本發(fā)明涉及基因檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法。
背景技術(shù)：
人乳頭瘤病毒（hpv）可以通過(guò)多種途徑感染生殖道，從而導(dǎo)致尖銳濕疣以及宮頸病變，甚至可能引起宮頸癌的發(fā)生，從高危型hpv的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要5~10年。因此，有針對(duì)性地進(jìn)行hpv的分型檢測(cè)對(duì)于宮頸癌的早期診斷和治療具有重要意義。
目前大都常用的基因芯片技術(shù)在檢測(cè)人乳頭瘤病毒（hpv）時(shí)，會(huì)遇到樣本中有大量宮頸黏液，對(duì)提取dna操作時(shí)影響甚大。
在吸取樣本時(shí)，如果遇到大量宮頸黏液，離心后沒(méi)辦法得到底部的沉淀，可能抑制擴(kuò)增。同時(shí)，去上清時(shí)吸走黏液可能帶走大部分宮頸脫落細(xì)胞，使結(jié)果呈假陰性。此外，如果為了破壞那些黏液加入過(guò)量細(xì)胞裂解液的話，很大可能會(huì)影響dna模板含量，影響后續(xù)擴(kuò)增、雜交。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決現(xiàn)有技術(shù)的hpv檢測(cè)過(guò)程中樣本黏液含量過(guò)高導(dǎo)致dna提取困難的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種解決上述問(wèn)題的hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法。
一種hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法，運(yùn)用所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法需使用以下組分：
離心管、naoh溶液、生理鹽水、細(xì)胞裂解液。
所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法包括以下步驟：
步驟一：吸取1ml黏性樣本至所述離心管中；
步驟二：向所述離心管中加入100μl的所述naoh溶液，振蕩混勻后，消化處理一定時(shí)間；
步驟三：將所述離心管于13000rpm下離心10min后，去除上清液，保留細(xì)胞沉淀；
步驟四：向所述離心管中加入1ml所述生理鹽水，反復(fù)吹打混勻；
步驟五：重復(fù)所述步驟三和所述步驟四；
步驟六：再次重復(fù)所述步驟三，然后向所述離心管中加入50μl細(xì)胞裂解液，懸浮所述細(xì)胞沉淀；
步驟七：將所述離心管沸水浴加熱10min；
步驟八：將所述離心管于13000rpm下離心10min后，保留上清液作為檢測(cè)樣本。
在本發(fā)明提供的hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法的一種較佳實(shí)施例中，所述naoh溶液為1.75mol/l的naoh溶液。
在本發(fā)明提供的hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法的一種較佳實(shí)施例中，所述步驟二中消化處理10min。
相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法具有以下有益效果：
一、所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法采用naoh溶液對(duì)宮頸黏液進(jìn)行處理。宮頸黏液的主要成分是糖蛋白，一定濃度的naoh溶液能有效的消化這部分蛋白質(zhì)，使其轉(zhuǎn)化為稀液，離心時(shí)上清液與底部沉淀正常分離，細(xì)胞裂解液也以正常量添加。保證了后續(xù)的擴(kuò)增、雜交等操作的正常進(jìn)行，以及最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確無(wú)誤。
二、所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法在消化處理后不使用酸性試劑中和處理，而利用生理鹽水進(jìn)行多次洗滌，使所述細(xì)胞沉淀處于趨向于中性的弱堿性環(huán)境。此環(huán)境中的dna性狀更為穩(wěn)定，后續(xù)的檢測(cè)操作也更為方便。
三、所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法使得對(duì)黏性樣本的處理具有了一套通用的處理方法，無(wú)需根據(jù)樣本情況調(diào)整處理流程，提取效率得到明顯改善，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，降低了復(fù)查率。
具體實(shí)施方式
下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。
運(yùn)用所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法需使用以下組分：1.5ml的離心管、1.75mol/l的naoh溶液、生理鹽水、細(xì)胞裂解液。
所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法包括以下步驟：
步驟一：吸取1ml黏性樣本至所述離心管中；
步驟二：向所述離心管中加入100μl的所述naoh溶液，振蕩混勻后，消化處理10min；
步驟三：將所述離心管于13000rpm下離心10min后，去除上清液，保留細(xì)胞沉淀；
步驟四：向所述離心管中加入1ml所述生理鹽水，反復(fù)吹打混勻；
步驟五：重復(fù)所述步驟三和所述步驟四；
步驟六：再次重復(fù)所述步驟三，然后向所述離心管中加入50μl細(xì)胞裂解液，懸浮所述細(xì)胞沉淀；
步驟七：將所述離心管沸水浴加熱10min；
步驟八：將所述離心管于13000rpm下離心10min后，保留上清液作為檢測(cè)樣本。
相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法具有以下有益效果：
一、所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法采用naoh溶液對(duì)宮頸黏液進(jìn)行處理。宮頸黏液的主要成分是糖蛋白，一定濃度的naoh溶液能有效的消化這部分蛋白質(zhì)，使其轉(zhuǎn)化為稀液，離心時(shí)上清液與底部沉淀可正常分離，細(xì)胞裂解液也以正常量添加。保證了后續(xù)的擴(kuò)增、雜交等操作的正常進(jìn)行，以及最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確無(wú)誤。
二、所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法在消化處理后不使用酸性試劑中和處理，而利用生理鹽水進(jìn)行多次洗滌，使所述細(xì)胞沉淀處于趨向于中性的弱堿性環(huán)境。此環(huán)境中的dna性狀更為穩(wěn)定，后續(xù)的檢測(cè)操作也更為方便。
三、所述hpv檢測(cè)中黏性樣本dna提取方法使得對(duì)黏性樣本的處理具有了一套通用的處理方法，無(wú)需根據(jù)樣本情況調(diào)整處理流程，提取效率得到明顯改善，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，降低了復(fù)查率。
以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其它相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍之內(nèi)。