一種多肽合成方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及多肽的合成，特別是涉及一種多肽液相合成方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人們對多肽藥物的需求逐漸增加，對化學(xué)家，特別是藥物化學(xué)家而言，如何高效合成廉價的多肽藥物，是一個亟待解決的技術(shù)問題。
[0003]隨著科技水平的提高和人類對多肽的重視與研發(fā)，越來越多的多肽藥物被開發(fā)應(yīng)用于臨床，為提高人類健康水平和治療、預(yù)防疾病，提供高效安全的新型藥物和疫苗。多肽的化學(xué)合成已經(jīng)成為獲得多肽藥物的最重要途徑。
[0004]目前，液相合成多肽是合成短肽及片段肽的非常高效廉價的制備手段，而結(jié)合固相合成和液相合成優(yōu)點的片段縮合工藝，與液相合成多肽的方法相比，則更是廉價且高效。但是，采用傳統(tǒng)的液相合成方法合成多肽時，除了必須使用保護(hù)氨基酸、縮合劑和反應(yīng)溶劑(一般為有機(jī)溶劑)之外，還需要使用大量有機(jī)溶劑用于反應(yīng)后的處理，常用的有機(jī)溶劑包括石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等，易污染環(huán)境。
[0005]由于必須使用大量有機(jī)溶劑，不僅提高了多肽的生產(chǎn)成本，而且造成非常嚴(yán)重的環(huán)境污染，因此，如何降低液相合成多肽的成本和減少對環(huán)境的污染，是本領(lǐng)域亟待解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服上述【背景技術(shù)】的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種多肽合成方法，其能夠大幅度降低多肽的生產(chǎn)成本，并減少因大量使用有機(jī)溶劑而對環(huán)境造成的污染。
[0007]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
一種多肽合成方法，其包括以下步驟:將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，將反應(yīng)溶液加入水中，析出固體后，經(jīng)過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護(hù)基后加入水中，并調(diào)節(jié)溶液酸堿性，將脫除氨基保護(hù)基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護(hù)基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺中縮合，然后重復(fù)上述過程，直至得到全保護(hù)多肽，再脫除所述全保護(hù)多肽的保護(hù)基，得到目標(biāo)多肽。
[0008]作為優(yōu)選實施方案之一，所述中間體的氨基保護(hù)基包括叔丁氧羰基和9-芴甲氧羰基，采用三氟乙酸脫除叔丁氧羰基，采用哌啶和DMF的混合溶液脫除9-芴甲氧羰基。
[0009]優(yōu)選的，將脫除叔丁氧羰基后的反應(yīng)溶液加入水中，再通過弱堿來調(diào)節(jié)溶液酸堿性，使脫除叔丁氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
[0010]優(yōu)選的，將脫除9-芴甲氧羰基后的反應(yīng)溶液加入水中，再通過弱酸來調(diào)節(jié)溶液酸堿性，使脫除9-芴甲氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
[0011]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點如下:
本發(fā)明避免大量使用有機(jī)溶劑進(jìn)行反應(yīng)后的處理，改用水作為析出保護(hù)多肽中間體的溶劑。本發(fā)明適用于規(guī)?；a(chǎn)小分子多肽，不需大規(guī)模改變原有工藝，只需在合成環(huán)節(jié)中采用易溶于水的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)作為反應(yīng)溶劑，在脫除氨基保護(hù)基的過程中，選用易溶于水的三氟乙酸(TFA)來脫除叔丁氧羰基(Boc)，選用哌啶和DMF的混合溶液來脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。因此，本發(fā)明不僅能夠大幅度降低多肽的生產(chǎn)成本，而且能夠減少因大量使用有機(jī)溶劑而對環(huán)境造成的污染。
【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0013]本發(fā)明實施例提供的多肽液相合成方法，包括以下步驟:將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中縮合，將反應(yīng)溶液加入水中，析出固體后，經(jīng)過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護(hù)基后加入水中，并調(diào)節(jié)溶液酸堿性，將脫除氨基保護(hù)基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護(hù)基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中縮合，然后重復(fù)上述過程，直至得到全保護(hù)多肽，再脫除所述全保護(hù)多肽的保護(hù)基，得到目標(biāo)多肽。
[0014]其中，所述中間體的氨基保護(hù)基包括叔丁氧羰基(Boc)和9-芴甲氧羰(Fmoc)，采用三氟乙酸(TFA)脫除叔丁氧羰基(Boc)，采用哌啶和DMF的混合溶液脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)。將脫除叔丁氧羰基(Boc)后的反應(yīng)溶液加入水中，再通過弱堿來調(diào)節(jié)溶液酸堿性，使脫除叔丁氧羰基(Boc)的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。將脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)后的反應(yīng)溶液加入水中，再通過弱酸來調(diào)節(jié)溶液酸堿性，使脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
[0015]反應(yīng)過程的具體實施通式如下:
I號保護(hù)氨基酸+2號保護(hù)氨基酸一在二甲基甲酰胺(DMF)中縮合一全保護(hù)二肽溶液一加入純水中析出全保護(hù)二肽(固體)一過濾洗滌得到全保護(hù)二肽(純化的保護(hù)二肽)一干燥，脫除全保護(hù)二肽的氨基保護(hù)基一脫除氨基保護(hù)基的側(cè)鏈保護(hù)二肽溶液一加入純水中并用弱酸(或弱堿)調(diào)節(jié)溶液酸堿性使側(cè)鏈保護(hù)二肽析出完全一過濾洗滌得側(cè)鏈保護(hù)二肽一干燥，與3號保護(hù)氨基酸縮合一過程循環(huán)一得全保護(hù)多肽一脫除保護(hù)基一多肽。
[0016]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種多肽合成方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，將反應(yīng)溶液加入水中，析出固體后，經(jīng)過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護(hù)基后加入水中，并調(diào)節(jié)溶液酸堿性，將脫除氨基保護(hù)基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護(hù)基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N- 二甲基甲酰胺中縮合，然后重復(fù)上述過程，直至得到全保護(hù)多肽，再脫除所述全保護(hù)多肽的保護(hù)基，得到目標(biāo)多肽。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽液相合成方法，其特征在于，所述中間體的氨基保護(hù)基包括叔丁氧羰基和9-芴甲氧羰基，采用三氟乙酸脫除叔丁氧羰基，采用哌啶和DMF的混合溶液脫除9-芴甲氧羰基。
3.如權(quán)利要求2所述的多肽液相合成方法，其特征在于，將脫除叔丁氧羰基后的反應(yīng)溶液加入水中，再通過弱堿來調(diào)節(jié)溶液酸堿性，使脫除叔丁氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
4.如權(quán)利要求2所述的多肽液相合成方法，其特征在于，將脫除9-芴甲氧羰基后的反應(yīng)溶液加入水中，再通過弱酸來調(diào)節(jié)溶液酸堿性，使脫除9-芴甲氧羰基的中間體析出，然后過濾、洗滌、干燥。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種多肽合成方法，其包括以下步驟：將氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，將反應(yīng)溶液加入水中，析出固體后，經(jīng)過濾、洗滌、干燥，得到中間體，脫除所述中間體的氨基保護(hù)基后加入水中，并調(diào)節(jié)溶液酸堿性，將脫除氨基保護(hù)基的中間體析出，干燥；將所述脫除氨基保護(hù)基的中間體與待縮合的氨基酸衍生物置于N，N-二甲基甲酰胺中縮合，然后重復(fù)上述過程，直至得到全保護(hù)多肽，再脫除所述全保護(hù)多肽的保護(hù)基，得到目標(biāo)多肽。本發(fā)明避免大量使用有機(jī)溶劑進(jìn)行反應(yīng)后的處理，改用水作為析出保護(hù)多肽中間體的溶劑，能夠大幅度降低多肽的生產(chǎn)成本，而且能夠減少因大量使用有機(jī)溶劑而對環(huán)境造成的污染。
【IPC分類】C07K1-06, C07K1-02
【公開號】CN104725463
【申請?zhí)枴緾N201510072355
【發(fā)明人】袁建新
【申請人】南通奧斯特鞋業(yè)有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年2月12日