本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域,特別涉及檢測菜豆莢斑駁病毒的RPA方法、引物及試劑盒。
背景技術(shù):
:菜豆莢斑駁病毒是危害大豆等豆科植物的重要病毒,在我國目前并無此病毒的分布,其主要發(fā)生于美國、加拿大、巴西、秘魯、厄瓜多爾等大豆產(chǎn)區(qū),自然寄主有大豆、豇豆、菜豆,實驗寄主有20屬25種植物,可以通過汁液接種傳播、甲蟲傳播和種子遠距離傳播。根據(jù)病毒侵染時間的不同,該病毒能夠造成3%至52%的產(chǎn)量損失并降低大豆品質(zhì),如與大豆花葉病毒混合侵染,可造成高達85%的大豆產(chǎn)量損失,一旦傳入我國并定殖下來,將很難根除,會對我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成重大損失。因此,該病毒已被列入我國新修訂的植物檢疫性有害生物名單中,由于目前尚無有效的病毒防治方法,因此加強出入境檢驗檢疫工作是防止這種病毒傳入的最有效的途徑之一。我國每年從國外進口大量的大豆,為防止該危險性病毒的傳入,必須加強開發(fā)該病毒的快速檢測技術(shù)。技術(shù)實現(xiàn)要素:本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種靈敏、準確、簡便和快速的基于RPA技術(shù)的檢測菜豆莢斑駁病毒的方法,本發(fā)明還提供了用于該方法的特異性好、靈敏度高、檢測時間短、不需要特殊的儀器和適用范圍廣的RPA引物和含有該RPA引物的試劑盒。為了解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn):本發(fā)明第一方面提供了一種引物對,其中一條引物包含SEQIDNO:1所示的核苷酸序列,另一條引物包含SEQIDNO:2所示的核苷酸序列。本發(fā)明第二方面提供了所述的引物對在檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒,或制備檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用;在一優(yōu)選例中,所述檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒包括:檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒,以及檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒;在一優(yōu)選例中,所述制備檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品包括:制備檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品,以及制備檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品。本發(fā)明第三方面提供了一種試劑盒,包括所述的引物對。在一優(yōu)選例中,還包括RPA恒溫擴增試劑;在一優(yōu)選例中,所述RPA恒溫擴增試劑包括來自TwistDX公司的RPA擴增試劑盒TwistAmpBasickits所包含的試劑。在一優(yōu)選例中,還包括植物總RNA提取試劑。在一優(yōu)選例中,所述植物總RNA提取試劑包括來自天根生物科技有限公司貨號為DP432的植物總RNA提取試劑盒所包含的試劑。在一優(yōu)選例中,還包括反轉(zhuǎn)錄試劑。在一優(yōu)選例中,所述反轉(zhuǎn)錄試劑包括來自TaKaRa的貨號為RR014A的PrimeScriptRT-PCRKit所包含的試劑。本發(fā)明第四方面提供了一種試劑盒在檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒,或制備檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用;在一優(yōu)選例中,所述檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒包括:檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒,以及檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒;在一優(yōu)選例中,所述制備檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品包括:制備檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品,以及制備檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品。本發(fā)明第五方面提供了一種檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的方法,包括使用所述的引物對或所述試劑盒的步驟。在一優(yōu)選例中,所述檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒包括:檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒;以及檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒。在一優(yōu)選例中,所述的方法包括如下步驟:1)RPA擴增從待測植物樣品或待測病毒中提取總RNA,然后將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA,再以cDNA為模板與所述的引物對或所述試劑盒進行RPA擴增。2)根據(jù)RPA擴增的結(jié)果判斷待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒,或待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒;在一優(yōu)選例中,所述RPA擴增的結(jié)果判斷的標準為:若所述RPA擴增得到的RPA擴增產(chǎn)物含有大小為198bp的片段,則所述待測植物樣品感染菜豆莢斑駁病毒,或待測病毒為或候選為菜豆莢斑駁病毒;若所述RPA擴增產(chǎn)物不含有大小為198bp的片段,則所述待測植物樣品未感染菜豆莢斑駁病毒,或待測病毒不為或候選不為菜豆莢斑駁病毒。在一優(yōu)選例中,步驟1)中從待測植物樣品中提取總RNA是采用天根生物科技有限公司貨號為DP432的植物總RNA提取試劑盒進行的;步驟1)中將總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA是采用TaKaRa的貨號為RR014A的PrimeScriptRT-PCRKit進行的。在一優(yōu)選例中,所述RPA擴增的反應(yīng)體系如下:含有凍干酶粉的0.2mLTwistAmp反應(yīng)管再水化緩沖液29.5μLSEQIDNO:1和SEQIDNO:2各2μL,引物的終濃度均為0.4μmol/LcDNA50ng醋酸鎂溶液2.5μL,濃度為280mmol/L去離子水12.5μL在一優(yōu)選例中,所述RPA擴增的反應(yīng)條件如下:所述RPA擴增的溫度為37℃,時間為40min。本發(fā)明提到的待測植物樣品,可為植物的根﹑莖﹑葉等部分的成長的植物體;而待測病毒則是一種純病毒或至少二種以上的病毒的混合。本發(fā)明的有益效果包括:(1)本發(fā)明針對菜豆莢斑駁病毒設(shè)計特異性RPA引物,建立了菜豆莢斑駁病毒RPA檢測方法,可對菜豆莢斑駁病毒進行定性檢測。(2)本發(fā)明針對菜豆莢斑駁病毒僅用一對引物即可完成擴增,省去了LAMP等其它恒溫擴增方法需要的多對引物的復(fù)雜設(shè)計過程;本發(fā)明的引物擴增只需要37℃下恒溫反應(yīng)即可,不需要特殊的熱循環(huán)設(shè)備;反應(yīng)時間僅需40min,檢測時間短;不像LAMP產(chǎn)物的彌散帶,RPA擴增產(chǎn)物根據(jù)引物設(shè)計位點具有特定大小的條帶,其結(jié)果易于判斷。(3)本發(fā)明的RPA擴增引物特異性好、靈敏度高且適用范圍廣。(4)本發(fā)明建立的菜豆莢斑駁病毒RPA檢測方法,靈敏、準確、簡便和快速,對進出境相關(guān)植物及產(chǎn)品檢驗檢疫具有指導(dǎo)意義。附圖說明圖1是采用本發(fā)明的RPA引物對多種病毒進行特異性檢測的瓊脂糖凝膠電泳圖,共有八條泳道:其中M為markerDL2000,1為菜豆莢斑駁病毒的RPA擴增產(chǎn)物,2為南方菜豆花葉病毒的RPA擴增產(chǎn)物,3為大豆花葉病毒的RPA擴增產(chǎn)物,4為南芥菜花葉病毒的RPA擴增產(chǎn)物,5為煙草環(huán)斑病毒的RPA擴增產(chǎn)物,6為陰性對照。圖2是采用本發(fā)明的RPA引物對菜豆莢斑駁病毒進行靈敏度檢測的瓊脂糖凝膠電泳圖,共有七條泳道:其中M為markerDL2000,1-5分別為菜豆莢斑駁病毒cDNA的100、10-1、10-2、10-3和10-4稀釋度的RPA擴增產(chǎn)物,6為陰性對照。具體實施方式:除非特殊說明,本發(fā)明所用術(shù)語具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域中的一般含義。下面參考具體實施例和附圖,對本發(fā)明進行說明,需要說明的是,這些實施例僅僅是說明性的,而不能理解為對本發(fā)明的限制。實施例中未注明具體技術(shù)或條件的,按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者,均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實施例1本實施例提供了一種RPA引物及其應(yīng)用。RPA引物的篩選方法為:針對菜豆莢斑駁病毒基因組(Genbank登錄號M62738.1)的保守序列,設(shè)計檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的RPA引物,設(shè)計了多條RPA引物后進行了大量的篩選實驗,綜合其特異性、靈敏度和所使用的各引物與RPA擴增試劑盒的適配性,最終篩選出特異性好、靈敏度高且適用范圍廣的一對RPA引物。此RPA引物具體序列如下:上游引物:5′-TATTTGTATGCTATGGTGCATGATAGTTCAGTGTC-3′(SEQIDNO:1);下游引物:5′-TGTTCTCACTGTTGCCATTTGATTCCAAAC-3′(SEQIDNO:2)。上述RPA引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。利用上述RPA引物針對菜豆莢斑駁病毒的基因組進行RPA擴增,得到的RPA擴增產(chǎn)物大小為198bp。上述RPA引物可應(yīng)用到菜豆莢斑駁病毒的檢測或輔助檢測上,例如檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒,或檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒;還可以用來制備檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品,例如制備檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品,或制備檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品。實施例2本實施例提供了一種試劑盒及其應(yīng)用,所述試劑盒包括:(1)植物總RNA提取試劑;(2)反轉(zhuǎn)錄試劑;(3)上游引物和下游引物(來自實施例1);(4)含凍干酶粉管;(5)再水化緩沖液;(6)醋酸鎂溶液。所述植物總RNA提取試劑為來自天根生物科技有限公司植物總RNA提取試劑盒(貨號:DP432)的試劑;所述反轉(zhuǎn)錄試劑為來自TaKaRa公司PrimeScriptRT-PCRKit(貨號:RR014A)的試劑。上述含凍干酶粉管、再水化緩沖液(RehydrationBuffer)和醋酸鎂溶液(280mmol/L)均來源于RPA擴增試劑盒TwistAmpBasickits(TwistDX公司,貨號:TABAS03KIT)。實驗證明,上述植物總RNA提取試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑與RPA擴增試劑盒TwistAmpBasickits、上游引物和下游引物的聯(lián)合使用,效果更加優(yōu)越,具體表現(xiàn)在特異性強,靈敏度與普通PCR相當(dāng),而且不需要昂貴的熱循環(huán)儀器,恒溫反應(yīng)即可,反應(yīng)時間僅需40min,結(jié)果容易判斷。上述試劑盒可應(yīng)用于檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒上,例如檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒,或檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒;還可以用來制備檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品,例如制備檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品,或制備檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒的產(chǎn)品。實施例3本實施例提供了一種檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的方法,例如檢測或輔助檢測待測植物樣品是否感染菜豆莢斑駁病毒,或檢測或輔助檢測待測病毒是否為或候選為菜豆莢斑駁病毒,該方法使用了實施例1的RPA引物和實施例2的試劑盒。上述方法包括如下步驟:1、RNA的提取及cDNA的合成采用天根生物科技有限公司的貨號為DP432的植物總RNA提取試劑盒,根據(jù)其說明書提取待測植物樣品或待測病毒的總RNA;并采用TaKaRa的貨號為RR014A的PrimeScriptRT-PCRKit,根據(jù)其說明書將前述提取的總RNA作為模板反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,將獲得的cDNA保存于-20℃?zhèn)溆谩?、RPA擴增以cDNA為模板,采用實施例1的上游引物和下游引物(序列分別為SEQIDNO:1和SEQIDNO:2)進行RPA擴增,得到RPA擴增產(chǎn)物,同時設(shè)置空白對照(模板為超純水)。RPA擴增體系(50μL)的配制方法如下:向含有凍干酶粉的0.2mLTwistAmp反應(yīng)管中加入再水化緩沖液(RehydrationBuffer)29.5μL、去離子水12.5μL、上游和下游引物(實施例1的上游引物和下游引物)各2μL(引物的終濃度均為0.4μmol/L),模板cDNA50ng,最后再加入醋酸鎂溶液2.5μL(280mmol/L)。RPA擴增反應(yīng)條件:將上述RPA擴增體系充分混勻,置于37℃的金屬浴上反應(yīng)40min,得到RPA擴增產(chǎn)物。3、RPA擴增產(chǎn)物的電泳檢測RPA反應(yīng)結(jié)束后,向上述RPA擴增產(chǎn)物中加入50μL苯酚/氯仿(1:1)溶液,充分混勻后12000rpm離心2min,取5μL上清液于1.5%瓊脂糖凝膠電泳,在凝膠成像系統(tǒng)上觀察結(jié)果,并對RPA擴增產(chǎn)物進行測序。所述RPA擴增的結(jié)果判斷的標準為:若所述RPA擴增得到的產(chǎn)物含有大小為198bp的片段,則所述待測植物樣品感染菜豆莢斑駁病毒,或待測病毒為或候選為菜豆莢斑駁病毒;若所述RPA擴增產(chǎn)物不含有大小為198bp的片段,則所述待測植物樣品未感染菜豆莢斑駁病毒,或待測病毒不為或候選不為菜豆莢斑駁病毒。實施例4本實施例對實施例3建立的檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的方法進行了有效性驗證。步驟一:RNA的提取及cDNA的合成采用天根生物科技有限公司的貨號為DP432的植物總RNA提取試劑盒,根據(jù)其說明書提取感染菜豆莢斑駁病毒的大豆葉片(保存于中國檢驗檢疫科學(xué)研究院)的RNA;并采用TaKaRa的貨號為RR014A的PrimeScriptRT-PCRKit,根據(jù)其說明書將前述提取的RNA作為模板反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,將獲得的cDNA保存于-20℃?zhèn)溆?。步驟二:RPA擴增以步驟一獲得的cDNA為模板,采用實施例1的上游引物和下游引物進行RPA擴增,同時設(shè)置空白對照(模板為超純水)。RPA擴增體系(50μL)的配制方法如下:向含有凍干酶粉的0.2mLTwistAmp反應(yīng)管中加入再水化緩沖液(RehydrationBuffer)29.5μL,去離子水12.5μL,上游和下游引物(實施例1的上游引物和下游引物)各2μL(引物的終濃度均為0.4μmol/L),模板cDNA50ng,最后再加入醋酸鎂溶液2.5μL(280mmol/L)。RPA擴增反應(yīng)條件:將上述RPA擴增體系充分混勻,置于37℃的金屬浴上反應(yīng)40min,得到RPA擴增產(chǎn)物。步驟三:RPA擴增產(chǎn)物的電泳檢測RPA反應(yīng)結(jié)束后,向RPA擴增產(chǎn)物中加入50μL苯酚/氯仿(1:1)溶液,充分混勻后12000rpm離心2min,取上清液5μL于1.5%瓊脂糖凝膠電泳,在凝膠成像系統(tǒng)上觀察結(jié)果,并對RPA擴增產(chǎn)物進行測序。結(jié)果顯示菜豆莢斑駁病毒的RPA擴增產(chǎn)物含有1條大小為198bp的條帶,而陰性對照無條帶,說明本發(fā)明的基于RPA引物及RPA試劑盒建立的檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的方法可以有效檢測菜豆莢斑駁病毒。實施例5本實施例對實施例1的RPA引物進行了特異性驗證,所用的供試材料如下:菜豆莢斑駁病毒、南方菜豆花葉病毒、大豆花葉病毒、南芥菜花葉病毒和煙草環(huán)斑病毒共5種病毒感染的大豆葉片,5種病毒如表1所示,編號依次為1、2、3、4、5。上述供試材料均保存于中國檢驗檢疫科學(xué)研究院,并設(shè)陰性對照。表1供試病毒序號病毒名稱英文名縮寫1菜豆莢斑駁病毒BeanpodmottlevirusBPMV2南方菜豆花葉病毒SouthernbeanmosaicvirusSBMV3大豆花葉病毒SoybeanmosaicvirusSMV4南芥菜花葉病毒ArabismosaicvirusArMV5煙草環(huán)斑病毒毒TobaccoringspotvirusTRSV采用天根生物科技有限公司的貨號為DP432的植物總RNA提取試劑盒,根據(jù)其說明書分別提取上述5種病毒感染的大豆葉片的RNA;并采用TaKaRa的貨號為RR014A的PrimeScriptRT-PCRKit,根據(jù)其說明書將前述提取的RNA作為模板反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。以cDNA為模板,進行RPA擴增和RPA擴增產(chǎn)物的電泳檢測,RPA擴增和RPA擴增產(chǎn)物的電泳檢測的方法同實施例4的步驟二和步驟三。結(jié)果分析:結(jié)果如圖1所示,從圖中可以看出:僅有菜豆莢斑駁病毒感染的大豆葉片對應(yīng)的RPA擴增產(chǎn)物含有1條大小為198bp的目的條帶,感染其它4種對照病毒的大豆葉片和陰性對照均無條帶,由此證明本發(fā)明實施例1的RPA引物具有高特異性;進一步的,本發(fā)明基于RPA引物及RPA試劑盒建立的檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的方法能夠準確的對菜豆莢斑駁病毒進行檢測。實施例6本實施例對實施例1的RPA引物進行了靈敏度的驗證,其方法如下:步驟一:cDNA的獲取參照實施例5的方法對感染菜豆莢斑駁病毒的大豆葉片(保存于中國檢驗檢疫科學(xué)研究院)提取RNA并反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA,并將獲取的cDNA進行梯度稀釋,分別得到稀釋度為100、10-1、10-2、10-3和10-4的菜豆莢斑駁病毒的cDNA。步驟二:RPA擴增分別以上述步驟一得到的稀釋度為100、10-1、10-2、10-3和10-4的菜豆莢斑駁病毒的cDNA為模板(模板量均取1μL)進行RPA擴增和RPA擴增產(chǎn)物的電泳檢測,并設(shè)陰性對照。RPA擴增的方法同實施例4的步驟二。步驟三:電泳檢測RPA擴增反應(yīng)結(jié)束后,分別向RPA擴增產(chǎn)物中加入50μL苯酚/氯仿(1:1)溶液,充分混勻,12000rpm離心2min,取5μL上清液于1.5%瓊脂糖凝膠電泳,在凝膠成像系統(tǒng)上觀察結(jié)果。RPA電泳結(jié)果如圖2所示。從圖2可以看出,本發(fā)明的RPA方法的靈敏度為10-3稀釋度。對比例1實際上,在尋求到本發(fā)明的引物對之前,嘗試了非常多的引物對組合,在本對比例中只摘取其中之若干進行闡述,其余不予贅述,具體為:利用實施例1的RPA引物對以及用PrimerPremier5.0軟件設(shè)計并選取其中排分靠前的RPA引物組合1-6,用實施例3建立的檢測或輔助檢測菜豆莢斑駁病毒的方法對50份大豆樣品進行了檢測,同時用國家標準《GB/T28063-2011菜豆莢斑駁病毒檢疫鑒定方法》中對這50份大豆樣品進行了菜豆莢斑駁病毒的檢測,靈敏度試驗的取樣和模板濃度梯度的設(shè)置均按照實施例6進行,檢測結(jié)果如表2所示。表2不同引物對檢測樣品中菜豆莢斑駁病毒的結(jié)果引物對檢出率(陽性數(shù)/樣品數(shù))(重復(fù)三次)靈敏度(按實施例6的稀釋度計)引物對16/50;7/50;6/5010-2引物對27/50;5/50;6/5010-3引物對36/50;6/50;7/5010-2引物對46/50;6/50;6/5010-3引物對58/50;7/50;8/5010-2引物對65/50;5/50;5/5010-2本發(fā)明引物對7/50;7/50;7/5010-3國家標準7/50;7/50;7/5010-3結(jié)果顯示:本發(fā)明引物對的檢測結(jié)果與國家標準檢測方法的檢測結(jié)果一致,這說明本發(fā)明引物組合特異性強、靈敏度高且重復(fù)性很好,而采用引物設(shè)計軟件隨機選取的若干種RPA引物對則或多或少的存在特異性不強、靈敏度不高和重復(fù)性不好的各種缺陷。對比例2本對比例提供了不同的試劑與本發(fā)明的引物對組合在一起檢測菜豆莢斑駁病毒時的檢測結(jié)果對比。各種試劑與本發(fā)明的引物對組合:組合1:本發(fā)明引物對+某市售植物總RNA提取試劑盒1+某市售反轉(zhuǎn)錄試劑盒1+某市售RPA擴增試劑盒1組合2:本發(fā)明引物對+某市售植物總RNA提取試劑盒2+某市售反轉(zhuǎn)錄試劑盒2+某市售RPA擴增試劑盒2組合3:本發(fā)明引物對+某市售植物總RNA提取試劑盒3+某市售反轉(zhuǎn)錄試劑盒3+某市售RPA擴增試劑盒3本發(fā)明組合:本發(fā)明引物對+來自天根生物科技有限公司貨號為DP432的植物總RNA提取試劑盒所包含的試劑+來自TaKaRa的貨號為RR014A的PrimeScriptRT-PCRKit所包含的試劑+來自TwistDX公司的RPA擴增試劑盒TwistAmpBasickits所包含的試劑。利用上述本發(fā)明組合檢測菜豆莢斑駁病毒時,其方法采用實施例3中的方法進行。靈敏度實驗的取樣和模板濃度稀釋梯度的設(shè)置均按照實施例6進行。利用上述組合1、組合2和組合3檢測菜豆莢斑駁病毒時,凡是用到市售試劑盒,均按照其說明書進行操作進行,其余條件均同本發(fā)明組合。受檢樣品同對比例1中的50份大豆樣品。檢測結(jié)果如表3所示。表3不同試劑組合檢測樣品中菜豆莢斑駁病毒的結(jié)果組合檢出率(陽性數(shù)/樣品數(shù))(重復(fù)三次)靈敏度(按實施例6的稀釋度計)組合18/50;7/50;7/5010-3組合26/50;6/50;6/5010-2組合35/50;6/50;6/5010-3本發(fā)明組合7/50;7/50;7/5010-3國家標準7/50;7/50;7/5010-3結(jié)果顯示:本發(fā)明引物對和各特定試劑的組合的檢測結(jié)果與國家標準檢測方法的檢測結(jié)果一致,這說明本發(fā)明引物對和各特定試劑的組合所組成的試劑盒具有特異性強、靈敏度高且重復(fù)性好的優(yōu)勢,而采用本發(fā)明引物對與其它隨機選取的若干試劑的組合則或多或少的存在特異性不強、靈敏度不高和重復(fù)性不好的各種缺陷。SEQUENCELISTING<110>中國檢驗檢疫科學(xué)研究院<120>基于RPA技術(shù)檢測菜豆莢斑駁病毒的方法、RPA引物及試劑盒<130>17PA0092CN.B1<160>2<170>PatentInversion3.3<210>1<211>35<212>DNA<213>Artificial<220><223>SEQIDNO:1<400>1tatttgtatgctatggtgcatgatagttcagtgtc35<210>2<211>30<212>DNA<213>Artificial<220><223>SEQIDNO:2<400>2tgttctcactgttgccatttgattccaaac30當(dāng)前第1頁1 2 3