本發(fā)明涉及醫(yī)藥，具體而言，涉及一種秦巴硒菇多糖、提取純化方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、秦巴硒菇又稱為富硒姬松茸，富含多種活性成分，可作為免疫調(diào)節(jié)劑、抗癌劑、抗突變劑和抗菌物質(zhì)的來源，近年來越來越受到廣泛關(guān)注。

2、在現(xiàn)有技術(shù)中，一般使用水煮提取其中的多糖成分，雖然這種提取方法的得率比較高，但是得到的主要是秦巴硒菇粗多糖，純度低，在抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗病毒和降血糖等方面的效果比較差，這導(dǎo)致秦巴硒菇難以進(jìn)行有效的應(yīng)用。

3、為了提高純度，一般情況下往往可以使用離子純化或凝膠純化等技術(shù)，這些技術(shù)手段已經(jīng)趨于成熟。然而，在水煮的基礎(chǔ)上進(jìn)行離子純化或者凝膠純化，會導(dǎo)致得率很低，往往可能降低不足百分之一，這就導(dǎo)致秦巴硒菇多糖的提取效率嚴(yán)重降低，也不利于秦巴硒菇多糖的推廣和應(yīng)用。

4、另外，一些離子純化或凝膠純化的條件與秦巴硒菇多糖并不匹配，并且步驟繁瑣、成本高，對于秦巴硒菇原料的浪費(fèi)較多。

5、因此，為了適應(yīng)市場需求，提高秦巴硒菇藥用和營養(yǎng)價值，亟需研究一種針對秦巴硒菇粗多糖的提取純化工藝。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種秦巴硒菇多糖、提取純化方法及應(yīng)用。

2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明提供一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，所述方法包括水提醇沉、微濾超濾聯(lián)合過濾、離子純化和凝膠純化；所述微濾超濾聯(lián)合過濾包括以下步驟：

4、將經(jīng)過所述水提醇沉制備得到的秦巴硒菇粗多糖反復(fù)凍融后溶解并冷凍，將解凍后的解凍溶液離心并保留上清液；對所述上清液依次進(jìn)行微濾和超濾，收集濾液后干燥得到秦巴硒菇胞外粗多糖。

5、在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。

6、進(jìn)一步，所述微濾超濾聯(lián)合過濾包括以下步驟：

7、s2-1、將所述解凍溶液在7000～7500rpm下多次離心，每次離心時間為10～20min，獲取上清液；

8、s2-2、依次采用至少兩種微濾膜對步驟s2-1獲得的所述上清液進(jìn)行所述微濾，得到微濾液；

9、s2-3、先采用超濾膜對所述微濾液進(jìn)行超濾，再采用微濾膜進(jìn)行過濾，得到超濾液；

10、s2-4、對所述超濾液的離子強(qiáng)度進(jìn)行檢測。

11、進(jìn)一步，當(dāng)所述超濾液的離子強(qiáng)度低于10μs/cm時，完成所述微濾超濾聯(lián)合過濾；當(dāng)所述超濾液的離子強(qiáng)度高于10μs/cm時，重復(fù)所述s2-2的步驟直至所述超濾液的離子強(qiáng)度低于10μs/cm。

12、進(jìn)一步，所述步驟s2-2中，所述微濾膜為三種，依次為0.8μm微濾膜、0.45μm微濾膜和0.22μm微濾膜。

13、進(jìn)一步，所述步驟s2-3中，所述超濾膜是分子量為100kda的超濾膜，所述微濾膜為0.22μm微濾膜。

14、進(jìn)一步，所述水提醇沉包括以下步驟：

15、s1-1、獲取秦巴硒菇粉末；

16、s1-2、將所述秦巴硒菇粉末與水混合并加熱，在100℃下保持2.5～3.5h，反復(fù)過濾后對濾液進(jìn)行濃縮，得到濃縮液；

17、s1-3、將所述濃縮液離心后加入體積百分?jǐn)?shù)為95％的乙醇，離心并收集沉淀，干燥后得到所述秦巴硒菇粗多糖；所述濃縮液與所述乙醇的體積比為1:4～5。

18、進(jìn)一步，將所述秦巴硒菇胞外粗多糖配制成質(zhì)量濃度為20mg/ml的溶液，再采用二乙氨基乙基纖維素離子交換層析柱進(jìn)行所述離子純化；所述離子純化的洗脫液依次為去離子水、0.1mo?l/l的nacl溶液和0.2mo?l/l的nacl溶液；所述離子純化的上樣量為1ml，流速為0.25ml/min。

19、進(jìn)一步，將所述離子純化得到的洗脫液進(jìn)行過濾后，再進(jìn)行所述凝膠純化；所述凝膠純化的凝膠柱的填料為sephacrys-200，規(guī)格為16mm×100cm；所述凝膠純化的上樣量為1ml/每次，洗脫液為去離子水，洗脫流速為1ml/min。

20、本發(fā)明還提供一種秦巴硒菇多糖，采用如上述的方法制備得到。

21、本發(fā)明還提供一種如上述的秦巴硒菇多糖的應(yīng)用，可用于制備干預(yù)急性髓系白血病的制劑。

22、本發(fā)明的有益效果為：

23、(1)本發(fā)明的秦巴硒菇多糖的提取純化方法，采用水提醇沉與離子純化和凝膠純化相結(jié)合的方法，使得秦巴硒菇多糖能夠被有效提取，通過具有良好的純度，使其能夠得到廣泛的應(yīng)用；

24、(2)本發(fā)明的秦巴硒菇多糖的提取純化方法，在進(jìn)行離子純化和凝膠純化前，先進(jìn)行微濾超濾聯(lián)合過濾，實(shí)現(xiàn)除雜，從而有效提高提取純化的效果；

25、(3)本發(fā)明的秦巴硒菇多糖的提取純化方法，步驟簡單、容易操作，提取和純化的成本低；

26、(4)本發(fā)明的秦巴硒菇多糖，具有良好的純度，能夠有效應(yīng)用于各種領(lǐng)域，特別是用于制備干預(yù)急性髓系白血病的制劑中。

技術(shù)特征：

1.一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，包括水提醇沉、微濾超濾聯(lián)合過濾、離子純化和凝膠純化，得到所述秦巴硒菇多糖；所述微濾超濾聯(lián)合過濾包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，所述微濾超濾聯(lián)合過濾包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，當(dāng)所述超濾液的離子強(qiáng)度低于10μs/cm時，完成所述微濾超濾聯(lián)合過濾；當(dāng)所述超濾液的離子強(qiáng)度高于10μs/cm時，重復(fù)s2-2的步驟直至所述超濾液的離子強(qiáng)度低于10μs/cm。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，所述步驟s2-2中，所述微濾膜為三種，依次為0.8μm微濾膜、0.45μm微濾膜和0.22μm微濾膜。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，所述步驟s2-3中，所述超濾膜是分子量為100kda的超濾膜，所述微濾膜為0.22μm微濾膜。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任意一項(xiàng)所述的一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，所述水提醇沉包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，將所述秦巴硒菇胞外粗多糖配制成質(zhì)量濃度為20mg/ml的溶液，再采用二乙氨基乙基纖維素離子交換層析柱進(jìn)行所述離子純化；所述離子純化的洗脫液依次為去離子水、0.1mol/l的nacl溶液和0.2mol/l的nacl溶液；所述離子純化的上樣量為1ml，流速為0.25ml/min。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種秦巴硒菇多糖的提取純化方法，其特征在于，將所述離子純化得到的洗脫液進(jìn)行過濾后，再進(jìn)行所述凝膠純化；所述凝膠純化的凝膠柱的填料為sephacrys-200，規(guī)格為16mm×100cm；所述凝膠純化的上樣量為1ml/每次，洗脫液為去離子水，洗脫流速為1ml/min。

9.一種秦巴硒菇多糖，其特征在于，采用權(quán)利要求1～8任意一項(xiàng)所述的方法制備得到。

10.一種如權(quán)利要求9所述的秦巴硒菇多糖的應(yīng)用，其特征在于，可用于制備干預(yù)急性髓系白血病的制劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種秦巴硒菇多糖、提取純化方法及應(yīng)用。該方法包括水提醇沉、微濾超濾聯(lián)合過濾、離子純化和凝膠純化；微濾超濾聯(lián)合過濾包括以下步驟：將經(jīng)過水提醇沉制備得到的秦巴硒菇粗多糖反復(fù)凍融后溶解并冷凍，將解凍后的解凍溶液離心并保留上清液；對上清液依次進(jìn)行微濾和超濾，收集濾液后干燥得到秦巴硒菇胞外粗多糖。該方法使秦巴硒菇多糖能夠被有效提取，通過具有良好的純度，使其能夠得到廣泛的應(yīng)用；步驟簡單、容易操作，提取和純化的成本低，能夠有效應(yīng)用于各種領(lǐng)域。

技術(shù)研發(fā)人員：程明霞,何錦,于淼,劉蓓,范俊順,于尚睿,孫延慶
受保護(hù)的技術(shù)使用者：甘肅省人民醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6