本申請(qǐng)是于2010年8月20日提交的申請(qǐng)?zhí)枮?01080040807.8，發(fā)明名稱(chēng)為“具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的變體免疫球蛋白”的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及抗體分子的表達(dá)，并且具體而言，涉及具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的抗體分子的制備。術(shù)語(yǔ)“聚集”描述了多種現(xiàn)象，所有現(xiàn)象都涉及蛋白自締合，能在多種環(huán)境中發(fā)生，從細(xì)胞培養(yǎng)和發(fā)酵至分離、純化和制備過(guò)程中都能發(fā)生。例如，描述以下情況時(shí)通常使用“聚集”：包涵體的形成；細(xì)胞分級(jí)分離后“不溶”部分中的蛋白累積；樣品中出現(xiàn)渾濁、蛋白沉淀或形成顆粒；或者小的可溶寡聚物的形成等等。在本文中，蛋白聚集理解為多肽鏈的“異常自締合”，并且可以具有多種起因和表現(xiàn)，這主要取決于參與的分子的性質(zhì)和產(chǎn)生、分離、保存和給予多肽的環(huán)境。多肽的三維結(jié)構(gòu)決定了其天然的生理功能。蛋白通常是在核糖體中合成后獲得其天然結(jié)構(gòu)。蛋白折疊的加工在根本上編碼于蛋白的氨基酸序列中。然而，多種能確保多肽獲得其預(yù)期的生物活性結(jié)構(gòu)的分子輔助物和質(zhì)量控制機(jī)制也能在體內(nèi)幫助折疊，從而在加工中避免異常構(gòu)象的群體。這些外部輔助物和質(zhì)量控制元件包括分子伴侶、二硫鍵異構(gòu)酶、翻譯后修飾(即蛋白水解過(guò)程、?；饔?、糖基化等)以及泛素-蛋白酶體系統(tǒng)。此外，蛋白聚集由溶液中蛋白的內(nèi)在穩(wěn)定性來(lái)驅(qū)動(dòng)。蛋白在溶液中僅是低度穩(wěn)定的，并且這種相對(duì)低的穩(wěn)定性在賦予特定生物學(xué)性質(zhì)同時(shí)提供良好的調(diào)節(jié)機(jī)制來(lái)控制其作用中是很重要的。然而，例如，為了將多肽開(kāi)發(fā)為藥物而使其脫離于其天然環(huán)境在多肽的產(chǎn)生、分離和配制中造成多種嚴(yán)格限制，這會(huì)對(duì)多肽的穩(wěn)定性和聚集行為產(chǎn)生巨大影響。對(duì)于指定蛋白的天然環(huán)境的改變，特別是由于特定的產(chǎn)生或工藝要求而導(dǎo)致的改變，會(huì)對(duì)蛋白的和溶液中的穩(wěn)定性產(chǎn)生巨大影響。為了增加收率的工藝要求加重了這個(gè)問(wèn)題，所述工藝要求例如：人工合成、異源表達(dá)(即哺乳動(dòng)物蛋白的原核表達(dá))、使用的是分泌途徑還是非分泌途徑、蛋白合成結(jié)構(gòu)的飽和；或諸如多肽片段或融合體的非天然蛋白造成的其它障礙。例如，哺乳動(dòng)物蛋白在異源系統(tǒng)中的表達(dá)會(huì)造成很多風(fēng)險(xiǎn)。這是由于該系統(tǒng)通常缺少合適的分子環(huán)境來(lái)保證“天然”折疊和加工這一事實(shí)造成的。本發(fā)明涉及以下發(fā)現(xiàn)：修飾免疫球蛋白分子的氨基酸序列中的某些關(guān)鍵位置會(huì)帶來(lái)可產(chǎn)生性的改進(jìn)，并且具體而言能使聚集傾向降低和/或增加產(chǎn)生水平。本發(fā)明的一方面提供產(chǎn)生變體免疫球蛋白的方法，包括：提供母體免疫球蛋白，在所述母體免疫球蛋白的vl結(jié)構(gòu)域框架區(qū)和/或vlcdr3的聚集傾向區(qū)段引入取代；和/或，在vh框架區(qū)和/或vhcdr3的聚集傾向區(qū)段中引入取代；和/或在所述母體免疫球蛋白重鏈(ch)的ch1恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的聚集傾向區(qū)段中引入取代，從而產(chǎn)生變體免疫球蛋白。所述變體免疫球蛋白相對(duì)于所述母體免疫球蛋白可以具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性。例如，相對(duì)于所述母體免疫球蛋白，所述變體免疫球蛋白在表達(dá)時(shí)可以表現(xiàn)出降低的聚集傾向和/或增加的產(chǎn)生能力。例如，相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出產(chǎn)生能力增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少100％、至少200％或至少500％，和/或相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出聚集降低(即，天然狀態(tài)組裝中發(fā)生聚集的分子的比例的降低)至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少80％、至少90％或至少99％。相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出聚集降低高達(dá)100％(即完全消除聚集)。可產(chǎn)生性的改進(jìn)可以完全地或部分地來(lái)自于相對(duì)于母體免疫球蛋白的降低的聚集傾向。聚集傾向涉及免疫球蛋白在重組系統(tǒng)中表達(dá)后形成不溶聚集物的傾向。聚集傾向的降低能減少免疫球蛋白的天然狀態(tài)系綜中以聚集形式存在的分子的比例(carpenteretal，2009jpharmsci.apr；98(4)：1201-5)。換言之，變體免疫球蛋白的天然狀態(tài)系綜中以聚集或不溶形式存在的分子的比例低于母體免疫球蛋白的天然狀態(tài)系綜中以聚集或不溶形式存在的分子的比例。在天然條件下或在增加的溫度下(例如60℃)(即免疫球蛋白的抗原結(jié)合位點(diǎn)不會(huì)展開(kāi)的條件)，與母體免疫球蛋白相比，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出較少的自締合或聚集。優(yōu)選地，在天然條件下(例如不會(huì)導(dǎo)致免疫球蛋白展開(kāi)的條件)，變體免疫球蛋白表現(xiàn)出的自締合或聚集少于母體免疫球蛋白。本文所述的聚集傾向不同于熱學(xué)再折疊效率(tre)，熱學(xué)再折疊效率涉及蛋白在熱變性后正確再折疊的能力，并且通常利用圓二色性(cd)進(jìn)行測(cè)定(tanhaetalproteinengdessel.2006nov；19(11):503-9)。本文所述的免疫球蛋白的聚集傾向的降低對(duì)免疫球蛋白的熱學(xué)再折疊效率可以具有很小影響或沒(méi)有影響。因此，熱學(xué)再折疊效率與聚集傾向無(wú)關(guān)，并且對(duì)免疫球蛋白的可產(chǎn)生性沒(méi)有顯著影響?？梢酝ㄟ^(guò)常規(guī)方法測(cè)定聚集。合適的技術(shù)包括gp-hplc、hplc和auc(gabrielsonjpetaljpharmsci200796(2)：268-79)，過(guò)濾后的蛋白丟失、濁度、熒光染料結(jié)合(例如尼爾紅、硫磺素t或8-苯胺基-1-萘磺酸；參見(jiàn)，例如hawe,a.etalpharmaceuticalresearch200825(7)1487-99或demeule,betal2007intjpharm329:37-45)、場(chǎng)流分離(fff；demeule,betal.mabs20091(2):142-150)和分析超離心(au/auc；liujetal.aapsj20068:580-9)。其它合適的方法描述于arvintet.in“methodsforstructuralanalysisofproteinpharmaceuticals”aapspress,2005:661-6和kiesesetaljpharmsci200897(10):4347-66?？僧a(chǎn)生性的改進(jìn)可以完全地或部分地來(lái)自于相對(duì)于母體免疫球蛋白的增加的產(chǎn)生能力。變體免疫球蛋白表現(xiàn)出的產(chǎn)生能力可以高于母體免疫球蛋白。例如，當(dāng)在重組系統(tǒng)例如細(xì)菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，與母體免疫球蛋白相比，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出增加的收率或滴度?？梢岳脴?biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)定產(chǎn)生能力，例如bradford測(cè)定、分光光度法和elisa。相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白還可以表現(xiàn)出一種或多種下述性質(zhì)：改進(jìn)的純化收率、降低的配置難度、降低的免疫原性和增加的生物利用度。在優(yōu)選實(shí)施方案中，可產(chǎn)生性的改進(jìn)可以來(lái)自于相對(duì)于母體免疫球蛋白的降低的聚集傾向和增加的產(chǎn)生能力兩者。優(yōu)選地，變體免疫球蛋白與母體免疫球蛋白表現(xiàn)出相同或基本上相同活性(即抗原結(jié)合活性)。免疫球蛋白是包含抗原結(jié)合位點(diǎn)的多肽或蛋白?？乖Y(jié)合位點(diǎn)是免疫球蛋白中與抗原的部分或全部特異性地結(jié)合并在空間上互補(bǔ)的部分。當(dāng)抗原較大時(shí)，免疫球蛋白可以?xún)H結(jié)合抗原的某一部分，該部分稱(chēng)為表位。優(yōu)選地，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(vl)和免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(vh)，它們可以在相同或不同的多肽鏈上。免疫球蛋白的實(shí)例包括完整抗體，包括抗體同種型，例如igg、iga、igd、igm和ige以及它們的同型亞類(lèi)，例如igg1和igg4；抗體片段；以及工程化抗體衍生物，例如小免疫蛋白(sip)、小型化抗體、駱駝vhh結(jié)構(gòu)域和雙鏈抗體?？贵w片段的實(shí)例包括(i)由vl、vh、cl和ch1結(jié)構(gòu)域組成的fab片段；(ii)由vh和ch1結(jié)構(gòu)域組成的fd片段；(iii)由單一抗體的vl和vh結(jié)構(gòu)域組成的fv片段；(iv)dab片段(ward,e.s.etal.,nature341,544-546(1989))，其由vh或vl結(jié)構(gòu)域組成；(v)分離的cdr區(qū)；(vi)f(ab')2片段，其是包含兩個(gè)連接的fab片段的二價(jià)片段；(vii)單鏈fv分子(scfv)，其中vh結(jié)構(gòu)域和vl結(jié)構(gòu)域通過(guò)肽連接物連接，所述肽連接物允許兩個(gè)結(jié)構(gòu)域相聯(lián)而形成抗原結(jié)合位點(diǎn)(birdetal，science，242，423-426，1988；hustonetal，pnasusa，85，5879-5883，1988)；(viii)雙特異性單鏈fv二聚物(pct/us92/09965)和(ix)“雙鏈抗體”，其是通過(guò)基因融合構(gòu)建的多價(jià)或多特異性片段(wo94/13804；p.holligeretal,proc.natl.acad.sci.usa906444-6448,1993)。可以通過(guò)引入連接vh和vl結(jié)構(gòu)域的二硫鍵而使fv、scfv或雙鏈抗體分子穩(wěn)定化(y.reiteretal.naturebiotech141239-12451996)。也可以制備包含與ch3結(jié)構(gòu)域連接的scfv的微型抗體(s.huetal,cancerres.563055-30611996)。免疫球蛋白可以是天然的或完全合成的或部分合成的。因此也可以包括嵌合免疫球蛋白，其包含與另一多肽融合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域或等同物。嵌合抗體的克隆和表達(dá)描述于ep-a-0120694和ep-a-0125023。已經(jīng)對(duì)包含一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的各種人工免疫球蛋白進(jìn)行了工程化，包括例如fab2、fab3、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和微型抗體。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本文所述的母體和變體免疫球蛋白是完整抗體或包含vh和vl結(jié)構(gòu)域的抗體片段。可以通過(guò)從天然來(lái)源中純化來(lái)分離或獲得免疫球蛋白，或也可以如本文所述，通過(guò)基因重組或化學(xué)合成來(lái)獲得免疫球蛋白。例如，通過(guò)借助于在合適的表達(dá)載體中合成并組裝的寡核苷酸而產(chǎn)生的基因的表達(dá)可以產(chǎn)生合成免疫球蛋白，正如knappiketal.j.mol.biol.(2000)296,57-86或krebsetal.journalofimmunologicalmethods254200167–84所述。免疫球蛋白可以是天然糖基化的，或體外或離體糖基化的，例如，利用異源真核細(xì)胞系統(tǒng)(例如cho細(xì)胞)，或免疫球蛋白可以是未糖基化的(例如，當(dāng)通過(guò)原核細(xì)胞中的表達(dá)而產(chǎn)生時(shí))。優(yōu)選地，糖基化的免疫球蛋白不包含巖藻糖。合適的母體免疫球蛋白可以是具有已知氨基酸序列，并且可以通過(guò)異源表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)而產(chǎn)生的任何免疫球蛋白。異源表達(dá)系統(tǒng)包括諸如cho細(xì)胞的哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、酵母細(xì)胞和細(xì)菌細(xì)胞(例如大腸桿菌，特別是對(duì)于抗體片段而言)，并且在下文中有更詳細(xì)的描述。適于如本文所述進(jìn)行修飾的母體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出次優(yōu)的可產(chǎn)生性。換言之，母體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出一個(gè)或多個(gè)不希望的產(chǎn)生性狀，例如當(dāng)以生產(chǎn)規(guī)模在異源系統(tǒng)中重組表達(dá)時(shí)，相對(duì)于對(duì)照免疫球蛋白的增加的聚集和/或降低的產(chǎn)生能力。合適的對(duì)照免疫球蛋白包括在相同異源系統(tǒng)中表現(xiàn)出令人滿意的可產(chǎn)生性的相同類(lèi)型的免疫球蛋白。當(dāng)以生產(chǎn)規(guī)模在哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中表達(dá)時(shí)，合適的母體免疫球蛋白可以，例如，產(chǎn)生1g/l或更小的可溶物質(zhì)收率(通過(guò)elisa測(cè)定)，和/或5％或更高的聚集(通過(guò)gp-hplc測(cè)定)。當(dāng)以生產(chǎn)規(guī)模在細(xì)菌系統(tǒng)中表達(dá)時(shí)，母體免疫球蛋白可以，例如，產(chǎn)生0.5g/l或更小的可溶物質(zhì)收率(通過(guò)elisa測(cè)定)，和/或5％或更高的聚集(通過(guò)gp-hplc測(cè)定)。方法可以包括測(cè)定母體免疫球蛋白的可產(chǎn)生性，例如通過(guò)測(cè)定本文所述的產(chǎn)生水平和聚集傾向。產(chǎn)生低收率(例如哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中1g/l或更少的可溶物質(zhì))和/或高聚集傾向(例如5％或更高的聚集)的母體免疫球蛋白可以被鑒定為表現(xiàn)出次優(yōu)的可產(chǎn)生性。本文所述的母體免疫球蛋白序列的修飾可以用于增加或優(yōu)化其可產(chǎn)生性。在優(yōu)選實(shí)施方案中，母體免疫球蛋白可以是治療性抗體，即，能結(jié)合治療相關(guān)抗原而實(shí)現(xiàn)有益治療效果的抗體。治療性抗體的很多實(shí)例是本領(lǐng)域已知的。變體免疫球蛋白是非天然存在的免疫球蛋白，其與母體免疫球蛋白結(jié)合相同的靶抗原，但具有不同的氨基酸序列。例如，相對(duì)于母體免疫球蛋白的序列，變體免疫球蛋白的序列可以有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)氨基酸殘基的不同。優(yōu)選地，如本文所述，變體免疫球蛋白的序列與母體免疫球蛋白序列的不同之處僅在于聚集傾向區(qū)段中的一處或多處取代。換言之，除了本文所述的一處或多處取代，變體免疫球蛋白的序列優(yōu)選與母體免疫球蛋白的氨基酸序列是相同的。變體免疫球蛋白與母體免疫球蛋白結(jié)合相同的表位，并且與母體免疫球蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原?？梢匀菀椎伢w外測(cè)定免疫球蛋白之間的競(jìng)爭(zhēng)，例如，利用elisa和/或通過(guò)將特異性報(bào)告分子標(biāo)簽添加于一種免疫球蛋白，從而在存在其它無(wú)標(biāo)簽的免疫球蛋白的情況下，可以檢測(cè)到這種免疫球蛋白。當(dāng)母體免疫球蛋白是治療性抗體時(shí)，變體免疫球蛋白優(yōu)選能實(shí)現(xiàn)相同的有益治療效果。本文所述的免疫球蛋白的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域優(yōu)選包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)。免疫球蛋白vh和vl結(jié)構(gòu)域中的每一個(gè)都包含3個(gè)cdr(cdr1、cdr2和cdr3)，其被框架區(qū)(fr1、fr2、fr3和fr4)分隔開(kāi)。cdr是可變結(jié)構(gòu)域中的高度可變區(qū)，其含有大部分負(fù)責(zé)抗體與其識(shí)別的抗原或表位的特異性結(jié)合的氨基酸殘基。cdr的長(zhǎng)度可以為2-26個(gè)氨基酸，這取決于具體基礎(chǔ)框架所能容納的長(zhǎng)度。優(yōu)選地，如本文所述使用的免疫球蛋白缺少cdr內(nèi)或cdr間的二硫鍵。適合如本文所述使用的母體免疫球蛋白ch1、vh和vl結(jié)構(gòu)域可以獲自任何種系或重新排列的人的可變結(jié)構(gòu)域，或可以是基于已知的人的可變結(jié)構(gòu)域的共有序列的合成可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，產(chǎn)生的變體免疫球蛋白的vh和vl結(jié)構(gòu)域可以缺少一個(gè)或多個(gè)cdr序列(例如cdr3)，例如為了如下文所述用于抗體工程化。變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出改進(jìn)的可產(chǎn)生性，例如，當(dāng)以生產(chǎn)規(guī)模在異源系統(tǒng)中重組表達(dá)時(shí)，相對(duì)于母體免疫球蛋白的降低的聚集和/或增加的產(chǎn)生能力。當(dāng)以生產(chǎn)規(guī)模在哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中表達(dá)時(shí)，變體免疫球蛋白可以，例如，產(chǎn)生大于1g/l的可溶物質(zhì)收率(通過(guò)elisa測(cè)定)，和/或少于5％的聚集(通過(guò)gp-hplc測(cè)定)。優(yōu)選地，本文所述的變體免疫球蛋白同時(shí)產(chǎn)生大于1g/l的可溶物質(zhì)收率和表現(xiàn)出少于5％的聚集。當(dāng)以生產(chǎn)規(guī)模在細(xì)菌系統(tǒng)中表達(dá)時(shí)，變體免疫球蛋白可以，例如，產(chǎn)生大于0.5g/l的可溶物質(zhì)收率(通過(guò)elisa測(cè)定)，和/或少于5％的聚集(通過(guò)gp-hplc測(cè)定)。優(yōu)選地，本文所述的變體免疫球蛋白同時(shí)產(chǎn)生大于0.5g/l的可溶物質(zhì)收率和表現(xiàn)出少于5％的聚集。聚集傾向區(qū)段是免疫球蛋白的輕鏈或重鏈序列中的短氨基酸殘基序列，所述短氨基酸殘基序列相對(duì)于周?chē)蛄芯哂懈叩木奂瘍A向并且對(duì)免疫球蛋白的可產(chǎn)生性產(chǎn)生不利影響。聚集傾向區(qū)段可以由1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸殘基組成。聚集傾向區(qū)段可以，例如，位于免疫球蛋白的ch1、vh或vl結(jié)構(gòu)域中。免疫球蛋白的單個(gè)結(jié)構(gòu)域或區(qū)，例如來(lái)自vh或vl結(jié)構(gòu)域或ch1結(jié)構(gòu)域的fr1、fr2、fr3、fr4或cdr3區(qū)，在其序列內(nèi)可以具有多個(gè)聚集傾向區(qū)段。一個(gè)或多個(gè)本文所述的這些聚集傾向區(qū)段中的一處或多處殘基取代可以改進(jìn)本文所述的免疫球蛋白的可產(chǎn)生性。下文所述的免疫球蛋白殘基位置是按照下述資料中所示的方案進(jìn)行編號(hào)：kabat,e.a.,wu,t.t.,perry,h.m.,gottesmann,k.s&foeller,c.(1991),sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫學(xué)目的蛋白的序列),第5版,nih出版號(hào)91-3242,美國(guó)健康和人類(lèi)服務(wù)部。在合適的情況下，取代位置可以相對(duì)于免疫球蛋白序列中未變異的kabat編號(hào)殘基進(jìn)行描述。備選抗體編號(hào)方案描述于honegger,aandplückthuna.(2001)。免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的另一編號(hào)方案：anautomaticmodellingandanalysistool.j.mol.biol309,657-670。表1a和1b顯示了honegger和kabat編號(hào)方案之間的對(duì)應(yīng)情況。本文所述的聚集傾向區(qū)段中的氨基酸取代優(yōu)選是20種天然存在的氨基酸中的一種。天然存在的氨基酸以及它們的標(biāo)準(zhǔn)單字母和三字母縮寫(xiě)是本領(lǐng)域公知的(principlesofproteinstructureg.schulz&r.schirmer,(1979)springer-verlagnyincusa)。可以在母體免疫球蛋白的vl結(jié)構(gòu)域框架區(qū)的聚集傾向區(qū)段中引入取代。vl結(jié)構(gòu)域框架區(qū)的合適的聚集傾向區(qū)段可以選自第20位聚集傾向區(qū)段、第37位聚集傾向區(qū)段、第45位聚集傾向區(qū)段和第74位聚集傾向區(qū)段。第20位聚集傾向區(qū)段位于vl框架區(qū)1中，并且從vl結(jié)構(gòu)域的第15位延伸至第23位。第20位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在vl結(jié)構(gòu)域的第18位。母體免疫球蛋白中第18位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第18位的殘基被取代為r、s或v。例如，母體免疫球蛋白中第18位的氨基酸殘基可以是t。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域中包含t18r、t18s或t18v取代。第20位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在vl結(jié)構(gòu)域的第20位。母體免疫球蛋白中第20位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第20位的殘基被取代為k、r、s或v。例如，母體免疫球蛋白中第20位的氨基酸殘基可以是t。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域中包含t20k、t20r、t20s或t20v取代。第37位聚集傾向區(qū)段位于vl框架區(qū)2中，并且從vl結(jié)構(gòu)域的第36位延伸至第38位。第37位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第37位。母體免疫球蛋白中第37位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第37位的殘基被取代為q或n。例如，母體免疫球蛋白中第37位的氨基酸殘基可以是l。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含l37q取代。第45位聚集傾向區(qū)段位于vl框架區(qū)2中，并且從vl結(jié)構(gòu)域的第42位延伸至第49位。第45位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第45位。母體免疫球蛋白中第45位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第45位的殘基被取代為e、k、r、q或v。例如，母體免疫球蛋白中第45位的氨基酸殘基可以是t。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含t45e、t45k、t45r、t45q或t45v取代。母體免疫球蛋白中第45位的氨基酸殘基可以是q。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含q45e、q45k或q45r取代。第45位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第46位。母體免疫球蛋白中第46位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第46位的殘基被取代為l、y、k、r、h、f或s。例如，母體免疫球蛋白中第46位的氨基酸殘基可以是t。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含t46l或t46y取代。母體免疫球蛋白中第46位的氨基酸殘基可以是l。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含l46k、l46r、l46h、l46f或l46s取代。第74位聚集傾向區(qū)段位于vl框架區(qū)3中，并且從vl結(jié)構(gòu)域的第71位延伸至第77位。第74位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第74位。母體免疫球蛋白中第74位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第74位的殘基被取代為v。例如，母體免疫球蛋白中第74位的氨基酸殘基可以是t。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含t74v取代?？梢栽谀阁w免疫球蛋白的vlcdr3中的聚集傾向區(qū)段中引入取代。合適的聚集傾向區(qū)段可以選自vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段和vlcdr3c末端聚集傾向區(qū)段。vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段從vl結(jié)構(gòu)域序列中的非變體殘基c88延伸至殘基c88c末端的第8位氨基酸。例如，vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段可以從vl結(jié)構(gòu)域的第88位延伸至第95a位。母體免疫球蛋白中第88位(c88)、第89位(c88+1；即殘基c88c末端的一個(gè)殘基)、第90位(c88+2)、第91位(c88+3)、第92位(c88+4)、第93位(c88+5)、第94位(c88+6)、第95位(c88+7)和第95a位(c88+8)中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。相對(duì)于非變體kabat殘基c88進(jìn)行編號(hào)的vlcdr3位置顯示在括號(hào)中。vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第91位(c88+3)。母體免疫球蛋白中第91位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第91位的殘基被取代為a、f、l、r、s或w。例如，母體免疫球蛋白中第91位的氨基酸殘基可以是y。變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含y91a、y91f、y91l、y91r、y91s或y91w取代。vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第93位(c88+5)。母體免疫球蛋白中第93位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第93位的殘基被取代為d、f、l、q、s、t、w或y。例如，母體免疫球蛋白中第93位的氨基酸殘基可以是p，并且變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含p93d、p93f、p93l、p93q、p93s、p93t、p93w或p93y取代。vlcdr3c末端聚集傾向區(qū)段從所述vl結(jié)構(gòu)域序列中非變體殘基f98的n末端第3位氨基酸(即第f98-3位或第95位)延伸至第99位。母體免疫球蛋白中第95位(f98-3)、第96位(f98-2)、第97位(f98-1)、第98位或第99位中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。vlcdr3c末端聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第96位(f98-2)。相對(duì)于變體kabat殘基f98進(jìn)行編號(hào)的vlcdr3位置顯示在括號(hào)中。母體免疫球蛋白中第96位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第96位的殘基被取代為e、l、v或w。例如，母體免疫球蛋白中第96位的氨基酸殘基可以是r，并且變體免疫球蛋白可以包含的vl結(jié)構(gòu)域包含r96e、r96l、r96v或r96w取代?？梢栽谀阁w免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域框架區(qū)中的聚集傾向區(qū)段引入取代。vh結(jié)構(gòu)域框架區(qū)的合適的聚集傾向區(qū)段可以選自fr1聚集傾向區(qū)段、第75位聚集傾向區(qū)段、第95位聚集傾向區(qū)段、以及第102位聚集傾向區(qū)段(或cdr3聚集傾向區(qū)段)。fr1聚集傾向區(qū)段位于vh框架區(qū)1中，并且可以，例如從vh結(jié)構(gòu)域序列的第1位延伸至第21位。vhfr1聚集傾向區(qū)段可以包含選自第1位至第3位、第4位至第6位、第11位至第13位和第16位至第21位的聚集傾向區(qū)段。vhfr1聚集傾向區(qū)段可以從vh結(jié)構(gòu)域序列的第1位延伸至第3位。vhfr1聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第1位。母體免疫球蛋白中第1位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第1位的殘基被取代為e、q、d、a或v。例如，母體免疫球蛋白中第1位的氨基酸殘基可以是e，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含e1q、e1d、e1a或e1v取代；或母體免疫球蛋白中第1位的氨基酸殘基可以是q，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含q1e、q1d、q1a或q1v取代。vhfr1聚集傾向區(qū)段可以從vh結(jié)構(gòu)域序列的第4位延伸至第6位。vhfr1聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在vh結(jié)構(gòu)域的第5位。母體免疫球蛋白中第5位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第5位的殘基被取代為v。例如，母體免疫球蛋白中第5位的氨基酸殘基可以是l，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含l5v取代。vhfr1聚集傾向區(qū)段可以從vh結(jié)構(gòu)域序列的第11位延伸至第13位。vhfr1聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在vh結(jié)構(gòu)域的第12位。母體免疫球蛋白中第12位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第12位的殘基被取代為v。例如，母體免疫球蛋白中第12位的氨基酸殘基可以是l，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含l12v取代。vhfr1聚集傾向區(qū)段可以從vh結(jié)構(gòu)域序列的第16位延伸至第21位。vhfr1聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第17位。母體免疫球蛋白中第17位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第17位的殘基被取代為r。例如，母體免疫球蛋白中第17位的氨基酸殘基可以是g，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含g17r取代。vhfr1聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第19位。母體免疫球蛋白中第19位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第19位的殘基被取代為t或v。例如，母體免疫球蛋白中第19位的氨基酸殘基可以是l，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含l19t或l19v取代。vhfr1聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第20位。母體免疫球蛋白中第20位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第20位的殘基被取代為a、k、s或t。例如，母體免疫球蛋白中第20位的氨基酸殘基可以是r，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含r20a、r20k、r20s或r20t取代。第75位聚集傾向區(qū)段可以從vh結(jié)構(gòu)域的第60位延伸至第85位。第75位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第61位。母體免疫球蛋白中第61位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。例如，第61位的殘基可以被取代為k、r、q、e、d、n或a。優(yōu)選地，第61位的殘基被取代為r。例如，母體免疫球蛋白中第61位的氨基酸殘基可以是p，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含p61r取代。第75位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第85位。母體免疫球蛋白中第85位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。例如，第85位的殘基可以被取代為e、d或a。優(yōu)選地，第85位的殘基被取代為e。例如，母體免疫球蛋白中第85位的氨基酸殘基可以是v，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含v85e、v85d或v85a取代。vh第95位聚集傾向區(qū)段位于vh框架區(qū)3中，并且可以從第91位延伸至第99位或第100位。母體免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中第91位、第92位、第93位、第94位、第95位、第96位、第97位、第98位、第99位和/或第100位中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。vh第95位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第94位。母體免疫球蛋白中第94位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。例如，第94位的殘基可以被取代為r、k或t。優(yōu)選地，第94位的殘基被取代為r。例如，母體免疫球蛋白中第94位的氨基酸殘基可以是k，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含k94r取代，或母體免疫球蛋白中第94位的氨基酸殘基可以是h，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含h94r、h94k或h94t取代。vh第95位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第95位。母體免疫球蛋白中第95位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。例如，第95位的殘基可以被取代為e或d。優(yōu)選地，第95位的殘基被取代為d。例如，母體免疫球蛋白中第95位的氨基酸殘基可以是r，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含r95e或r95d取代。vh第95位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第96位。母體免疫球蛋白中第96位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第96位的殘基被取代為a。例如，母體免疫球蛋白中第96位的氨基酸殘基可以是g，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含g96a取代。vh第95位聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第100位。母體免疫球蛋白中第100位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。第100位的殘基可以被取代為f、g、l、m或p。優(yōu)選地，第100位的殘基被取代為f。例如，母體免疫球蛋白中第100位的氨基酸殘基可以是v，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含v100f、v100g、v100l、v100m或v100p取代。可以在母體免疫球蛋白的vhcdr3聚集傾向區(qū)段中引入取代。vhcdr3聚集傾向區(qū)段從第100c位(即相對(duì)于kabat殘基d101進(jìn)行編號(hào)的非變體殘基d101或d101-2的n末端的兩個(gè)氨基酸)延伸至第102位或第103位。母體免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中第d101-2位(殘基d101的n末端的兩個(gè)氨基酸)、第d101-1位(殘基d101的n末端的一個(gè)氨基酸)、第101位、第102位和第103位中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。vhcdr3聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第d101-2位(殘基d101的n末端的兩個(gè)氨基酸)。母體免疫球蛋白中第d101-2位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第d101-2位的殘基被取代為d、e、f、g、p、s、t、w或y。例如，母體免疫球蛋白中第d101-2位的氨基酸殘基可以是a，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含a(d101-2)d、a(d101-2)e、a(d101-2)f、a(d101-2)g、a(d101-2)p、a(d101-2)s、a(d101-2)t或a(d101-2)w或a(d101-2)y取代。換言之，d101的n末端的兩個(gè)氨基酸位置處的從a至d、e、f、g、p、s、t、w或y的取代，例如a100c。vhcdr3聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第d101-1位(d101的n末端的一個(gè)氨基酸)。母體免疫球蛋白中第d101-1位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第d101-1位的殘基被取代為f、g、l、p或m。例如，母體免疫球蛋白中第d101-1位的氨基酸殘基可以是s，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含s(d101-1)f、s(d101-1)g、s(d101-1)l、s(d101-1)p或s(d101-1)m取代。在一些實(shí)施方案中，殘基s(d101-1)對(duì)應(yīng)于s100d。vhcdr3聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第102位。母體免疫球蛋白中第102位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第102位的殘基被取代為a、f、h、i、l、v或y。例如，母體免疫球蛋白中第102位的氨基酸殘基可以是p，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含p102a、p102f、p102h、p102i、p102l、p102y或p102v取代，或母體免疫球蛋白中第102位的氨基酸殘基可以是s，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含s102a、s102f、s102h、s102i、s102l、s102y或s102v取代。vhcdr3聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第103位。母體免疫球蛋白中第103位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第103位的殘基被取代為i、l或v。例如，母體免疫球蛋白中第103位的氨基酸殘基可以是w，并且變體免疫球蛋白可以包含的vh結(jié)構(gòu)域包含w103i、w103l或w103v取代。ch1聚集傾向區(qū)段從第150位延伸至第156位。ch1聚集傾向區(qū)段中的取代可以發(fā)生在第153位。母體免疫球蛋白中第153位的氨基酸殘基可以被取代為變體免疫球蛋白中的不同氨基酸殘基。優(yōu)選地，第153位的殘基被取代為v。例如，母體免疫球蛋白中第153位的氨基酸殘基可以是s，并且變體免疫球蛋白可以包含的ch1結(jié)構(gòu)域包含s153v取代。相對(duì)于所述母體免疫球蛋白序列，變體免疫球蛋白可以包含多至10處本文所述的取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含多至1、2、3、4、5、6、7、8、9或10處取代。取代可以在相同的聚集傾向區(qū)段中或在不同的聚集傾向區(qū)段中。例如，變體免疫球蛋白可以在1、2、3、4或更多個(gè)不同的本文所述的聚集傾向區(qū)段中包含取代。變體免疫球蛋白可以在vh結(jié)構(gòu)域、vl結(jié)構(gòu)域和/或ch1區(qū)中包含取代?？梢圆捎帽疚乃龅娜〈娜我饨M合。合適的取代組合的實(shí)例示于表3a和3b中。在一些實(shí)施方案中，變體免疫球蛋白可以在vlfr1和/或fr2結(jié)構(gòu)域中包含2處取代；在vlcdr3結(jié)構(gòu)域中包含3處取代；在vlfr2結(jié)構(gòu)域中包含2處取代和在vlcdr3結(jié)構(gòu)域中包含3處取代；在vlfr1結(jié)構(gòu)域中包含2處取代、在vlfr2結(jié)構(gòu)域中包含2處取代和在vlcdr3結(jié)構(gòu)域中包含3處取代；在vhfr1結(jié)構(gòu)域中包含2處取代；在vhfr1結(jié)構(gòu)域中包含1處取代和在vhcdr3結(jié)構(gòu)域中包含1處取代；在vhcdr3結(jié)構(gòu)域中包含2處取代；或在ch1結(jié)構(gòu)域中包含1處取代和在vhfr1結(jié)構(gòu)域中包含1處取代。變體免疫球蛋白可以在第20位聚集傾向區(qū)段中包含2處取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第18位和第20位包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第18位和第20位的殘基可以被取代為r。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含t18r和t20r取代。變體免疫球蛋白可以在第20位聚集傾向區(qū)段包含取代并且在第74位聚集傾向區(qū)段包含取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第18位和第74位包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第18位的殘基可以被取代為r，并且第74位的殘基可以被取代為v。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含t18r和t74v取代。變體免疫球蛋白可以在第45位聚集傾向區(qū)段包含2處取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第45位和第46位包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第45位的殘基可以被取代為k或r，并且第46位的殘基可以被取代為l。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含t45k(或t45r)和t46l取代。變體免疫球蛋白可以在第20位聚集傾向區(qū)段包含2處取代并且在第45位聚集傾向區(qū)段包含2處取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第18位、第20位、第45位和第46位包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第18位和第20位的殘基可以被取代為r，第45位的殘基可以被取代為k或r，第46位的殘基可以被取代為l。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含t18r、t20r、t45k和t46l取代或t18r、t20r、t45r和t46l取代。變體免疫球蛋白在vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段可以包含2處取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第91位(c88+3)、第93位(c88+5)和第96位(f98-2)包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第91位的殘基可以被取代為w，第93位的殘基可以被取代為q，第96位的殘基可以被取代為v。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含y91w(c88+3)、p93q(c88+5)和r96v(f98-2)取代。變體免疫球蛋白可以在第45位聚集傾向區(qū)段包含2處取代并且在vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段包含2處取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第45位、第46位、第91位(c88+3)、第93位(c88+5)和第96位(f98-2)包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第45位的殘基可以被取代為k或r，第46位的殘基可以被取代為l，第91位的殘基可以被取代為w，第93位的殘基可以被取代為q，第96位的殘基可以被取代為v。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含t45k、t46l、y91w(c88+3)、p93q(c88+5)和r96v(f98-2)取代，或t45r、t46l、y91w(c88+3)、p93q(c88+5)和r96v(f98-2)取代。變體免疫球蛋白可以在第20位聚集傾向區(qū)段包含2處取代、在第45位聚集傾向區(qū)段包含2處取代，并且在vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段包含2處或3處取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第18位、第20位、第45位、第46位、第91位(c88+3)、第93位(c88+5)和第96位(f98-2)包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第18位和第20位的殘基可以被取代為r，第45位的殘基可以被取代為k或r，第46位的殘基可以被取代為l，第91位的殘基可以被取代為w，第93位的殘基可以被取代為q，并且第96位的殘基可以被取代為v。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含t18r、t20r、t45k、t46l、y91w(c88+3)、p93q(c88+5)和r96v(f98-2)取代，或t18r、t20r、t45r、t46l、y91w(c88+3)、p93q(c88+5)和r96v(f98-2)取代。變體免疫球蛋白可以包含在vl第37位聚集傾向區(qū)段和vl第45位聚集傾向區(qū)段包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第37位和第45位包含取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，第37位的殘基可以被取代為q或n，第45位的殘基可以被取代為e、k或r。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含l37q和q45r取代。變體免疫球蛋白可以包含在vhfr1聚集傾向區(qū)段和vhcdr3聚集傾向區(qū)段包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第1位和第102位包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第1位的殘基可以被取代為q、a、e或v，第102位的殘基可以被取代為y。vh結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含q1a和p102y取代、q1e和p102y取代、q1v和p102y取代、e1a和p102y取代、e1q和p102y取代或e1v和p102y取代。在其它實(shí)例中，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第1位和第103位包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第1位的殘基可以被取代為q、a、d、e或v，第103位的殘基可以被取代為l。vh結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含q1a和w103l取代、q1e和w103l取代、q1d和w103l取代、q1v和w103l取代、e1a和w103l取代、e1q和w103l取代、e1d和w103l取代或e1v和w103l取代。變體免疫球蛋白在vhcdr3聚集傾向區(qū)段可以包含2處取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第100c位(d101-2)和第100d位(d101-1)包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第100c位的殘基可以被取代為w，第100d位的殘基可以被取代為f。vh結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含a100cw和s100df取代。在其它實(shí)例中，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第100d位(d101-1)和第102位包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第100d位的殘基可以被取代為f或m，第102位的殘基可以被取代為v或y。vh結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含s100df和p102v取代、s100dm和p102v取代、s100df和p102y取代或s100dm和p102y取代。在其它實(shí)例中，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第102位和第103位包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第102位的殘基可以被取代為v或y，第103位的殘基可以被取代為l、i或v。vh結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含p102y和w103l取代、p102y和w103i取代、p102y和w103v取代、p102v和w103l取代、p102v和w103i取代或p102v和w103v取代。變體免疫球蛋白可以包含在vh第95位聚集傾向區(qū)段和vhcdr3聚集傾向區(qū)段包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第95位和第102位包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第95位的殘基可以被取代為e或d，第102位的殘基可以被取代為a、f、h、i、l、v或y。vh結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含r95d和s102v取代。任選地，vh結(jié)構(gòu)域還可以在上文所述的第94位和第100位包含取代。例如，第94位的殘基可以被取代為r、k或t，第100位的殘基可以被取代為f、g、l、m或p。vh結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含h94r、r95d、v100f和s102v取代。變體免疫球蛋白可以在ch1聚集傾向區(qū)段和vh第19位聚集傾向區(qū)段包含取代。例如，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第153位包含取代的ch1結(jié)構(gòu)域，以及在上文所述的第19位包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第153位的殘基可以被取代為v，第19位的殘基可以被取代為t。免疫球蛋白可以，例如，在ch1結(jié)構(gòu)域中包含s153v取代并且在vh結(jié)構(gòu)域中包含l19t取代。在其它實(shí)例中，變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第153位包含取代的ch1結(jié)構(gòu)域，以及在上文所述的第20位包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，第153位的殘基可以被取代為v，第20位的殘基可以被取代為a。變體免疫球蛋白可以，例如，包含s153v和r20a取代。變體免疫球蛋白可以包含在vl第20位聚集傾向區(qū)段包含取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及在vhfr1聚集傾向區(qū)段包含取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，變體免疫球蛋白可以包含在第20位具有取代的vh結(jié)構(gòu)域，并且變體免疫球蛋白可以包含在第18位具有取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，vh結(jié)構(gòu)域中第20位的殘基可以被取代為a，vl結(jié)構(gòu)域中第18位的殘基可以被取代為v。例如，免疫球蛋白可以包含具有t18v取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及具有r20a或r20v取代的vh結(jié)構(gòu)域。變體免疫球蛋白可以包含在vl第45位聚集傾向區(qū)段包含取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及在vh第75位聚集傾向區(qū)段包含一處或多處取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，變體免疫球蛋白可以包含在第61位和第85位具有取代的vh結(jié)構(gòu)域，以及在第46位具有取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，vh結(jié)構(gòu)域中第61位的殘基可以被取代為k、r、q、e、d、n和a，優(yōu)選r；vh結(jié)構(gòu)域中第85位的殘基可以被取代為e、d或a，優(yōu)選e；vl結(jié)構(gòu)域中第46位的殘基可以被取代為k、r、h、f或s，優(yōu)選r。例如，免疫球蛋白可以包含具有l(wèi)46r取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及具有p61r和v85e取代的vh結(jié)構(gòu)域。變體免疫球蛋白可以包含在vl第45位聚集傾向區(qū)段包含取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及在vh第95位聚集傾向區(qū)段包含一處或多處取代并且在vhcdr3聚集傾向區(qū)段包含一處或多處取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，變體免疫球蛋白可以包含在第95位和第102位具有取代的vh結(jié)構(gòu)域，以及在第37位和第45位具有取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，vh結(jié)構(gòu)域中第95位的殘基可以被取代為e或d，優(yōu)選d；vh結(jié)構(gòu)域中第102位的殘基可以被取代為a、f、h、i、l、v或y，優(yōu)選y；vl結(jié)構(gòu)域中第37位的殘基可以被取代為q或n，優(yōu)選q；以及vl結(jié)構(gòu)域中第45位的殘基可以被取代為r、k或e，優(yōu)選r。例如，免疫球蛋白可以包含具有l(wèi)37q和q45r取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及具有r95d和s102v取代的vh結(jié)構(gòu)域。變體免疫球蛋白可以包含在vl第45位聚集傾向區(qū)段包含取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及在vh第95位聚集傾向區(qū)段包含一處或多處取代的vh結(jié)構(gòu)域。例如，變體免疫球蛋白可以包含在第94位和第95位具有取代的vh結(jié)構(gòu)域，以及在第46位具有取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，vh結(jié)構(gòu)域中第94位的殘基可以被取代為r、k或t，優(yōu)選r；vh結(jié)構(gòu)域中第95位的殘基可以被取代為e或d，優(yōu)選d；vl結(jié)構(gòu)域中第46位的殘基可以被取代為k、r、h、f或s，優(yōu)選r。例如，免疫球蛋白可以包含具有l(wèi)46r取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及具有h94r和r95d取代的vh結(jié)構(gòu)域。在vh、vl和ch1結(jié)構(gòu)域的聚集傾向區(qū)段的氨基酸序列中產(chǎn)生取代所需的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。例如，利用dna操控和誘變的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可以產(chǎn)生編碼包含一處或多處取代的變體免疫球蛋白的核酸；例如，如currentprotocolsinmolecularbiology(現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)),第二版,ausubeletal.eds.,johnwiley&sons,1992，或molecularcloning:alaboratorymanual(分子克?。簩?shí)驗(yàn)手冊(cè)):第二版,sambrooketal.,1989,coldspringharborlaboratorypress中所述。然后，可以如下文所述使核酸表達(dá)而產(chǎn)生變體免疫球蛋白?？梢詼y(cè)試變體序列結(jié)合和/或中和母體免疫球蛋白的靶抗原的能力和/或測(cè)試其改進(jìn)的可產(chǎn)生性。引入一個(gè)或多個(gè)上文所示的取代可以通過(guò)增加表達(dá)時(shí)的產(chǎn)生能力和降低變體免疫球蛋白相對(duì)于其母體免疫球蛋白的聚集傾向而增加變體免疫球蛋白相對(duì)于其母體免疫球蛋白的可產(chǎn)生性。例如，變體免疫球蛋白可以相對(duì)于母體免疫球蛋白表現(xiàn)出產(chǎn)生能力增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少100％、至少200％或至少500％，以及相對(duì)于母體免疫球蛋白，表現(xiàn)出聚集降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少80％、至少90％或至少99％。變體免疫球蛋白可以相對(duì)于母體免疫球蛋白表現(xiàn)出聚集降低高達(dá)100％(即，聚集完全消除)。產(chǎn)生本文所述的變體免疫球蛋白的方法可以包括提供母體免疫球蛋白，在vl結(jié)構(gòu)域中的vl第37位聚集傾向區(qū)段和/或vl第45位聚集傾向區(qū)段中引入取代；和/或在vh結(jié)構(gòu)域中的vhfr1聚集傾向區(qū)段、vh第95位聚集傾向區(qū)段以及vhcdr3聚集傾向區(qū)段中引入取代，從而產(chǎn)生變體免疫球蛋白，其中相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白表現(xiàn)出增加的產(chǎn)生能力和降低的聚集。例如，產(chǎn)生變體免疫球蛋白的方法可以包括：提供母體免疫球蛋白，在vh結(jié)構(gòu)域中引入一處或多處下述取代：第1位的a、d、e、q或v取代；第17位的r取代；第94位的r取代；第95位的d取代；第96位的a取代；第100位的f取代；第100d位的f、g、l、m或p取代，優(yōu)選f或m取代；第102位的a、f、h、i、l、v或y取代，優(yōu)選v或y取代；和/或在vl結(jié)構(gòu)域中引入下述取代：第37位的q取代；第45位的e、k、r、q或v取代，優(yōu)選k或r取代；第46位的l或y取代，優(yōu)選l取代；從而產(chǎn)生變體免疫球蛋白，其中變體免疫球蛋白表現(xiàn)出相對(duì)于母體免疫球蛋白的增加的產(chǎn)生能力和降低的聚集。例如，合適的vh結(jié)構(gòu)域可以在上文所述的第94位和第102位具有取代，任選地在第94位和第100位具有其它取代。例如，vh結(jié)構(gòu)域中第95位的殘基可以被取代為d，第102位的殘基可以被取代為a、f、h、i、l、v或y，優(yōu)選v或y；任選地，第94位的殘基還可以被取代為r，第100位的殘基被取代為f。合適的vl結(jié)構(gòu)域可以在上文所述的第37位和第45位具有取代。例如，第37位的殘基可以被取代為q，第45位的殘基可以被取代為e、k、r、q或v，優(yōu)選k或r。vl結(jié)構(gòu)域可以，例如，包含l37q和q45r取代。變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第94位和第95位具有取代的vh結(jié)構(gòu)域，以及在第46位具有取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，vh結(jié)構(gòu)域中第94位和第95位的殘基分別可以被取代為r和d，vl結(jié)構(gòu)域中第46位的殘基可以被取代為r。例如，免疫球蛋白可以包含具有l(wèi)46r取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及具有h94r和r95d取代的vh結(jié)構(gòu)域。其它變體免疫球蛋白可以包含在上文所述的第95位和第102位具有取代的vh結(jié)構(gòu)域，以及在第37位和第45位具有取代的vl結(jié)構(gòu)域。例如，vh結(jié)構(gòu)域中第95位和第102位的殘基分別可以被取代為d和v，并且vl結(jié)構(gòu)域中第37位和第45位的殘基分別可以被取代為q和r。例如，免疫球蛋白可以包含具有l(wèi)73q和q45r取代的vl結(jié)構(gòu)域，以及具有r95d和s102v取代的vh結(jié)構(gòu)域。本文所述的聚集傾向區(qū)段的存在可以有助于鑒定表現(xiàn)出降低的或次優(yōu)的可產(chǎn)生性的免疫球蛋白。評(píng)價(jià)免疫球蛋白的可產(chǎn)生性的方法可以包括：鑒定一個(gè)或多個(gè)選自以下的位置處的氨基酸殘基：所述免疫球蛋白的vl結(jié)構(gòu)域中的第18位、第20位、第45位、第46位、第74位、第91位、第93位和第96位，所述免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中的第1位、第5位、第12位、第17位、第19位、第20位、第94位、第96位、第100c位、第100d位、第102位和第103位，以及ch1結(jié)構(gòu)域中的第153位，其中在所述免疫球蛋白的vl結(jié)構(gòu)域中，如果第18位的殘基不是r、s或v，優(yōu)選不是r或v，第20位的殘基不是k、r、s或v，優(yōu)選不是r或v，第45位的殘基不是e、k、r、q或v，優(yōu)選不是k或r，第46位的殘基不是l或y，優(yōu)選不是l，第74位的殘基不是v，第91位的殘基不是a、f、l、r、s或w，優(yōu)選不是w，第93位的殘基不是d、f、l、q、s、t、w或y，優(yōu)選不是q和/或第96位的殘基不是e、l、v或w，優(yōu)選不是v；和/或在所述免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中，如果第1位的殘基不是a、d、e、q或v，第5位或第12位的殘基不是v，第17位的殘基不是r，第19位的殘基不是t或v，優(yōu)選不是t，第20位的殘基不是a、k、s或t，優(yōu)選不是a，第94位的殘基不是r，第96位的殘基不是a，第100c位的殘基不是d、e、f、g、p、s、t、w或y，優(yōu)選不是w，第100d位的殘基不是f、g、l、m或p，優(yōu)選不是f或m，第102位的殘基不是a、f、h、i、l、v或y，優(yōu)選不是v或y，第103位的殘基不是i、l或v；和/或在所述免疫球蛋白的ch1結(jié)構(gòu)域中，如果第153位的殘基不是v；則表明所述免疫球蛋白具有次優(yōu)的可產(chǎn)生性。在一些實(shí)施方案中，可以確定免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中第100d位和/或第102位的氨基酸殘基。如果第100d位的殘基不是f、g、l、m或p，優(yōu)選不是f或m，和/或第102位的殘基不是a、f、h、i、l、v或y、優(yōu)選不是v或y，則表明所述免疫球蛋白的可產(chǎn)生性是次優(yōu)的。相對(duì)于對(duì)照免疫球蛋白，可產(chǎn)生性被鑒定為降低或次優(yōu)的免疫球蛋白可以是用于通過(guò)上文所述的方法進(jìn)行修飾的候選物，從而產(chǎn)生表現(xiàn)出改進(jìn)的可產(chǎn)生性的變體免疫球蛋白。具體而言，可以鑒定出免疫球蛋白序列中對(duì)可產(chǎn)生性會(huì)造成不利影響的一個(gè)或多個(gè)殘基。然后，可以如本文所述改變或修飾所鑒定出的殘基，從而改進(jìn)可產(chǎn)生性。本發(fā)明的另一方面提供通過(guò)上文所述的方法產(chǎn)生的母體免疫球蛋白變體。本發(fā)明的另一方面提供母體免疫球蛋白的變體，其中所述變體免疫球蛋白包含：vl結(jié)構(gòu)域，其在框架聚集傾向區(qū)段和/或cdr3聚集傾向區(qū)段包含相對(duì)于所述母體免疫球蛋白序列的取代；vh結(jié)構(gòu)域，其在框架聚集傾向區(qū)和/或cdr3聚集傾向區(qū)段包含相對(duì)于所述母體免疫球蛋白序列的取代；和/或，ch1結(jié)構(gòu)域，其在ch1聚集傾向區(qū)包含相對(duì)于所述母體免疫球蛋白序列的取代。合適的聚集傾向區(qū)段和取代如上文所述。vl、vh或ch1結(jié)構(gòu)域中某一位置的取代涉及將母體序列中該位置的殘基用不同的殘基替代，優(yōu)選用上文所示的殘基替代。如果母體免疫球蛋白在氨基酸序列中合適的位置已經(jīng)含有上文所示的殘基，則這不是本文所述的取代或取代殘基。因此，母體或種系免疫球蛋白不是本文所述的變體免疫球蛋白。如上文所述，變體免疫球蛋白可以與母體免疫球蛋白具有相似或相同的生物學(xué)活性，但表現(xiàn)出改進(jìn)的可產(chǎn)生性，例如降低的聚集傾向和/或異源表達(dá)系統(tǒng)中的增加的產(chǎn)生能力。例如，相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出產(chǎn)生能力增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少100％、至少200％或至少500％，和/或相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出聚集降低(即，天然狀態(tài)系綜中發(fā)生聚集的分子的比例降低)至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少80％、至少90％或至少99％。相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出聚集降低高達(dá)100％(即，聚集完全消除)。如上文所述，相對(duì)于母體免疫球蛋白，變體免疫球蛋白可以表現(xiàn)出改進(jìn)的生物利用度和/或降低的免疫原性。本發(fā)明的另一方面提供分離的核酸，其編碼上文所述的變體免疫球蛋白或其ch1、vh或vl結(jié)構(gòu)域。核酸可以包含dna或rna，并且可以是完全合成的或部分合成的。除非文中另作要求，涉及本文所述的核苷酸序列時(shí)，其包括具有指定序列的dna分子并且包括具有指定序列的rna分子，其中u被替換為t。可以通過(guò)下述方法制備本文所述的變體免疫球蛋白分子或其ch1、vh結(jié)構(gòu)域和/或vl結(jié)構(gòu)域：所述方法包括在能引起所述變體免疫球蛋白分子或其ch1、vh和/或vl結(jié)構(gòu)域產(chǎn)生的條件下表達(dá)所述核酸，并將所述變體免疫球蛋白分子或其ch1、vh和/或vl結(jié)構(gòu)域回收。如下文更詳細(xì)地描述，核酸可以編碼變體免疫球蛋白或所述變體免疫球蛋白的缺少一個(gè)或多個(gè)cdr的vh或vl結(jié)構(gòu)域。通過(guò)將編碼cdr的合適的核酸插入編碼變體免疫球蛋白或其vh或vl結(jié)構(gòu)域的核酸中，可以將從供體免疫球蛋白獲取的一個(gè)或多個(gè)cdr合并到變體免疫球蛋白的框架中。變體免疫球蛋白和編碼核酸優(yōu)選是分離的。免疫球蛋白和核酸不含或基本上不含與其相關(guān)的物質(zhì)，所述相關(guān)的物質(zhì)例如在制備所述免疫球蛋白和核酸的環(huán)境(例如細(xì)胞培養(yǎng)物)中與所述免疫球蛋白和核酸共同存在的其它多肽或核酸(如果所述制備是利用體外或體內(nèi)實(shí)施的重組dna技術(shù))。本發(fā)明的其它方面提供了質(zhì)粒、載體、轉(zhuǎn)錄或表達(dá)盒形式的核酸構(gòu)建體，其包含至少一種編碼本文所述的變體免疫球蛋白或其ch1、vh和/或vl結(jié)構(gòu)域的核酸。構(gòu)建體可用于表達(dá)系統(tǒng)中，從而表達(dá)上文所述的免疫球蛋白。用于在各種不同宿主細(xì)胞中克隆和表達(dá)免疫球蛋白的體系是公知的。合適的宿主細(xì)胞包括細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母和桿狀病毒體系。本領(lǐng)域中可用于表達(dá)異源多肽的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、hela細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎細(xì)胞、nso小鼠黑素瘤細(xì)胞以及很多其它細(xì)胞系。用于小的免疫球蛋白分子的常見(jiàn)優(yōu)選細(xì)菌宿主是大腸桿菌(e.coli)。在原核細(xì)胞(例如大腸桿菌)中表達(dá)免疫球蛋白(例如抗體和抗體片段)已是本領(lǐng)域中的成熟技術(shù)。綜述可參見(jiàn)例如plückthun,a.bio/technology9:545-551(1991)。在培養(yǎng)的真核細(xì)胞中的表達(dá)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員也是產(chǎn)生免疫球蛋白的可用選擇，近期綜述可參見(jiàn)例如ref,m.e.(1993)curr.opinionbiotech.4:573-576；trillj.j.etal.(1995)curr.opinionbiotech6:553-560。還可以在無(wú)細(xì)胞體系中表達(dá)免疫球蛋白，例如抗體和抗體片段?？梢赃x擇或構(gòu)建適于表達(dá)免疫球蛋白的載體，所述載體含有合適的調(diào)節(jié)序列，包括啟動(dòng)子序列、終止子序列、聚腺苷酸化序列、增強(qiáng)子序列、標(biāo)記基因以及其它合適的序列。載體可以是合適的質(zhì)粒、病毒，例如噬菌體或噬菌粒。更詳細(xì)的內(nèi)容可以參見(jiàn)，例如，molecularcloning:alaboratorymanual(分子克?。簩?shí)驗(yàn)手冊(cè)),第二版,sambrooketal.,1989,coldspringharborlaboratorypress。例如，核酸構(gòu)建體制備、誘變、測(cè)序、將dna引入細(xì)胞和基因表達(dá)以及蛋白分析中的很多已知的操控核酸的技術(shù)和方法詳細(xì)描述于currentprotocolsinmolecularbiology(現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)),第二版,ausubeletal.eds.,johnwiley&sons,1992。宿主細(xì)胞中可以含有編碼變體免疫球蛋白或其ch1、vh和/或vl結(jié)構(gòu)域的核酸。另一方面提供的方法包括將所述核酸引入宿主細(xì)胞中。所述引入可以利用任何可獲得的技術(shù)。對(duì)于真核細(xì)胞，合適的技術(shù)可以包括磷酸鈣轉(zhuǎn)染、deae-葡聚糖、電穿孔、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染和利用逆轉(zhuǎn)錄病毒或其它病毒(例如牛痘病毒)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，或者對(duì)于昆蟲(chóng)細(xì)胞，利用桿狀病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)。將核酸引入宿主細(xì)胞中，特別是引入真核細(xì)胞中，可以利用基于病毒或質(zhì)粒的體系。質(zhì)粒體系可以保持為附加體，或可以被合并入宿主細(xì)胞或合并入人工染色體。可以通過(guò)將一個(gè)或多個(gè)拷貝隨機(jī)整合或靶向整合到單一或多個(gè)基因座進(jìn)行合并。對(duì)于細(xì)菌細(xì)胞，合適的技術(shù)可以包括氯化鈣轉(zhuǎn)化、電穿孔和利用噬菌體的轉(zhuǎn)染。引入之后，可以引起或允許核酸表達(dá)，例如，通過(guò)在適于基因表達(dá)的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞。編碼變體免疫球蛋白或其ch1、vh和/或vl結(jié)構(gòu)域的核酸可以被整合到宿主細(xì)胞的基因組中(例如染色體)。可以按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，通過(guò)包含促進(jìn)與基因組進(jìn)行重組的序列來(lái)促進(jìn)整合。通過(guò)表達(dá)產(chǎn)生后，可以利用任何合適的技術(shù)來(lái)分離和/或純化變體免疫球蛋白或其ch1、vh和/或vl結(jié)構(gòu)域，然后視需要使用。例如，產(chǎn)生方法還可以進(jìn)一步包括將產(chǎn)物配制到組合物中，所述組合物包含至少一種其它組分，例如藥學(xué)上可接受的賦形劑。變體免疫球蛋白可以用于人體或動(dòng)物體的治療或診斷方法中，例如人類(lèi)患者的疾病或病癥的治療方法(可以包括預(yù)防性治療)，所述方法包括將有效量的變體免疫球蛋白給予所述患者。本發(fā)明的其它方面提供了包含本文所述的變體免疫球蛋白的藥物組合物、制備藥物或藥物組合物的方法和變體免疫球蛋白在制備用于給藥的藥物中的用途，所述方法包括將變體免疫球蛋白與藥學(xué)上可接受的賦形劑一起配制。除變體免疫球蛋白之外，藥物組合物可以包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體、緩沖劑、穩(wěn)定劑或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它物質(zhì)。所述物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是無(wú)毒性的，并且應(yīng)當(dāng)不影響活性成分的功效。載體或其它物質(zhì)的確切性質(zhì)取決于給藥途徑，所述途徑可以是口服或注射，例如靜脈內(nèi)注射。對(duì)于靜脈內(nèi)注射或受累位點(diǎn)注射，活性成分是胃腸外可接受的水溶液形式，所述溶液無(wú)致熱源并且具有合適的ph、等滲性和穩(wěn)定性。本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地利用例如等滲介質(zhì)來(lái)制備合適的溶液，所述介質(zhì)例如氯化鈉注射液、林格氏注射液、乳酸鹽林格氏注射液。如果需要，可以包含防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/或其它添加劑。可以單獨(dú)給予或與其它治療聯(lián)合給予組合物，所述聯(lián)合給予可以是同時(shí)的或依次的，這取決于所要治療的疾病狀態(tài)。其它治療可以包括給予合適劑量的緩解疼痛藥物，例如非甾體類(lèi)抗炎藥(例如阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、布洛芬或酮洛芬)或阿片類(lèi)藥物(例如嗎啡)或止吐藥。變體免疫球蛋白可以用于提供治療益處的臨床適應(yīng)癥包括任何可使用母體免疫球蛋白的疾病狀態(tài)或病癥。按照本發(fā)明，可以將所提供的組合物給予個(gè)體。給藥優(yōu)選是“治療有效量”，即足以對(duì)患者表現(xiàn)出益處的量。所述益處可以至少是至少一種癥狀的緩解。實(shí)際給藥量以及給藥速率和時(shí)程將取決于所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度。治療處方(例如劑量決定等)由全科醫(yī)師及其他醫(yī)師負(fù)責(zé)?？贵w的合適劑量是本領(lǐng)域公知的；參見(jiàn)，ledermannj.a.etal.(1991)intj.cancer47:659-664；bagshawek.d.etal.(1991)antibody,immunoconjugatesandradiopharmaceuticals4:915-922。確切劑量取決于多種因素，包括抗體是用于診斷還是治療、所要治療的區(qū)域的大小和位置、抗體的確切性質(zhì)(例如完整抗體、片段或雙鏈抗體)和與抗體連接的任何可檢測(cè)的標(biāo)記或其它分子的性質(zhì)。通常，典型的抗體劑量為：系統(tǒng)施用時(shí)為0.5mg-1g，局部施用時(shí)為10μg-1mg。通常，抗體是完整抗體，優(yōu)選igg4同種型。以上是成年患者單次治療的劑量，對(duì)兒童和嬰兒其可以按比例進(jìn)行調(diào)整，并且還可以對(duì)其它抗體形式根據(jù)分子量按比例進(jìn)行調(diào)整。醫(yī)師可以根據(jù)判斷每天一次、每周兩次、每周一次或每月一次間隔重復(fù)治療。本文所述的在聚集傾向區(qū)段中包含取代的變體免疫球蛋白和編碼核酸可以用于抗體工程化方法中來(lái)產(chǎn)生具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的免疫球蛋白。重組dna技術(shù)可以用于產(chǎn)生變體具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的免疫球蛋白。所述技術(shù)可以涉及將編碼供體抗體的一個(gè)或多個(gè)cdr序列的dna引入本文所述的變體免疫球蛋白的可變區(qū)。參見(jiàn)，例如，ep-a-184187、gb2188638a或ep-a-239400以及大量的后續(xù)文獻(xiàn)。或者，可以將產(chǎn)生免疫球蛋白的雜交瘤或其它細(xì)胞進(jìn)行編碼免疫球蛋白聚集傾向區(qū)段的序列中的基因突變，這可以改進(jìn)所產(chǎn)生的免疫球蛋白的可產(chǎn)生性。這可以用于改造或重構(gòu)具有適于重組產(chǎn)生的可產(chǎn)生性的抗體。在一些實(shí)施方案中，變體免疫球蛋白的vh和vl結(jié)構(gòu)域可以缺少一個(gè)或多個(gè)cdr序列(例如cdr3)?？梢岳弥亟Mdna技術(shù)將異源cdr或合成cdr引入變體免疫球蛋白的缺少相應(yīng)cdr(例如cdr3)的vh和/或vl結(jié)構(gòu)域。這可以改變變體免疫球蛋白的結(jié)合性質(zhì)，而不會(huì)影響可產(chǎn)生性。例如，來(lái)自供體免疫球蛋白的一個(gè)或多個(gè)cdr序列(例如cdr3)可以用于替換本文所述的變體免疫球蛋白中對(duì)應(yīng)的cdr序列。來(lái)自本文所述的人變體免疫球蛋白的1、2、3、4、5或所有6個(gè)cdr序列可以被獲自非人供體免疫球蛋白(例如鼠免疫球蛋白)的cdr序列取代，從而產(chǎn)生人源化的免疫球蛋白。人源化的免疫球蛋白可以具有與非人供體免疫球蛋白相同的結(jié)合活性，但是表現(xiàn)出在人中的降低的免疫原性并因此可以具有治療功效。制備能結(jié)合靶抗原的雜合免疫球蛋白的方法可以包括：提供能結(jié)合所述靶抗原的供體免疫球蛋白，提供上文所述的變體免疫球蛋白，以及將所述變體免疫球蛋白的1、2、3、4、5或6個(gè)cdr序列替換為來(lái)自所述供體免疫球蛋白的對(duì)應(yīng)cdr序列，從而產(chǎn)生能結(jié)合所述靶抗原的雜合免疫球蛋白。優(yōu)選地，將變體免疫球蛋白的vhcdr3和/或vlcdr3替換為來(lái)自供體免疫球蛋白的對(duì)應(yīng)vhcdr3和/或vlcdr3。變體免疫球蛋白可以是人免疫球蛋白，并且供體免疫球蛋白可以是非人免疫球蛋白。適于通過(guò)cdr移植將免疫球蛋白人源化的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的(參見(jiàn)例如，riechmanetal(1988)nature332323-327；queenetalpnasusa(1989)8610029-10033)。雜合免疫球蛋白的vlcdr3可以在上文所述的vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段或vlcdr3c末端聚集傾向區(qū)段中包含取代。雜合免疫球蛋白的vhcdr3可以在上文所述的vhcdr3聚集傾向區(qū)段中包含取代。合適的變體免疫球蛋白可以在上文所述的框架區(qū)或恒定區(qū)中包含一處或多處取代。在一些實(shí)施方案中，可以在供體vh和/或vlcdr3序列中引入取代。可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在插入變體免疫球蛋白之前或之后進(jìn)行取代。本文所述的變體免疫球蛋白還可以用于除cdr移植之外的人源化方法?？梢栽谌嗽椿贵w的產(chǎn)生過(guò)程中在免疫球蛋白中引入本文所述的一處或多處取代，從而改進(jìn)其可產(chǎn)生性?？捎玫娜嗽椿夹g(shù)是本領(lǐng)域公知的(參見(jiàn)例如padlanetalmolimmunol.(1991)28489-498)。本文所述的變體免疫球蛋白可以用于產(chǎn)生用于分離結(jié)合特異性的文庫(kù)或庫(kù)。制備變體免疫球蛋白庫(kù)的方法可以包括：提供上文所述的變體免疫球蛋白群體，將所述變體免疫球蛋白群體的1、2、3、4、5或6個(gè)cdr序列替換為cdr序列庫(kù)，從而產(chǎn)生變體免疫球蛋白庫(kù)。變體免疫球蛋白庫(kù)會(huì)含有相同變體免疫球蛋白背景中的不同替代cdr序列的庫(kù)。可以篩選所述庫(kù)中對(duì)靶抗原具有特異性的變體免疫球蛋白。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，變體免疫球蛋白群體的vhcdr3可以被取代為vhcdr3序列庫(kù)。例如，制備能結(jié)合靶抗原的變體免疫球蛋白方法可以包括：(a)提供編碼vh結(jié)構(gòu)域的核酸的起始群體，所述vh結(jié)構(gòu)域包含待替換的cdr3或缺少cdr3編碼區(qū)；其中所述vh結(jié)構(gòu)域在一個(gè)或多個(gè)上文所述聚集傾向區(qū)段中包含一處或多處取代，(b)使所述vh結(jié)構(gòu)域群體與編碼vhcdr3氨基酸序列庫(kù)的供體核酸群體組合，使得所述供體核酸被插入vh結(jié)構(gòu)域群體的cdr3區(qū)中，從而提供編碼包含所述vhcdr3序列的vh結(jié)構(gòu)域庫(kù)的核酸的產(chǎn)物群體；(c)表達(dá)所述產(chǎn)物群體的核酸；(d)選擇對(duì)靶抗原具有特異性的免疫球蛋白；以及(e)回收所述免疫球蛋白或編碼其的核酸。編碼vh結(jié)構(gòu)域的核酸群體還可以包含編碼ch1結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列，所述ch1結(jié)構(gòu)域在上文所述的ch1聚集傾向區(qū)段中包含一處或多處取代。按照相同方式，vlcdr3序列庫(kù)可以與編碼vl結(jié)構(gòu)域的核酸群體組合，所述vl結(jié)構(gòu)域在本文所述的聚集傾向區(qū)段中包含一處或多處取代，并且包含待替換的vlcdr3或缺少vlcdr3編碼區(qū)。除cdr3之外，也可以將cdr1和cdr2序列的庫(kù)移植到vh和/或vl結(jié)構(gòu)域群體中，然后篩選對(duì)靶抗原具有特異性的變體免疫球蛋白，所述vh和/或vl結(jié)構(gòu)域在本文所述的聚集傾向區(qū)段中包含一處或多處取代?？梢詫dr來(lái)源的序列庫(kù)用本文所述的缺少對(duì)應(yīng)的cdr序列的vh或vl結(jié)構(gòu)域的群體改組，并且將改組后的完整vh或vl結(jié)構(gòu)域與同源vl或vh結(jié)構(gòu)域(其也可以包含本文所述的一處或多處取代)組合，從而提供工程化的變體免疫球蛋白。然后，可以將庫(kù)在合適的宿主系統(tǒng)(例如wo92/01047的噬菌體展示系統(tǒng))中展示，從而可以選擇具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的合適的免疫球蛋白。庫(kù)可以由來(lái)自104個(gè)以上的個(gè)體成員(例如106至108或1010個(gè)成員)中的任意個(gè)組成。cdr改組和抗體工程化的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，并且本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠利用常規(guī)方法使用這些技術(shù)來(lái)提供具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的免疫球蛋白。cdr序列庫(kù)可以包括cdr序列中一個(gè)或多個(gè)位置處的多種殘基。例如，cdr序列庫(kù)可以包括cdr序列中1、2、3、4、5或更多個(gè)位置處的多種殘基。cdr序列庫(kù)可以包括cdr序列中的一個(gè)或多個(gè)可變位置。例如，cdr序列庫(kù)可以包括cdr序列中1、2、3、4、5或更多個(gè)可變位置。每個(gè)可變位置處的殘基可以在庫(kù)的不同成員之間是不同的?？勺兾恢锰幍臍埢梢允请S機(jī)的(例如，其可以是具有相同概率的任何天然存在的氨基酸)或可以選自預(yù)定的氨基酸組或子集。例如，變體免疫球蛋白的vlcdr3可被取代為供體vlcdr3序列的庫(kù)，所述供體vlcdr3序列在第91位包含a、f、l、r、s和w，在第93位包含d、f、l、q、s、t、w和y，和/或在第96位包含e、l、v和w。變體免疫球蛋白的vhcdr3可以被取代為供體vhcdr3序列的庫(kù)，所述供體vhcdr3序列在第100c位包含d、e、f、g、p、s、t、w和y，在第100d位包含f、g、l、p和m，在第102位包含a、f、h、i、l、v和y，和/或在第103位包含i、l和v。使cdr3庫(kù)偏向于這些位置處的這些殘基可以有助于改進(jìn)可產(chǎn)生性。除一個(gè)或多個(gè)可變位置之外，cdr序列庫(kù)還可以包括一個(gè)或多個(gè)非可變位置。每個(gè)非可變位置處的殘基可以在庫(kù)的每個(gè)成員中是相同的。將cdr序列庫(kù)并入受體變體免疫球蛋白可用于產(chǎn)生具有不同結(jié)合性質(zhì)的變體免疫球蛋白的庫(kù)，庫(kù)的每個(gè)成員在本文所述的一個(gè)或多個(gè)聚集傾向區(qū)段中包含一處或多處取代。變體免疫球蛋白庫(kù)可以包含：vl結(jié)構(gòu)域，其在上文所述的框架聚集傾向區(qū)段和/或cdr3聚集傾向區(qū)中包含取代；vh結(jié)構(gòu)域，其在上文所述的框架聚集傾向區(qū)和/或cdr3聚集傾向區(qū)段中包含取代；和/或，ch1結(jié)構(gòu)域，在上文所述的ch1聚集傾向區(qū)中包含取代；其中庫(kù)的成員在一個(gè)或多個(gè)cdr序列中是不同的。變體免疫球蛋白的庫(kù)可以用于鑒定具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性、能結(jié)合靶抗原的免疫球蛋白。獲得一種或多種能結(jié)合靶抗原的免疫球蛋白的方法可以包括：使上文所述的免疫球蛋白庫(kù)和所述抗原接觸，以及選擇庫(kù)中能結(jié)合所述抗原的一個(gè)或多個(gè)免疫球蛋白。所述庫(kù)可以，例如，展示在噬菌體顆粒的表面上，每個(gè)顆粒都含有編碼展示在其表面上的抗體vh可變結(jié)構(gòu)域以及任選地所展示的vl結(jié)構(gòu)域(如果存在)的核酸。選擇能結(jié)合抗原并展示在噬菌體顆粒上的免疫球蛋白之后，可以從展示所述免疫球蛋白的噬菌體顆粒獲取核酸。通過(guò)表達(dá)具有從展示所述免疫球蛋白的噬菌體顆粒獲取的核酸序列的核酸，所述核酸可以用于后續(xù)產(chǎn)生免疫球蛋白或其抗體vh可變結(jié)構(gòu)域和/或vl結(jié)構(gòu)域?？梢詼y(cè)試免疫球蛋白結(jié)合抗原的能力、與其它免疫球蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原的能力和/或中和抗原的能力。在合適的條件下，可以比較不同免疫球蛋白的結(jié)合親和力和中和能力。還可以測(cè)試免疫球蛋白的可產(chǎn)生性。根據(jù)本文公開(kāi)內(nèi)容，本發(fā)明的各個(gè)其它方面和實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。將本說(shuō)明書(shū)中提及的所有文件通過(guò)引用整體并入本文。本文中所用的“和/或”應(yīng)當(dāng)理解為兩個(gè)規(guī)定的特征或組分中每一個(gè)的具體公開(kāi)內(nèi)容，可以具有另一個(gè)或沒(méi)有另一個(gè)。例如，“a和/或b”應(yīng)當(dāng)理解為(i)a、(ii)b和(iii)a和b中每一個(gè)的具體公開(kāi)內(nèi)容，就如同其中每一個(gè)在本文中被單獨(dú)列出一樣。除非上下文另作規(guī)定，上文所示的特征的描述和定義不限于本發(fā)明的任何特定方面或?qū)嵤┓桨?，并可以等同地?yīng)用于所描述的所有方面和實(shí)施方案。現(xiàn)在，通過(guò)舉例并結(jié)合下文所述的表描述本發(fā)明的某些方面和實(shí)施方案。表1a和1b顯示出免疫球蛋白vh和vl結(jié)構(gòu)域的kabat和honegger編號(hào)方案之間的對(duì)應(yīng)。表2a和2b顯示出能改進(jìn)可產(chǎn)生性的聚集傾向區(qū)段中的氨基酸取代的實(shí)例。還標(biāo)出了優(yōu)選取代。使用標(biāo)準(zhǔn)iupac-iubjcbn的氨基酸單字母縮寫(xiě)。表3a和3b顯示出能改進(jìn)可產(chǎn)生性的聚集傾向區(qū)段中的取代組合的實(shí)例。表4顯示出變體免疫球蛋白的實(shí)例的可產(chǎn)生性。實(shí)驗(yàn)基因合成由商業(yè)供應(yīng)商優(yōu)化和合成序列，并將序列亞克隆到pee6.4和pee12.4中。通過(guò)轉(zhuǎn)化到top10細(xì)胞、將細(xì)胞在lb培養(yǎng)基中o/n培養(yǎng)、并利用qiagenendofree質(zhì)粒純化試劑盒進(jìn)行純化來(lái)制備dna儲(chǔ)備物。將dna重懸于te緩沖液中，并利用nanodrop分光光度計(jì)測(cè)定濃度。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)每3-4天將chok1sv細(xì)胞在補(bǔ)充了15mml-谷氨酰胺的cd-cho培養(yǎng)基中次培養(yǎng)，并在co2搖床(140rpm)中、36.5℃、10％co2、85％濕度下孵育。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染利用lipofectamine2000轉(zhuǎn)染chok1sv細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)，收集上清、將上清離心并在進(jìn)行分析前保存在4℃下。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染利用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的chok1sv細(xì)胞，在msx選擇下進(jìn)行大規(guī)模表達(dá)。收集后，在純化之前將上清保存在4℃下。純化利用hitrap柱(ge)將上清進(jìn)行蛋白a純化，并在濃縮和緩沖液交換之前保存在4℃下?？贵w濃縮和緩沖液交換通過(guò)2000g下離心15-20分鐘濃縮樣品。利用配制緩沖液(50mm磷酸鹽、100mmnacl、ph7.4)將材料進(jìn)行4-5次緩沖液交換。緩沖液交換后，將樣品在配制緩沖液中稀釋至合適的工作濃度。gp-hplc在agilent1200系列hplc系統(tǒng)上，利用gp-hplc分析重復(fù)樣品。將80μl等分式樣的1mg/ml樣品(保存在4℃下)上樣，并以1ml/分鐘運(yùn)行15分鐘。利用chemstation軟件分析結(jié)果。igg滴度利用夾心elisa測(cè)定抗體表達(dá)收率。將滴度以輕鏈特異性對(duì)照進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。硫磺素t結(jié)合硫磺素t可用于監(jiān)測(cè)聚集。將1mg/ml的純化抗體在60°下孵育1小時(shí)，然后與終濃度為30μm的硫磺素t混合，并以ex＝305、em＝508nm測(cè)定熒光(hawe,a.,sutter,mandjiskoot,w.pharmaceuticalresearch200825(7)1487-99)。ans結(jié)合8-苯胺基-1-萘磺酸(ans)可用于監(jiān)測(cè)聚集。將1mg/ml的純化抗體在60°下孵育1小時(shí)，然后與終濃度為30μm的ans混合，并以ex＝360、em/508nm測(cè)定熒光(hawe,a.,sutter,mandjiskoot,w.pharmaceuticalresearch200825(7)1487-99)。結(jié)果通過(guò)計(jì)算機(jī)方法和體外方法分析免疫球蛋白序列來(lái)鑒定聚集傾向區(qū)段。鑒定出的聚集傾向區(qū)段顯示在表2中設(shè)計(jì)并合成了在vh和vl結(jié)構(gòu)域(如seqidno:1和2所示)中鑒定出的聚集傾向區(qū)段中的能降低聚集傾向的取代(表2)。測(cè)試了取代對(duì)免疫球蛋白的表達(dá)、穩(wěn)定性和聚集的影響(表3和4)。發(fā)現(xiàn)鑒定出的聚集傾向區(qū)段中的殘基取代能實(shí)現(xiàn)可產(chǎn)生性的改進(jìn)，特別是能實(shí)現(xiàn)降低的聚集傾向和/或改進(jìn)的產(chǎn)生水平。本發(fā)明的其它編號(hào)的聲明：1.變體免疫球蛋白，包含：輕鏈可變(vl)結(jié)構(gòu)域，其在框架(fr)聚集傾向區(qū)段和/或互補(bǔ)決定區(qū)3(cdr3)聚集傾向區(qū)段包含取代；重鏈可變(vh)結(jié)構(gòu)域，其在框架區(qū)聚集傾向區(qū)段和/或cdr3聚集傾向區(qū)段包含取代；和/或重鏈恒定區(qū)1(ch1)結(jié)構(gòu)域，其在ch1聚集傾向區(qū)段包含取代。2.改進(jìn)免疫球蛋白的可產(chǎn)生性的方法，包括：鑒定母體免疫球蛋白，在所述母體免疫球蛋白的vl結(jié)構(gòu)域中的框架聚集傾向區(qū)段和/或cdr3聚集傾向區(qū)段中引入取代，和/或在所述母體免疫球蛋白vh結(jié)構(gòu)域中的框架區(qū)聚集傾向區(qū)段和/或cdr3聚集傾向區(qū)段中引入取代，和/或在所述母體免疫球蛋白的ch1結(jié)構(gòu)域中的恒定區(qū)聚集傾向區(qū)段中引入取代，從而產(chǎn)生相對(duì)于所述母體免疫球蛋白具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的變體免疫球蛋白。3.如前述聲明中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中相對(duì)于所述母體免疫球蛋白，所述變體免疫球蛋白在表達(dá)時(shí)具有降低的聚集傾向和/或增加的產(chǎn)生能力。4.如前述聲明中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域的框架聚集傾向區(qū)段選自：第20位聚集傾向區(qū)段、第45位聚集傾向區(qū)段和第74位聚集傾向區(qū)段。5.如聲明4中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第20位聚集傾向區(qū)段從所述vl結(jié)構(gòu)域的第15位延伸至第23位。6.如聲明5中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在其第18位包含取代。7.如聲明6中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第18位的殘基被取代為r、s或v。8.如聲明7中所述的變體免疫球蛋白或方法，中所述vl結(jié)構(gòu)域包含t18r、t18s或t18v。9.如聲明5-8中任一項(xiàng)中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在其第20位包含取代。10.如聲明9中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第20位的殘基被取代為k、r、s或v。11.如聲明10中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl包含t20k、t20r、t20s或t20v取代。12.如聲明4-11中任一項(xiàng)中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第45位聚集傾向區(qū)段從所述vl結(jié)構(gòu)域的第42位延伸至第49位。13.如聲明12中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第45位包含取代。14.如聲明13中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第45位的殘基被取代為e、k、r、q或v。15.如聲明14中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域包含t45e、t45k、t45r、t45q或t45v取代。16.如聲明12-15中任一項(xiàng)中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第46位包含取代。17.如聲明16中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第46位的殘基被取代為l或y。18.如聲明17中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域包含t46l或t46y取代。19.如聲明4-18中任一項(xiàng)中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第74位聚集傾向區(qū)段從所述vl結(jié)構(gòu)域序列的第71位延伸至第77位。20.如聲明19中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第74位包含取代。21.如聲明20中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第74位的殘基被取代為v。22.如聲明21中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域包含t74v取代。23.如前述聲明中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域cdr3聚集傾向區(qū)段選自：vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段和vlcdr3c末端聚集傾向區(qū)段。24.如聲明23中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段從所述vl結(jié)構(gòu)域序列中的殘基c88延伸至殘基c88c末端的第8位氨基酸。25.如聲明24中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第88位、第89位、第90位、第91位、第92位、第93位、第94位、第95位或第95a位中的一個(gè)或多個(gè)包含取代。26.如聲明25中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第91位包含取代。27.如聲明26中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第91位的殘基被取代為a、f、l、r、s或w。28.如聲明27中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域包含y91a、y91f、y91l、y91r、y91s或y91w取代。29.如聲明24-29中任一項(xiàng)中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第93位包含取代。30.如聲明29中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第93位的殘基被取代為d、f、l、q、s、t、w或y。31.如聲明30中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域包含p93d、p93f、p93l、p93q、p93s、p93t、p93w或p93y取代。32.如聲明23中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vlc末端cdr3聚集傾向區(qū)段從所述vl結(jié)構(gòu)域序列中殘基f98的n末端第3位氨基酸延伸至第99位。33.如聲明32中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第95位、第96位、第97位、第98位或第99位中的一個(gè)或多個(gè)包含取代。34.如聲明33中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域在第96位包含取代。35.如聲明34中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第96位的殘基被取代為e、l、v或w。36.如聲明35中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vl結(jié)構(gòu)域包含r96e、r96l、r96v或r96w取代。37.如前述聲明中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域框架聚集傾向區(qū)段選自：fr1聚集傾向區(qū)段、第95位聚集傾向區(qū)段以及第102位聚集傾向區(qū)段。38.如聲明37中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述fr1聚集傾向區(qū)段位于所述vh結(jié)構(gòu)域序列的框架區(qū)1中。39.如聲明38中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述fr1聚集傾向區(qū)段是選自以下的聚集傾向區(qū)段：第1位至第3位、第4位至第6位、第11位至第13位以及第16位至第21位。40.如聲明39中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中fr1聚集傾向區(qū)段從第1位延伸至第3位。41.如聲明40中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在其第1位包含取代。42.如聲明41中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第1位的殘基被取代為e、q、d、a或v。43.如聲明42中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含q1e、q1d、q1a或q1v取代或e1q、e1d、e1a或e1v取代。44.如聲明39中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述fr1聚集傾向區(qū)段從所述vh結(jié)構(gòu)域的第4位延伸至第6位。45.如聲明44中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在其第5位包含取代。46.如聲明45中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第5位的殘基被取代為v。47.如聲明46中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含l5v。48.如聲明39中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述fr1聚集傾向區(qū)段從所述vh結(jié)構(gòu)域的第11位延伸至第13位。49.如聲明48中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在其第12位包含取代。50.如聲明49中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第12位的殘基被取代為v。51.如聲明50中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含l12v。52.如聲明39中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述fr1聚集傾向區(qū)段從所述vh結(jié)構(gòu)域的第16位延伸至第21位。53.如聲明52中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第17位包含取代。54.如聲明53中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第17位的殘基被取代為r。55.如聲明54中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含g17r取代。56.如聲明52-55中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第19位包含取代。57.如聲明56中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第19位的殘基被取代為t或v。58.如聲明57中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含l19t或和l19v取代。59.如聲明52-58中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第20位包含取代。60.如聲明59中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第20位的殘基被取代為a、k、s或t。61.如聲明60中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述殘基的位置，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含r20a、r20k或r20s或r20t取代。62.如聲明37-61中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第95位聚集傾向區(qū)段從第91位延伸至第99位。63.如聲明62中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第91位、第92位、第93位、第94位、第95位、第96位、第97位、第98位和/或第99位中的一個(gè)或多個(gè)包含取代。64.如聲明63中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第94位包含取代。65.如聲明64中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第94位的殘基被取代為r。66.如聲明65中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含k94r取代。67.如聲明63-66中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第96位包含取代。68.如聲明67中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第96位的殘基被取代為a。69.如聲明68中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含g96a取代。70.如聲明1-69中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vhcdr3聚集傾向區(qū)段從第100c位延伸至第103位。71.如聲明70中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第100c位、第100d位、第101位、第102位和第103位中的一個(gè)或多個(gè)包含取代。72.如聲明71中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第100c位包含取代。73.如聲明72中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第100c位的殘基被取代為d、e、f、g、p、s、t、w或y。74.如聲明73中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含a100cd、a100ce、a100cf、a100cg、a100cp、a100cs、a100ct、或a100cw或a100cy。75.如聲明70-74中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第100d位包含取代。76.如聲明75中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第100d位的殘基被取代為f、g、l、p或m。77.如聲明76中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含s100df、s100dg、s100dl、s100dp或s100dm取代。78.如聲明70-77中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第102位包含取代。79.如聲明78中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第102位的殘基被取代為a、f、h、i、l、v或y。80.如聲明79中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含p102a、p102f、p102h、p102i、p102l、p102y或p102v取代。81.如聲明70-80中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域在第103位包含取代。82.如聲明81中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第103位的殘基被取代為i、l或v。83.如聲明82中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含w103i、w103l或w103v取代。84.如聲明1-83中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述ch1聚集傾向區(qū)段從第150位延伸至第156位。85.如聲明84中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述ch1結(jié)構(gòu)域在第153位包含取代。86.如聲明85中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述ch1結(jié)構(gòu)域在第153位包含取代。87.如聲明86中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第153位的殘基被取代為v。88.如聲明87中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含s153v取代。89.如前述聲明中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中相對(duì)于所述母體免疫球蛋白序列，所述變體免疫球蛋白的序列具有多至10個(gè)氨基酸取代。90.如前述聲明中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述變體免疫球蛋白的序列在vlfr1和/或fr2結(jié)構(gòu)域中包含2處取代；在vlcdr3結(jié)構(gòu)域中包含3處取代；在vlfr2結(jié)構(gòu)域中包含2處取代并在vlcdr3結(jié)構(gòu)域中包含3處取代；在vlfr1結(jié)構(gòu)域中包含2處取代、在vlfr2結(jié)構(gòu)域中包含2處取代并在vlcdr3結(jié)構(gòu)域中包含3處取代；在vhfr1結(jié)構(gòu)域中包含2處取代；在vhfr1結(jié)構(gòu)域中包含1處取代并在vhcdr3結(jié)構(gòu)域中包含1處取代；在vhcdr3結(jié)構(gòu)域中包含2處取代；或在ch1結(jié)構(gòu)域中包含1處取代并在vhfr1結(jié)構(gòu)域中包含1處取代。91.如聲明90中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域的序列包含100d(d101-1)和102處取代。92.如聲明91中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述第102位的殘基被取代為a、f、h、i、l、v或y，并且其中第100d位的殘基被取代為f、g、l、p或m。93.如聲明92中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含p102a、p102f、p102h、p102i、p102l、p102y或p102v取代和s100df、s100dg、s100dl、s100dp或s100dm取代。94.如聲明93中所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述vh結(jié)構(gòu)域包含s100df和p102v取代、s100dm和p102v取代、s100df和p102y取代或s100dm和p102y取代。95.如前述聲明中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白或方法，其中所述變體免疫球蛋白是人源化的。96.評(píng)價(jià)免疫球蛋白的可產(chǎn)生性的方法，包括：鑒定一個(gè)或多個(gè)選自以下的位置處的氨基酸殘基：所述免疫球蛋白的vl結(jié)構(gòu)域中的第18位、第20位、第45位、第46位、第74位、第91位、第93位和第96位，所述免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中的第1位、第5位、第12位、第17位、第19位、第20位、第94位、第96位、第100c位、第100d位、第102位和第103位，以及所述免疫球蛋白的ch1結(jié)構(gòu)域中的第153位，其中在所述免疫球蛋白的vl結(jié)構(gòu)域中，如果第18位的殘基不是r、s或v，優(yōu)選不是r或v，第20位的殘基不是k、r、s或v，優(yōu)選不是r或v，第45位的殘基不是e、k、r、q或v，優(yōu)選不是k或r，第46位的殘基不是l或y，優(yōu)選不是l，第74位的殘基不是v，第91位的殘基不是a、f、l、r、s或w，優(yōu)選不是w，第93位的殘基不是d、f、l、q、s、t、w或y，優(yōu)選不是q和/或第96位的殘基不是e、l、v或w，優(yōu)選不是v；和/或在所述免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中，如果第1位的殘基不是a、d、e、q或v，第5位或第12位的殘基不是v，第17位的殘基不是r，第19位的殘基不是t或v，優(yōu)選不是t，第20位的殘基不是a、k、s或t，優(yōu)選不是a，第94位的殘基不是r，第96位的殘基不是a，第100c位的殘基不是d、e、f、g、p、s、t、w或y，優(yōu)選不是w，第100d位的殘基不是f、g、l、m或p，優(yōu)選不是f或m，第102位的殘基不是a、f、h、i、l、v或y，優(yōu)選不是v或y，第103位的殘基不是i、l或v；和/或在所述免疫球蛋白的ch1結(jié)構(gòu)域中，如果第153位的殘基不是v；則表明所述免疫球蛋白的可產(chǎn)生性是次優(yōu)的。97.評(píng)價(jià)免疫球蛋白的可產(chǎn)生性的方法，包括：鑒定所述免疫球蛋白的vh結(jié)構(gòu)域中第100d位和/或第102位處的氨基酸殘基，其中如果第100d位是s和/或第102位是p，則表明所述免疫球蛋白具有次優(yōu)的可產(chǎn)生性。98.分離的核酸，其編碼聲明1-95中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白，或編碼所述變體免疫球蛋白的包含一個(gè)或多個(gè)所述取代的vh結(jié)構(gòu)域、vl結(jié)構(gòu)域或ch1結(jié)構(gòu)域。99.表達(dá)載體，包含聲明98所述的分離的核酸。100.宿主細(xì)胞，包含聲明99所述的表達(dá)載體。101.制備變體免疫球蛋白的方法，包括：在能引起所述變體免疫球蛋白或其vh結(jié)構(gòu)域、vl結(jié)構(gòu)域或ch1結(jié)構(gòu)域的產(chǎn)生的條件下，表達(dá)聲明98所述的核酸，并將所述變體免疫球蛋白或其vh結(jié)構(gòu)域、vl結(jié)構(gòu)域或ch1結(jié)構(gòu)域回收。102.如權(quán)利要求101所述的方法，包括將所述變體免疫球蛋白配制在組合物中，所述組合物包含藥學(xué)上可接受的賦形劑。103.藥物組合物，包含聲明1-95中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白和藥學(xué)上可接受的賦形劑。104.如聲明1-95中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白，其用作藥物。105.制備能結(jié)合靶抗原的雜合免疫球蛋白的方法，包括：提供能結(jié)合所述靶抗原的供體免疫球蛋白，提供聲明1-89中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白，將所述變體免疫球蛋白的一個(gè)或多個(gè)cdr序列替換為所述供體免疫球蛋白的對(duì)應(yīng)cdr序列，從而產(chǎn)生能結(jié)合所述靶抗原的雜合免疫球蛋白。106.如聲明105所述的方法，其中所述雜合免疫球蛋白的vlcdr3在vlcdr3n末端聚集傾向區(qū)段或vlcdr3c末端聚集傾向區(qū)段中包含取代。107.如聲明105或106所述的方法，其中所述雜合免疫球蛋白的vhcdr3在vhcdr3聚集傾向區(qū)段中包含取代。108.制備變體免疫球蛋白庫(kù)的方法，包括：提供聲明1-95中任一項(xiàng)所述的變體免疫球蛋白，將所述變體免疫球蛋白的一個(gè)或多個(gè)cdr序列替換為在其中一個(gè)或多個(gè)位置包含隨機(jī)殘基的cdr序列，從而產(chǎn)生具有多種變體免疫球蛋白的庫(kù)。109.如聲明108所述的方法，其中所述變體免疫球蛋白的vlcdr3被取代為隨機(jī)cdr3序列，所述隨機(jī)cdr3序列在第91位包含a、f、l、r、s或w，在第93位包含d、f、l、q、s、t、w或y，和/或在第96位包含e、l、v或w。110.如聲明108或109所述的方法，其中所述變體免疫球蛋白的vhcdr3被取代為隨機(jī)cdr3序列，所述隨機(jī)cdr3序列在第位100c包含d、e、f、g、p、s、t、w或y，在第位100d包含f、g、l、p或m，在第位102包含a、f、h、i、l、v或y，和/或在第位103包含i、l或v。111.變體免疫球蛋白庫(kù)，其中所述庫(kù)的每個(gè)成員包含：vl結(jié)構(gòu)域，其在框架聚集傾向區(qū)段和/或cdr3聚集傾向區(qū)段中包含取代；vh結(jié)構(gòu)域，其在框架區(qū)聚集傾向區(qū)段和/或cdr3聚集傾向區(qū)段中包含取代；和/或ch1結(jié)構(gòu)域，其在ch1聚集傾向區(qū)段中包含取代，其中所述庫(kù)的成員在一個(gè)或多個(gè)cdr序列中是不同的。112.核酸群體，其編碼聲明111所述的變體免疫球蛋白庫(kù)。113.獲得一個(gè)或多個(gè)具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的、能結(jié)合靶抗原的免疫球蛋白的方法，包括：使聲明111所述的變體免疫球蛋白庫(kù)與所述抗原接觸，以及選擇所述庫(kù)中能結(jié)合所述抗原的一個(gè)或多個(gè)免疫球蛋白。序列：vlnfmltqphsvsespgktvtisctrssgsiasnyvqwyqqrpgsspttviyednqrpsgvpdrfsgsidsssnsasltisglktedeadyycqsydpemrvfgggtkltvl(seqidno:1)vhqvqlvesgggvvqpgrslrlscaasgftfssygmhwvrqapgkglewvavisydgsnkyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycaktyegptyfasdpwgqgtlvtvss(seqidno:2)表1a：vl結(jié)構(gòu)域編號(hào)表1b：vh結(jié)構(gòu)域編號(hào)表2a*vlcdr3位置：y91，p93還按照與kabat的c88的距離進(jìn)行編號(hào)；r96還按照與kabat的f98的距離進(jìn)行編號(hào)。**vhcdr3位置：由于cdr3(重鏈)的異質(zhì)性，位置還按照與d101(在kabat中不變)的距離進(jìn)行命名。表2b表3a*vlcdr3位置：y91，p93還按照與kabat的c88的距離進(jìn)行編號(hào)；r96還按照與kabat的f98的距離進(jìn)行編號(hào)**vhcdr3位置：由于cdr3(重鏈)的異質(zhì)性，位置還按照與d101(在kabat中不變)的距離進(jìn)行命名表3b變體組合測(cè)試的組合hcr95s102r95ds102vh94r95v100s102h94rr95dv100fs102vhc/lcp61v85/l46p61rv85e/l46rr95s102/l37q45r95ds102v/l37qq45rh94r95/l46h94rr95d/l46rlcl37q45l37qq45r表4vlcdr3位置：y91、p93還按照與kabat的c88的距離進(jìn)行編號(hào)，r96還按照與kabat的f98的距離進(jìn)行編號(hào)。**vhcdr3位置：由于cdr3(重鏈)的異質(zhì)性，位置還按照與d101(在kabat中不變)的距離進(jìn)行命名。所有顯示的數(shù)據(jù)是相對(duì)于野生型。序列表<110>英國(guó)龍沙生物醫(yī)藥股份有限公司<120>具有改進(jìn)的可產(chǎn)生性的變體免疫球蛋白<130>d16c12668cn<150>gb0914691.1<151>2009-08-21<150>us61/241,717<151>2009-09-11<160>2<170>patentinversion3.3<210>1<211>110<212>prt<213>智人<400>1asnphemetleuthrglnprohisservalsergluserproglylys151015thrvalthrilesercysthrargserserglyserilealaserasn202530tyrvalglntrptyrglnglnargproglyserserprothrthrval354045iletyrgluaspasnglnargproserglyvalproaspargpheser505560glyserileaspserserserasnseralaserleuthrilesergly65707580leulysthrgluaspglualaasptyrtyrcysglnsertyrasppro859095glumetargvalpheglyglyglythrlysleuthrvalleu100105110<210>2<211>121<212>prt<213>智人<400>2glnvalglnleuvalgluserglyglyglyvalvalglnproglyarg151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrphesersertyr202530glymethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alavalilesertyraspglyserasnlystyrtyralaaspserval505560lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alalysthrtyrgluglyprothrtyrphealaseraspprotrpgly100105110glnglythrleuvalthrvalserser115120=當(dāng)前第1頁(yè)12