廢糖蜜用于發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種廢糖蜜的發(fā)酵利用方法，尤其是一種廢糖蜜海洋微生物發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶的方法。
【背景技術】
[0002]糖蜜是生產蔗糖的副產物，如果將糖蜜應用于發(fā)酵工業(yè)，將大大降低玉米等使用量，能夠節(jié)約成本，并且減少了糖蜜處理的難度和降低污染風險。
[0003]四氫嘧啶羥化酶是四氫嘧啶合成羥基四氫嘧啶的關鍵酶，四氫嘧啶是嗜鹽或者耐鹽微生物在受到外界高鹽濃度脅迫時合成的能夠抵御外界高滲透壓的一種相容性溶質，羥基四氫嘧啶作為四氫嘧啶的衍生物，除了和四氫嘧啶一樣能夠抵御外界高滲透壓對細菌細胞的脅迫，還能夠提高細菌對高溫的耐受性，其應用更廣，對帕金森等疾病也具有一定的治療作用，在生物工業(yè)和醫(yī)藥等領域具有應用前景。
[0004]因此，利用糖蜜來發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶，能夠降低生產成本和開辟了糖蜜處理的新途徑。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種利用廢糖蜜為主要碳源發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶的方法。
[0006]實現本發(fā)明目的的一種通過海洋微生物發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶的方法，包括以下步驟。
[0007]將能夠產四氫嘧啶羥化酶的海洋微生物菌種接種在試管中活化18-26h，然后接種到搖瓶中擴大培養(yǎng)，將搖瓶中的菌種接種到種子罐擴大培養(yǎng)，接種量為3-5%，然后種子罐培養(yǎng)24h后以5-10%的接種量接入發(fā)酵罐發(fā)酵。發(fā)酵罐發(fā)酵36小時，在發(fā)酵過程中流加糖蜜。將發(fā)酵液離心收集細胞然后將收集到的濕細胞加入為其20倍的水中釋放2-10分鐘，然后離心，收集液體，即為粗酶液，根據用途將粗酶液進一步純化分離結晶。
[0008]實現本發(fā)明所用的糖蜜為糖廠生產蔗糖的下腳料。
【具體實施方式】
[0009]實施例1
(I)菌種活化，選用德國菌種保藏中心的ih 1morms ο I onga ieDSM 258 It作為發(fā)酵菌種，選用營養(yǎng)培養(yǎng)基作為試管和三角瓶培養(yǎng)的活化培養(yǎng)基，比例如下(g/L):5g酵母膏，5g蛋白胨，2M NaCl，pH調整到7.2。試管裝液量6ml，500ml錐形瓶裝液量100ml。
[0010](2)發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)，糖蜜20g，豆柏粉，5g，葡萄糖lg，硫酸鎂0.0lg，硫酸亞鐵，0.005g, 2M NaCl，pH 調整到 7.2。
(3)將保存于-80度冰箱的種子取出到試管中活化20h，240轉/秒搖床培養(yǎng)。然后接種于錐形瓶中，240轉/秒搖床搖瓶培養(yǎng)24h。
[0011](4)將搖瓶培養(yǎng)的種子接入35升種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20h后接種到350升發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵36h，發(fā)酵12小時后通過補料方式流加糖蜜10-30升。
[0012](5)將步驟四得到的發(fā)酵液通過高速離心機10000轉離心收集菌體，然后將菌體置入儲藏罐加入20倍水，攪拌2-5分鐘，離心收集液體即為粗酶液。粗酶液進一步純化為目的酶制劑。
【主權項】
1.一種利用廢糖蜜發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶的方法，包括以下步驟: (1)發(fā)酵培養(yǎng)基主要包括將廢糖蜜、豆柏粉、硫酸鹽； (2)將能夠產四氫嘧啶羥化酶的海洋微生物菌種接種在試管中活化18-26h，然后接種到搖瓶中擴大培養(yǎng)，將搖瓶中的菌種接種到種子罐擴大培養(yǎng)，接種量為3-5%，然后種子罐培養(yǎng)24h后以5-10%的接種量接入發(fā)酵罐發(fā)酵； (3)發(fā)酵罐發(fā)酵過程中流加糖蜜，發(fā)酵時間為36小時； (4)將發(fā)酵液離心收集細胞然后將收集到的濕細胞加入為其20倍的水中釋放2-10分鐘，然后離心，收集液體，即為粗酶液，根據用途將粗酶液進一步純化分離結晶。
2.根據權利要求1所述的一種利用廢糖蜜發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶的方法，其特征在于:所述糖蜜的添加量為5-15%。
3.根據權利要求1和2所述的一種利用廢糖蜜發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶的方法，其特征在于:糖蜜作為主要碳源發(fā)酵前添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中，并且發(fā)酵過程中通過補料方式繼續(xù)流加廢糖蜜。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種利用廢糖蜜作為主要原料生產四氫嘧啶羥化酶的方法，主要包括以糖蜜作為主要碳源，添加豆粕粉作為氮源，高密度發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶。本發(fā)明用廢糖蜜代替了玉米粉和部分豆粕粉等原料，使得發(fā)酵生產四氫嘧啶羥化酶成本大大降低。
【IPC分類】C12N9-02
【公開號】CN104560902
【申請?zhí)枴緾N201310483668
【發(fā)明人】朱道辰, 陳焱, 朱淑靜, 洪好
【申請人】鎮(zhèn)江拜因諾生物科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月16日