:本發(fā)明屬于生物活性物質(zhì)提取,更具體地涉及一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)
0、
背景技術(shù):
1、何首烏為蓼科植物何首烏(polygonum?multiflorum?thunb)的干燥塊根,具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便等功效。現(xiàn)代藥理研究表明何首烏具有抗腫瘤、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗衰老、提高免疫力、抗炎等活性,因此,近年來何首烏在藥品、保健品、化妝品等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛?;瘜W(xué)成分研究表明何首烏塊根中主要含有二苯乙烯苷類、多糖類、蒽醌類、黃酮類、磷脂類等活性成分。何首烏提取物主要活性成分是何首烏苷,二苯乙烯苷是何首烏苷中特有的水溶性生物活性成分,也是一種有效的化妝品護(hù)膚成分。因此,何首烏提取物被作為化妝品添加劑通過外用而得到廣泛應(yīng)用。在生發(fā)和防止脫發(fā)中的效果與作用機(jī)制的研究表明何首烏提取物有效成分何首烏苷能夠調(diào)控與生發(fā)或防止脫發(fā)相關(guān)的5α-還原酶、堿性磷酸酶(alpl)、雄激素受體、dkk-1等基因表達(dá),在促進(jìn)生發(fā)與防止脫發(fā)方面效果顯著。
2、目前,何首烏苷的提取方法多采用水作為反應(yīng)溶劑提取,并結(jié)合相應(yīng)的超聲波處理技術(shù)和微波處理技術(shù),提取技術(shù)研究相對成熟,二苯乙烯苷是何首烏苷中特有的水溶性生物活性成分,水作為優(yōu)選溶劑,可以用于二苯乙烯苷的提取,但是何首烏為木本植物,何首烏苷有一部分作為游離態(tài)處于細(xì)胞之間,這部分可以很方便的利用水提提取出來,還有一部分作為結(jié)合態(tài)或游離態(tài)處于何首烏的細(xì)胞內(nèi)或者細(xì)胞膜蛋白上,這部分何首烏苷不能直接通過水提的方式提取出來,
3、最近也有些研究表明:可以通過超聲波細(xì)胞破碎機(jī)對何首烏粉末進(jìn)行處理,該法可以破壞細(xì)胞壁,再通過破碎細(xì)胞的方式,將細(xì)胞內(nèi)容物釋放,再利用水提的方式將何首烏苷提取出來,然而隨著細(xì)胞的破碎,其他水溶性活性物質(zhì)也會(huì)進(jìn)入水溶液,給后續(xù)精帶來無法解決的難題,導(dǎo)致產(chǎn)品純度極差。
4、如何獲得一種純度高、收率高、操作流程簡單的何首烏苷的提取方法至關(guān)重要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
0、
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
1、為解決上述問題,克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明提供了一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法及其應(yīng)用,能夠有效的解決首烏苷不能直接通過水提的方式提取和提取率低的問題。
2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的具體技術(shù)方案為:低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法,其特征在于包括如下步驟:
3、(1)將何首烏粉末利用超聲波連續(xù)流細(xì)胞破碎機(jī)處理得到何首烏破壁粉末,將何首烏破壁粉末按照料液比為1:(7-9)置于水中,加入磷脂酶和螯合樹脂并混合攪拌,同時(shí)控制容器溫度為40-50℃,反應(yīng)1-2h,得到處理液;撈出螯合樹脂,離心取上層清液得到處理液;
4、(2)將螯合樹脂加入到處理液中,加入糖苷內(nèi)切酶h、處理液的ph為7.5-8.3,控制容器溫度為40-50℃,反應(yīng)0.5h,再加1%edta反應(yīng)0.5-2h,撈出螯合樹脂,抽濾取上層清液得到反應(yīng)液;
5、(3)在反應(yīng)液中加入乙醚溶劑中,常溫萃取48小時(shí)后,得到上清液;
6、(4)將上清液經(jīng)濃縮并干燥后,得到何首烏苷粗品。
7、進(jìn)一步地,按照處理液的質(zhì)量百分比加入1-5%磷脂酶、10-15%螯合樹脂、1%-5%糖苷內(nèi)切酶h、1-2%反應(yīng)助劑,處理液的ph為7.5-8.3。
8、進(jìn)一步地,反應(yīng)助劑為金屬螯合劑,金屬螯合劑為edta。
9、進(jìn)一步地,所述何首烏粉末與所述乙醚的質(zhì)量體積比為(45~55)g:(0.5~1.5)l。
10、進(jìn)一步地,何首烏苷粗品通過精制工藝得到精制何首烏苷。
11、進(jìn)一步地,所述精制工藝:
12、(1)將何首烏苷粗品,加入蒸餾水,搖勻后進(jìn)行超聲預(yù)處理,冷卻,調(diào)節(jié)溶液ph5-8;加入纖維素酶,添加量為0.5-2.5%,在溫度45-65℃下酶解4-8h,取出,高溫進(jìn)行滅酶,冷卻;
13、(2)將上述酶解液放入大孔樹脂,以水為洗脫液洗脫,洗脫得到洗脫液,洗脫液干燥,得到精制何首烏苷。
14、一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法制備的何首烏苷。
15、一種何首烏苷在制備促進(jìn)生發(fā)與防止脫發(fā)的化妝品中的應(yīng)用。
16、本發(fā)明的有益效果是:
17、本發(fā)明創(chuàng)造性的將可以通過超聲波細(xì)胞破碎機(jī)對何首烏粉末進(jìn)行處理,將細(xì)胞內(nèi)容物釋放,極大地提高了體系中的何首烏苷的含量,借助螯合樹脂將糖蛋白捕獲,并通過水提和將不溶于水的內(nèi)容物去掉,避免雜質(zhì)引入,再借助乙醚萃取將水解后的何首烏苷轉(zhuǎn)移至乙醚相與水溶性物質(zhì)分離。
18、本發(fā)明創(chuàng)造性地在何首烏粉末的細(xì)胞內(nèi)容物中加入糖苷內(nèi)切酶h,糖苷內(nèi)切酶h能夠?qū)Ⅱ蠘渲东@的糖蛋白中結(jié)合態(tài)的何首烏苷釋放,極大地提高體系中的首烏苷的含量,從而配合乙醚的加入使水溶性的蛋白的變性進(jìn)入水相,將產(chǎn)物與雜質(zhì)有效分離,極大地提高了首烏苷的收率和純度。
19、本發(fā)明創(chuàng)造性地分步加入edta,保證了螯合樹脂優(yōu)先捕獲的糖蛋白,進(jìn)一步地作為金屬螯合劑避免金屬離子能夠?qū)问诪踯掌鸬搅私到獾淖饔?,還能夠?qū)μ擒諆?nèi)切酶h起到一定的緩沖作用,避免過度水解的產(chǎn)生。
1.一種低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法,其特征在于包括如下步驟:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法,其特征在于按照處理液的質(zhì)量百分比加入1-5%磷脂酶、10-15%螯合樹脂、1%-5%糖苷內(nèi)切酶h、1-2%反應(yīng)助劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法,其特征在于反應(yīng)助劑為金屬螯合劑,金屬螯合劑為edta。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法,其特征在于何首烏粉末與乙醚的質(zhì)量體積比為(45~55)g:(0.5~1.5)l。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法,其特征在于何首烏苷粗品通過精制工藝得到精制何首烏苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法,其特征在于所述精制工藝:
7.一種權(quán)利要求1~6任一項(xiàng)所述低溫溶劑酶法提取何首烏苷的方法制備的何首烏苷。
8.一種如權(quán)利要求7所述何首烏苷在制備促進(jìn)生發(fā)與防止脫發(fā)的化妝品中的應(yīng)用。