本申請(qǐng)涉及生物醫(yī)藥，具體涉及一種基質(zhì)膠的制備方法及基質(zhì)膠。

背景技術(shù)：

1、在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，基質(zhì)膠作為一種常用的研究工具，在細(xì)胞生物學(xué)研究和藥物篩選中發(fā)揮著重要作用。它可以模擬體內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)環(huán)境，為細(xì)胞提供一個(gè)三維的空間結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)細(xì)胞生長和功能的維持。尤其是在腫瘤研究中，基質(zhì)膠能夠提供類似于腫瘤微環(huán)境的支持，使得研究細(xì)胞間的相互作用更為接近生理狀態(tài)，極大地推動(dòng)了疾病模型構(gòu)建、細(xì)胞增殖和遷移等方面的進(jìn)展。

2、目前，基質(zhì)膠的制備方法主要有以下兩種：一是利用動(dòng)物組織進(jìn)行提取，二是通過細(xì)胞培養(yǎng)脫細(xì)胞獲得。其中，動(dòng)物組織提取法操作簡單且容易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，但是獲得的基質(zhì)膠存在批次間差異大、化學(xué)成分不明確、潛在病原污染等風(fēng)險(xiǎn)；而通過細(xì)胞培養(yǎng)后脫細(xì)胞法制備的基質(zhì)膠可以較好地控制其組成成分，獲得的基質(zhì)膠一致性好，但是其采用的培養(yǎng)基中包含有胎牛血清等動(dòng)物源成分，導(dǎo)致原料成本較高、且獲得的基質(zhì)膠的生物相容性不佳，不利于臨床使用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的原料成本高、基質(zhì)膠中有動(dòng)物源成分殘留的風(fēng)險(xiǎn)等問題，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N基質(zhì)膠的制備方法及基質(zhì)膠。

2、第一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N基質(zhì)膠的制備方法，采用如下的技術(shù)方案：

3、一種基質(zhì)膠的制備方法，包括以下步驟：采用細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)肉瘤細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)，然后用脫細(xì)胞液脫細(xì)胞，經(jīng)透析、過濾，獲得基質(zhì)膠；

4、所述細(xì)胞培養(yǎng)基包括無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基以及以下含量的組分：扶芳藤提取物0.01-0.1g/l、益母草提取物0.04-0.12g/l和丹參凍干粉0.3-0.5g/l。

5、本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N能夠有效提升基質(zhì)膠產(chǎn)量和生物相容性的制備方法，該方法采用上述特定成分組成的細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，能夠顯著促進(jìn)肉瘤細(xì)胞的生長與分化，進(jìn)而使制得的基質(zhì)膠的產(chǎn)量更高，且具有更好的生物活性。本申請(qǐng)中，細(xì)胞在最佳生長環(huán)境下培養(yǎng)后，通過脫細(xì)胞處理，可以將細(xì)胞膜等非特異性成分有效去除，避免了傳統(tǒng)方法中可能出現(xiàn)的細(xì)胞殘骸殘留，提高了最終產(chǎn)物基質(zhì)膠的純凈度；最后通過透析和過濾步驟，進(jìn)一步清除了小分子雜質(zhì)和其他不必要的成分，確保了所得基質(zhì)膠質(zhì)量穩(wěn)定可靠。本申請(qǐng)的培養(yǎng)基的組分選擇以及濃度配比經(jīng)過精心設(shè)計(jì)，不僅能很好支持肉瘤細(xì)胞生長，還能有效誘導(dǎo)基質(zhì)膠的生成。綜上，本申請(qǐng)?zhí)峁┑姆椒ê喕嘶|(zhì)膠的生產(chǎn)流程，降低了成本，提高了產(chǎn)量，適合大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用，此外，上述方法獲得的基質(zhì)膠具備優(yōu)異的生物相容性和較低的免疫原性，適用于多種生物醫(yī)學(xué)研究及臨床治療目的。

6、可選地，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包括以下含量的組分：扶芳藤提取物0.01-0.1g/l、益母草提取物0.06-0.10g/l和丹參凍干粉0.35-0.45g/l。

7、本申請(qǐng)?zhí)峁┑募?xì)胞培養(yǎng)基中，扶芳藤提取物、益母草提取物和丹參凍干粉中含有生長因子或類似物，上述物質(zhì)能夠刺激細(xì)胞的增殖與分化，有助于在制備基質(zhì)膠時(shí)獲得更多的細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而獲得更高產(chǎn)量的基質(zhì)膠；此外，益母草提取物含有多種微量元素、維生素和礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分，這些成分即使殘留在培養(yǎng)基中，可以為后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)提供必要的營養(yǎng)支持，幫助細(xì)胞在培養(yǎng)環(huán)境中更好地生長。本申請(qǐng)通過試驗(yàn)探究發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步將細(xì)胞培養(yǎng)基中各組分的含量控制在上述范圍內(nèi)，制得的基質(zhì)膠的產(chǎn)量更高。

8、在一些實(shí)施方案中，所述益母草提取物的含量可以為0.04-0.06g/l、0.04-0.08g/l、0.04-0.10g/l、0.04-0.12g/l、0.06-0.08g/l、0.06-0.10g/l、0.06-0.12g/l、0.08-0.10g/l、0.08-0.12g/l或0.10-0.12g/l。

9、在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述益母草提取物的含量還可以為0.04g/l、0.06g/l、0.08g/l、0.10g/l或0.12g/l。

10、在一些實(shí)施方案中，所述丹參凍干粉的含量可以為0.30-0.35g/l、0.30-0.40g/l、0.30-0.45g/l、0.30-0.50g/l、0.35-0.40g/l、0.35-0.45g/l、0.35-0.50g/l、0.40-0.45g/l、0.40-0.50g/l或0.45-0.50g/l。

11、在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述丹參凍干粉的含量還可以為0.30g/l、0.35g/l、0.40g/l、0.45g/l或0.50g/l。

12、可選地，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包括以下含量的組分：扶芳藤提取物0.05g/l、益母草提取物0.08g/l和丹參凍干粉0.40g/l。

13、可選地，當(dāng)采用懸浮培養(yǎng)時(shí)，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還包括終濃度為28-42g/l的重組人源化膠原蛋白。

14、在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述重組人源化膠原蛋白的終濃度為35g/l。

15、可選地，所述基質(zhì)膠的制備方法的具體步驟為：使用細(xì)胞培養(yǎng)基重懸肉瘤細(xì)胞，然后置于細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，在37℃、20-100rpm的轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)12-14天；低速離心去上清，并收集細(xì)胞；向細(xì)胞中加入細(xì)胞液進(jìn)行重懸、高速離心，將收集的上清液進(jìn)行透析，獲得基質(zhì)膠。

16、可選地，所述加入細(xì)胞液進(jìn)行重懸、離心的操作需要重復(fù)至少3次，并將3次離心獲得的上清液合并再進(jìn)行過透析。

17、可選地，所述低速離心的轉(zhuǎn)速為1000-1200rpm，所述高速離心的轉(zhuǎn)速為10000-12000rpm。

18、第二方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┑幕|(zhì)膠的制備方法獲得的基質(zhì)膠。

19、第三方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┑幕|(zhì)膠的制備方法獲得的基質(zhì)膠在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

20、綜上所述，本申請(qǐng)具有以下有益效果：

21、1.本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N基質(zhì)膠的制備方法，該制備方法采用扶芳藤提取物、益母草提取物和丹參凍干粉制得的細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)，經(jīng)過脫細(xì)胞、透析、過濾等后處理，從而獲得高產(chǎn)量的基質(zhì)膠，并且基質(zhì)膠中不存在動(dòng)物源成分殘留，能夠用于ips培養(yǎng)相關(guān)的臨床試驗(yàn)。

22、2.本申請(qǐng)使用的細(xì)胞培養(yǎng)基中，進(jìn)一步將益母草提取物的含量控制在0.06-0.10g/l范圍內(nèi)，將丹參凍干粉的含量控制在0.35-0.45g/l范圍內(nèi)，獲得的細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果更好，使得基質(zhì)膠的產(chǎn)量能夠達(dá)到320mg以上，

技術(shù)特征：

1.一種基質(zhì)膠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：采用細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)肉瘤細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)，然后用脫細(xì)胞液脫細(xì)胞，經(jīng)透析、過濾，獲得基質(zhì)膠；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基質(zhì)膠的制備方法，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包括以下含量的組分：扶芳藤提取物0.01-0.1g/l、益母草提取物0.06-0.10?g/l和丹參凍干粉0.35-0.45?g/l。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基質(zhì)膠的制備方法，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)基包括以下含量的組分：扶芳藤提取物0.05g/l、益母草提取物0.08?g/l和丹參凍干粉0.40g/l。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基質(zhì)膠的制備方法，其特征在于，當(dāng)采用懸浮培養(yǎng)時(shí)，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還包括終濃度為28-42?g/l的重組人源化膠原蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基質(zhì)膠的制備方法，其特征在于，所述基質(zhì)膠的制備方法的具體步驟為：使用細(xì)胞培養(yǎng)基重懸肉瘤細(xì)胞，然后置于細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，在37℃、20-100rpm的轉(zhuǎn)速下培養(yǎng)12-14天；低速離心去上清，并收集細(xì)胞；向細(xì)胞中加入細(xì)胞液進(jìn)行重懸、高速離心，將收集的上清液進(jìn)行透析，獲得基質(zhì)膠。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基質(zhì)膠的制備方法，其特征在于，所述加入細(xì)胞液進(jìn)行重懸、離心的操作需要重復(fù)至少3次，并將3次離心獲得的上清液合并，再進(jìn)行過透析。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基質(zhì)膠的制備方法，其特征在于，所述低速離心的轉(zhuǎn)速為1000-1200rpm，所述高速離心的轉(zhuǎn)速為10000-12000rpm。

8.一種利用權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的基質(zhì)膠的制備方法獲得的基質(zhì)膠。

9.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的基質(zhì)膠的制備方法獲得的基質(zhì)膠在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種基質(zhì)膠的制備方法及基質(zhì)膠。本申請(qǐng)?zhí)峁┑幕|(zhì)膠的制備方法，包括以下步驟：采用細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)肉瘤細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)，然后用脫細(xì)胞液脫細(xì)胞，經(jīng)透析、過濾，獲得基質(zhì)膠；所述細(xì)胞培養(yǎng)基包括無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基以及以下含量的組分：扶芳藤提取物0.01?0.1g/L、益母草提取物0.04?0.12?g/L和丹參凍干粉0.3?0.5?g/L；本申請(qǐng)還提供了上述基質(zhì)膠的制備方法獲得的基質(zhì)膠。本申請(qǐng)?zhí)峁┑幕|(zhì)膠的制備方法制得的基質(zhì)膠具有產(chǎn)量高、無動(dòng)物源成分等優(yōu)點(diǎn)，能夠用于IPS細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)臨床試驗(yàn)。

技術(shù)研發(fā)人員：王雪瑩,郭恒
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣西愛科賽生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9