本發(fā)明涉及一種芳香族化合物，尤其涉及一種查爾酮衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽，對11β-HSD1的催化方向具有雙重調(diào)節(jié)作用，能明顯降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平，能明顯降低血糖和血脂水平，具有防治代謝綜合征和II型糖尿病的作用。

背景技術(shù)：

天然查爾酮屬于黃酮類化合物，廣泛存在于水果蔬菜和天然藥物中，并且具有抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗?jié)兒涂咕饔?，以及抗瘧疾等多種生物學(xué)活性，且毒性非常低。

糖尿病是由于體內(nèi)胰島素分泌不足或者胰島素抵抗引起的以高血糖和糖尿為特征的內(nèi)分泌代謝疾病，常伴有動脈粥樣硬化性心血管疾病、糖尿病腎病、神經(jīng)系統(tǒng)病變、下肢潰瘍、眼部病變?nèi)绨變?nèi)障、視網(wǎng)膜病變等多種并發(fā)癥。因此，糖尿病已經(jīng)成為繼心腦血管、癌癥之后的嚴(yán)重危害人類健康的第三大疾病。

糖尿病是由于體內(nèi)胰島素分泌不足或者胰島素抵抗引起的以高血糖和糖尿為特征的內(nèi)分泌代謝疾病，常伴有動脈粥樣硬化性心血管疾病、糖尿病腎病、神經(jīng)系統(tǒng)病變、下肢潰瘍、眼部病變?nèi)纾喊變?nèi)障、視網(wǎng)膜病變等多種并發(fā)癥。因此，糖尿病已經(jīng)成為繼心腦血管、癌癥之后的嚴(yán)重危害人類健康的第三大疾病。

胰島素是調(diào)節(jié)葡萄糖和脂質(zhì)代謝的激素。糖尿病分為兩類：I型糖尿病和II型糖尿病。I型糖尿病(即胰島素依賴型糖尿病)由于胰島素分泌減少引起。II型糖尿病(即非胰島素依賴型糖尿病)由于胰島素抵抗引起。通常，II型糖尿病患者中胰島素水平升高(即，高胰島素血癥)，但這種代償性增加不足以克服胰島素抵抗。I型和II型糖尿病持續(xù)或不受控制的高血糖增加大血管和微血管并發(fā)癥，包括動脈粥樣硬化、冠狀動脈心臟疾病、周圍血管疾病、中風(fēng)、腎病、神經(jīng)病和視網(wǎng)膜病變的發(fā)生率。

胰島素抵抗，即使在高血糖臨界可以發(fā)生，是代謝綜合征的一個組成部分。最近，代謝綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)建立。下列五個條件必須滿足三個就可以診斷為代謝綜合癥：(1)血壓高于130/85毫米汞柱；(2)空腹血糖超過110毫克/分升；(3)腹型肥胖腰圍大于40″(男性)或35″(女性)；(4)甘油三酯高于150毫克/分升；(5)高密度脂蛋白膽固醇低于40毫克/分升(男性)或50毫克/分升(女性)。

世界上大約有1.2億的糖尿病患者。據(jù)WHO估計，到2020年，全球糖尿病患者將接近3億。

II型糖尿病的治療方法有限。飲食和身體鍛煉對II型糖尿病患者有益，但依從性差。需要其他方式的治療，以進一步提高葡萄糖和脂質(zhì)代謝。I型糖尿病的治療采用胰島素。II型糖尿病糖尿病的治療采用一些藥物，如：二甲雙胍和苯乙雙胍，可改善糖尿病患者中胰島素敏感性和葡萄糖代謝，然而，作用機理還不很清楚，兩種化合物可導(dǎo)致乳酸性酸中毒和胃腸道副作用(例如，惡心或腹瀉)。α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖)可以從腸道飯后延緩碳水化合物的吸收，反過來降低血糖水平。像雙胍類，這些化合物也可以引起胃腸道的副作用。格列酮類是一種較新的治療2型糖尿病的化合物，通過修改過PPARγ亞型的活性，格列酮類副作用包括體重增加和外周水腫。其他藥物有胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物、Exendin-4和二肽基肽酶IV(DPPIV)的抑制劑，其增加胰島素的分泌，參與肝葡萄糖產(chǎn)生和分泌的關(guān)鍵酶的抑制劑(例如：果糖1，6-二磷酸酶抑制劑)。

從目前的II型糖尿病藥物研制趨勢來看，從內(nèi)分泌失調(diào)和代謝紊亂機制入手研制II型糖尿病治療藥物的正在逐漸起步。

其中一種方法是使用11β-羥基類固醇脫氫酶1(11β-HSD1)抑制劑。糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇控制葡萄糖和脂質(zhì)代謝，過度皮質(zhì)醇作用可導(dǎo)致胰島素抗性、II型糖尿病、血脂異常、增加腹部肥胖和高血壓。糖皮質(zhì)激素包括血液中循環(huán)的活性皮質(zhì)醇(人)和非活性形式(即：可的松)。11β-HSD1在肝臟和脂肪組織中高度表達，其還原酶轉(zhuǎn)換可的松到皮質(zhì)醇導(dǎo)致皮質(zhì)醇局部濃度增高。11β-HSD1還原酶的抑制可防止或減小糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇作用(Curr Med Chem.，17，412～22)。

11β-HSD包括兩種酶：11β-HSD1和11β-HSD2，有兩個不同的基因表達。它們的作用也不同。其中，11β-HSD1是氧化還原酶，含有還原酶和氧化酶兩種酶活性形式，其中在肝臟和脂肪以還原酶占主要地位，促進非活性糖皮質(zhì)激素可的松向活性糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化。而氧化酶的作用方向相反，占次要地位。而11β-HSD2在腎臟，保護鹽皮質(zhì)激素的作用，11β-HSD2的抑制或失變異可造成高血壓和低血鉀(Curr Med Chem.，17，412～22)。11β-HSD2促進活性糖皮質(zhì)激素向非活性糖皮質(zhì)激素的轉(zhuǎn)化。國外已有多家大型藥物公司開始了11β-HSD1還原酶抑制劑的研究，如：BVT 7702(Diabetologia 2002，45，1528～32)、NCB13793(IDmgs 2010，13，266～75)和BMS-770767(J Labelled Comp.Radiopharm，2016)等。其中，Incyte公司的11β-HSD1選擇性抑制劑NCB13793正在進行II期臨床研究。11β-HSD1還原酶的主要作用是促進非活性糖皮質(zhì)激素可的松向活性糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化(Curr Med Chem.，17，412～22)。這些11β-HSD1還原酶抑制劑大多不抑制11β-HSD2活性，以免造成高血壓和低血鉀的副反應(yīng)，所以是11β-HSD1還原酶抑制劑選擇性抑制劑。

目前所報道的11β-HSD1抑制劑，表觀上體現(xiàn)出對11β-HSD1還原酶的抑制，但均同時抑制11β-HSD1氧化酶和還原酶兩種活性。11β-HSD1氧化酶有著與11β-HSD2相同的作用，在肝臟和脂肪組織中可以降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇的濃度、增加胰腺胰島素合成，降低肝糖輸出和血糖水平，增強胰島素敏感性，抵抗糖尿病發(fā)生發(fā)展。雖然在已報道的11β-HSD1抑制劑對11β-HSD1的混合抑制中，抑制氧化酶所產(chǎn)生的影響小于抑制還原酶所產(chǎn)生的影響，但勢必會抵消抑制劑的部分藥效。而且，抑制11β-HSD1還原酶只能預(yù)防和阻止氫化可的松的生成，阻止血糖濃度生高，但是卻無法降低已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇濃度。局部組織中已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇水平仍將維持刺激肝糖輸出和胰島素抵抗。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個目的在于提供一種查爾酮衍生物，能夠同時降低11β-HSD1還原酶活性并增加11β-HSD1氧化酶活性。

本發(fā)明的另一個目的在于提供一種查爾酮衍生物，能顯著降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平。

本發(fā)明的再一個目的在于提供一種查爾酮衍生物，能顯著降低血糖水平。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種查爾酮衍生物，能顯著降低血脂水平。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種查爾酮衍生物，在制備防治代謝綜合征藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種查爾酮衍生物，在制備防治II型糖尿病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種藥物組合物，含有查爾酮衍生物。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種低劑量藥物組合物，含有查爾酮衍生物。

本發(fā)明的又一個目的在于提供一種藥劑盒，含有查爾酮衍生物。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式I所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基，Z選自于C1～C6烷氧基和NR₁R₂，R₁和R₂獨立地選自于H和C1～C6烷基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式II所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式III所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式IV所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，其結(jié)構(gòu)如式V所示：

其中：Y選自于鹵素、C1～C6烷氧基、羥基和羧基。

本發(fā)明提供的另一種查爾酮衍生物，具有如下結(jié)構(gòu)：

RS02：2-氯-4’-氨基查爾酮(化學(xué)式：C₁₅H₁₂ClNO)；

RS03：2-氟-4’-氨基查爾酮(化學(xué)式：C₁₅H₁₂FNO)；

RS04：2-氯-4’-甲氧基查爾酮(化學(xué)式：C₁₆H₁₃ClO₂)；

RS05：4-甲氧基-4’-甲氧基查爾酮(化學(xué)式：C₁₇H₁₆O₃)；

RS06：4-羥基-4’-甲氧基查爾酮(化學(xué)式：C₁₆H₁₄O₃)。

本發(fā)明提供的各種查爾酮衍生物，還包括其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明提供的各種查爾酮衍生物，能夠同時降低11β-HSD1還原酶的活性并增加11β-HSD1氧化酶的活性，能顯著降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平，顯著降低血糖水平和血脂水平。因此非常有效于治療或預(yù)防代謝疾病和II型糖尿病。

本發(fā)明還提供的一種組合物，包含以查爾酮衍生物為活性成分。

此外，組合物還包括各種與所含化合物或組合物相適應(yīng)的藥物輔料，以制成有利于給藥(drug delivery)的劑型，如：但不僅限于水溶液注射劑、粉針劑、丸劑、散劑、片劑、貼劑、栓劑、乳劑、霜劑、凝膠劑、顆粒劑、膠囊劑、氣霧劑、噴霧劑、粉霧劑、緩釋劑和控釋劑等。這些藥用輔料既可以是各種制劑中常規(guī)使用的，如：但不僅限于等滲劑、緩沖液、矯味劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、崩解劑和潤滑劑等；也可以是為了與所述物質(zhì)相適應(yīng)而選擇使用的，如：乳化劑、增溶劑、抑菌劑、止痛劑和抗氧劑等，這類輔料能有效提高組合物所含化合物的穩(wěn)定性和溶解性或改變化合物的釋放速率和吸收速率等，從而改善各種化合物在生物體內(nèi)的代謝，進而增強組合物的給藥效果。此外，還可以為實現(xiàn)特定的給藥目的或方式，如：緩釋給藥、控釋給藥和脈沖給藥等，而使用的輔料，如：但不僅限于明膠、白蛋白、殼聚糖、聚醚和聚酯類高分子材料，如：但不僅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。所稱的“有利于給藥”的主要表現(xiàn)有：但不僅限于提高治療效果、提高生物利用度、降低毒副作用和提高患者順應(yīng)性等。

在水溶液注射劑中，輔料一般包括等滲劑和緩沖液，以及必要的乳化劑(如：Tweeen-80、Pluronic和Poloxamer等)、增溶劑和抑菌劑等。此外，還包括含有藥學(xué)上可接受的其它藥用輔料，如：抗氧劑、pH調(diào)節(jié)劑和止痛劑等。

用于制取口服液體制劑的輔料一般包括溶劑，以及必要的矯味劑、抑菌劑、乳化劑和著色劑等。

用于制取片劑的輔料一般包括填充劑(如：淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可壓性淀粉、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣和甘露醇等)、粘合劑(如：乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、明膠溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解劑(如：干淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)和潤滑劑(如：硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇4,000、聚乙二醇6,000和月桂醇硫酸鎂等)等。

用于制取乳劑的輔料一般為水、油(如：脂肪酸)、乳化劑，以及必要的防腐劑和矯味劑等。

用于制取顆粒劑的輔料與片劑類似，但造粒過程不同。根據(jù)需要，將制得的顆粒劑與助流劑混合后裝入膠囊即得膠囊劑。

本發(fā)明所稱的“C1～C6”表示碳原子個數(shù)為1～6。其中，字母C表示碳原子，其后數(shù)字為正整數(shù)，如：1、2或3，表示基團所含的碳原子個數(shù)，如：1、2、3、4、5和6等。

本發(fā)明所稱的“烷基”作為一基團或一基團的一部分時是指直鏈或者帶有支鏈的飽和脂肪烴基團，如：但不僅限于甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、新戊基和己基等。

本發(fā)明所稱的“烷氧基”為烷基與氧原子連結(jié)后而成的基團，如：但不僅限于甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。

本發(fā)明所稱的“生物體”、“動物”或“患者”是指人、野生動物和家畜(Livestock)。野生動物為自然狀態(tài)下未經(jīng)人工馴化的動物。家畜是為了提供食物來源而人工飼養(yǎng)的動物，如：但不僅限于狗、貓、鼠、大鼠、倉鼠、豬、兔、奶牛、水牛、公牛、綿羊、山羊、鵝和雞等。給予治療的“患者”或“生物體”優(yōu)先選擇哺乳動物，尤其是人。

本發(fā)明所稱的“預(yù)防”是指在未被臨床標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)定的疾病前，各種用于防止疾病發(fā)生或發(fā)展的手段或措施，包括醫(yī)學(xué)、物理或化學(xué)的方法，以阻止和降低疾病各種癥狀的發(fā)生或發(fā)展。

本發(fā)明所稱的“預(yù)防糖尿病”是指將本發(fā)明組合物用于還未符合“糖尿病”臨床指標(biāo)的，隨著時間的延續(xù)將慢慢發(fā)展成為臨床上定義為“糖尿病”的潛在患者，從而改善這些患者對葡萄糖的耐受，促進肌體對糖代謝的能力，增加肌體對胰島素的敏感性。這類潛在的患者通常患有“代謝綜合癥(Metabolic Syndrome)”(Annnu.Rev.Nutri.，2005，25，391-406；Annnu.Rev.Med.，2005，56，45-62；Nat.Rev.Drug.Disc.，2006，5，295-309；Nat.Rev.Endocri.，2006，2，335-348)，如：肥胖、胰島素抵制、葡萄糖不耐受、高血壓、動脈硬化證(antherosclerosis)、血脂異常癥(dyslipidemia)(即血液中的甘油三酯水平偏高，高密度脂蛋白同時偏低)等。

本發(fā)明所稱的“治療”是指為了阻止和降低疾病的發(fā)生或發(fā)展，使疾病病程的發(fā)展或加重得以抑制、遏制、減輕、改善、減緩、停止、延遲或反轉(zhuǎn)，所描述的保持和/或用藥時的疾病的、紊亂的或病理學(xué)狀態(tài)的各種指標(biāo)包括減輕或減少癥狀或并發(fā)癥，或治愈或消除疾病、紊亂或狀況。

本發(fā)明所稱的“治療糖尿病”是指將本發(fā)明組合物用于臨床診斷為“糖尿病”的患者，改善這些患者對葡萄糖的耐受，促進肌體對糖代謝的能力，增加肌體對胰島素的敏感性。進而使得患者的餐后和空腹血糖得以控制在正常的水平。由于對葡萄糖代謝的能力得以提高，從而減緩了因長期高血糖而產(chǎn)生的各種心血管疾病、慢性腎衰竭、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變及微血管病變的發(fā)生和發(fā)展。

本發(fā)明所稱的“食品”是指包括本發(fā)明提供的各種化合物、組合物或提取物制成可食用的單一化合物或組合物。該種單一化合物或組合物的生產(chǎn)和制造應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)食品安全標(biāo)準(zhǔn)，但是這些食品安全標(biāo)準(zhǔn)不得限定本發(fā)明。

本發(fā)明所稱的“保健品”是指將包括本發(fā)明提供的各種化合物、組合物或提取物制成可食用的單一化合物或組合物以施于患者，起到對疾病進行預(yù)防和治療的目的。其屬于本發(fā)明所稱的食品，但其生產(chǎn)、制造和銷售還應(yīng)當(dāng)符合各種相關(guān)的要求、標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。

本發(fā)明所稱的“藥物”是指可以用于預(yù)防或治療某種疾病的單一化合物、多種化合物形成的組合物、中藥材及其提取物，或指以單一化合物為主要活性成分的組合物或制劑(formulation)，還指由多種化合物為活性成分的組合物或制劑。“藥物”應(yīng)理解為不僅指根據(jù)一國之法律規(guī)定，通過其設(shè)立的行政機構(gòu)審批并準(zhǔn)予生產(chǎn)的產(chǎn)品，還指在為了獲得通過審批和準(zhǔn)予生產(chǎn)的過程中，所形成的含單一化合物為活性成分的各類物質(zhì)形態(tài)。“形成”應(yīng)理解為通過化學(xué)合成、生物轉(zhuǎn)化或購買等途徑獲得。

優(yōu)選在一方面中，代謝疾病和II型糖尿病相對于健康或正常個體、器官、組織或細(xì)胞報道，具有11β-HSD1還原酶活性增加和/或11β-HSD1氧化酶活性降低的癥狀，更優(yōu)選具有11β-HSD1還原酶活性增加和11β-HSD1氧化酶活性降低的癥狀。更優(yōu)選，代謝類疾病是由于11β-HSD1還原酶活性增加和/或11β-HSD1氧化酶活性降低造成。由于本發(fā)明提供的各種查爾酮衍生物，尤其是化合物RS02～RS06能夠同時降低11β-HSD1還原酶活性并增加11β-HSD1氧化酶活性，所以本發(fā)明第一方面中更優(yōu)選代謝疾病和II型糖尿病是由于11β-HSD1還原酶活性增加和11β-HSD1氧化酶活性降低造成的。

優(yōu)選在另一方面中，代謝疾病和II型糖尿病是可通過降低11β-HSD1還原酶活性和/或增加11β-HSD1氧化酶活性而治療或預(yù)防代謝疾病和2型糖尿病，更優(yōu)選代謝疾病和II型糖尿病是可通過降低11β-HSD1還原酶活性和增加11β-HSD1氧化酶活性而治療或預(yù)防代謝疾病和2型糖尿病。經(jīng)本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，由于提供的各種查爾酮衍生物，尤其是化合物RS02～RS06能夠同時降低11β-HSD1還原酶活性并增加11β-HSD1氧化酶活性，所以本發(fā)明另一方面中更優(yōu)選代謝類疾病可通過降低11β-HSD1還原酶活性和增加11β-HSD1氧化酶活性中之任一途徑(優(yōu)選同時通過這兩個途徑)而治療或預(yù)防的。例如：代謝疾病和II型糖尿病選自糖尿病、肥胖癥、動脈粥樣硬化癥、肝硬化、脂肪肝、高血糖、高血脂和高血壓。在本發(fā)明的具體實施方式中，代謝類疾病選自糖尿病、脂肪肝、高血糖和高血脂。在本發(fā)明優(yōu)選的具體實施方式中，代謝類疾病是糖尿病，如：I型糖尿病和II型糖尿病。

優(yōu)選在另一方面中，經(jīng)制備過程，藥物含有有效劑量的本發(fā)明各種查爾酮衍生物，尤其是化合物RS02～RS06等之一個或者多個。有效劑量可以是單位給藥劑量形式(如：一片、一針、一丸或一劑)的藥物中的含量，也可以是所需治療/預(yù)防的患者的單位劑量(如：單位體重劑量)。藥物制造商能夠很容易地通過所需治療/預(yù)防的患者群體的平均體重將所需治療/預(yù)防的患者的單位體重劑量換算成單位給藥劑量形式的藥物中的含量。

本發(fā)明技術(shù)方案實現(xiàn)的有益效果：

本發(fā)明提供的查爾酮衍生物，能夠同時降低11β-HSD1還原酶的活性并增加11β-HSD1氧化酶的活性，能顯著降低糖皮質(zhì)激素皮質(zhì)醇水平，顯著降低血糖水平和血脂水平。因此非常有效于治療或預(yù)防代謝疾病和II型糖尿病。

經(jīng)驗證，本發(fā)明提供的查爾酮衍生物，未觀察到給藥動物的異常行為和情況，具有安全性。也未觀察到給藥動物的異常行為和情況，說明毒性低，無測量LD50值。

附圖說明

圖1為制取本發(fā)明查爾酮衍生物的化學(xué)合成示意圖；

圖2為本發(fā)明雙重調(diào)節(jié)11β-HSD1機制的示意圖；

圖3A為本發(fā)明化合物RS02對11β-HSD1還原酶抑制的作用(Mean±SEM，n＝4)；

圖3B為本發(fā)明化合物RS02對11β-HSD1氧化酶激活的作用(Mean±SEM，n＝4)；

圖4為本發(fā)明化合物RS02對大鼠血糖水平和酯質(zhì)代謝的影響(Mean±SEM，n＝10)，其中，A圖為血糖(Glucose)，B圖為三酰甘油(TG)，C圖為總膽固醇(Cholesterol)，D圖為低密度脂蛋白(LDL)，相同字母間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；

圖5A為本發(fā)明化合物RS02～RS06體外對大鼠腎微粒體11β-HSD2活性的影響；

圖5B為本發(fā)明化合物RS02～RS06體外對人腎微粒體11β-HSD2活性的影響。

具體實施方式

以下結(jié)合附圖詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案。本發(fā)明實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。

實施例1

參見圖1的方式，即通過取代的苯乙酮和取代或未取代的苯甲醛之間在5℃～8℃，5～7.5eq NaOH條件下進行Claisen-Schmidt縮合反應(yīng)合成，獲得化合物RS02～RS06，其合成通法為：在Fisher-約翰斯熔點裝置測定熔點。在600MHz的光譜儀記錄¹H NMR光譜。在HCT光譜儀以正模式Electrospray電離質(zhì)譜(LC-ESI-MS)記錄數(shù)據(jù)。經(jīng)硅膠60(Merck)進行柱層析純化化合物。

(E)-2-氯-4′-氨基查爾酮(RS02)：黃色粉末，收率81.1％，熔點132.3～135.7℃。¹H核磁共振(CDCl₃)，δ：8.132(d，J＝15.6Hz赫茲，1H，H-β)，7.926(d，J＝8.4Hz赫茲，2H，H-2′，H-6′)，7.733(d，J＝9.6Hz赫茲，1H，H-6)，7.490(d，J＝15.6Hz赫茲，1H，H-α)，7.431(d，J＝9赫茲，1H，H-3)，7.307(m，1H，H-5)，7.302(m，1H，H-3)，6.700(d，J＝8.4Hz赫茲，2H，H-3′，H-5′)，4.190(brs，2H，NH2-4′)。ESI-MS m/z：258.3(M+1)⁺；計算C₁₅H₁₂ClNO，257.71。

(E)-2-氟-4′-氨基查爾酮(RS03)：黃色粉末，收率92.3％，熔點38.7～140.4℃。¹H核磁共振(CDCl₃)，δ：7.936(d，J＝7.8Hz，2H，H-2，H-6)，7.863(d，J＝15.6Hz，1H，H-β)，7.653(d，J＝15.6Hz，1H，H-α)，7.6197.647(m，1H，H-6)，7.345～7.362(m，1H，H-4)，7.170～7.196(m，1H，H-5)，7.105～7.138(m，1H，H-3)，6.704(d，J＝7.8Hz，2H，H_3，H_5)，4.185(brs，2H，NH2_4)。IR(cm-1)：3216，3329(NH2)，1650(C＝0)，1485，1557，1587(Ar)，1602(C＝C)。ES1-MS m/z：240.2(M-I)；計算C₁₅H₁₂FNO，241.26。

(E)-2-氯-4′-甲氧基查爾酮(RS04)：白色粉末，收率94.0％。¹H-WR(CDCl₃)，δ：8.159(d，J＝16.2Hz，1H，H-β)，8.038(d，J＝9Hz，2H，H_2，H_6)，7.742(d，J＝6.6Hz，1H，H-3)，7.495(d，J＝15.6Hz，1H，H-α)，7.442(d，J＝9Hz，1H，H-6)，7.326(t，1H，H_4)，7.314(t，1H，H-5)，6.989(d，J＝8·4Hζ，2H，H-3，H-5)，3.896(s，3H，0CH3_4)。ESI-MS m/z：274.2(M+1)⁺；計算C₁₆H₁₃ClO₂，272.73。

(E)-4-甲氧基-4′-甲氧基查爾酮(RS05)：收率65.0％。¹H NMR(δ/ppm)：8.02(d，2H，J＝8.7Hz)-7.77(d，1H，J＝15.6Hz)-7.69(d，2H，J＝8.7Hz)-7.42(d，1H，J＝15.6Hz)-6.97(d，2H，J＝9Hz)-6.93(d，2H，J＝8.7Hz)-3.88(s，3H)-3.85(s，3H)。¹³C NMR(δ/ppm)：55.46-55.54-113.83-114.83-119.59-127.85-130.15-130.75-131.40-143.86-161.55-163.31-188.82；計算C₁₇H₁₆O₃，268.307。

(E)-4-羥基-4′-甲氧基查爾酮(RS06)：淡黃粉末，收率14.7％，熔點170.4～171.0℃。¹H NMR(CDCl₃)，δ：10.048(s，1H，OH-4)，8.122(d，J＝8.4Hz，2H，H-2′，H-6′)，7.721(d，J＝8.4Hz，2H，H-2，H-6)，7.720(d，J＝15.6Hz，1H，H-β)，7.641(d，J＝15.6Hz，1H，H-α)，7.070(d，J＝9.0Hz，2H，H-3，H-5)，6.834(d，J＝8.4Hz，2H，H-3′，H-5′)，3.860(s，3H，OCH 3-4′).ESI-MS m/z：253.0(M-1)^-，計算C₁₆H₁₄O₃，254.28。

實施例2 RS02～RS06體外雙重調(diào)節(jié)11β-HSD1活性

圖2所示，目前所報道的11β-HSD1抑制劑都僅指對11β-HSD1還原酶(11β-HSD1 reductase)選擇性，尚未涉及到對11β-HSD1還原酶(reductase)和氧化酶(oxidase)兩個催化方向之間的選擇性。所報道的11β-HSD1抑制劑同時抑制11β-HSD1還原酶和氧化酶，但由于還原酶占主要地位，因而表觀上體現(xiàn)為抑制還原酶，降低機體和局部的皮質(zhì)醇(cortisol)濃度。目前尚未見對11β-HSD1還原酶和氧化酶分別篩選測試和具有11β-HSD1方向選擇性藥物的報道。雖然目前的抑制劑抑制氧化酶所產(chǎn)生的影響小于抑制還原酶所產(chǎn)生的影響，但其缺陷在于：(1)勢必會抵消抑制劑的部分藥效；(2)雙向抑制11β-HSD1只能阻止可的松(cortisone)向皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化，但是卻無法降低已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇濃度，組織中已經(jīng)升高的皮質(zhì)醇水平仍將維持刺激肝糖輸出和胰島素抵抗；已有的皮質(zhì)醇濃度需要通過刺激11β-HSD1氧化酶使其轉(zhuǎn)化為無活性的可的松。理想的11β-HSD1雙重調(diào)節(jié)劑(本發(fā)明的查爾酮化合物(Chalcone derivative)即為11β-HSD1雙重調(diào)節(jié)劑)，它能抑制11β-HSD1還原酶同時激活11β-HSD1氧化酶，更大幅度地降低糖皮質(zhì)激素(cortisol)活性，最終發(fā)揮更好的抑制代謝綜合征型和2型糖尿病的效果，形成理想的通過11β-HSD1→糖皮質(zhì)激素→胰島素→血糖通道發(fā)揮抗糖尿病作用的藥物。

本實施例大鼠間質(zhì)細(xì)胞分離：用CO₂窒息法處死大鼠后，摘除睪丸以提取和純化間質(zhì)細(xì)胞，方法參考(J Androl，2001，22，665～71)。間質(zhì)細(xì)胞的純度通過3β-羥甾脫氫酶活性組織化學(xué)染色法測定(以0.4mM本膽烷醇酮為甾體底物)，該方法可以95％純度以上的成熟間質(zhì)細(xì)胞。

針對整體間質(zhì)細(xì)胞11β-HSD1氧化酶和還原酶活性檢測：利用檢測[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的濃度分別表征11β-HSD1氧化酶或還原酶活性。每個11β-HSD1活性檢測管中加入25nM[3H]-可的松(該濃度在可的松生理學(xué)活性濃度范圍之內(nèi))。50000個原代間質(zhì)細(xì)胞在含有25nM[3H]-可的松的培養(yǎng)液中培養(yǎng)30min后，[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的濃度表征11β-HSD1氧化酶或還原酶活性。反應(yīng)在一定時間后用2ml冰乙醚終止。然后，用有機溶劑提取孵育液中的甾體，氮氣氣流中干燥后，以氯仿/甲醇(9∶1，v/v)為流動相，通過薄層層析法分離甾體，[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的放射性通過掃描輻射儀檢測(System AR2000，Bioscan Inc.，Washington，USA)，可的松和氫化可的松之間的轉(zhuǎn)化率由它們本身的放射性標(biāo)準(zhǔn)數(shù)計算確定。

表1：RS02～RS06對間質(zhì)細(xì)胞11β-HSD1氧化酶和還原酶方向影響(Mean±SEM，n＝4)

實施例3 RS02在大鼠間質(zhì)細(xì)胞中對11β-HSD1還原酶和氧化酶的雙重調(diào)節(jié)作用。

參見圖3A和圖3B，氧化酶活性通過50000個間質(zhì)細(xì)胞加入皮質(zhì)醇(10^-9～10^-5M)處理30分鐘后測量。11β-HSD1還原酶通過在50000個間質(zhì)細(xì)胞加入可的松(10^-9～10^-5M)處理30分鐘后測量。RS02對11β-HSD1還原酶抑制的IC₅₀是98nM，而其對11β-HSD1氧化酶激活的EC₅₀是54nM。

實施例4 RS02～RS06體外對間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體11β-HSD1還原酶活性

大鼠間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體蛋白的制備：大鼠間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體制備參考Ge RS等報道的方法進行制備(Endocrinology 1997，138，435～42)。

化合物處理與檢測：對于微粒體中的11β-HSD1活性檢測，微粒體(10μg蛋白)與11β-HSD1底物0.2mM NADPH、1mM G6P一起孵育，反應(yīng)在一定時間后用2ml冰乙醚終止。然后，用有機溶劑提取孵育液中的甾體，氮氣氣流中干燥后，以氯仿/甲醇(9∶1)為流動相，通過薄層層析法分離甾體，[3H]-可的松或[3H]-11-氫化可的松的放射性通過掃描輻射儀檢測(System AR2000，Bioscan Inc.，Washington，USA)，可的松和氫化可的松之間的轉(zhuǎn)化率由它們本身的放射性標(biāo)準(zhǔn)數(shù)計算確定。11β-HSD2的檢測方法如11β-HSD1氧化酶的檢測方法。

表2

RS02～RS06對間質(zhì)細(xì)胞和人肝細(xì)胞微粒體11β-HSD1還原酶的影響(Mean±SEM，n＝4)

實施例5 RS02～RS06體外對大鼠和人腎微粒體11β-HSD2活性

大鼠腎微粒體和人腎微粒體蛋白的制備：大鼠腎微粒體制備參考Ge RS等報道的方法進行制備(Endocrinology 1997，138，435～42)。

化合物處理與檢測：對于微粒體中的11β-HSD2活性檢測，微粒體(10μg蛋白)與11β-HSD2底物0.2mM NAD⁺一起孵育，反應(yīng)在一定時間后用2ml冰乙醚終止。然后，用有機溶劑提取孵育液中的甾體，氮氣氣流中干燥后，以氯仿/甲醇(9∶1)為流動相，通過薄層層析法分離甾體，[3H]-可的松和[3H]-11-氫化可的松的放射性通過掃描輻射儀檢測。氫化可的松轉(zhuǎn)化可的松的轉(zhuǎn)化率由它們本身的放射性標(biāo)準(zhǔn)數(shù)計算確定。

如圖5A和圖5B所示，RS02-RS06對大鼠和人腎微粒體11β-HSD2活性的無抑制作用。

實施例6 RS02對動物模型血糖水平和酯質(zhì)代謝的影響

雄性成年SD大鼠30只，每組10只分別用正常飲食喂養(yǎng)(CON，對照組)和高脂飲食喂養(yǎng)(HFD，高脂模型組)，灌胃給藥RS02(2mg/kg組)，對照組和高脂模型組給溶媒(1％羧甲基纖維素)，RS02懸浮于1％羧甲基纖維素，灌胃給藥2個月。

各種指標(biāo)通過生化分析儀檢測血糖(Glucose)三酰甘油(TG)、總膽固醇(Cholesterol)和低密度脂蛋白(LDL)。

如圖4所示，化合物RS02明顯降低血糖、三酰甘油、總膽固醇和低密度脂蛋白作用。

實施例7 RS02的安全性實驗：低劑量亞急性毒性試驗

將RS02懸溶于1％的羥甲基纖維素鈉溶液中，取15～18g的雄性Balb/C小鼠，分為4組，每組10只，普通飲食喂養(yǎng)，分別是陰性組(正常飼養(yǎng)，不灌胃)、溶劑組(灌胃相同量的％羥甲基纖維素鈉溶液)、400mg/kg的RS02組、800mg/kg的RS02組，灌胃給藥，每天一次，連續(xù)灌胃14天。

14天內(nèi)沒有小鼠因毒性死亡，也未觀察到給藥小鼠的異常行為和情況，說明安全。

實施例8RS02的安全性實驗：急性毒性試驗

將RS02懸溶于1％的羥甲基纖維素鈉溶液中，取15-18g的Balb/C雄性小鼠20只，普通飲食喂養(yǎng)，以4g/kg的劑量灌胃RS02，每天一次，連續(xù)灌胃7天，然后再觀察7天。

14天內(nèi)沒有小鼠因毒性死亡，也未觀察到給藥小鼠的異常行為和情況，說明毒性低，無測量LD50值。

結(jié)論：RS02顯著的降低血糖的作用，毒性低。