一種干細胞無血清培養(yǎng)基的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物領域，尤其涉及一種干細胞無血清培養(yǎng)基。
【背景技術】
[0002] 干細胞在再生醫(yī)學（細胞治療）、藥物篩選及早期胚胎發(fā)育研宄中有廣闊的應用 前景，但其研宄仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)，其中最關鍵的是干細胞的培養(yǎng)試劑。干細胞培養(yǎng)基的 發(fā)展經(jīng)歷了從標準滋養(yǎng)層培養(yǎng)到條件培養(yǎng)基培養(yǎng)，到最后的成份確定培養(yǎng)基培養(yǎng)的動態(tài)發(fā) 展過程。起初，干細胞是在滋養(yǎng)層細胞上生長，且培養(yǎng)基中添加了胎牛血清（FBS)和動物來 源的生長因子。然而這些動物來源的成分會在臨床上引起很多潛在的危險：（1)含有的免 疫原和毒蛋白能激發(fā)免疫反應，發(fā)生免疫排斥，比如，體外培養(yǎng)帶有動物來源Neu5GC抗體 的細胞，移植到人體內(nèi)后會產(chǎn)生嚴重的免疫排斥反應。動物來源組分擴增的細胞一直到人 體內(nèi)后會引起嚴重的過敏反應和免疫排斥反應；（2)增加了病原微生物污染干細胞的危險 性，包括病毒和細菌感染、朊病毒和未知的動物傳染??；（3)從滋養(yǎng)層中分離純化干細胞費 時費力；(4)培養(yǎng)系統(tǒng)中的各種復雜未知的營養(yǎng)成份，干擾了基礎研宄的結(jié)果，使研宄結(jié)果 失去了真實性。所以要盡量減少培養(yǎng)系統(tǒng)中的外源性物質(zhì)，并明確維持干細胞生長的具體 成份，建立無外源物質(zhì)、成份明確的培養(yǎng)系統(tǒng)。這不僅有利于干細胞的臨床應用和基礎研 宄，也有利用提高培養(yǎng)系統(tǒng)的可重復性和標準化。
[0003] 干細胞的臨床應用要求用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。然而目前市場上即使是國際品牌的 無血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果卻遠遠不如帶血清的培養(yǎng)基。CN102827807A公開了一種無血清 培基，其必要組成為MDM、L-谷氨酰胺、碳酸氫鈉、H印es、重組人胰島素、重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白、 重組人白蛋白、2-巰基乙醇、原兒茶酸、脂質(zhì)、氨基酸、維生素、微量元素、氫化可的松、維生 素C、粘接胺或重組人纖連蛋白、黃體酮、腐胺、肝素、血清素、EGF、b-FGF、TOGF-BB、IGF-I。 CN102634482A公開了一種間充質(zhì)干細胞的無血清完全培養(yǎng)基，由基礎培養(yǎng)基和添加成份 構(gòu)成，所述的基礎培養(yǎng)基為DMEM/F12，所述的添加成分由重組人胰島素、人血清白蛋白、人 轉(zhuǎn)鐵蛋白、膽固醇、亞硒酸鈉、硝酸鐵和葡聚糖組成。上述無血清培養(yǎng)基成分確定，均能用于 細胞的培養(yǎng)。而帶血清的干細胞培養(yǎng)基因為血清的組成具有不確定的性，可控性、重現(xiàn)性都 比較差，不利于產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；?；而且動物血清中潛在的病原體的污染，從而使干細胞的臨 床應用受到了很大的限制。
[0004] 無血清無動物源培養(yǎng)基組成確定、重現(xiàn)性、可控性都比較好，因此為進一步推廣干 細胞在臨床上的應用，研發(fā)出無血清無動物源且組成確定的干細胞培養(yǎng)基具有重要的臨床 診斷意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種干細胞無血清培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基化學成分明確、無 血清、無動物源，能夠避免目前干細胞培養(yǎng)基在臨床應用中的弊端。
[0006] 為達此目的，本發(fā)明采用以下技術方案：
[0007]-方面，本發(fā)明提供了一種干細胞無血清培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基添加劑包括以下組 分：
【主權項】
1. 一種干細胞無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基添加劑包括以下組分：
2. 根據(jù)權利要求1所述的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基添加劑包括以下組 分：

3. 根據(jù)權利要求1或2所述的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基添加劑包括以下 組分：
4. 根據(jù)權利要求1-3中任一項所述的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基添加劑 中的蛋白為人源化的細胞因子。
5. 根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基添加劑 中的蛋白為通過DNA重組技術表達獲得。
6. 根據(jù)權利要求1所述的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，還包括基礎培養(yǎng)基，所述基礎培 養(yǎng)基為〇1^]?、]\^]\1、1^]\〇-164〇、〇1^]\0712、]\1199、頂〇11中的任意一種或至少兩種組合。
7. 根據(jù)權利要求1-6中任一項所述的無血清培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)干細胞中的應用。
8. 根據(jù)權利要求7所述的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述的干細胞為間充質(zhì)干細胞。
9. 根據(jù)權利要求7或8所述的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述的干細胞為臍帶間充質(zhì) 干細胞、脂肪干細胞、骨髓干細胞或臍血造血干細胞。
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物領域，尤其涉及一種干細胞無血清培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基添加劑包括以下組分：人血白蛋白5-30g/L、植物源性重組人血清轉(zhuǎn)鐵蛋白1-10g/L、α1酸性糖蛋白0.1-8g/L、α2-HS-糖蛋白0.1-8g/L、載脂蛋白AⅠ0.05-5g/L、載脂蛋白AⅡ0.05-5g/L、血液結(jié)合素0.01-2g/L、腺苷脫氨酶0.05-5g/L、絲氨酸蛋白酶抑制蛋白0.03-3g/L、人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白0.01-3g/L和人胰島素0.01-3g/L。本發(fā)明的干細胞無血清培養(yǎng)基排除了動物來源的病原體污染，且成分確定，因此重現(xiàn)性、可控性都要比血清培養(yǎng)基好，體外培養(yǎng)干細胞達到了優(yōu)于血清培養(yǎng)基的效果，提高了干細胞擴增速度，大大縮短了干細胞培養(yǎng)的時間。
【IPC分類】C12N5-077, C12N5-0775, C12N5-0789
【公開號】CN104694470
【申請?zhí)枴緾N201510147883
【發(fā)明人】彭樂
【申請人】彭樂
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年3月31日