本發(fā)明涉及生物，更具體地說它涉及一種ace抑制肽vr8、其應(yīng)用及制備方法。

背景技術(shù)：

1、高血壓是一種慢性心血管疾病。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angi?otens?i?n?convert?ing?enzyme，ace)具有收縮血管和升高血壓的作用。降壓藥物可以通過抑制ace活性控制血壓，但長期使用會(huì)產(chǎn)生一定副作用。來源于乳制品的天然生物活性肽具有抑制ace活性、降低血壓的作用。同時(shí)鑒于其來源于食源性蛋白，因此特異性高、毒副作用小、療效好，在使用中能夠采用更大的藥劑量，滿足日常使用和保健的需求。

2、ace抑制肽在原蛋白中沒有活性，但能通過酶水解方法從原蛋白中釋放出。公告號為cn100398661c的中國專利公開了一種酪蛋白水解物及其生產(chǎn)過程與應(yīng)用，該酪蛋白水解物及其生產(chǎn)過程與應(yīng)用利用含有來自米曲霉(aspergi?l?l?us?oryzae)的胞外酶的酶組水解酪蛋白，以xp和xpp為核心組分的制備方法。另外，鐘玉旺等在《辣木籽凝乳酶在水牛乳干酪制備中應(yīng)用及產(chǎn)ace抑制肽分析》中報(bào)道了利用辣木籽凝乳酶在水牛乳干酪中制備ace抑制的工藝；湯海霞等在《酶解法制備綿羊乳酪蛋白ace抑制肽的工藝優(yōu)化及其抑制機(jī)制》中報(bào)道了利用堿性蛋白酶在綿羊乳酪蛋白中生產(chǎn)ace抑制肽的工藝。但是，如何利用酶組和胰蛋白酶混合復(fù)合酶制備ace抑制肽的工藝當(dāng)前仍舊是難以解決的技術(shù)難題。

3、公告號為cn117551170b的專利公開了一種來自于金槍魚的ace抑制肽ltfsy和sthphf，其ic50值分別為20.72和30.71μg/ml。孫美玲等在文章《海參水煮液中ace抑制肽的分離純化》中分離得到2個(gè)ace抑制肽，其i?c50分別為0.74和1.77mg/ml。但是，酪蛋白酶解產(chǎn)物成分復(fù)雜，不同ace抑制肽的鏈長和氨基酸組成差別很大，沒有統(tǒng)一的規(guī)律，也無法通過現(xiàn)有的ace抑制肽結(jié)構(gòu)進(jìn)行簡單的推斷獲得。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本申請的第一個(gè)目的在于提供一種ace抑制肽vr8，以實(shí)現(xiàn)具有體外ace抑制活性和降血壓功能的目的。其具體方案如下：

2、一種ace抑制肽vr8，所述ace抑制肽vr8的氨基酸序列為：vpnsaeer。

3、優(yōu)選地：所述ace抑制肽vr8的分子量為900.4301da，且1mg/ml條件下體外ace抑制率大于70％。

4、本申請的第二個(gè)目的在于提供一種ace抑制肽vr8的應(yīng)用，包括采用如上所述的ace抑制肽vr8并應(yīng)用于輔助降血壓功能食品。

5、本申請的第三個(gè)目的在于提供一種用于制備如上的ace抑制肽vr8的方法，包括如下步驟：

6、步驟1、取牛奶酪蛋白，加入蛋白酶進(jìn)行酶解，控制酶解溫度為37℃-55℃，加酶量為2％-6％，ph大于7，酶解時(shí)間為3h-12h，獲得酶解產(chǎn)物；

7、步驟2、對酶解產(chǎn)物進(jìn)行過濾，去除殘?jiān)蟮玫匠吻宓亩嚯拿附庖?，將多肽酶解液凍干處理后得到多肽凍干粉?/p>

8、優(yōu)選地：所述牛奶酪蛋白中的酪蛋白添加量為2％。

9、優(yōu)選地：所述酶解ph控制為8.0，酶解溫度為37℃，加酶量為5％，且蛋白酶由胰蛋白酶和酶組x以3：1組成，酶解時(shí)間為6h。

10、優(yōu)選地：還包括從多肽凍干粉中篩選出ace抑制肽vr8部分。

11、優(yōu)選地：所述從多肽凍干粉中篩選出ace抑制肽vr8部分包括如下步驟：

12、步驟3、采用lc-ms/ms對步驟2中獲得的多肽凍干粉進(jìn)行質(zhì)譜測定，質(zhì)譜測定的結(jié)果采用質(zhì)譜分析軟件分析，獲得若干多肽序列；

13、步驟4、通過軟件將多肽序列與ace蛋白進(jìn)行分子對接，在對接之前通過能量最小化將多肽的2d結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換為3d結(jié)構(gòu)，篩選得到與ace蛋白的結(jié)合能力強(qiáng)的多肽序列；

14、步驟5、將預(yù)測得分最高的多肽進(jìn)行固相合成，檢測其體外ace抑制率。

15、優(yōu)選地：在步驟3中，所述質(zhì)譜測定的條件如下：

16、①、液相方法中色譜柱為c18，3μm，250mm?x?75μm，a相為水，0.1％甲酸；b相為乙腈，0.1％甲酸，流速為300n?l/min，進(jìn)樣體積為4μl，60min色譜梯度，具體洗脫梯度為：0-48min：a相從95％均勻減少到60％；48-55min：a相從60％均勻減少到30％；55-56min：a相從30％均勻減少到0；56-60min：保持0％a相；

17、②、質(zhì)譜方法：orbitrap?exp?l?or?i?s?480，正離子檢測模式，一級分辨率為120000，agc設(shè)置為300，掃描范圍200-1600m/z；

18、③、m?ips?mode為pept?ide，選擇價(jià)態(tài)1-5，二級分辨率為15000，分離窗口1.6m/z。

19、優(yōu)選地：在步驟5中，檢測獲得1mg/ml濃度下的ace抑制肽vr8的體外ace抑制率為70.12％。

20、通過以上方案可知，本申請?zhí)峁┝艘环Nace抑制肽vr8、其應(yīng)用及制備方法，該ace抑制肽vr8、其應(yīng)用及制備方法具有以下有益效果：通過本發(fā)明的制備方法獲得的ace抑制肽vr8具有有效抑制體外ace活性的效果，從而實(shí)現(xiàn)血壓控制的目的，并可應(yīng)用于開發(fā)輔助降血壓功能食品。同時(shí)由于該ace抑制肽vr8提取自牛奶酪蛋白，因此兼具特異性高、毒副作用小和療效好的優(yōu)勢，以便于提高藥劑量的方式滿足日常使用和保健需求。

技術(shù)特征：

1.一種ace抑制肽vr8，其特征在于：所述ace抑制肽vr8的氨基酸序列為：vpnsaeer。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ace抑制肽vr8，其特征在于：所述ace抑制肽vr8的分子量為900.4301da，且1mg/ml條件下體外ace抑制率大于70%。

3.一種ace抑制肽vr8的應(yīng)用，其特征在于：包括采用如權(quán)利要求1或2所述的ace抑制肽vr8并應(yīng)用于輔助降血壓功能食品。

4.一種用于制備如權(quán)利要求1或2所述的ace抑制肽vr8的方法，其特征在于，包括如下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的ace抑制肽vr8的制備方法，其特征在于：所述牛奶酪蛋白中的酪蛋白添加量為2%。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的ace抑制肽vr8的制備方法，其特征在于：所述酶解ph控制為8.0，酶解溫度為37℃，加酶量為5%，且蛋白酶由胰蛋白酶和酶組x以3：1組成，酶解時(shí)間為6h。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的ace抑制肽vr8的制備方法，其特征在于：還包括從多肽凍干粉中篩選出ace抑制肽vr8部分。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的ace抑制肽vr8的制備方法，其特征在于，所述從多肽凍干粉中篩選出ace抑制肽vr8部分包括如下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的ace抑制肽vr8的制備方法，其特征在于：在步驟3中，所述質(zhì)譜測定的條件如下：

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的ace抑制肽vr8的制備方法，其特征在于：在步驟5中，檢測獲得1mg/ml濃度下的ace抑制肽vr8的體外ace抑制率為70.12%。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了ACE抑制肽VR8、其應(yīng)用及制備方法，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，其技術(shù)方案要點(diǎn)包括所述ACE抑制肽VR8的氨基酸序列為：VPNSAEER。本發(fā)明還公開了ACE抑制肽VR8在輔助降血壓功能食品中的應(yīng)用。本發(fā)明得到的ACE抑制肽VR8從牛奶酪蛋白中提取得到，在有效抑制體外ACE活性時(shí)控制血壓，同時(shí)兼具特異性高、毒副作用小和療效好優(yōu)勢，以便于提高藥劑量的方式滿足日常使用和保健需求。

技術(shù)研發(fā)人員：蘆晨陽,周海濱,周凱,季亞飛,童佳麒,俞偉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：寧波立華制藥有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6