本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法。

背景技術(shù)：

南瓜籽是食用南瓜的種子，營養(yǎng)物質(zhì)豐富，是珍貴的副食品和保健食品。南瓜籽生產(chǎn)的加工食品等保健食品已成為國內(nèi)外市場的熱銷貨，是出口創(chuàng)匯的重要農(nóng)產(chǎn)品。由于是原料性的供應(yīng)，南瓜籽采后經(jīng)濟(jì)效益較低，以至于增產(chǎn)不增效的實(shí)際問題凸現(xiàn)。南瓜籽中含有大量天然油脂(350-600g/kg)，不同的產(chǎn)地，不同的品種間有差異。天然南瓜籽油中棕櫚酸、油酸、亞油酸含量高，維生素e和維生素k十分豐富，可有效預(yù)防濕疹和抗過敏。其中某些活性成分可激活男性荷爾蒙的分泌，消除前列腺的初期腫脹，治療和預(yù)防泌尿系統(tǒng)及前列腺增生等。因此，南瓜籽油在歐洲市場廣有銷售。

葉綠醌即維生素k1，是肝內(nèi)合成凝血酶原的必需物質(zhì)，當(dāng)缺乏維生素k1時可造成凝血障礙；當(dāng)血液中凝血酶原缺乏時，血液的凝固就會出現(xiàn)遲緩，這時補(bǔ)充適量維生素k1可促使肝臟合成凝血酶原起到止血的作用。它還可以防止內(nèi)出血和痔瘡、治療月經(jīng)過量、促進(jìn)血液正常的凝固等。維生素k1也具有鎮(zhèn)痛作用，并且具有解痙攣?zhàn)饔?，對?nèi)臟平滑肌絞痛、膽管痙攣、腸痙攣引起的絞痛有明顯的效果，用于膽石癥和膽腸蛔蟲引起的絞痛效果尤其明顯。維生素k1除作為醫(yī)藥制劑應(yīng)用于臨床外，在國內(nèi)外大量應(yīng)用于多維食品的生產(chǎn)。

亞臨界是物質(zhì)存在的一種特殊狀態(tài)，即處于沸點(diǎn)以上，臨界溫度以下，對其施以一定的壓力使其始終處于液體狀態(tài)。亞臨界流體萃取就是利用物質(zhì)處于亞臨界流體狀態(tài)時，其分子的擴(kuò)散能力增強(qiáng)，傳質(zhì)速度加快，滲透性和溶解能力顯著提高的特點(diǎn)，按照相似相溶的原理來選擇合適的溶劑，對目標(biāo)產(chǎn)物進(jìn)行萃取。

分子蒸餾技術(shù)是一種新型的用于液-液分離或精制的高新技術(shù)，在國外已在食品、醫(yī)藥、油脂加工、石油化工、生物工程等生產(chǎn)中得到了廣泛應(yīng)用。分子蒸餾的基本原理是基于不同物質(zhì)分子在高真空下分子運(yùn)動平均自由程不同而達(dá)到分離目的。與常規(guī)蒸餾相比，分子蒸餾具有蒸餾溫度遠(yuǎn)低于物料沸點(diǎn)、蒸餾壓強(qiáng)低、受熱時間短和分離程度高等優(yōu)點(diǎn)，因而特別適合于分離高沸點(diǎn)、高粘度、熱敏性的天然產(chǎn)物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法。

一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法，按照如下步驟進(jìn)行：

(1)原料預(yù)處理：選擇顆粒成熟、飽滿的南瓜籽為原料，置于烘箱中于47-57℃干燥51-55h，使南瓜籽水分含量低于3％，再將干燥后的南瓜籽放入粉碎機(jī)粉碎過40-60目篩后得到籽仁粉備用；

(2)亞臨界流體萃?。簩⑸鲜鲎讶史鄯湃?10-230目的網(wǎng)狀綢中并投入至亞臨界萃取釜內(nèi)，用真空泵使亞臨界萃取釜和分離釜內(nèi)的真空度為-0.1-0mpa，向亞臨界萃取釜中注入萃取溶劑正丁烷至樣品完全浸沒，采用熱水循環(huán)系統(tǒng)對萃取釜進(jìn)行加熱，并進(jìn)行3-4次萃取；

(3)脫溶：萃取結(jié)束后，將含有南瓜籽油及萃取溶劑的混合物放入分離釜，進(jìn)行脫溶，脫溶時間為30-40min，脫溶完畢后打開分離釜下端閥門，收集南瓜籽毛油；

(4)脫臭：南瓜籽毛油在170-190℃、真空度小于250pa的條件下脫臭，得南瓜籽油脫臭餾出物；

(5)甲酯化：以南瓜籽油脫臭餾出物為原料加入甲醇，以對甲基苯磺酸作為催化劑，在溫度80-90℃，反應(yīng)3-4h，使原料中的游離脂肪酸轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的甲醇，所述南瓜籽油脫臭餾出物與甲醇的質(zhì)量比為1:2-1:4，催化劑用量為南瓜籽油脫臭餾出物質(zhì)量的2-4％；

(6)第一次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：60℃，進(jìn)料速率：5kg/h，蒸餾溫度：80℃，操作壓力：15pa，刮板速度：400rpm，冷凝溫度：25℃；

(7)第二次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：70-80℃，進(jìn)料速率：3.5kg/h，蒸餾溫度：120-160℃，操作壓力：0.05-0.25pa，刮板速度：350rpm，冷凝溫度：25℃。

步驟(2)所述亞臨界萃取參數(shù)為：萃取時間為20-60min，萃取壓力為0.3-0.5mpa，萃取溫度為45-50℃。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明制備南瓜籽葉綠醌是食品級的，技術(shù)路線采用亞臨界流體萃取和分子蒸餾法，工藝路線簡單，步驟少成本低，提高了精煉副產(chǎn)品的深加工和市場附加值，制備的葉綠醌純度高。

具體實(shí)施方式

下面對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受具體實(shí)施方式的限制。

實(shí)施例1

一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法，按照如下步驟進(jìn)行：

(1)原料預(yù)處理：選擇顆粒成熟、飽滿的南瓜籽為原料，置于烘箱中于47℃干燥51h，得到水分含量為2.5％的南瓜籽，再將干燥后的南瓜籽放入粉碎機(jī)粉碎過40目篩后得到籽仁粉備用；

(2)亞臨界流體萃?。簩⑸鲜鲎讶史鄯湃?10目的網(wǎng)狀綢中并投入至亞臨界萃取釜內(nèi)，用真空泵使亞臨界萃取釜和分離釜內(nèi)的真空度為-0.1mpa，向亞臨界萃取釜中注入萃取溶劑正丁烷至樣品完全浸沒，采用熱水循環(huán)系統(tǒng)對萃取釜進(jìn)行加熱，使萃取釜中溫度為45℃，萃取壓力為0.3mpa，進(jìn)行三次萃取，第一次萃取時間為60min，第二次萃取時間為30min，第三次萃取時間為30min；

(3)脫溶：萃取結(jié)束后，將含有南瓜籽油及萃取溶劑的混合物放入分離釜，脫溶時間為30min，脫溶完畢后打開分離釜下端閥門，收集南瓜籽毛油；

(4)脫臭：南瓜籽毛油在170℃、真空度200pa的條件下脫臭，得南瓜籽油脫臭餾出物；

(5)甲酯化：以南瓜籽油脫臭餾出物為原料加入甲醇料液比2:1，對甲基苯磺酸用量2％，反應(yīng)溫度80℃，反應(yīng)時間3h，得到酯化率94％；

(6)第一次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：60℃，進(jìn)料速率：5kg/h，蒸餾溫度：80℃，操作壓力：15pa，刮板速度：400rpm，冷凝溫度：25℃；

(7)第二次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：70℃，進(jìn)料速率：3.5kg/h，蒸餾溫度：120℃，操作壓力：0.25pa，刮板速度：350rpm，冷凝溫度：25℃，得到葉綠醌的純度為88.45％。

實(shí)施例2

一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法，按照如下步驟進(jìn)行：

(1)原料預(yù)處理：選擇顆粒成熟、飽滿的南瓜籽為原料，置于烘箱中于52℃干燥53h，得到水分含量為2.2％的南瓜籽，再將干燥后的南瓜籽放入粉碎機(jī)粉碎過50目篩后得到籽仁粉備用；

(2)亞臨界流體萃取：將上述籽仁粉放入220目的網(wǎng)狀綢中并投入至亞臨界萃取釜內(nèi)，用真空泵使亞臨界萃取釜和分離釜內(nèi)的真空度為-0.08mpa，向亞臨界萃取釜中注入萃取溶劑正丁烷至樣品完全浸沒，采用熱水循環(huán)系統(tǒng)對萃取釜進(jìn)行加熱，使萃取釜中溫度為47℃，萃取壓力為0.4mpa，進(jìn)行四次萃取，第一次萃取時間為60min，第二次萃取時間為30min，第三次萃取時間為30min，第四次萃取時間為20min；

(3)脫溶：萃取結(jié)束后，將含有南瓜籽油及萃取溶劑的混合物放入分離釜，脫溶時間為35min，脫溶完畢后打開分離釜下端閥門，收集南瓜籽毛油；

(4)脫臭：南瓜籽毛油在190℃、真空度250pa的條件下脫臭，得南瓜籽油脫臭餾出物；

(5)甲酯化：以南瓜籽油脫臭餾出物為原料加入甲醇料液比3:1，對甲基苯磺酸用量3％，反應(yīng)溫度85℃，反應(yīng)時間3.5h，得到酯化率95％；

(6)第一次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：60℃，進(jìn)料速率：5kg/h，蒸餾溫度：80℃，操作壓力：15pa，刮板速度：400rpm，冷凝溫度：25℃；

(7)第二次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：80℃，進(jìn)料速率：3.5kg/h，蒸餾溫度：130℃，操作壓力：0.09pa，刮板速度：350rpm，冷凝溫度：25℃，得到葉綠醌的純度為91.37％。

實(shí)施例3

一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法，按照如下步驟進(jìn)行：

(1)原料預(yù)處理：選擇顆粒成熟、飽滿的南瓜籽為原料，置于烘箱中于57℃干燥55h，得到水分含量為2％的南瓜籽，再將干燥后的南瓜籽放入粉碎機(jī)粉碎過60目篩后得到籽仁粉備用；

(2)亞臨界流體萃取：將上述籽仁粉放入230目的網(wǎng)狀綢中并投入至亞臨界萃取釜內(nèi)，用真空泵使亞臨界萃取釜和分離釜內(nèi)的真空度為-0.05mpa，向亞臨界萃取釜中注入萃取溶劑正丁烷至樣品完全浸沒，采用熱水循環(huán)系統(tǒng)對萃取釜進(jìn)行加熱，使萃取釜中溫度為50℃，萃取壓力為0.5mpa，進(jìn)行四次萃取，第一次萃取時間為60min，第二次萃取時間為30min，第三次萃取時間為30min，第四次萃取時間為20min；

(3)脫溶：萃取結(jié)束后，將含有南瓜籽油及萃取溶劑的混合物放入分離釜，脫溶時間為40min，脫溶完畢后打開分離釜下端閥門，收集南瓜籽毛油；

(4)脫臭：南瓜籽毛油在180℃、真空度220pa的條件下脫臭，得南瓜籽油脫臭餾出物；

(5)甲酯化：以南瓜籽油脫臭餾出物為原料加入甲醇料液比4:1，對甲基苯磺酸用量4％，反應(yīng)溫度90℃，反應(yīng)時間4h，得到酯化率96％；

(6)第一次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：60℃，進(jìn)料速率：5kg/h，蒸餾溫度：80℃，操作壓力：15pa，刮板速度：400rpm，冷凝溫度：25℃；

(7)第二次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：80℃，進(jìn)料速率：3.5kg/h，蒸餾溫度：160℃，操作壓力：0.05pa，刮板速度：350rpm，冷凝溫度：25℃，得到葉綠醌的純度為95.24％。

實(shí)施例4

一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法，按照如下步驟進(jìn)行：

(1)原料預(yù)處理：選擇顆粒成熟、飽滿的南瓜籽為原料，置于烘箱中于47℃干燥51h，得到水分含量為2.5％的南瓜籽，再取占南瓜籽重量5％的匙葉草，曬干，再將干燥后的南瓜籽和匙葉草放入粉碎機(jī)粉碎過40目篩后得到籽仁粉備用；

(2)亞臨界流體萃取：將上述籽仁粉放入210目的網(wǎng)狀綢中并投入至亞臨界萃取釜內(nèi)，用真空泵使亞臨界萃取釜和分離釜內(nèi)的真空度為-0.1mpa，向亞臨界萃取釜中注入萃取溶劑正丁烷至樣品完全浸沒，采用熱水循環(huán)系統(tǒng)對萃取釜進(jìn)行加熱，使萃取釜中溫度為45℃，萃取壓力為0.3mpa，進(jìn)行三次萃取，第一次萃取時間為60min，第二次萃取時間為30min，第三次萃取時間為30min；

(3)脫溶：萃取結(jié)束后，將含有南瓜籽油及萃取溶劑的混合物放入分離釜，脫溶時間為30min，脫溶完畢后打開分離釜下端閥門，收集南瓜籽毛油；

(4)脫臭：南瓜籽毛油在170℃、真空度200pa的條件下脫臭，得南瓜籽油脫臭餾出物；

(5)甲酯化：以南瓜籽油脫臭餾出物為原料加入甲醇料液比2:1，對甲基苯磺酸用量2％，反應(yīng)溫度80℃，反應(yīng)時間3h，得到酯化率94％；

(6)第一次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：60℃，進(jìn)料速率：5kg/h，蒸餾溫度：80℃，操作壓力：15pa，刮板速度：400rpm，冷凝溫度：25℃；

(7)第二次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：70℃，進(jìn)料速率：3.5kg/h，蒸餾溫度：120℃，操作壓力：0.25pa，刮板速度：350rpm，冷凝溫度：25℃，得到葉綠醌的純度為97.15％。

實(shí)施例5

一種基于亞臨界流體與分子蒸餾萃取南瓜籽葉綠醌的方法，按照如下步驟進(jìn)行：

(1)原料預(yù)處理：選擇顆粒成熟、飽滿的南瓜籽為原料，置于烘箱中于47℃干燥51h，得到水分含量為2.5％的南瓜籽，再將干燥后的南瓜籽放入粉碎機(jī)粉碎過40目篩后得到籽仁粉備用；

(2)亞臨界流體萃?。簩⑸鲜鲎讶史鄯湃?10目的網(wǎng)狀綢中并投入至亞臨界萃取釜內(nèi)，用真空泵使亞臨界萃取釜和分離釜內(nèi)的真空度為-0.1mpa，向亞臨界萃取釜中注入萃取溶劑正丁烷至樣品完全浸沒，采用熱水循環(huán)系統(tǒng)對萃取釜進(jìn)行加熱，使萃取釜中溫度為45℃，萃取壓力為0.3mpa，進(jìn)行三次萃取，第一次萃取時間為60min，第二次萃取時間為30min，第三次萃取時間為30min；

(3)脫溶：萃取結(jié)束后，將含有南瓜籽油及萃取溶劑的混合物放入分離釜，脫溶時間為30min，脫溶完畢后打開分離釜下端閥門，收集南瓜籽毛油；

(4)脫臭：南瓜籽毛油在170℃、真空度200pa的條件下脫臭，得南瓜籽油脫臭餾出物；

(5)甲酯化：以南瓜籽油脫臭餾出物為原料加入甲醇料液比2:1，對甲基苯磺酸用量2％，巨大戟醇0.5％，反應(yīng)溫度80℃，反應(yīng)時間3h，得到酯化率99％；

(6)第一次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：60℃，進(jìn)料速率：5kg/h，蒸餾溫度：80℃，操作壓力：15pa，刮板速度：400rpm，冷凝溫度：25℃；

(7)第二次分子蒸餾：預(yù)熱溫度：70℃，進(jìn)料速率：3.5kg/h，蒸餾溫度：120℃，操作壓力：0.25pa，刮板速度：350rpm，冷凝溫度：25℃，得到葉綠醌的純度為96.89％。

以上公開的僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，但是，本發(fā)明并非局限于此，任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員能思之的變化都應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。