本發(fā)明是一種含茶黃素雙沒食子酸酯的提取物的制備方法，屬于茶黃素雙沒食子酸酯提取物制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、茶黃素是茶色素的主要成分，共有12種組分，其中茶黃素、茶黃素-3-沒食子酸酯、茶黃素-3，3’-雙沒食子酸酯和茶黃素-3’-沒食子酸酯是4種最主要的茶黃素。tf3是茶黃素中一種重要的生物活性物質(zhì)，tf3，茶黃素組成成分，化學(xué)式c43h32o20，橙黃色，熔點226～233℃，易溶于甲醇、乙醇、水、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮。茶黃素中主要有四種重要的活性單體，分別是tf1\tf2a\tf2b\tf3，此四種單體中，tf3的活性最強，四種單體抗氧自由基能力的順利為tf3>tf2a=tf2b>tf1，因此茶黃素品質(zhì)的高低通常以tf3含量的高低為基準(zhǔn)，tf3含量高通常茶黃素的品質(zhì)也就優(yōu)。

2、目前茶黃素的制備工藝大體上主要有三種：直接提取法、化學(xué)氧化法及酶促氧化法。直接提取制備茶黃素的方法就是從紅茶中用熱水或溶劑直接抽提出來，并進行后道工序的純化干燥的工藝，該方法簡單，茶黃素比較容易獲取，但過程中茶黃素比較容易被氧化，產(chǎn)品含量不高，特別是tf3的含量也較低；化學(xué)氧化主要是利用無機氧化劑氧化兒茶素制得茶黃素，化學(xué)氧化根據(jù)其氧化的條件可分為堿性氧化和酸性氧化，化學(xué)氧化法雖然也能制備茶黃素產(chǎn)品，但化學(xué)法生產(chǎn)比酶法生產(chǎn)將投人更多的廢水處理系統(tǒng)費用，并且化學(xué)法缺乏底物專一性，副產(chǎn)品復(fù)雜，產(chǎn)品純度受到一定限制，有害物殘留比較嚴(yán)重等缺點，目前化學(xué)氧化法接收度較低；酶促氧化制取茶黃素的研究，主要是利用茶葉本身的多酚氧化酶和過氧化物酶的氧化特性來有目的地生產(chǎn)茶黃素，其機理是ppo對兒茶素進行氧化導(dǎo)致醌類的形成，再經(jīng)非酶性次級氧化變化，從而生成茶黃素，酶促氧化制備茶黃素是目前行業(yè)內(nèi)主流工藝，但產(chǎn)品含量還是不夠很高，tf3的含量通常只有10%。因此優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)工藝，提高純化技術(shù)，提高產(chǎn)品中tf3的含量，是茶黃素研究發(fā)展方向，也成為茶黃素產(chǎn)品發(fā)展中的一項重要課題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明目的是提供一種含茶黃素雙沒食子酸酯的提取物的制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過如下的技術(shù)方案來實現(xiàn)：一種含茶黃素雙沒食子酸酯的提取物的制備方法，包括以下步驟：

3、步驟1：采用油水雙液態(tài)生物發(fā)酵技術(shù)對紅茶進行發(fā)酵；

4、步驟2：對步驟1中發(fā)酵后的紅茶進行過濾，即采用分散態(tài)液相層析分離技術(shù)對紅茶發(fā)酵后的產(chǎn)物進行提取與分離；

5、步驟3：采用緩沖控溫體系濃縮技術(shù)對步驟2中提取和分離后的產(chǎn)物進行濃縮；

6、步驟4：采用分散態(tài)液相層析分離技術(shù)對步驟3中的產(chǎn)物再次進行純化；

7、步驟5：采用緩沖控溫體系濃縮技術(shù)對步驟4中再次純化的產(chǎn)物進行再次濃縮；

8、步驟6：對步驟5中的產(chǎn)物進行干燥處理。

9、具體地，所述油水雙液態(tài)生物發(fā)酵技術(shù)包括：

10、體系構(gòu)建：首先，根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物和所選微生物的特性，準(zhǔn)備油相和水相，油相包括長鏈脂肪酸、植物油或其他疏水性溶劑，水相則是富含微生物生長所需營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基；

11、微生物接種：將選定的微生物菌株接種到水相中，確保菌種能夠有效附著并分布在油水界面上，或在界面上進行生長；

12、培養(yǎng)條件優(yōu)化：調(diào)整和控制培養(yǎng)體系的溫度、ph值、氧氣供應(yīng)的參數(shù)，為微生物創(chuàng)造適宜的生長及產(chǎn)物流的環(huán)境；

13、發(fā)酵過程監(jiān)控：在發(fā)酵過程中定期取樣，監(jiān)測微生物生長狀況、產(chǎn)物濃度及體系穩(wěn)定性，必要時調(diào)整培養(yǎng)條件，以維持高效的生物轉(zhuǎn)化。

14、具體地，所述培養(yǎng)體系的溫度在60-90℃、ph值在5-7之間，其中氧氣供應(yīng)采用攪拌的方式來增加溶解度，攪拌速率在80-120r/min。

15、具體地，所述分散態(tài)液相層析分離技術(shù)包括：

16、溶劑選擇與配比：首先，需要選擇兩種互不相溶的溶劑：萃取溶劑和分散劑，根據(jù)目標(biāo)分析物的極性和分配系數(shù)，確定兩相的體積比；

17、混合與分散：將少量的萃取溶劑加入到含有目標(biāo)分析物的大量分散劑中，并迅速通過劇烈振蕩、超聲波或其他機械手段使萃取溶劑分散成微小液滴，形成一個分散態(tài)的兩相系統(tǒng)，這一過程極大地增加了兩相接觸面積，有利于分析物的快速轉(zhuǎn)移；

18、萃取與平衡：在輕微攪拌或靜置條件下，讓分析物從分散劑轉(zhuǎn)移到萃取溶劑微滴中，此步驟中，分析物依據(jù)其在兩相間的分配系數(shù)進行分配，達到萃取平衡；

19、相分離：通過離心、冷藏誘導(dǎo)相分離或使用磁性納米粒子等方法，促使微滴聚集并從分散劑中分離出來，形成清晰的兩相；

20、溶劑去除與富集：收集萃取相后，通過加熱、氮吹或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等手段去除大部分萃取溶劑和分散劑，得到高度濃縮的目標(biāo)分析物；

21、分析測定：將富集后的分析物溶液用于后續(xù)的分析檢測，如高效液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用。

22、具體地，所述萃取溶劑為有機相，所述分散劑為水相或緩沖液。

23、具體地，所述緩沖控溫體系濃縮技術(shù)包括：

24、配置緩沖溶液：根據(jù)物料性質(zhì)，配置適合的緩沖溶液，用于維持濃縮過程中體系的ph穩(wěn)定，保護目標(biāo)成分的活性；

25、連接與檢查系統(tǒng)：將原料液與緩沖液引入控溫濃縮系統(tǒng)，檢查所有管道連接是否密封，檢查控制系統(tǒng)中的溫度傳感器是否正常；

26、啟動控溫系統(tǒng)：設(shè)定目標(biāo)溫度，啟動控溫裝置，確保整個濃縮過程中體系溫度保持恒定，溫度的選擇需依據(jù)物料特性，通常略高于物料的冰點但低于其熱變性溫度；

27、開始濃縮：通過減壓蒸發(fā)、反滲透、超濾或低溫真空濃縮等方法開始濃縮過程，在控溫條件下，加快溶劑的蒸發(fā)或透過速度，同時監(jiān)控濃縮速率和物料狀態(tài)；

28、監(jiān)測與調(diào)整：在整個濃縮過程中，持續(xù)監(jiān)測物料的溫度、ph值、濃度指標(biāo)，根據(jù)需要微調(diào)控溫系統(tǒng)和濃縮速率，確保產(chǎn)品質(zhì)量；

29、終止?jié)饪s與冷卻：達到預(yù)定的濃縮終點后，停止加熱或抽真空，對濃縮液進行快速冷卻，防止后續(xù)的非酶性褐變或其他不利反應(yīng)；

30、清洗與消毒：完成全部操作后，對整個濃縮系統(tǒng)進行徹底的清洗與消毒，為下一批次的生產(chǎn)做好準(zhǔn)備。

31、本發(fā)明的有益效果：

32、在傳統(tǒng)酶促氯化制備茶黃素工藝的基礎(chǔ)上，精深度分析，針對tf3的分子物理化學(xué)特性，找出影響tf3的生物轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵點，在篩選特殊底物原料的基礎(chǔ)，開發(fā)出油水雙液態(tài)生物發(fā)酵技術(shù)，在生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化的過程，進行選擇的萃取富集油溶性的茶黃素單體tf3，使茶黃素單體tf3的轉(zhuǎn)化提升25%以上；在產(chǎn)品的純化過程中，利用茶黃素tf3為偏油性的特點，開發(fā)出分散態(tài)液相層析分離技術(shù)，有效去除偏水性的雜質(zhì)，富集偏油性成分tf3，從而使茶黃素單體tf3的含量提升至20%以上；在產(chǎn)品濃縮過程中，采用緩沖控溫體系濃縮技術(shù)，即在濃縮過程中采用ph緩沖體系增強茶黃素的穩(wěn)定性，同時控制一定溫度下進行茶黃素的濃縮，使茶黃素的整體降解率控制在5%以內(nèi)，使最終茶黃素產(chǎn)品中tf3的含量達20%以上，從而生產(chǎn)出高tf3茶黃素產(chǎn)品。