這種抗原-結(jié)合多肽的重組表達(dá)載體和宿主細(xì)胞。還提供了使用本文公開的抗原-結(jié)合多肽來治療疾病的方法。
【IPC分類】C07K16-28
【公開號】CN104797601
【申請?zhí)枴緾N201380058863
【發(fā)明人】C·潘, H·邱
【申請人】建新公司
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2013年9月12日
【公告號】CA2884762A1, WO2014043361A1