本發(fā)明涉及一種蟲草菌絲體的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的蟲草菌絲體的培養(yǎng)方法普遍存在蟲草素含量低、硒含量低等問題，需要進一步加以改進。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種方法簡便、蟲草素含量高、硒含量高的富硒高蟲草素含量的蟲草菌絲體的培養(yǎng)方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：
一種富硒高蟲草素含量的蟲草菌絲體的培養(yǎng)方法，其特征是：包括下列步驟：
（1）菌種的活化：將蛹蟲草菌種接在以下培養(yǎng)基中進行活化和優(yōu)化：葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素B10.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，瓊脂粉15-20克，加水至1000毫升；將上述營養(yǎng)液在121℃，0.1MPa條件下滅菌30分鐘，待冷卻后倒入培養(yǎng)皿中；將蛹蟲草菌種接入培養(yǎng)皿中，22℃黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，選取生長速度快，菌絲致密，顏色純正的菌落，再轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22℃黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，所得菌種即所需蟲草菌種；
（2）液體一級菌種的制備：按以下配方制備液體培養(yǎng)基
首先按下列配方配制營養(yǎng)液I：葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素B10.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；將上述營養(yǎng)液I分裝在500毫升的錐形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘，待冷卻后在超凈臺上接入活化的蟲草菌種，再在130轉(zhuǎn)/分鐘，22℃的搖床中震蕩培養(yǎng)5-9天，待液體中出現(xiàn)均勻的菌球且較粘稠狀可用；
（3）液體二級菌種的制備
首先按以下配方配置營養(yǎng)液Ⅱ：葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素B10.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；將營養(yǎng)液Ⅱ分裝在500毫升的錐形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘，待冷卻后在超凈臺上接入一級液體蟲草菌種，每瓶5毫升，在130轉(zhuǎn)/分鐘，22℃的搖床中震蕩培養(yǎng)5-9天，待液體中出現(xiàn)均勻的菌球且較粘稠狀可用；
（4）小型菌種發(fā)酵罐
首先按下列配方配置發(fā)酵液I：去皮馬鈴薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸鎂0.1%，磷酸二氫鉀0.1%，白海參研磨液4-5%，維生素B10.01%，自然pH值；
將上述發(fā)酵液I按70%的容量裝入50升的液體發(fā)酵罐中，按10%的接種量接入二級液體菌種，22℃、通氣量0.5-1.0m3/h，攪拌速度150-180r/min,培養(yǎng)72-96h，得到生產(chǎn)用液體菌種；
（5）生產(chǎn)發(fā)酵罐
按下列配方配置發(fā)酵液Ⅱ：去皮馬鈴薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸鎂0.1%，磷酸二氫鉀0.1%，白海參研磨液4-5%，維生素B 10.01%，自然PH值。
將上述發(fā)酵液Ⅱ按70%的容量裝入200升的液體發(fā)酵罐中，按10%的接種量接入生產(chǎn)用液體菌種，22℃，通氣量0.5-1.0m3/h，攪拌速度150-180r/min，培養(yǎng)72-96h；
（6）濃縮：
將發(fā)酵液過濾，使菌絲體和營養(yǎng)液分離，用蒸餾水沖洗2次；
（7）噴粉干燥
將獲得的菌絲體在70-80℃干燥箱中烘干至恒重；
（8）成品菌粉
將干燥后的菌粉在-20℃避光保存。
白海參研磨液的制作：將新鮮的白海參去除內(nèi)臟或泡發(fā)好的白海參放入料理機中打成勻漿。
本發(fā)明用白海參研磨液作為培養(yǎng)蛹蟲草培養(yǎng)基的添加劑，利用液體發(fā)酵的方法，可以培育出高硒、高蟲草素含量的蛹蟲草菌絲體，硒含量可達到98.5微克/克以上，蟲草素含量可達到3.15毫克/克以上。
本發(fā)明用高硒含量的白海參作為蛹蟲草培養(yǎng)基的添加劑，
本發(fā)明利用液體發(fā)酵的方法，可以培育出富硒蛹蟲草菌絲體，高效安全。同時利用了海參營養(yǎng)成分極其豐富這一特點，可以培育出高蟲草素含量的蛹蟲草菌絲體。用該發(fā)明培育出的蛹蟲草不僅富硒，而且蟲草素含量也很高，使蛹蟲草的藥用價值成倍增加，達到了事半功倍的效果。
本發(fā)明用白海參作為硒源，避免了加亞硒酸鈉的不安全性，培養(yǎng)出的蟲草子實體不僅硒元素的含量高，還能使海參中豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸及其它微量元素作為蟲草的營養(yǎng)源，使培養(yǎng)出的蟲草藥用價值更高。
富硒的白海參雖然珍貴稀有，但目前已經(jīng)能夠規(guī)模化人工養(yǎng)殖，生產(chǎn)成本并不高。
本發(fā)明重新組合了有利于菌絲體生長的配方，不僅加快了菌絲體的生長速度，同時也提高了蟲草素和硒的含量。
本發(fā)明借助食品工業(yè)液體發(fā)酵技術(shù)培養(yǎng)菌種來實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，具有方法先進，成本低廉，勞動效率高，減少污染等優(yōu)點。
白海參又名白玉參，是極為稀有的海參，是由刺參遺傳變異而來，在自然界極為罕見。據(jù)檢驗其體內(nèi)硒的含量高達630微克/100克以上，是普通海參的10多倍，并且90%以上為有機硒。目前硒普遍被科學家稱為人體微量元素中的“防癌之王”，因此白海參對腫瘤的生長有很好的抑制作用，能有效抗癌。另外，海參中鈣、鋅等各種元素含量也很高，蛋白質(zhì)、各種氨基酸含量豐富，尤其是可以補充人體內(nèi)各種必需氨基酸。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
具體實施方式
一種富硒高蟲草素含量的蟲草菌絲體的培養(yǎng)方法，包括下列步驟：
（1）菌種的活化：將蛹蟲草菌種接在以下培養(yǎng)基中進行活化和優(yōu)化：葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素B10.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，瓊脂粉15-20克，加水至1000毫升；將上述營養(yǎng)液在121℃，0.1MPa條件下滅菌30分鐘，待冷卻后倒入培養(yǎng)皿中；將蛹蟲草菌種接入培養(yǎng)皿中，22℃黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，選取生長速度快，菌絲致密，顏色純正的菌落，再轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22℃黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，所得菌種即所需蟲草菌種；
（2）液體一級菌種的制備：按以下配方制備液體培養(yǎng)基
首先按下列配方配制營養(yǎng)液I：葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素B10.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；將上述營養(yǎng)液I分裝在500毫升的錐形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘，待冷卻后在超凈臺上接入活化的蟲草菌種，再在130轉(zhuǎn)/分鐘，22℃的搖床中震蕩培養(yǎng)5-9天，待液體中出現(xiàn)均勻的菌球且較粘稠狀可用；
（3）液體二級菌種的制備
首先按以下配方配置營養(yǎng)液Ⅱ：葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素B10.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；將營養(yǎng)液Ⅱ分裝在500毫升的錐形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘，待冷卻后在超凈臺上接入一級液體蟲草菌種，每瓶5毫升，在130轉(zhuǎn)/分鐘，22℃的搖床中震蕩培養(yǎng)5-9天，待液體中出現(xiàn)均勻的菌球且較粘稠狀可用；
（4）小型菌種發(fā)酵罐
首先按下列配方配置發(fā)酵液I：去皮馬鈴薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸鎂0.1%，磷酸二氫鉀0.1%，白海參研磨液4-5%，維生素B10.01%，自然pH值；
將上述發(fā)酵液I按70%的容量裝入50升的液體發(fā)酵罐中，按10%的接種量接入二級液體菌種，22℃、通氣量0.5-1.0m3/h，攪拌速度150-180r/min,培養(yǎng)72-96h，得到生產(chǎn)用液體菌種；
（5）生產(chǎn)發(fā)酵罐
按下列配方配置發(fā)酵液Ⅱ：去皮馬鈴薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸鎂0.1%，磷酸二氫鉀0.1%，白海參研磨液4-5%，維生素B 10.01%，自然PH值。
將上述發(fā)酵液Ⅱ按70%的容量裝入200升的液體發(fā)酵罐中，按10%的接種量接入生產(chǎn)用液體菌種，22℃，通氣量0.5-1.0m3/h，攪拌速度150-180r/min，培養(yǎng)72-96h；
（6）濃縮：
將發(fā)酵液過濾，使菌絲體和營養(yǎng)液分離，用蒸餾水沖洗2次；
（7）噴粉干燥
將獲得的菌絲體在70-80℃干燥箱中烘干至恒重；
（8）成品菌粉
將干燥后的菌粉在-20℃避光保存。
白海參研磨液的制作：將新鮮的白海參去除內(nèi)臟或泡發(fā)好的白海參放入料理機中打成勻漿。