一種預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制備及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種血凝素抗原的制備，尤其是涉及一種預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制備及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]禽流感和季節(jié)性流感是困擾世界的問題。最新流行的H10N8禽流感病毒對人的感染是亟待解決的問題。
[0003]大流感是比季節(jié)性流感更為嚴(yán)重的疾病。比如1918年“西班牙”大流感造成了世界范圍內(nèi)4千萬到I億人的死亡。2009-2010年的HlNl豬流感在世界范圍內(nèi)迅速蔓延，并被WHO定義為21世紀(jì)第一起大流感。高致病禽流感(HPAI)病毒可能造成未來的大流感。比如，逐漸增加的H5N1禽流感病毒感染病例也顯示出了造成大流感的可能。其它潛在的可能造成大流感的還有曾經(jīng)感染過人的H7N2和H9N2禽流感病毒。2013年3月，華東地區(qū)曾爆發(fā)了 H7N9大流行，造成嚴(yán)重的疾病和死亡現(xiàn)象。尚無可預(yù)防新型的H10N8禽流感病毒的疫苗。H10N8禽流感病毒，是一種新型的禽流感病毒類型，首次發(fā)現(xiàn)病例是在江西省，甲型流感依據(jù)流感病毒特征可分為HxNx (H為血凝素蛋白，N為神經(jīng)氨酸酶蛋白)共140余種亞型，目前，國內(nèi)外還沒有公開任何關(guān)于預(yù)防H10N8禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制備及應(yīng)用的相關(guān)研宄報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種可用于預(yù)防H10N8禽流感的預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制備及應(yīng)用
[0005]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:一種預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制備，包括以下步驟:
[0006](I)制備含有HlO基因的穩(wěn)定的重組桿狀病毒(rBV);
[0007](2)從Sf9細胞中分離的HlO重組血凝素的的重組流感亞病毒顆粒SVP ；
[0008](3)重組流感亞病毒顆粒經(jīng)NP40表面活性劑處理后采用離子交換和分子篩層析純化。
[0009]上述預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的應(yīng)用，該HlO重組血凝素可用于預(yù)防禽流感H10N8的感染，免疫人或動物以產(chǎn)生抗體和保護作用，與針對H10N8或HlO血凝素的抗體發(fā)生反應(yīng)。
[0010]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于:
[0011]本發(fā)明首次成功制備了包含潛在的大流感病毒H10N8的血凝素蛋白HlO SVPJi于H10N8流感病毒有免疫原性，是由HlO凝血素組成的全新重組流感亞病毒顆粒(SVP)疫苗?？偟貋碚f，SVP是由細胞培養(yǎng)(昆蟲或其它細胞)中分離出來的納米顆粒，是由血凝素(HA)蛋白分子組成的。與流感類病毒顆粒不同，我們的SVP不含有NA、M1或其它需要用來制備類病毒顆粒的蛋白，由HA組成的多個分子集合。SVP代表球形或多晶結(jié)構(gòu)，僅有脂類和以天然狀態(tài)存在的HA分子。SVP能夠誘導(dǎo)和VLP相似的免疫反應(yīng)。該SVP通過sf9昆蟲細胞膜形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，具有高效、低成本的特點，可用于預(yù)防H10N8禽流感病毒的感染。另外此重組血凝素在昆蟲細胞中表達，不依賴于雞胚，很容易進行工藝放大和規(guī)?；a(chǎn)。
【附圖說明】
[0012]圖1為HlO重組血凝素組成的亞病毒顆粒示意圖；
[0013]圖2為電鏡下的HlO重組血凝素的亞病毒顆粒照片。
【具體實施方式】
[0014]以下結(jié)合附圖實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。
[0015]一、具體實施例
[0016]為了制備SVP，禽流感病毒H10N8的血凝素HlO基因在重組桿狀病毒(rBV)中的克隆。得到的rBV用于在Sf9細胞中表達HlO血凝素蛋白。從Sf9細胞中分離的HlO重組血凝素的SVP經(jīng)NP40表面活性劑處理后采用離子交換(IEX)和分子篩層析純化。結(jié)果如圖1和圖2所示，病毒顆粒清晰，純度高。
[0017]二、應(yīng)用實施例
[0018]我們評估了重組血凝素HlO在鼠和白鼬的模型中的挑戰(zhàn)性模型中的免疫原性和有效性。免疫原性由HAI (血凝素抑制)和中和病毒的抗體確認(rèn)。死亡率由接種疫苗的動物在三種病毒挑戰(zhàn)性實驗后確定。
[0019]上述實施例是對本發(fā)明的進一步說明，但本發(fā)明的保護范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。
【主權(quán)項】
1.一種預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制備，其特征在于包括以下步驟: (1)制備含有HlO基因的穩(wěn)定的重組桿狀病毒(rBV); (2)從Sf9細胞中分離的HlO重組血凝素的的重組流感亞病毒顆粒SVP； (3)重組流感亞病毒顆粒經(jīng)NP40表面活性劑處理后采用離子交換和分子篩層析純化。
2.—種根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的應(yīng)用，其特征在于:該HlO重組血凝素可用于預(yù)防禽流感H10N8的感染，免疫人或動物以產(chǎn)生抗體和保護作用，與針對H10N8或HlO血凝素的抗體發(fā)生反應(yīng)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種預(yù)防禽流感病毒感染的新型血凝素抗原的制備及其應(yīng)用，特點是包括以下步驟：(1)制備含有H10基因的穩(wěn)定的重組桿狀病毒(rBV)；(2)Sf9細胞表達H10的SVP；(3)SVP的純度和穩(wěn)定性，該H10重組血凝素可用于預(yù)防禽流感H10N8的感染，免疫人或動物以產(chǎn)生抗體和保護作用，與針對H10N8或H10血凝素的抗體發(fā)生反應(yīng)，優(yōu)點是具有高效、低成本的特點，可用于預(yù)防H10N8禽流感病毒的感染，另外此重組血凝素在昆蟲細胞中表達，不依賴于雞胚，很容易進行工藝放大和規(guī)模化生產(chǎn)。
【IPC分類】C12N15-866, A61K39-145, C12N7-04, A61P31-16
【公開號】CN104711291
【申請?zhí)枴緾N201410345277
【發(fā)明人】喬素梅
【申請人】寧波欣安醫(yī)療科技有限公司
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2014年7月21日