本發(fā)明涉及一株瘤胃菌及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

己酸是一種重要的化工原料，可用于食品香料、動(dòng)物飼料、綠色抗菌劑、緩蝕劑和生物燃料等領(lǐng)域。特別地，己酸還是生成濃香型白酒的主體香成份—己酸乙酯的前體物，具有廣泛的應(yīng)用前景。微生物催化產(chǎn)己酸研究最多和最為深入的是克氏梭菌(Clostridium klyuveri)，該菌以乙醇為電子供體，乙酸為電子受體合成己酸。目前普遍以此工藝進(jìn)行己酸的生物合成。

近年來，有研究表明乳酸同樣可作為電子供體，用于合成己酸，效率甚至高于以乙醇為電子供體合成己酸的途徑。乳酸是碳水化合物厭氧降解過程中常見的中間產(chǎn)物，例如，傳統(tǒng)窖池釀酒過程中，除了產(chǎn)乙醇外，還會(huì)產(chǎn)生大量的乳酸，其濃度甚至高于乙醇濃度5-10倍。另外，城市廢水和食品發(fā)酵廢水在厭氧處理時(shí)，其中的碳水化合物(占廢水COD的17-70％)會(huì)轉(zhuǎn)化為乳酸、乙酸等中間產(chǎn)物。由于乳酸、乙酸等小分子中間產(chǎn)物可溶于水，回收成本高，因此基本未被有效回收利用，大量廢物資源被白白浪費(fèi)；此外，乳酸還可以從許多有機(jī)廢棄物中較容易地獲得，比如農(nóng)業(yè)廢棄物玉米秸稈和玉米芯發(fā)酵。由于己酸較乳酸溶解度低(僅1％)，附加值高(4-5倍)，易于提取，因此以乳酸為底物合成己酸的途徑為廢水、廢棄物資源化提供了一條新思路。

目前的研究中，通過乳酸合成己酸的工藝多采用混合菌種，在菌種調(diào)控和穩(wěn)定性方面存在一定的問題。分離獲得具有利用乳酸合成己酸的純菌種，制備成強(qiáng)化菌劑，用于乳酸—己酸的工業(yè)化高效轉(zhuǎn)化，以及相關(guān)工藝(比如釀酒發(fā)酵)的調(diào)控非常具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。截止目前，已報(bào)道的能夠利用乳酸產(chǎn)己酸的純菌僅有Megasphaera elsdenii J1和本發(fā)明人前期分離的一株新菌瘤胃菌CPC-11(申請(qǐng)?zhí)枺?01511025819.4)。但Megasphaera elsdenii J1利用乳酸主要產(chǎn)丁酸，己酸僅為其副產(chǎn)物，產(chǎn)量非常低(約23.2mg/L)，不具備工業(yè)化應(yīng)用潛力。本發(fā)明人前期分離的瘤胃菌CPC-11可以將乳酸轉(zhuǎn)化為己酸，產(chǎn)己酸的速率為1.46g/L/d，但該菌產(chǎn)己酸的速率仍然較低，因此，還需要開發(fā)一種產(chǎn)己酸速率更高、產(chǎn)己酸濃度更高的新菌株。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有產(chǎn)己酸菌生產(chǎn)己酸的速率較低、產(chǎn)量較低的問題，本發(fā)明提供了一株新的瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6，已于2016年12月20日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏地址：廣州市先烈中路100號(hào)，廣東省微生物研究所59號(hào)樓5樓，保藏編號(hào)：GDMCC No：60133。

本發(fā)明所提供的瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6菌株來自于己酸生物合成的厭氧生物反應(yīng)器，采用梯度稀釋分離獲得。通過序列比對(duì)分析，該菌株與數(shù)據(jù)庫(NCBI，RDP)中已有的模式菌種16SrDNA的同源性均較低(<94％)，數(shù)據(jù)庫中與其最接近的模式菌株為Clostridium leptum DSM753(92.6％)，其次是Clostridiumsporosphaeroides DSM1294(91.7％)。此外，瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6與本發(fā)明人前期分離的產(chǎn)己酸菌瘤胃菌(Clostridium sp.)CPC-11(Clostridium sp.KM454168)的16SrDNA序列相似度僅92.8％，表明二者并非同種。根據(jù)細(xì)菌新種判定的重要標(biāo)準(zhǔn)(16S rRNA序列相似性<97％)判斷CPB6為瘤胃菌科(Ruminococcaceae)的一個(gè)新分支(Clostridium cluster IV)的一個(gè)新種。CPB6在NCBI基因庫序列登記號(hào)為KM454167。

瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6的16S rRNA序列(SEQ ID No.1)：

TTTAGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAACACATGCAAGTCGAACGAAACTTTTTGCTTCGGTAGAAAGTTTAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGAGGAACCTGCCTTTCAGAGGGGGATAATGTCTGGAAACGGACACTAATACCGCATGACATTTTCTGTTCACATGGACAGAAAATCAAAGGAGCAATCTGCTGAAAGATGGACTCGCGTCCGATTAGCTAGATGGTGAGATAATAGCCCACCATGGCGACGATCGGTAGCCGGACTGAGAGGTTGAACGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGGATATTGCACAATGGAGGAAACTCTGATGCAGCAACGCCGCGTGAAGGAAGACGGTCTTCGGATTGTAAACTTTTGTACCTAGGGACGATAATGACGGTACCTAGGCAGCAAGCTCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGAGCGAGCGTTGTCCGGATTTACTGGGTGTAAAGGGTGCGTAGGCGGCCAAGCAAGTCAGCTGTGAAAACTATGGGCTTAACCCATAGCCTGCAATTGAAACTGTTTGGCTTGAGTGAAGTAGAGGTAGGTGGAATTCCCGGTGTAGCGGTGAAATG CGTAGAGATCGGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCTACTGGGCTTTAACTGACGCTGAAGCACGAAAGCATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCTGTAAACGATGATTACTAGGTGTGGGGGGTCTGACCCCTTCCGTGCCGGAGTTAACACAATAAGTAATCCACCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCAGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAACTAACGAAGCAGAGATGCATTAGGTGCCCTTCGGGGAAAGTTGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTACTGTTAGTTGCTACGCAAGAGCACTCTAGCAGGACTGCCGTTGACAAAACGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTACTACAATGGCCGTTAACAGAGAGAAGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAACCTCAAAAAGCGGTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGAAACCCGCCTGCATGAAGTTGGAATTGCTAGTAATCGCGGATCATAATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGCCGGTAATACCCGAAGTCAGTAGTCTAACCGCAAGGAGGACGCTGCCGAAGGTAGGATTGGCGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCAGAAGGTGCGGCTGGATCACCTCCTTT

本發(fā)明的另一目的是提供一種利用上述瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6將乳酸轉(zhuǎn)化為己酸的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，上述瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6菌株可用于含乳酸的廢水、有機(jī)廢棄物生產(chǎn)高附加值的己酸，實(shí)現(xiàn)廢物資源化和循環(huán)利用。

1、分離培養(yǎng)基成分如下：

1g酪蛋白胨,0.25g酵母汁,0.4g NaHCO₃,0.1g半胱氨酸,0.045g K₂HPO4,0.045g KH₂PO₄,0.09g NaCl,0.009g MgSO₄·7H₂O,0.009g CaCl₂,0.1mg刃天青,1mg氯化血紅素,0.5mL乳酸，微量元素溶液0.1ml，維生素溶液1ml。蒸餾水100ml。其中：

微量元素溶液(L)：FeCl₂·4H₂O 1.5g；CoCl₂·6H₂O 0.19g；MnCl₂·4H₂O 0.1g；ZnCl₂0.07g；NaMO₄·2H₂O 0.036g；NiCl₂·6H₂O 0.024g；H₃BO₃ 0.006g；CuCl₂·2H₂O 0.002g；HCl(25％solution)10ml。

維生素溶液(L)：p-氨基苯甲酸0.04g；生物素0.01g；煙酸0.1g；B₅ 0.05g；B₆0.15g；B₁ 0.1g；B₁₂ 0.05g；D.L-硫辛酸0.03g；B₂ 0.03g；葉酸0.01g。

2、發(fā)酵培養(yǎng)基成分如下：

蛋白胨5g,葡萄糖1g,酵母浸粉5g，乙酸鉀10g,磷酸氫二鉀0.31g，磷酸二氫鉀0.23g，氯化銨0.25g，硫酸鎂0.2g,碳酸氫鈉2.5g,L-半胱氨酸0.25g,硫化鈉0.25g，乳酸鈉18.8ml,蒸餾水1000mL，pH值5.5。

本發(fā)明所述瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6菌株的菌落形態(tài)為圓形，白色凸起，質(zhì)地粘稠。掃描電鏡顯示該菌體呈短桿狀，菌體大小為2μm×0.5μm，該菌株革蘭氏染色陽性，菌體的適宜生長(zhǎng)溫度30-40℃，pH5.0-6.5，厭氧生長(zhǎng)，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。

Biolog AN MicroPlates TM厭氧鑒定系統(tǒng)分析得出菌株CPB6具有廣泛的糖利用范圍，不僅能利用α-D-葡萄糖、N-乙?；?D-葡萄糖胺、N-乙?；?β-D-甘露糖胺、杏苷、D-纖維二糖、D-果糖、L-海藻糖、D-半乳糖、D-半乳糖醛酸、龍膽二糖、D-葡萄糖酸，還能利用葡萄糖-6-磷酸鹽、α-D-乳糖、麥芽糖、麥芽三糖等。但不能利用N-乙?；?D半乳糖胺、甘露糖胺、D-阿拉伯糖醇、熊果苷、α-環(huán)式糊精、β-環(huán)式糊精、糊精、己六醇、i-赤藻糖醇等，詳見表1。

API實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6菌株對(duì)葡萄糖、甘露醇、蔗糖、麥芽糖、木糖、纖維二糖、甘露糖、松三糖和棉子糖、鼠李糖、海藻糖表現(xiàn)為顯性反應(yīng)。而對(duì)色氨酸、脲素、乳糖、柳醇、阿拉伯糖及明膠、七葉靈檸檬酸鐵、甘油、山梨醇則為陰性反應(yīng)，如表2所示。

本發(fā)明涉及的生物材料相關(guān)保藏信息為：

保藏單位：廣東省微生物菌種保藏中心；地址：廣州市先烈中路100號(hào)，廣東省微生物研究所59號(hào)樓5樓；保藏日期：2016年12月20日；保藏編號(hào)：GDMCCNo：60133；命名為：瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

(1)提供了一株新的瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6菌株；

(2)瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6菌株可利用乳酸產(chǎn)己酸，產(chǎn)己酸濃度可達(dá)16.6g/L，最高產(chǎn)率可以達(dá)到5.29g/L/d；

(3)瘤胃菌(Clostridium sp.)CPB6菌株可用于含乳酸廢水、有機(jī)廢棄物生產(chǎn)高附加值的己酸，實(shí)現(xiàn)廢物資源化和循環(huán)利用。

附圖說明

圖1是菌株CPB6的掃描電鏡照片；

圖2是基于16SrRNA系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹；

圖3是pH對(duì)菌株CPB6產(chǎn)己酸的影響，其中，A為乳酸消耗情況，B為己酸生成情況；

圖4是溫度對(duì)菌株CPB6產(chǎn)己酸的影響，其中，A為乳酸消耗情況，B為己酸生成情況；

圖5是混合廢水發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明。

實(shí)施例1菌種的分離、純化與培養(yǎng)

1、分離培養(yǎng)基

培養(yǎng)基組成(100mL)：1g酪蛋白胨,0.25g酵母汁,0.4g NaHCO₃,0.1g半胱氨酸,0.045g K₂HPO4,0.045g KH₂PO₄,0.09g NaCl,0.009g MgSO₄·7H₂O,0.009g CaCl₂,0.1mg刃天青,1mg氯化血紅素,0.5mL乳酸，微量元素溶液0.1ml，維生素溶液1ml。蒸餾水100ml。其中：

微量元素溶液(L)：FeCl₂·4H₂O 1.5g；CoCl₂·6H₂O 0.19g；MnCl₂·4H₂O 0.1g；ZnCl₂0.07g；NaMO₄·2H₂O 0.036g；NiCl₂·6H₂O 0.024g；H₃BO₃ 0.006g；CuCl₂·2H₂O 0.002g；HCl(25％solution)10ml。

維生素溶液(L)：p-氨基苯甲酸0.04g；生物素0.01g；煙酸0.1g；B₅ 0.05g；B₆0.15g；B₁ 0.1g；B₁₂ 0.05g；D.L-硫辛酸0.03g；B₂ 0.03g；葉酸0.01g。

2、分離過程

(1)菌種的富集

己酸菌屬于梭狀芽孢桿菌，根據(jù)芽孢桿菌比非芽孢桿菌有耐熱性的特點(diǎn)，通過加熱方法淘汰非芽孢菌。取1g申請(qǐng)人用于己酸生物合成的厭氧生物反應(yīng)器中的底泥樣品加入到裝有5mL蒸餾水的試管中，高速振蕩15min，放在95℃的恒溫水浴鍋中處理30min。處理結(jié)束后，在厭氧培養(yǎng)箱中，取1mL樣品接種到裝有100mL已除氧滅菌的上述培養(yǎng)基的厭氧瓶中，置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天。

(2)菌種分離和純化

在無氧、無菌的超凈厭氧培養(yǎng)箱中，采用梯度稀釋平板法制成10^-1，10^-2至10^-5。選取10^-3、10^-4、10^-5三個(gè)稀釋度用平板涂布法將菌液接種到固體分離培養(yǎng)基上，倒置平板，于30℃厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)直至長(zhǎng)出菌落。挑取平板上形態(tài)不同的單菌落，在新的固體平板分離培養(yǎng)基上劃線，培養(yǎng)，再挑取單菌落重復(fù)劃線，直至得到純菌株。然后挑選單菌落斜面保存，或接入液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)液用甘油保存在-80℃冰箱。

(3)菌種復(fù)篩

將獲得的純菌株，再次接入以乳酸為碳源的發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，在30-35℃厭氧培養(yǎng)5-7天，觀察并驗(yàn)證是否能夠轉(zhuǎn)化乳酸并產(chǎn)生己酸，復(fù)選出轉(zhuǎn)化速率快、己酸產(chǎn)量高的菌株保存?zhèn)溆谩?/p>

(4)純菌檢測(cè)與驗(yàn)證

首先通過菌落形態(tài)、顏色和顯微鏡檢觀察細(xì)菌，初步判定是否是純菌株；然后通過PCR擴(kuò)增菌液的16SrRNA基因序列，直接測(cè)序確定是否為純菌株。

3、菌種培養(yǎng)

(1)培養(yǎng)基

發(fā)酵培養(yǎng)基成分：蛋白胨5g,葡萄糖1g,酵母浸粉5g，乙酸鉀10g，磷酸氫二鉀0.31g，磷酸二氫鉀0.23g，氯化銨0.25g，硫酸鎂0.2g,碳酸氫鈉2.5g，L-半胱氨酸0.25g，硫化鈉0.25g，乳酸鈉18.8ml，蒸餾水1000mL，pH值5.5。

(2)挑取一環(huán)斜面菌種接入含上述培養(yǎng)基的厭氧管中，150rpm，37℃培養(yǎng)3天，可獲得濃度約10⁸CFU/mL的種子培養(yǎng)液。

實(shí)施例2菌種的特征與鑒定

1、形態(tài)特征

(1)菌落形態(tài)

菌落為圓形，白色凸起，質(zhì)地粘稠。

(2)菌體形態(tài)

革蘭氏染色陽性，菌體呈短桿狀，菌體大小為2μm×0.5μm，如圖1所示。

2、生理生化特征

用Biolog AN MicroPlates ^TM和API 20A厭氧鑒定系統(tǒng)分析得出該菌的特征如表1、表2所示。

表1菌株CPB6的Biolog特征

表2菌株CPB6的API特征

3、分子生物學(xué)特征

通過細(xì)菌Pacbio平臺(tái)對(duì)CPB6進(jìn)行全基因組測(cè)序，獲得CPB6的全基因組圖譜，其16S rRNA基因長(zhǎng)度為1511bp，在NCBI基因庫序列登記號(hào)為KM454167，序列見圖2。

通過序列比對(duì)分析，該菌株與數(shù)據(jù)庫中的梭菌模式種(Clostridiumsporosphaeroides DSM1294)91.7％相似，(Clostridium leptum DSM753)92.6％相似。此外，該菌株與CPC-11(Clostridium sp.KM454168)的相似度92.8％。根據(jù)細(xì)菌新種判定的重要標(biāo)準(zhǔn)(16S rRNA序列相似性<97％)判斷CPB6為瘤胃菌科(Ruminococcaceae)的一個(gè)新分支(Clostridium cluster IV)的一個(gè)新種CPB6在NCBI基因庫序列登記號(hào)為KM454167，保藏編號(hào)GDMCC No：60133。與CPB6最相似的模式菌株如表3所示，基于16SrRNA系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹如圖2所示。

4、菌株的保藏

將獲得的CPB6(Clostridium sp.CPB6)純菌株，寄到廣東省微生物菌種保藏中心(地址：廣州市先烈中路100號(hào)，廣東省微生物研究所59號(hào)樓5樓)進(jìn)行保藏，保藏編號(hào)GDMCC No：60133。

表3與CPB6最相似的模式菌株

實(shí)施例3初始pH值對(duì)CPB6產(chǎn)己酸的影響

從圖3中可以看出，當(dāng)pH為5-6.5時(shí)，該菌株己酸含量大幅上升；而當(dāng)pH大于7.5時(shí)幾乎沒有己酸產(chǎn)生。當(dāng)pH為5.5-6時(shí)產(chǎn)酸能力最強(qiáng)，pH為5.5-6最佳。

實(shí)施例4溫度對(duì)CPB6產(chǎn)己酸的影響

如圖4所示，發(fā)酵溫度為20℃或50℃，經(jīng)過24h乳酸沒有消耗，也幾乎沒有己酸產(chǎn)生。溫度30-40℃時(shí)菌的活性明顯增加，24h后明顯有己酸產(chǎn)生，48h就可以達(dá)到最高產(chǎn)量。因此，該菌的最佳產(chǎn)己酸溫度在30-40℃。

實(shí)施例5利用釀酒廢水和城市廢水混合發(fā)酵產(chǎn)己酸

將釀酒廢水/城市廢水按3：1配制混合廢水(乳酸終濃度約31g/L)，作為發(fā)酵培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH為5.5-6.0，通氮?dú)獬鹾螅缓蠼臃N5％的CPB6種子液(濃度約10⁸CFU/mL)，反應(yīng)器中厭氧培養(yǎng)(圖5)，控制溫度30±2℃。當(dāng)乳酸降解完或即將降解完時(shí)，排出25％的發(fā)酵液，再加入等量的混合廢水，保證總反應(yīng)體積不變，繼續(xù)發(fā)酵。通過液相色譜法(HPLC)測(cè)定發(fā)酵產(chǎn)物。結(jié)果表明，從第1天開始乳酸含量明顯下降，有3g/L己酸產(chǎn)生，到第3乳酸消耗完畢，己酸產(chǎn)量達(dá)到12g/L，重新添加含乳酸廢水，第5天，乳酸含量達(dá)到16.6g/L，己酸的平均產(chǎn)率為3.32g/L/d，最高產(chǎn)率達(dá)5.29g/L/d。

序列表

<110>中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所

<120>一株瘤胃菌及其應(yīng)用

<160>1

<210>1

<211>1511

<212>RNA

<213>瘤胃菌（Clostridium sp.）

<400>1

tttagagagt ttgatcctgg ctcaggacga acgctggcgg cgtgcctaac acatgcaagt 60

cgaacgaaac tttttgcttc ggtagaaagt ttagtggcgg acgggtgagt aacgcgtgag 120

gaacctgcct ttcagagggg gataatgtct ggaaacggac actaataccg catgacattt 180

tctgttcaca tggacagaaa atcaaaggag caatctgctg aaagatggac tcgcgtccga 240

ttagctagat ggtgagataa tagcccacca tggcgacgat cggtagccgg actgagaggt 300

tgaacggcca cattgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtggggg 360

atattgcaca atggaggaaa ctctgatgca gcaacgccgc gtgaaggaag acggtcttcg 420

gattgtaaac ttttgtacct agggacgata atgacggtac ctaggcagca agctccggct 480

aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggagcgag cgttgtccgg atttactggg 540

tgtaaagggt gcgtaggcgg ccaagcaagt cagctgtgaa aactatgggc ttaacccata 600

gcctgcaatt gaaactgttt ggcttgagtg aagtagaggt aggtggaatt cccggtgtag 660

cggtgaaatg cgtagagatc gggaggaaca ccagtggcga aggcgaccta ctgggcttta 720

actgacgctg aagcacgaaa gcatgggtag caaacaggat tagataccct ggtagtccat 780

gctgtaaacg atgattacta ggtgtggggg gtctgacccc ttccgtgccg gagttaacac 840

aataagtaat ccacctgggg agtacgaccg caaggttgaa actcaaagga attgacgggg 900

gcccgcacaa gcagtggagt atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg 960

tcttgacatc caactaacga agcagagatg cattaggtgc ccttcgggga aagttgagac 1020

aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 1080

gcgcaaccct tactgttagt tgctacgcaa gagcactcta gcaggactgc cgttgacaaa 1140

acggaggaag gtggggacga cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg 1200

tactacaatg gccgttaaca gagagaagcg ataccgcgag gtggagcgaa cctcaaaaag 1260

cggtctcagt tcggattgca ggctgaaacc cgcctgcatg aagttggaat tgctagtaat 1320

cgcggatcat aatgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac 1380

catgggagcc ggtaataccc gaagtcagta gtctaaccgc aaggaggacg ctgccgaagg 1440

taggattggc gactggggtg aagtcgtaac aaggtagccg tatcagaagg tgcggctgga 1500

tcacctcctt t 1511