一種穩(wěn)定的5’-核糖核苷酸水解酶檢測(cè)試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及臨床體外檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種5' -核糖核苷酸水解酶檢 測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 5'-核苷酸酶全稱(chēng)5'-核糖核苷酸磷酸水解酶（5'-Nucleotidase, 5'-NU或 5'-NT)，廣泛分布在肝、膽、胰、腸、心、腦、肺、腎、垂體、甲狀腺、前列腺、睪丸等臟器和組織 中，定位在細(xì)胞膜上，在肝內(nèi)主要存在于膽小管和竇狀間隙內(nèi)。
[0003] 正常人血清中5'-核糖核苷酸磷酸水解酶參考值范圍是0-10U/L，在5'-次黃嘌 呤核苷酸分解代謝過(guò)程中起到很重要的催化作用，可催化5' -次黃嘌呤核苷酸降解為次黃 嘌呤核苷，之后再經(jīng)核苷酸磷化酶催化生成次黃嘌呤，最終氧化為代謝產(chǎn)物尿酸。
[0004] 5' -NT活性增高常見(jiàn)于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、膽管炎、 急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性肝損傷。其活性增高可達(dá)2~6倍，且與病情嚴(yán)重程度呈正相 關(guān)。
[0005] 5' -NT是診斷肝腫瘤非常靈敏的酶學(xué)指標(biāo)，在病變?cè)缙?，?dāng)肝功能、肝掃描和有關(guān) 肝病檢查陰性時(shí)本酶活性已明顯增高。對(duì)于AFP陰性病例，其與AFP互補(bǔ)診斷肝癌的陽(yáng)性 率可達(dá)94%。
[0006] 特異性高，能協(xié)助判斷堿性磷酸酶(ALP)增高是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨髓系統(tǒng)疾病 (如骨癌、骨肉瘤、骨轉(zhuǎn)移癌、佝僂病等)。ALP在肝膽系統(tǒng)疾病和骨骼系統(tǒng)疾病時(shí)均可增高。 5' -NT除肝膽系統(tǒng)疾病增高外，骨骼系統(tǒng)疾病一般均不升高。
[0007] 有助于鑒別診斷肝細(xì)胞性黃疸和阻塞性黃疸。
[0008]由于5'-核糖核苷酸水解酶檢測(cè)試劑盒（比色法）中存在多種酶，會(huì)使該試劑的穩(wěn) 定性受到影響，不利于試劑的長(zhǎng)期保存，從而造成浪費(fèi)的不良后果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 針對(duì)于常規(guī)的5'-核糖核苷酸水解酶檢測(cè)試劑盒（比色法）存在的問(wèn)題，，本發(fā)明 提供了一種穩(wěn)定性強(qiáng)的5' -核糖核苷酸水解酶檢測(cè)試劑盒（比色法)，該試劑盒與常規(guī)的 5'_核糖核苷酸水解酶檢測(cè)試劑盒（比色法)相比，穩(wěn)定性比常規(guī)的檢測(cè)試劑盒要好，而且準(zhǔn) 確度和分析靈敏度不受影響，有利于提高試劑的穩(wěn)定性。
[0010] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，一種穩(wěn)定性強(qiáng)的5' -核糖核苷酸水解酶檢測(cè)試劑盒（比色法）組 成為：甘氨酸緩沖液（Goods緩沖液)、4_氨基安替比林溶液、嘌呤核苷酸磷化酶（PNP)、黃嘌 呤氧化酶（X0D)、過(guò)氧化物酶（P0D)、4 一甲酰苯基硼酸（4-FPBA)、氯化鈉（NaCl)、甘露醇、曲 拉通100、牛血清白蛋白（BSA)、5'-次黃嘌呤核苷酸、（H1SPT)。
[0011] 一種穩(wěn)定性強(qiáng)的5'-核糖核苷酸水解酶檢測(cè)試劑盒，包括R1試劑和R2試劑，應(yīng)用 時(shí)體積比為R1 :R2=180:90。各組分的含量如下： R1試劑組分： Goods緩沖液（PH7. 6) lOOmmol/L 4-AA 2.3mmol/L PNP 0. 2U/mL XOD 0. 3U/mL POD 0.5U/mL 4-FPBA 0.01% NaCl 5mmol/L 甘露醇 5g/L 曲拉通100 1% BSA 0.1-lg/L R2試劑組分： Goods緩沖液（PH7. 6) lOOmmol/L 5'_次黃嗓呤核苷酸 13mmol/L EHSPT 4mmol/L〇
[0012] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是： 5' -NT催化底物中次黃嘌呤核苷酸反應(yīng)產(chǎn)生次黃苷和磷酸，再經(jīng)過(guò)一系列催化反應(yīng)最 終生成紅色醌類(lèi)。在波長(zhǎng)550nm處檢測(cè)其吸光度，其變化程度與樣本中的5' -NT活性成正 比。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種穩(wěn)定的5' -核糖核苷酸水解酶比色法檢測(cè)試劑盒，其特征在于，它包含試劑Rl 和試劑R2,其中試劑Rl組成為：100mmol/L pH 7. 6甘氨酸緩沖液（Goods緩沖液)、2. 3mmol/ L 4-氨基安替比林溶液（4-AA)、0. 2U/mL嘌呤核苷酸磷化酶（PNP)、0. 3U/mL黃嘌呤氧化 酶（X0D)、0. 5U/mL過(guò)氧化物酶（P0D)、0. 01% 4 -甲酰苯基硼酸（4-FPBA)、5mmol/L氯化 鈉（NaCl)、5g/L甘露醇、1%曲拉通100、0. Ι-lg/L牛血清白蛋白（BSA);試劑R2組成為： 100mmol/L pH 7. 6 Goods 緩沖液、13mmol/L 5' -次黃嗓吟核昔酸、4mmol/L EHSPT。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，采用具有雙試劑功能的自動(dòng)生化分析 儀，如東芝120自動(dòng)分析儀，操作如下： 使用的方法如下：
〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，通過(guò)在組分1中加入了由4-FPBA、 NaCl、甘露醇、曲拉通100、BSA五種成分組成的復(fù)合穩(wěn)定劑，解決了酶長(zhǎng)期保存不穩(wěn)定這一 難題，在試驗(yàn)中它能增加酶的穩(wěn)定時(shí)間，而不會(huì)影響酶的活性，從而有效地增強(qiáng)了試劑盒的 穩(wěn)定性，卻不會(huì)對(duì)試劑的準(zhǔn)確度和分析靈敏度產(chǎn)生影響，有利于該試劑在市場(chǎng)中進(jìn)一步的 推廣。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑Rl和試劑R2在使用時(shí)的體積 比例為 Rl :R2=180 :90。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種5'-核糖核苷酸磷酸水解酶比色法檢測(cè)試劑盒，屬于臨床體外檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明試劑盒包括試劑R1、試劑R2。通過(guò)在試劑組分1中加入了由4-FPBA、NaCl、甘露醇、曲拉通100、BSA五種成分組成的復(fù)合穩(wěn)定劑，解決了酶長(zhǎng)期保存不穩(wěn)定這一難題，在試驗(yàn)中它能增加酶的穩(wěn)定時(shí)間，而不會(huì)影響酶的活性，從而有效地增強(qiáng)了試劑盒的穩(wěn)定性，卻不會(huì)對(duì)試劑的準(zhǔn)確度和分析靈敏度產(chǎn)生影響，有利于該試劑在市場(chǎng)中進(jìn)一步的推廣。
【IPC分類(lèi)】C12Q1-42, C12Q1-26, C12Q1-28
【公開(kāi)號(hào)】CN104745673
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510205932
【發(fā)明人】甘宜梧, 董雯, 譚柏清, 王 琦, 王春艷, 肖慧
【申請(qǐng)人】山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2015年4月28日