本發(fā)明涉及免疫原性肽。這些肽用于體外和體內系統(tǒng)來產生抗原特異性的細胞溶解性cd4+t細胞。這些肽和通過這些肽獲得的細胞用作藥物活性肽以用于多種疾病，包括自身免疫疾病，如多發(fā)性硬化癥(multiplesclerosis)。
背景技術：
：：wo2008/017517公開了一種包含抗原的mhcii類t細胞表位和氧化還原基序序列的新型肽。在文獻fomenkoetal.(2003)biochemistry42，11214-11225中已經綜述了氧化還原基序序列。所述氧化還原基序列的不同替代物是c(x)2c[seqidno:71]，c(x)2s[seqidno:72]，c(x)2t[seqidno:73]，s(x)2c[seqidno:74]和t(x)2c[seqidno:75]。氧化還原基序序列上的其他現(xiàn)有技術評論了組氨酸在所述氧化還原基序序列內的相關性[kortemmeetal.(1996)biochemistry35，14503-14511]。wo2008/017517解釋說明，肽內彼此鄰近的t細胞表位與氧化還原基序序列的組合提供了以前從來未認識的性質。即，這樣的肽具有引發(fā)特異性地殺死存在包含存在于所述肽中的所述t細胞表位的所述抗原的所述抗原呈遞細胞的cd4+細胞溶解性t細胞群的能力。因此，這些肽能夠用于在非常早的階段，即在抗原呈遞水平上阻斷免疫應答(immuneresponse)。wo2008/017517展示了這些肽在治療和預防過敏和免疫疾病中的醫(yī)學用途。本發(fā)明的概念后來在文獻carlieretal.(2012)plosone7,10e45366中公開。其它專利申請表明，這樣的肽能夠用于其中避免免疫應答的其他醫(yī)療應用中，如腫瘤治療，移植排異(rejectionoftransplant)，針對可溶性同種因子(allofactor)的免疫應答，針對由病毒載體的所述主鏈編碼的病毒蛋白的免疫應答。以上出版物討論了氧化還原基序序列的類型和氧化還原基序與t細胞表位序列之間的所述間隔(spacing)。對這些肽可以提供改進的性質的所述肽中的其它決定因素尚未有報道。技術實現(xiàn)要素：所述引言中提到的所述4氨基酸氧化還原基序序列的不同替代物也可以寫成[cst]-x(2)-c[seqidno:76]或cx(2)-[cst][seqidno:77]。本發(fā)明表明，額外的組氨酸氨基酸緊鄰所述基序(所述基序的n端(位置-1)或所述基序的c端(位置+5))之外的存在會增加所述氧化還原基序的穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明涉及具有一般結構或h-c-x(2)-[cst][seqidno:78]或[cst]-x(2)-c-h[seqidno:79]的改性氧化還原基序。利用這種改進的穩(wěn)定性，與不存在額外的組氨酸的肽相比，所述肽的特異性還原活性增加，而使例如能夠使用更少的肽或減少注射的數(shù)量。第一方面涉及適用作藥物的包含抗原的mhcii類t細胞表位和與所述表位緊鄰或相隔至多7個氨基酸的h-x(0,2)-c-x(2)-[cst]([seqidno:78]，[seqidno:90]或[seqidno:91])或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h([seqidno:79]，[seqidno:92]或[seqidno:93])氧化還原基序序列的分離的13-100個氨基酸的免疫原性肽。在某些實施方式中，所述抗原在其序列中不包含所述表位的10個氨基酸的距離內的所述基序，或甚至在其序列中不含所述基序。在具體實施方式中，所述基序是h-x-c-x(2)-[cst][seqidno:90]或[cst]-x(2)-c-x-h[seqidno:92]氧化還原基序序列，或是h-c-x(2)-[cst][seqidno:78]或[cst]-x(2)-c-h[seqidno:79]氧化還原基序序列。在其它實施方式中，所述基序是h-x(0,2)-c-x(2)-c([seqidno:80]，[seqidno:96]或[seqidno:97])或c-x(2)-c-x(0,2)-h([seqidno:83]，[seqidno:94]或[seqidno:95])。在還有的其它實施方式中，所述基序是h-c-x(2)-c[seqidno:80]或c-x(2)-c-h[seqidno:83]。在具體實施方式中，所述肽具有13-75個氨基酸，13-50個氨基酸或13-30個氨基酸的長度。所述mhcii類t細胞表位能夠與所述基序分隔最多4個氨基酸的序列或2個氨基酸的序列。在具體實施方式中，其中所述氧化還原基序中的x是gly或pro，或所述氧化還原基序內的x不是cys。在其它具體實施方案中，所述氧化還原基序外的x不是cys，ser或thr。所述肽能夠用于預防或治療多發(fā)性硬化癥(ms)，由此所述抗原是參與多發(fā)性硬化癥的自身抗原(auto-antigen)，如mog。用于ms的肽的具體實施方式包括所述表位序列vvhlyrngk[seqidno:3]，如hcpycsrvvhlyrngkd[seqidno:1]，hxcpycsrvvhlyrngkd[seqidno:115]或hxxcpycsrvvhlyrngkd[seqidno:116]。所述肽能夠用于預防或治療糖尿病，其中所述抗原，例如，是胰島素原(proinsulin)。另一方面涉及包含抗原的mhcii類t細胞表位，和與所述表位緊鄰或分隔至多7個氨基酸的h-x(0,2)-c-x(2)-[cst]([seqidno:78]或[seqidno:90]或[seqidno:91])或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79]，[seqidno:92]或[seqidno:93]氧化還原基序序列的分離的13-100個氨基酸的免疫原性肽，條件是所述抗原在其序列中不含所述表位10個氨基酸的距離內的所述基序。在某些實施方式中，所述抗原在其序列中不含所述基序?；虻木唧w實施方式是h-x-c-x(2)-[cst][seqidno:90]，[cst]-x(2)-c-x-h[seqidno:92]，h-c-x(2)-[cst][seqidno:78]或[cst]-x(2)-c-h[seqidno:79]，x(0,2)-c-x(2)-c([seqidno:80]，[seqidno:96][seqidno:97])，c-x(2)-c-x(0,2)-h([seqidno:83]，[seqidno:94][seqidno:95])h-c-x(2)-c[seqidno:80]或c-x(2)-c-h[seqidno:83]。在肽的具體實施方式中，如果所述基序是h-x(0,2)-c-x(2)-[cst][seqidno:78，90或91]，則所述基序位于所述肽內的所述t細胞表位的n端位，并且其中，如果所述基序是[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]，則所述基序位于所述t細胞表位的c端。所述基序能夠位于所述t細胞表位的n端。所述肽能夠具有13-75個氨基酸，13-50個氨基酸，13-30個氨基酸的長度。在具體實施方式中，所述mhcii類t細胞表位與所述基序相隔至多4個氨基酸的序列，或與所述基序相隔2個氨基酸的序列。在具體實施方式中，所述氧化還原基序內的x是gly或pro，或所述氧化還原基序內的x不是cys。在具體實施方式中，所述氧化還原基元外的x不是cys，ser或thr。來自所述自身抗原的具體肽是mog或胰島素原。具體的肽包含所述表位序列vvhlyrngk[seqidno:3]，如hcpycsrvvhlyrngkd[seqidno:1]，hxcpycsrvvhlyrngkd[seqidno:115]或hxxcpycsrvvhlyrngkd[seqidno:116]。另一方面是包括給予有效量的包含抗原的mhcii類t細胞表位，和與所述表位緊鄰或分隔至多7個氨基酸的h-x(0,2)-c-x(2)-[cst]([seqidno:78]，[seqidno:90]或[seqidno:91])或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h([seqidno:79]，[seqidno:92]或[seqidno:93])氧化還原基序序列的13-100個氨基酸的免疫原性肽的步驟的治療或預防方法。本發(fā)明的另一方面涉及上述用于產生抗原特異性cd4+細胞溶解性t細胞的體外用途。另一方面涉及獲得抗細胞抗原的細胞溶解性的cd4+t細胞群的方法，所述方法包括以下步驟：提供外周血細胞；在體外使所述細胞與包含抗原的mhcii類t細胞表位和與所述表位緊鄰或相隔至多7個氨基酸的h-x(0,2)-c-x(2)-[cst]([seqidno:78]，[seqidno:90]或[seqidno:91])或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h([seqidno:79]，[seqidno:92]或[seqidno:93])氧化還原基序序列的13-100個氨基酸的免疫原性肽接觸；并在il-2存在下擴增所述細胞。另一方面涉及能夠通過上述方法獲得的細胞群，用作藥物。另一方面涉及包括給予有效量的如上所述的細胞的步驟的治療和預防方法。附圖說明圖1：原生(naive)人cd4+t細胞系對具有mog的t細胞表位和沒有(右側條棒)[seqidno:7]和具有額外的組氨酸(左側條棒)[seqidno:1]的氧化還原基序的肽的應答(response)。具體實施方式定義本文中所用的所述術語“肽”是指包含通過肽鍵連接但能夠包含非氨基酸結構的2-200個氨基酸的氨基酸序列的分子。根據(jù)本發(fā)明的肽能夠包含任何所述常規(guī)的20種氨基酸或其修飾形式，或能夠包含通過化學肽合成或通過化學或酶修飾(enzymaticmodification)引入的非天然存在的氨基酸。本文所用的所述術語“抗原”是指大分子的結構，通常是蛋白質(含或不含多糖)或由包含一個或多個半抗原并包含t細胞表位的蛋白質組合物制成。本文所用的所述術語“抗原性蛋白(antigenicprotein)”是指包含一個或多個t細胞表位的蛋白質。本文所用的自身抗原或自身抗原性蛋白質是指所述體內存在的人或動物蛋白，其會在相同的人體或動物體內引起免疫應答。所述術語“食品或藥物抗原性蛋白”是指天然存在于食品或藥物產品，如疫苗中的抗原性蛋白。所述術語“表位”是指被抗體或其部分(fab'，fab2'等)特異性識別和結合的抗原性蛋白的一個或多個部分(其可以限定構象表位(conformationalepitope))，或存在于b細胞或t細胞淋巴細胞的細胞表面，并能夠通過所述結合誘導免疫應答的受體。在本發(fā)明的上下文中，所述術語“t細胞表位”是指顯性，亞顯性或次要(minor)t細胞表位，即由t淋巴細胞的所述細胞表面的受體特異性識別和結合的抗原性蛋白的一部分。表位是顯性的(優(yōu)勢的，dominant)，亞顯性的(亞優(yōu)勢的，sub-domainant)或是次要的(minor)，要取決于針對所述表位引起的所述免疫反應。顯性(dominace)取決于t細胞在蛋白質的所有可能的t細胞表位中識別這些表位并能夠激活它們的頻率。所述t細胞表位是由mhcii類分子識別的表位，其由適合于所述mhcii分子的溝槽(groove)中的+/-9個氨基酸的序列構成。在代表t細胞表位的肽序列內，所述表位中的氨基酸編號為p1至p9，所述表位的n-端的氨基酸編號為p-1，p-2等，所述表位c端的氨基酸編號為p+1，p+2等。由mhcii類分子識別而不是mhci類分子識別的肽被稱為mhcii類限制性t細胞表位。所述術語“mhc”是指“主要組織相容性抗原”。在人類中，所述mhc基因被稱為hla(“人白細胞抗原”)基因。雖然沒有一貫遵循的慣例，但一些文獻使用了hla指示hla蛋白分子，而mhc指示編碼所述hla蛋白的基因。因此，當在本文中使用時，所述術語“mhc”和“hla”是等同物。人體中的所述hla系統(tǒng)在小鼠中，即h2系統(tǒng)中具有等效性。最深入研究的hla基因是九種所謂的經典mhc基因：hla-a，hla-b，hla-c，hla-dpa1，hla-dpb1，hla-dqa1，hlasdqb1，hla-dra和hla-drb1。在人類中，所述mhc分為三個區(qū)域：i，ii和iii類。所述a，b和c基因屬于mhci類，而所述六種d基因屬于ii類。mhci類分子由含有3個結構域(α1，2和3)的單個多態(tài)性鏈制成，其與細胞表面的β2微球蛋白相關。ii類分子由2個多態(tài)性鏈制成，每條鏈含有2條鏈(α1和2，以及β1和2)。i類mhc分子幾乎在所有有核細胞上表達。在i類mhc分子的背景中呈現(xiàn)的肽片段由cd8+t淋巴細胞(細胞溶解性t淋巴細胞或ctl)識別。cd8+t淋巴細胞經常成熟為細胞溶解性效應器，其能夠溶解具有所述刺激抗原的細胞。ii類mhc分子主要表達于活化的淋巴細胞和抗原呈遞的細胞上。cd4+t淋巴細胞(輔助t淋巴細胞或th)通過識別由ii類mhc分子呈遞的，通常發(fā)現(xiàn)于抗原呈遞的細胞如巨噬細胞或樹突狀細胞上的獨特肽片段而激活。cd4+t淋巴細胞增殖并分泌支持抗體介導的和細胞介導的應答的細胞因子如il-2，ifn-γ和il-4。功能性hla的特征在于內源的和外來的潛在抗原性肽結合的深結合溝槽。所述溝槽的特征進一步在于良好限定的形狀和理化特性。hlai類結合位點關閉，因為所述肽末端被向下固定(pin)于所述溝槽的端部。它們也參與了具有保守hla殘基的氫鍵的網絡。鑒于這些約束，結合肽的長度被限于8-10個殘基。然而，已經證明，最多達12個氨基酸殘基的肽也能夠結合hlai類。不同hla復合物的結構的比較證實了一般的結合模式，其中肽采用相對線性的擴展構象，或能夠涉及中央殘基從而從所述溝槽中凸出(bulge)。與hlai類結合位點相反，ii級位點在兩端都是開放的。這允許肽從所述結合的實際區(qū)域延伸，從而在兩端“懸掛出(hangingout)”。因此，ii類hla能夠結合可變長度的肽配體，其范圍為9至超過25個氨基酸殘基。類似于hlai類，ii類配體的親和力由“恒定”和“可變”組分確定。恒定部分再次由所述hlaii類溝槽中的保守殘基與結合肽的主鏈之間形成的氫鍵網絡引起。然而，該氫鍵模式不限于所述肽的n-和c-端殘基，而是分布于整個鏈上。后者是重要的，因為它將復合肽的構象限制于嚴格線性的結合模式。這對于所有ii類同種異體(allotype)是很常見的。決定肽的所述結合親和力的第二組分由于ii類結合位點內的多態(tài)性的某些位置而是可變的。不同的同種異型在溝槽內形成不同的互補口袋，從而支持了肽的亞型依賴性選擇或特異性。重要的是，對保持于ii類口袋中的所述氨基酸殘基的限制通常比i類“更軟”。在不同的hlaii類同種異型體中存在大得多的肽的交叉反應性。適合于所述mhcii分子的溝槽中的mhcii類t細胞表位的所述+/-9個氨基酸的序列通常編號為p1-p9。所述表位n-端的額外的氨基酸編號為p-1，p-2等，所述表位c端的氨基酸編號為p+1，p+2等。本文中對于本發(fā)明的上下文中使用的表位而使用的所述術語“同源物(homologue)”是指與天然存在的表位具有至少50％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％或至少98％的氨基酸序列一致性的分子，從而保持所述表位結合抗體或b和/或t細胞的細胞表面受體的能力。表位的具體同源物對應于至多三個，更特別是至多2個，最特別是一個氨基酸中修飾的所述天然表位。本文中關于本發(fā)明的所述肽而使用的所述術語“衍生物(derivative)”是指至少含有所述肽活性部分(即，能夠引起細胞溶解性cd4+t細胞活性)，并且除此之外還包含可以具有不同的目的如穩(wěn)定所述肽或改變所述肽的藥代動力學(pharmacokinetic)或藥效學(pharmacodynamic)性質的互補部分的分子。本文使用的所述術語，兩個序列的“序列一致性(sequenceidentity)”涉及當兩個序列比對時具有相同核苷酸或氨基酸的位置數(shù)目除以較短序列中的核苷酸或氨基酸的數(shù)目。具體而言，所述序列一致性為70％-80％，81％-85％，86％-90％，91％-95％，96％-100％，或100％。本文中的所述術語“肽編碼多核苷酸(peptide-encodingpolynucleotide)(或核酸)”和“編碼肽的多核苷酸(polynucleotideencodingpeptide)(或核酸)”是指在適當?shù)沫h(huán)境中表達時導致所述相關肽序列或其衍生物或同源物產生的核苷酸序列。這樣的多核苷酸或核酸包括編碼所述肽的正常序列，以及能夠表達具有所需活性的肽的這些核酸的衍生物和片段。編碼根據(jù)本發(fā)明的肽或其片段的核酸是編碼源自哺乳動物或對應于哺乳動物，最特別是人肽片段的肽或其片段的序列。所述術語“免疫失調(immunedisorder)”或“免疫疾病(immunedisease)”是指其中所述免疫系統(tǒng)的反應是負責或維持生物體中的功能失調或非生理狀況的疾病。免疫失調中包括過敏性疾病和自身免疫性疾病等。本文所用的所述術語“過敏性疾病”或“過敏性失調”是指特征為所述免疫系統(tǒng)對被稱為過敏原(如花粉，叮咬，藥物或食物)的特定物質的超敏反應的疾病。過敏是當特應性個體患者遇到已被致敏的過敏原時觀察到的體征(sign)和癥狀(symptom)的總體，這可能導致各種疾病，特別是呼吸系統(tǒng)疾病和癥狀如支氣管哮喘的發(fā)展。存在各種類型的分類，并且多數(shù)情況是過敏性疾病具有不同的名稱，這取決于哺乳動物身體發(fā)生的位置?！俺粜浴笔侵府敱┞队谝呀涀兊弥旅舻目乖瓡r個體中產生的不希望的(損害的，產生不適的，有時是致命的)反應；“立即超敏性(immeditatehypersensitivity)”取決于lge抗體的產生，因此等同于過敏。所述術語“自身免疫性疾病”或“自身免疫性失調”是指由生物體對其自身的細胞和組織由于生物體不能識別其自身的組成部分(直到亞分子水平)為“自我(self)”的異常免疫應答引起的疾病，這組疾病能夠分為器官特異性和全身性疾病兩類，“過敏原”定義為一種物質，通常是在傾向于，特別是遺傳上傾向性的個體(特應性)患者中引起lge抗體產生的大分子或蛋白質組合物。文獻liebersetal.(1996)clin.exp.allergy26，494-516中給出了相似的定義。所述術語“治療有效量”是指本發(fā)明的肽或其衍生物的量，其在患者體內產生所需的治療或預防效果。例如，關于疾病或病癥，其是在一定程度上減少所述疾病或病癥的一種或多種癥狀，并更特別是部分地或完全地恢復至正常的與所述疾病或病癥相關的或引起所述疾病或病癥的生理或生物化學參數(shù)的量。通常而言，治療有效量是本發(fā)明的所述肽或其衍生物的量，其將導致正常生理情況的改善或恢復。例如，當治療上用于治療受免疫疾病影響的哺乳動物時，其是日劑量肽/所述哺乳動物kg體重。可替代地，當通過基因療法進行給藥時，調整裸dna或病毒載體的量以確保局部產生本發(fā)明的肽，其衍生物或同源物的相關劑量。當涉及肽時，所述術語“天然”涉及所述序列與天然存在的蛋白質(野生型或突變體)的片段相同的事實。相比之下，所述術語“人工的”是指在自然界中不存在的這樣的序列。通過有限的修飾，如在天然存在的序列內改變/刪除/插入一個或多個氨基酸，或通過添加/除去天然存在的序列的n-或c-端的氨基酸而從所述天然序列獲得人工序列。在此上下文中，實現(xiàn)了通常在表位掃描的背景下，從抗原產生所述肽片段。碰巧的是(bycoincidence)，這種肽可以在其序列中包含mhcii類表位，并在其附近具有所述修飾的氧化還原基序h-x(0,2)-c-x(2)-[cst][seqidno:78，90或91]或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]的序列。本文中“附近”是指在mhcii類表位序列之間和在上述h-x(0,2)-c-x(2)-[cst][seqidno:78、90或91]或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]基序之間，能夠存在至多7個氨基酸，至多4個氨基酸，至多2個氨基酸，或甚至0個氨基酸(換句話說，表位和基序序列彼此緊鄰)的氨基酸序列。因此，本發(fā)明的具體實施方式排除了還意外包含彼此緊鄰或相隔最多達2，4或7個氨基酸的氨基酸序列的mhc類t細胞和氧化還原基序序列的抗原的肽片段。不管表位和基序修飾的氧化還原基序之間的間距，本發(fā)明的其它具體實施方式排除了意外地也包含mhcii類t細胞表位和氧化還原基序序列的抗原的肽片段。對于所述免疫原性性質對抗原的肽片段進行了研究，但通常不使用治療劑(除了過敏和腫瘤疫苗的領域之外)。因此，在沒有關于本發(fā)明的所述肽的改進性質的任何知識的情況下，這種肽作為藥物的使用是前所未有的。氨基酸在本文中以其全稱，其三字母縮寫或其一個字母縮寫進行指代。氨基酸序列的基序在本文中根據(jù)prosite的格式書寫?；蛴糜诿枋鲂蛄刑囟ú糠值哪撤N序列變化。所述符號x用于任何氨基酸被接受的位置。通過在方括號('[]')之間列出給定位置的所述可接受氨基酸而表示替代物。例如：[cst]代表選自cys，ser或thr的氨基酸。作為替代物排除的氨基酸通過將其列于大括號('{}')之間而指出。例如：{am}代表除ala和met之外的任何氨基酸。基序中的不同元件通過連字號-彼此分開。通過在所述元件后面括號之內放置數(shù)值或數(shù)值范圍就能夠指示基序內的相同元件的重復。例如：x(2)對應于x-x；x(2,5)對應于2，3，4或5個x氨基酸，a(3)對應于a-a-a。因此，h-c-x(2)-c[sedidno:80]能夠寫成hcxxc[sedidno:80]。同樣地，c-x(2)-c-x(0,2)代表三種可能性，其中h和c之間不存，存在一個或兩個氨基酸；即cxxch[seqidno:83]，cxxcxh[seqidno:94]和cxxcxxh[seqidno:95]。同樣h-x(0,2)-c-x(2)-c表示三種可能性，其中h和c之間不存在，存在一個或兩個氨基酸。即hcxxc[seqidno:80]，hxcxxc[seqidno:96]和hxxcxxc[seqidno:97]。為了區(qū)分所述氨基酸x，將h和c之間的那些稱為外部氨基酸x(在上述序列中單下劃線)，所述氧化還原基序內的那些稱為內部氨基酸x(在上述序列中雙下劃線)。x表示任何氨基酸，特別是l-氨基酸，更特別是所述20種天然存在的l-氨基酸中之一。具有還原活性的肽(包含t細胞表位和修飾的肽基序序列)，能夠針對抗原呈遞細胞產生抗原特異性的細胞溶解性cd4+t細胞群。因此，在其最廣泛的意義上，本發(fā)明涉及包含具有引發(fā)免疫反應的潛勢的抗原(自身或非自身)的至少一個t細胞表位，以及對肽二硫鍵具有還原活性的修飾的硫還原酶(thioreductase)序列基序的肽。所述t細胞表位和所述修飾的氧化還原基序序列可以在所述肽中彼此緊鄰或可選地相隔一個或多個氨基酸(所謂的連接子序列)。可選地，所述肽另外包含內體靶向序列和/或另外的“側翼”序列。本發(fā)明的所述肽包含具有引發(fā)免疫反應能力的抗原(自身或非自身)的mhcii類t細胞表位，以及修飾的氧化還原基序?？梢葬槍ζ溥€原巰基的能力測定所述肽中的基序序列的還原活性，如在胰島素溶解度分析測定中，其中在還原時，或使用熒光標記的底物如胰島素改變胰島素溶解度。在本申請的實驗部分中將會更詳細地描述這種分析測定的實施例。所述修飾的氧化還原基序可以位于所述t細胞表位的所述氨基端側或所述t細胞表位的羧基端。在硫還原酶(thioreductase)(其是包括谷氧還蛋白(glutaredoxin)，核鐵氧還蛋白(nucleoredoxin)，硫氧還蛋白(thioredoxin)和其他硫醇/二硫化物的氧化還原酶的小二硫化物還原酶)中會遇到具有還原活性的肽片段(holmgren(2000)antioxid.redoxsignal.2，811-820；jacquotetal.(2002)biochem.pharm.64，1065-1069)。它們是多功能的，普遍存在的(ubiquitous)，并發(fā)現(xiàn)于許多原核生物和真核生物中。它們通過保守的活性結構域一致序列內的氧化還原活性半胱氨酸，對蛋白質(如酶)上的二硫鍵發(fā)揮還原活性：c-x(2)-c[seqidno:71]，c-x(2)-s[seqidno:72]，c-x(2)-t[seqidno:73]，s-x(2)-c[seqidno:74]，t-x(2)-c[seqidno:75](fomenkoetal.(2003)biochemistry42，11214-11225；fomenkoetal.(2002)prot.science11，2285-2296)，其中x代表任何氨基酸。這種結構域也存在于更大的蛋白，如蛋白質二硫鍵異構酶(pdi)和磷酸肌醇特異性磷脂酶c中。根據(jù)例如fomenko和wo2008/017517可知的所述4氨基酸氧化還原基序，包含位置1和/或4處的半胱氨酸；因此所述基序是c-x(2)-[cst][seqidno:77]，或[cst]-x(2)-c[seqidno:76]。這種四肽序列將稱為“所述基序(motif)”，肽中的所述基序能夠是任何所述替代物c-x(2)-c[seqidno:71]，s-x(2)-c[seqidno:74]，t-x(2)-c[seqidno:75]，c-x(2)-s[seqidno:72]或c-x(2)-t[seqidno:73]。具體而言，肽包含所述序列基序c-x(2)-c[seqidno:71]。本發(fā)明的所述肽的所述“修飾的”氧化還原基序與現(xiàn)有技術的不同之處在于緊鄰半胱氨酸和所述基序之外存在組氨酸，換句話而言，所述修飾的氧化還原基序被寫成h-x(0,2)-c-x(2)-[cst][seqidno:78，90或91]或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]。其實施方式是h-xx-c-x(2)-[cst][seqidno:91]，h-x-c-x(2)-[cst][seqidno:90]，h-c-x(2)-[cst][seqidno:78]，[cst]-x(2)-c-xx-h[seqidno:93][cst]-x(2)-c-x-h[seqidno:92]和[cst]-x(2)-c-h[seqidno:79]，更具體的實施方式是h-c-x(2)-s[seqidno:81]，h-x-c-x(2)-s[seqidno:98]，h-xx-c-x(2)-s[seqidno:99]，h-c-x(2)-t[seqidno:82]，h-x-c-x(2)-t[seqidno:100]，h-xx-c-x(2)-t[seqidno:101]，s-x(2)-c-h[seqidno:84]，s-x(2)-c-x-h[seqidno:102]，s-x(2)-cxx-h[seqidno:103]，t-x(2)-c-h[seqidno:85]，t-x(2)-c-x-h[seqidno:104]，t-x(2)-c-xx-h[seqidno:105]，c-x(2)-c-h[seqidno:83]，c-x(2)-c-x-h[seqidno:94]，c-x(2)-c-xx-h[seqidno:95]，h-c-x(2)-c[seqidno:80]，h-x-c-x(2)-c[seqidno:96]，h-xx-c-x(2)-c[seqidno:97]。在本發(fā)明的具體實施方式中，具有h-c-x(2)-c-h[seqidno:86]基序的肽被排除在本發(fā)明的范圍之外。其它具體實施方式是其中所述氧化還原基序的半胱氨酸氨基酸側接兩個組氨酸序列如hchxc[seqidno:106]或cxxhch[seqidno:107]的肽。正如進一步對其的詳細說明，本發(fā)明的所述肽能夠通過化學合成制備，其允許引入非天然氨基酸。因此，上以上引述的氧化還原修飾的氧化還原基序中的“c”表示半胱氨酸，或表示具有硫醇基(巰基)的另一氨基酸，如巰基纈氨酸，高半胱氨酸或具有硫醇官能團的其它天然或非天然氨基酸。為了具有還原活性，存在于修飾的氧化還原基序中的半胱氨酸不應該作為胱氨酸二硫橋的一部分出現(xiàn)。然而，氧化還原修飾的氧化還原基序可以包含修飾的半胱氨酸，如甲基化半胱氨酸，其在體內被轉化成具有游離巰基的半胱氨酸。x能夠是所述20種天然氨基酸中任何一種，包括s，c或t，或能夠是非天然氨基酸。在具體實施方式中，x是具有小側鏈的氨基酸，如gly，ala，ser或thr。在進一步的具體實施方式中，x不是具有大體積(bulky)側鏈的氨基酸如trp。在進一步的具體實施方式中，x不是半胱氨酸。在進一步的具體實施方式中，所述修飾的氧化還原基序中的至少一個x是his。在其它進一步的具體實施方式中，所述修飾的氧化還原中的至少一個x是pro。肽可以進一步包括增加穩(wěn)定性或溶解度的修飾，如所述n-端nh2基團或c-端cooh基團的修飾(例如，將所述cooh修飾為conh2基團)。在本發(fā)明包含修飾的氧化還原基序的肽中，所述基序經過定位使得在所述表位配合到所述mhc溝槽中時，所述基序保留在所述mhc結合溝槽的外部。所述修飾的氧化還原基序置于所述肽內的表位序列緊鄰(換句話而言，基序和表位之間零氨基酸的連接子序列)，或與所述t細胞表位相隔包含7個氨基酸或更少的氨基酸序列的連接子。更具體而言，所述連接子包含1，2，3或4個氨基酸。具體實施方式是在表位序列和修飾的氧化還原基序序列之間具有0，1或2個氨基酸連接子的肽?？商娲?，連接子可以包含5，6，7，8，9或10個氨基酸。在所述修飾的氧化還原基序序列與所述表位序列相鄰的那些肽中，與所述表位序列相比，這指示為位置p-4至p-1或p+1至p+4。除了肽連接子之外，其它有機化合物能夠用作連接子而將所述肽的部分彼此連接(例如，將所述修飾的氧化還原基序序列連接至所述t細胞表位序列)。本發(fā)明的所述肽能夠進一步包含另外的包含所述t細胞表位和所述修飾的氧化還原基序的所述序列n或c端的短氨基酸序列。這種氨基酸序列通常在本文中被稱為“側翼序列(flankingsequence)”。側翼序列能夠位于所述表位和內體靶向序列之間和/或所述修飾的氧化還原基序和內體靶向序列之間。在某些不包含內體靶向序列的肽中，短氨基酸序列可以存在于所述肽中的所述修飾的氧化還原基序和/或表位序列的n和/或c端。更具體而言，側翼序列是1-7個氨基酸的序列，最特別的是2個氨基酸的序列。所述修飾的氧化還原基序可以位于所述表位的n-端。在所述修飾的氧化還原基序包含一個半胱氨酸的某些實施方式中，這種半胱氨酸存在于遠離所述表位的位置上的所述修飾的氧化還原基序中，因此所述修飾的氧化還原基序，例如，作為所述表位的n-端的h-c-x(2)-t[seqidno:82]或h-c-x(2)-s[seqidno:81]出現(xiàn)，或作為所述表位c-端的t-x(2)-c-h[seqidno:85]或s-x(2)-c-h[seqidno:84]出現(xiàn)。在本發(fā)明的某些實施方式中，提供了包含一個表位序列和修飾的氧化還原基序序列的肽。在進一步的具體實施方式中，所述修飾的氧化還原基序在所述肽中，例如，作為所述修飾的氧化還原基序的重復(其可以彼此間隔一個或多個氨基酸)或作為彼此緊鄰的重復出現(xiàn)了多次(1，2，3，4或甚至更多次)。可替代地，在所述t細胞表位序列的n和c端都提供一個或多個修飾的氧化還原基序。對本發(fā)明的所述肽設想的其它變體包括含有t細胞表位序列的重復的肽，其中每個表位序列在所述修飾的氧化還原基序之前和/或之后(例如，“修飾的氧化還原基序-表位”的重復或“修飾的氧化還原基序-表位-修飾的氧化還原基序”的重復)。在本文中，所述修飾的氧化還原基序都能夠具有相同的序列，但這不是必須的。注意，包含本身包含修飾的氧化還原基序的表位的肽的重復序列還將導致包含“表位”和“修飾的氧化還原基序”的序列。在這種肽中，一個表位序列內的所述修飾的氧化還原基序發(fā)揮了第二表位序列之外的修飾的氧化還原基序的功能。通常而言，本發(fā)明的所述肽僅包含一個t細胞表位。正如下所述，蛋白質序列中的t細胞表位能夠通過功能分析測試和/或二氧化硅預測分析測試中的一種或多種識別。t細胞表位序列中的所述氨基酸根據(jù)其在所述mhc蛋白的所述結合溝槽中的位置進行編號。存在于肽內的t細胞表位由8-25個氨基酸，更特別的是8-16個氨基酸，而最特別的是由8，9，10，11，12，13，14，15或16個氨基酸構成。在更具體的實施方式中，所述t細胞表位由9個氨基酸的序列構成。在進一步的具體實施方式中，所述t細胞表位是通過mhc-ii類分子[mhcii類限制性t細胞表位]呈遞于t細胞的表位。通常而言，t細胞表位序列是指所述八肽或更具體而言配合至mhcii蛋白質的所述裂隙(cleft)的九肽序列。本發(fā)明的所述肽的t細胞表位能夠對應于蛋白質的天然表位序列，或能夠是其修飾形式，條件是所述修飾的t細胞表位要保持其類似于所述天然t細胞表位序列在所述mhc裂縫內結合的能力。所述修飾的t細胞表位能夠具有與所述天然表位相同的對所述mhc蛋白的結合親和力，但也能夠具有降低的親和力。具體而言，所述修飾肽的結合親和力不低于所述原始肽的10倍更少，更具體而言不小于5倍更少。本發(fā)明的肽對蛋白質復合物具有穩(wěn)定化作用。因此，所述肽-mhc復合物的穩(wěn)定化作用補償了所述修飾的表位對于所述mhc分子的所述降低的親和力。包含所述t細胞表位和所述肽內的所述還原化合物的序列能夠進一步連接至促進所述肽攝入晚期內體(lateendosome)用于在mhcii類決定子內進行處理和呈遞的氨基酸序列(或另一種有機化合物)。所述晚期內體靶向是通過存在于蛋白質的細胞質尾部的信號介導的，并對應于良好識別的肽基序，如所述基于二亮氨酸的[de]xxxl[li][seqidno:87]或dxxll[seqidno:88]基序，基于酪氨酸的yxxφ[seqidno:89]基序或所謂的酸性簇基序。所述符號φ表示具有龐大的疏水性側鏈如phe、tyr和trp的氨基酸殘基。所述晚期內體靶向序列允許由mhc-ii類分子進行處理和有效地呈遞所述抗原衍生的t細胞表位。這種內體靶向序列，例如，包含于所述gp75蛋白(vijayasaradhietal.(1995)j.cell.biol.130，807-820)，所述人cd3γ蛋白，所述hla-bm11(copieretal.(1996)j.lmmunol.157，1017-1027)，所述dec205受體的細胞質尾(mahnkeetal.(2000)j.cellbiol.151，673-683)內。在文獻bonifacioandtraub(2003)annu.rev.biochem.72，395-447的綜述中公開了發(fā)揮對所述內體的信號排序功能(sorting)的肽的其它實例?？商娲兀鲂蛄心軌蚴莵碜缘鞍踪|的亞顯性(亞優(yōu)勢，subdominant)或次要(minor)t細胞表位的序列，其有助于晚期內體中的攝入而無需克服針對所述抗原的t細胞應答。所述晚期內體靶向序列能夠位于所述抗原衍生肽的氨基端或羧基端以有效攝入和加工，并也能夠通過側翼序列如最多達10個氨基酸的肽序列而連接。當使用次要t細胞表位完成靶向目的時，后者通常位于所述抗原衍生肽的氨基端。因此，本發(fā)明設想了抗原性蛋白的肽及其在引發(fā)特異性免疫反應中的用途。這些肽能夠對應于在其序列內包括相隔至多10個，優(yōu)選7個或更少氨基酸的還原化合物和t細胞表位的蛋白質的片段?？商娲?，對于大多數(shù)抗原性蛋白質，本發(fā)明的所述肽通過將還原化合物，更具體而言是如本文所述的還原修飾的氧化還原基序在n-端或c-端(直接與其相鄰，或者用至多10個，更具體而言至多7個氨基酸的連接子)連接至所述抗原性蛋白的t細胞表位而產生。此外，與天然存在的序列相比，所述蛋白質的t細胞表位序列和/或所述修飾的氧化還原基序能夠進行修飾和/或一個或多個側翼序列和/或靶向序列能夠引入(或進行修飾)。因此，取決于是否能夠在所關注的抗原性蛋白的序列內發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的特征，本發(fā)明的所述肽能夠包含“人工的”或“天然存在”的序列。本發(fā)明的所述肽能夠在長度上發(fā)生顯著變化。所述肽的長度能夠從13或14個氨基酸變化，即，由8-9個氨基酸的表位構成，與之相鄰，所述修飾的氧化還原基序具有所述組氨酸的5個氨基酸，最高達20，25，30，40，50，75，100或200個氨基酸。例如，肽可以包含40個氨基酸的內體靶向序列，約2個氨基酸的側翼序列，本文所述的5個氨基酸的基序，4個氨基酸的連接子和9個氨基酸的t細胞表位肽。因此，在具體實施方式中，所述完整的肽由13個氨基酸到最多50，75，100個或200個氨基酸構成。更具體而言，當所述還原化合物是如本文中所述的修飾的氧化還原基序時，則包含可選地通過連接子連接的所述表位和修飾的氧化還原基序的(人工或天然)序列(本文稱為“表位修飾的氧化還原基序”序列)的長度，沒有內體靶向序列，是很關鍵的。所述“表位修飾的氧化還原基序”更具體而言具有13，14，15，16，17，18或19個氨基酸的長度。這種13或14-19個氨基酸的肽能夠可選地連接于尺寸不太重要的內體靶向信號。如上所述，在具體實施方式中，本發(fā)明的所述肽包含與t細胞表位序列連接的如本文所述的還原性修飾的氧化還原基序。少量蛋白質序列，蛋白片段或合成肽可以一致地(bycoincidence)包含修飾的氧化還原基序序列。然而，這些蛋白質包含在所述修飾的氧化還原序列附近的mhc類t細胞表位的機會變得非常小。如果存在，則這種肽可能是從其中合成了重疊肽片段的組的表位掃描實驗獲知的。在這樣的出版物中，所述興趣轉移到所述表位并忽略了修飾的氧化還原基序與組氨酸的相關性以及這種肽在醫(yī)學應用中的相關性。因此，這種肽是意外公開的，與本發(fā)明的發(fā)明構思無關。在進一步的具體實施方式中，本發(fā)明的所述肽是包含不含在其天然序列內具有氧化還原性質的氨基酸序列的t細胞表位的肽。然而，在替代實施方式中，所述t細胞表位可以包含確保所述表位與所述mhc裂縫結合的任何氨基酸序列。在抗原性蛋白的所關注表位在其表位序列中包含本文中所述的修飾的氧化還原基序的情況下，根據(jù)本發(fā)明的免疫原性肽包含本文所述的修飾的氧化還原基序的序列和/或n-或c-端連接至表位序列的另一還原序列的序列，而使(與包埋于所述裂縫內的所述表位內存在的所述修飾的氧化還原基序相反)所述附連的修飾的氧化還原基序能夠確保所述還原活性。因此，所述t細胞表位和基序緊鄰或彼此分隔開并且不重疊。為了評價“緊鄰(immediatedlyadjacent)”或“分隔開(separated)”的概念，確定了適合于所述mhc裂縫的所述8或9個氨基酸序列，并確定了這八肽或九肽與所述修飾的氧化還原基序五肽之間的距離。通常而言，本發(fā)明的所述肽不是天然的(因此不存在這樣的蛋白質的片段)，而是包含除了t細胞表位之外的如本文所述的修飾的氧化還原基序的人工肽，由此所述修飾的氧化還原基序立即與所述t細胞表位相隔由最多7個，最特別是至多4個或至多2個氨基酸構成的連接子。已經證明，在向哺乳動物給藥(即，注射)根據(jù)本發(fā)明的所述肽(或包含這種肽的組合物)時，所述肽會引起識別所述抗原衍生t細胞表位的t細胞的活化，并通過表面受體的還原而向所述t細胞提供額外的信號。這種超最佳激活作用導致t細胞獲得呈遞所述t細胞表位的所述細胞的細胞溶解性質，以及對旁觀t細胞的抑制性質。以這種方式，包含本發(fā)明中所描述的肽的所述肽或組合物(其含有抗原衍生t細胞表位，和在所述表位外的修飾的氧化還原基序)能夠用于直接免疫哺乳動物，包括人類。因此，本發(fā)明提供了本發(fā)明適用作藥物的肽或其衍生物。因此，本發(fā)明提供了包括向有需要的患者給予根據(jù)本發(fā)明的一種或多種肽的治療方法。本發(fā)明提供了藉此能夠通過用小肽免疫引起賦予細胞溶解性質的抗原特異性t細胞的方法。據(jù)發(fā)現(xiàn)，含有(i)編碼來自抗原的t細胞表位的序列和(ii)具有氧化還原性質的一致序列，并也可選地包含有助于將所述肽攝入晚期內體內進行有效的mhc-ii型呈遞的序列的肽，會引發(fā)抑制t細胞。本發(fā)明的所述肽的免疫原性質在治療和預防免疫反應中是特別感興趣的。本文所述的肽用作藥物，更特別的是用于制備用于預防或治療哺乳動物，更具體而言是人的免疫疾病的藥物。本發(fā)明描述了通過使用本發(fā)明的所述肽、其同源物或衍生物治療或預防需要這種治療或預防的哺乳動物的免疫病癥的方法，所述方法包括向所述遭受免疫疾病或處于其風險中的哺乳動物給予治療有效量的本發(fā)明的所述肽、其同源物或衍生物從而減少所述免疫病癥的癥狀的步驟。本發(fā)明設想了人類和動物如寵物和農場動物的治療。在一個實施方式中，待治療的哺乳動物是人。以上所指的免疫疾病在具體實施方式中選自過敏性疾病和自身免疫疾病。過敏性疾病通常被描述為1型介導的疾病或lge介導的疾病。過敏性疾病的臨床表現(xiàn)包括支氣管哮喘，過敏性鼻炎，特應性皮炎，食物超敏反應和對昆蟲叮咬或藥物的過敏反應。過敏性疾病是由所述免疫系統(tǒng)對稱之為過敏原(如花粉，叮咬(sting)，藥物或食物)的特異性物質的超敏性反應引起的。過敏性疾病最嚴重的形式是過敏性休克，這是一種醫(yī)療緊急情況。過敏原包括空氣中的過敏原，如房塵螨，寵物和花粉的那些。過敏原還包括負責食物超敏性的攝食過敏原，包括水果，蔬菜和牛奶。為了治療上述疾病，根據(jù)本發(fā)明的肽由已知的或被認為是所述疾病的致病因素的所述抗原性蛋白或過敏原產生。能夠用于選擇t細胞表位的過敏原通常是選自由以下這些組成的組中的過敏原：花生中存在的食物過敏原，魚例如鱈魚(codfish)，蛋白，甲殼類例如蝦，奶例如牛奶，小麥，谷物，薔薇科(rosaceafamily)的果實(蘋果，李子，草莓)，百合科(liliacea)、十字花科(cruciferae)、茄科(solanaceae)和傘形科(umbelliferae)的植物，樹堅果，芝麻，花生，大豆和其它豆科(legume)過敏原，香料(spices)，甜瓜，鱷梨(avocado)，芒果，無花果(fig)，香蕉，....，獲自塵螨屬(dermatophagoidesspp)或歐洲室塵蟎(d.pteronyssinus)，粉塵螨(d.farinae)和微角塵螨(d.microceras)，梅氏嗜酶蟎(euroglyphusmaynei)或無爪螨屬(blomiasp.)的房塵螨過敏原，來自存在于蟑螂(cockroach)或膜翅目(hymenoptera)中存在的昆蟲的過敏原，來自花粉特別是樹木、草(grass)和雜草(weed)的花粉的過敏原，來自動物特別是貓、狗、馬和嚙齒動物的過敏原，來自真菌特別是來自曲霉屬(aspergillus)、交鏈孢霉(altemaria)或分子孢子菌屬(cladosporium)的過敏原，以及諸如乳膠、淀粉酶等的產品中存在的職業(yè)過敏原。作為關于過敏原的實例，在本發(fā)明的上下文中，所述derp2肽cgfssnycqiyppnankir[seqidno:9]在hcgfssnycqiyppnankir[seqidno:10]或hcgfcsnycqiyppnankir[seqidno:11]進行修飾。作為進一步的實例，關于過敏原所述derp2肽chgsepciihrgkpf[seqidno:12]，被修飾為hchgsepciihrgkpf[seqidno:13]，hchgcepciihrgkpf[seqidno:14]，更典型地修飾為hcxgsepciihrgkpf[seqidno:15]或hcxgcepciihrgkpf，其中x不是his或cys[seqidno:16]。作為關于過敏原的進一步實例，所述β-乳球蛋白肽chgcaqkkiiaek[seqidno:17]被修飾為hchgcaqkkiiaek[seqidno:18]，更典型地為hcxgcaqkkiiaek，其中x不是cys或his[seqidno:19]。作為自體免疫疾病的實例，所述甲狀腺過氧化物酶肽cgpcmneelterl[seqidno:20]被修飾為hcgpcmneelterl[seqidno:21]。作為自身免疫疾病的實例，所述甲狀腺球蛋白肽cgpsaaltwvqth[seqidno:22]被修飾為hcgpcaaltwvqth[seqidno:23]。本發(fā)明進一步涉及具有所述包含通過基因療法和基因疫苗接種中使用的病毒載體的所述骨架編碼的病毒蛋白的mhcii類t細胞表位的改性氧化還原基序的肽。本發(fā)明進一步涉及治療或預防對病毒載體的免疫原性應答的方法。病毒載體(例如，來自腺病毒，腺相關病毒，皰疹病毒或痘病毒，逆轉錄病毒或慢病毒)和病毒蛋白(例如，衣殼蛋白)的實例公開與wo2009101204中。作為本發(fā)明教導的一個實例，所述腺病毒肽chgcptllyvlfev[seqidno:24]被修飾為hchgcptllyvlfev[seqidno:25]，更典型修飾為hcxgcptllyvlfev，其中x不是cys或his[seqidno:26]。作為進一步的實例，腺病毒晚期蛋白2肽cgpcggyvpfhiqvp[seqidno:27]被修飾為hcgpcggyvpfhiqvp[seqidno:28]。本發(fā)明進一步涉及具有所述包含胞內病原體的蛋白質的mhcii類t細胞表位的改性氧化還原基序的肽。本發(fā)明進一步涉及治療和預防具有胞內病原體的感染的方法。胞內病原體(病毒[dnavsrna病毒，ssvsds病毒，細菌，分枝桿菌或具有胞內生命周期的寄生蟲)和抗原的實例在wo2009101208進行了討論(例如，皰疹病毒，黃病毒和小核糖核酸病毒，流感病毒，麻疹病毒和免疫缺陷病毒，乳頭狀瘤病毒(papilloviruses)。細菌和分枝桿菌包括結核分枝桿菌，以及人類或動物病原性的其他分枝桿菌如耶爾辛氏菌亞科(yersiniae)，布魯氏桿菌族(brucellae)，衣原體(chlamydiae)，支原體(mycoplasmae)，立克次體(rickettsiae)，沙門氏菌(salmonellae)和志賀氏菌(shigellae)。寄生蟲包括瘧原蟲，利士曼原蟲(leishmanias)，錐體蟲(trypanosomas)，剛地弓形蟲(toxoplasmagondii)，李斯特菌(listeriasp.))，組織胞漿菌(histoplasmasp)。作為進一步的實例，瘧疾cghcdkhieqylk[seqidno:29]的所述csp抗原，被修飾為hcghcdkhieqylk[seqidno:30]，更典型地被修飾為hcgxcdkhieqylk，其中x不是cys或his[seqidno:31]。作為進一步的實施例，相同抗原的所述cghcekkickmek[seqidno:32]肽被修飾為hcghcekkickmek[seqidno:33]，更典型地被修飾為hcgxcekkickmek[seqidno:34]，其中x不是cys或his。作為進一步的實例，來自流感病毒血凝素的肽從cghckyvkqntlk[seqidno:35]被修飾為hcghckyvkqntlk[seqidno:36]，更典型地修飾為hcgxckyvkqntlk，其中x不是cys或his[seqidno:37]。作為進一步的實例，來自利什曼原蟲缺乏(leishmanialack)抗原cghcehpivvsgs[seqidno:38]的肽被修飾為hcghcehpivvsgs[seqidno:39]，更典型地被修飾為hcgxcehpivvsgs，其中x不是cys或his[seqidno:40]。作為進一步的實例，hiv的所述env蛋白的gp120亞單元的所述肽，從cghcramyappia[seqidno:41]被修飾為hcghcramyappia[seqidno:42]，更典型地被修飾為hcgxcramyappia，其中x不是cys或his[seqidno:43]。本發(fā)明進一步涉及具有包含如在置換療法中使用的水溶性外源因子(allofactor)的mhcii類t細胞表位的所述改性氧化還原基序的肽。本發(fā)明進一步涉及治療和預防針對可溶性外源因子的免疫反應的方法?？扇苄酝庠匆蜃拥膶嵗_于wo2009101206中。作為本發(fā)明的一個實例，b02c11抗體的所述vh區(qū)的互補性決定區(qū)(cdr)3的肽(針對因子viii，chgcycavpddpda[seqidno:44])，被修飾為hchgcycavpddpda[seqidno:45]，更典型地修飾為hcxgcycavpddpda，其中x不是cys或his[seqidno:46]。作為進一步的實例，源自另一抗因子(anti-factor)viii抗體的所述肽，cghcggirlhpthysir[seqidno:47]被修飾為hcghcggirlhpthysir[seqidno:48]，更典型地修飾為hcgxcggirlhpthysir，其中x不是cys或his[seqidno:49]。本發(fā)明進一步涉及具有包括腫瘤相關抗原的mhcii類t細胞表位的所述改性氧化還原基序的肽。本發(fā)明進一步涉及治療和預防腫瘤的方法。相關的腫瘤(例如，癌基因，原癌基因，病毒蛋白，存活因子，克隆型決定子)和腫瘤相關抗原的實例公開于wo2009101205中。這種腫瘤相關抗原包括腫瘤引起病毒的病毒抗原如hpv，具有野生型序列但在腫瘤中具有增加的表達的患者腫瘤相關抗原，或具有通過點突變、缺失、框架漂移(frameshift)或染色體重排的突變序列的抗原。作為本發(fā)明的教導的一個實例，所述mage-3肽chgcyrqvpgsdp[seqidno:50]被修改為hchgcyrqvpgsdp[seqidno:51]，更典型地修飾為hcxgcyrqvpgsdp，其中x不是cys或his[seqidno:52]。作為進一步的實例，所述細胞周期蛋白(cyclin)d肽chgcfvalcatdv[seqidno:53]被修飾為hchgcfvalcatdv[seqidno:54]，更典型地修飾為hcxgcfvalcatdv，其中x不是cys或his[seqidno:55]。作為進一步的實例，所述幸存肽(survivingpeptide)chgcfkelegwep[seqidno:56]被修飾為hchgcfkelegwep[seqidno:57]，更典型地修飾為hcxgcfkelegwep，其中x不是cys或his[seqidno:58]。作為進一步的實例，所述愛潑斯坦巴爾(epsteinbarr)病毒肽chgcvassyaaaq[seqidno:59]被修飾為hchgcvassyaaaq[seqidno:60]，更典型地修飾為hcxgcvassyaaaq，其中x不是cys或his[seqidno:61]。本發(fā)明進一步涉及具有包括異基因移植物(allograft)的同種異體抗原性蛋白(alloantigenicprotein)的mhcii類t細胞表位的所述改性氧化還原基序的肽。本發(fā)明進一步涉及治療和預防異基因移植物排異的方法。實例有骨髓移植物，實體器官移植物如腎臟、肺、心臟、肝臟、胰臟、骨或皮膚，或諸如臍帶血細胞移植物、干細胞移植物或胰島細胞移植物的細胞移植物。同種異體抗原性蛋白的實例公開于wo2009100505中，如次要組織相容性抗原，主要組織相容性抗原或組織特異性抗原。作為本發(fā)明的實例，來自鼠dby抗原的肽chgcfnsnranss[seqidno:62]被修飾為hchgcfnsnranss[seqidno:63]，更具體而言修飾為hcxgcfnsnranss，其中x不是cys或his[seqidno:64]。在另一實例中，來自人dby的序列cghclvlaptrel[seqidno:65]，被修飾為hcghclvlaptrel[seqidno:66]，更具體而言修飾為hcgxclvlaptrel，其中x不是cys或his[seqidno:67]。在另一個實例中，所述鼠黑6菌株特異性肽cghcpefleqkra[seqidno:68]被修飾為hcghcpefleqkra[seqidno:69]，更典型地修飾為hcgxcpefleqkra，其中x不是cys或his[seqidno:70]。對于所有上述的肽，設想了其他變體，其中在組氨酸和半胱氨酸之間，存在一個或兩個氨基酸x。通常而言，這些外部氨基酸x不是his，cys，ser或thr。本發(fā)明的所述肽也能夠用于體外診斷方法用于檢測樣品中的ii類限制性cd4+t細胞。在這種方法中樣品與mhcii類分子和根據(jù)本發(fā)明的肽的復合物接觸。通過測定所述復合物與所述樣品中的細胞的所述結合而檢測所述cd4+t細胞，其中所述復合物與細胞的所述結合是cd4+t細胞在樣品中存在的指示。所述復合物能夠是所述肽和mhcii類分子的融合蛋白?？商娲?，所述復合物中的mhc分子是四聚體。所述復合物能夠作為可溶性分子提供或能夠附連于載體。對應于適合本發(fā)明的上下文中使用的抗原性蛋白(或免疫原)的所述t細胞表位通常是通用的或混雜的t細胞表位(即，能夠結合到大多數(shù)所述mhcii類分子的t細胞表位)，更具體而言存在于空氣攜帶的過敏原或食物攜帶的過敏原。在具體實施方式中，所述過敏原選自由鼻-鼻竇炎過敏原，過敏性支氣管哮喘過敏原和特應性皮炎過敏原組成的組中。過敏原也能夠是存在于霉或各種藥物如激素、抗生素、酶等中的主要過敏原(也參見clin.exp.allergy26，494-516(1996)和r.bush主編的過敏和免疫學的分子生物學(molecularbiologyofallergyandimmunology)(1996)的定義)。涉及特異性過敏性疾病的其它過敏原在本領域中也是眾所周知的并能夠在互聯(lián)網，例如，在www.allergome.org上找到。自身免疫疾病大致分為兩大類，器官特異性和全身性疾病。全身性自身免疫性疾病的精確病因還并未確定。與此相反，器官特異性自身免疫疾病涉及包括b細胞和t細胞的特異性免疫應答，其靶向所述器官，由此誘導和維持局部炎癥的慢性狀態(tài)。器官特異性自體免疫疾病的實例包括1型糖尿病，重癥肌無力(myastheniagravis)，甲狀腺炎和多發(fā)性硬化。在每一種這些病癥中，單個或少數(shù)自體抗原已經分別確定，包括胰島素，乙酰膽堿肌肉受體，甲狀腺過氧化物酶和主要堿性蛋白。公認的是，這種器官特異性免疫應答的抑制作用是有益的，并會導致器官功能的部分或完全恢復。然而，還沒有將能以病原特異性方式抑制這種免疫應答的療法。目前的療法相反卻利用通過使用糖皮質激素和免疫抑制劑獲得的非特異性抑制作用，全部表現(xiàn)出與其特異性缺乏相關的顯著副作用，從而限制了其用途和其整體效果。本發(fā)明中涉及的器官特異性自身免疫性疾病和自身抗原的實例的非限制性列表(它們都設想于本發(fā)明上下文中)為：根據(jù)本發(fā)明，提供了免疫原性肽，其包含具有觸發(fā)免疫反應的能力的抗原(自或非自身)的t細胞表位。在一個具體的實施方式中，所述t細胞表位是顯性(dominant)t細胞表位。因此，在具體的實施方式中，本發(fā)明的治療和預防方法包括給予如本文中所述的免疫原性肽，其中所述肽包含在要治療的疾病中發(fā)揮作用的抗原性蛋白的t細胞表位(例如，如上面描述的那些)。在進一步的具體實施方式中，所使用的表位是一種顯性表位。本發(fā)明進一步涉及生產具有mhcii類t細胞表位和修飾的氧化還原基序的肽的方法。在第一步驟中，所述方法包括提供所關注的抗原性蛋白的序列和識別所述抗原中的mhcii類t細胞表位序列的步驟。表位序列也可以對于所考慮的所述抗原性蛋白進行描述?？商娲兀鼈兺ㄟ^在計算機方法(silicomethod)，體外方法或體內方法中進行確定。此外，所述抗原性蛋白對于所述修飾的氧化還原基序的存在進行篩選，這在計算機方法中不需要特異性。具有非常小的，但存在的機會是，抗原性蛋白在其序列中緊鄰t細胞表位序列(即，與所述t細胞表位相隔7個或更少氨基酸)包含h-x(0,2)c-x(2)-[cst][seqidno:78，90或91]或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]基序。如果如此，包含t細胞表位和基序的所述抗原性蛋白的片段能夠用于本發(fā)明的方法和用途。在這種蛋白中的所述表位可能已經在現(xiàn)有技術中進行討論，但所述存在，更不用說，這種修飾的氧化還原基序的相關性并沒有進行討論。因此，在現(xiàn)有技術中，并沒有動機選擇這種肽片段，或使用這種肽片段用于本文中所述方法。在某些實施方式中，其中所述肽基于包含mhcii類t細胞表位和修飾的氧化還原基序的蛋白的片段，從而肽序列可以通過改變所述表位和所述修飾的氧化還原基序之間的序列的長度，將所述連接子(linker)序列中的氨基酸改變，將所述基序中的ser或thr變成半胱氨酸或改變所述基序中一個或兩個x位置上的氨基酸而進一步修飾。適用于肽設計的其他抗原性蛋白可以在其序列中包含h-x(0,2)-c-x(2)-[cst][seqidno:78，90或91]或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]序列，其進一步遠離mhcii類t細胞表位(離開所述表位序列超過7個氨基酸)。在這種情況下，能夠生產肽，其中僅所述表位和所述基序之間的距離縮短，并由此保留了所述基序的序列和鄰近氨基酸。如果認為合適，所述基序之外的氨基酸，所述基序內的絲氨酸或蘇氨酸或一個或兩個x位置被改變。更一般而言，適用于肽設計的抗原性蛋白將會在它們的蛋白序列中不含h-x(0,2)-c-x(2)-[cst][seqidno:78，90或91]或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]序列。根據(jù)本發(fā)明的肽將通過合成肽而制備，其中t細胞表位和修飾的氧化還原基序將會相隔0至7個氨基酸。在某些實施方式中，所述修飾的氧化還原基序能夠通過在所述表位序列之外引入1，2或3個突變而獲得，以保持所述蛋白質中出現(xiàn)所述序列內容(sequencecontext)。通常p-2和p-1，以及在p+10及p+11中的氨基酸(參照作為所述天然序列的部分的所述九肽(nonapeptide))被保留于所述肽序列。這些側翼殘基一般而言會穩(wěn)定對mhcii類的結合。在其它實施方式中，所述表位的n-端或c-端序列將與含所述t細胞表位序列的所述抗原性蛋白質的序列無關。在其他具體的實施方式中，肽通過用t細胞表位和c-x(2)-[cst][seqidno:77]或[cst]-x(2)-c[seqidno:76]基序修飾肽而制備(如wo2008/017517中公開的)。組氨酸添加或氨基酸修飾成組氨酸導致了本發(fā)明的肽具有h-x(2,0)-c-x(2)-[cst][seqidno:78，90或91]或[cst]-x(2)-c-x(0,2)-h[seqidno:79，92或93]序列。因此，基于設計肽的上述方法，通過化學肽合成、重組表達方法或在更例外的情況下，蛋白水解或蛋白質的化學斷裂(chemicalfragmentation)來產生肽。如在上述方法中產生的肽能夠用于體外和體內方法中t細胞表位的存在進行測試，能夠在體外分析測試中測試其還原活性。作為最后的質量控制，所述肽能夠在體外分析測試中進行測試，以驗證所述肽是否能夠產生經由呈遞所述抗原(包含也存在于所述具有所述修飾的氧化還原基序的肽中的表位序列)的抗原呈遞細胞的細胞凋亡途徑的屬于細胞溶解性的cd4+t細胞。從抗原性蛋白識別和選擇適合于本發(fā)明上下文中使用的t細胞表位對于本領域技術人員而言是已知的。為了識別適合于本發(fā)明的上下文中使用的表位，抗原性蛋白的分離的肽序列通過，例如，t細胞生物學技術進行測試以確定所述肽序列是否會引發(fā)t細胞應答。那些據(jù)發(fā)現(xiàn)能夠引發(fā)t細胞應答的肽序列被定義為具有t細胞刺激活性。人t細胞刺激活性能夠進一步通過采用源自所述過敏原的肽/表位培養(yǎng)從對于，例如，螨過敏原敏感的個體(即，對于螨過敏原具有ige介導的免疫應答的個體)獲得的t細胞，并確定t細胞是否響應所述肽/表位發(fā)生增殖而進行測試，例如，通過氚代胸苷(tritiatedthymidine)的細胞攝取測定的。通過t細胞對肽/表位的響應的刺激指數(shù)能夠計算為響應于肽/表位的最大cpm除以對照cpm。t細胞刺激指數(shù)(s.i.)等于或大于2倍所述背景水平被認為是“陽性”。陽性結果用于計算每種肽/表位對于所測試的肽/表位的組的平均刺激指數(shù)。非天然的(或修飾的)t細胞表位能夠進一步可選地測試其對mhcii類分子的結合親和力。這能夠用不同的方式進行實施。例如，可溶性hlaii類分子通過溶解對于給定ii類分子純合的(homozygous)細胞而獲得。后者(給定ii類分子)通過親和色譜法純化?？扇苄詉i類分子采用根據(jù)其對所述ii類分子的強結合親和力產生的生物素標記對照肽進行孵育。對于ii類結合進行評價的肽隨后以不同的濃度孵育，并且它們的從其ii類結合中置換所述對照肽的能力通過加入中性抗生物素蛋白(neutravidin)進行計算。方法能夠例如在文獻texieretal.，(2000)j.immunology164，3177-3184中發(fā)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明，t細胞表位的免疫原性性質通過將其連接至具有增強的還原性能的所述修飾的氧化還原基序而增加。具體而言，包含至少一個t細胞表位和所述修飾的氧化還原基序的本發(fā)明的肽(如本文所述)具有大于或等于2.0的平均t細胞刺激指數(shù)。具有大于或等于2.0的t細胞刺激指數(shù)的肽被認為作為治療劑是有用的。更具體而言，根據(jù)本發(fā)明的肽具有至少2.5，至少3.5，至少4.0，或甚至至少5.0的平均t細胞刺激指數(shù)。此外，肽通常具有至少約100，至少150，至少約200或至少約250的陽性指數(shù)(positivityindex)(p.i.)。肽的陽性指數(shù)通過所述平均t細胞刺激指數(shù)乘以在具有免疫應答的個體群(例如，對房塵螨敏感)(例如，至少9個個體，至少16個個體或至少29或30，或甚至更多)中具有對所述肽應答的t細胞的個體的百分數(shù)(因此，對應于所述si乘以所述肽/表位的所述混雜性質(promiscuousnature))而確定。因此，所述陽性指數(shù)代表t細胞對肽應答的強度(s.i.)和在具有對房塵螨敏感的免疫應答(例如)的個體群中對于肽的t細胞應答的頻率兩者。為了通過，例如，精確繪圖技術(finemappingtechnique)確定最佳t細胞表位，具有t細胞刺激活性以及由此包含至少一個t細胞表位的肽(如通過t細胞生物學技術測定)，通過在所述肽的氨基-或羧基端加入或缺失氨基酸殘基進行修飾并經過測試而確定對于所述修飾的肽t細胞反應性的變化。如果發(fā)現(xiàn)兩個或更多個在所述天然蛋白序列中共享重疊的區(qū)域的肽具有人t細胞刺激活性(如通過t細胞生物學技術測定)，則就能夠生產出包括所有或部分這種肽的額外的肽，以及這些額外的肽能夠通過類似的程序進行測試。按照這種技術，肽被篩選出并進行重組地或合成地生產。t細胞表位或肽基于各種因素，包括對于所述肽/表位所述t細胞響應的強度(例如，刺激指數(shù))和在個體群中對于所述肽的所述t細胞應答的頻率進行選擇。另外和/或可替代地，一個或多個體外算法能夠用于識別抗原性蛋白中的t細胞表位序列。合適的算法包括，但不限于，文獻zhangetal.(2005)nucleicacidsres33，w180-w183(predbalb)；salomon&flower(2006)bmcbioinformatics7，501(mhcbn)；schuleretal.(2007)methodsmol.biol.409，75-93(syfpeithi)；donnes&kohlbacher(2006)nucleicacidsres.34，w194-w197(svmhc)；kolaskar&tongaonkar(1990)febslett.276，172-174，guanetal.(2003)appl.bioinformatics2，63-66(mhcpred)和singhandraghava(2001)bioinformatics17，1236-1237(propred)中描述的那些。更具體而言，這種算法允許在抗原性蛋白中預測將會匹配于mhcii分子的所述溝槽的一個或多個八-或九-肽序列，以及這針對不同hla型。本發(fā)明的所述肽能夠使用重組dna技術，在細菌、酵母、昆蟲細胞、植物細胞或哺乳動物細胞中產生。鑒于所述肽的有限長度，它們能夠通過化學肽合成而制備，其中肽通過不同的氨基酸相互連接而制備?；瘜W合成特別適合于包含，例如，d-氨基酸，具有非天然存在的側鏈的氨基酸或具有修飾的側鏈的天然氨基酸如甲基化的半胱氨酸?；瘜W肽合成方法進行了充分描述以及肽能夠從多個公司，諸如appliedbiosystems公司和其他公司訂購。肽合成能夠按照固相肽合成(spps)或與溶液相肽合成相反進行實施。所述最有名的spps方法是t-boc和fmoc固相化學：在肽合成期間使用了多種保護基。例如，羥基和羧基官能團通過叔丁基保護，賴氨酸和色氨酸通過t-boc基團保護，而天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸和組氨酸通過三苯甲基保護，并且精氨酸通過所述pbf基團進行保護。如果合適，這種保護基團能夠在合成后保留于所述肽上。肽能夠使用由kent(schnelzer&kent(1992)lnt.j.pept.proteinres.40，180-193)首次描述并例如在文獻tametal.(2001)biopolymers60，194-205中綜述的連接技術(ligationstragegy)(2個未受保護的肽片段的化學選擇性連接)相互連接而形成更長的肽，提供了實現(xiàn)超出spps范圍的蛋白合成的巨大潛力。具有100-300殘基的許多蛋白質通過這種方法成功合成。合成肽繼續(xù)在生物化學、藥理學、神經生物學、酶學和分子生物學的領域中繼續(xù)發(fā)揮越來越增長的至關重要的作用(因為在所述spps中的巨大進步)?？商娲兀鲭哪軌蛲ㄟ^使用在包括所述編碼核苷酸序列的合適表達載體中編碼本發(fā)明的所述肽的核酸分子進行合成。這種dna分子可以使用自動化dna合成儀和所述遺傳密碼的所述公知的密碼子-氨基酸關系而易于制備。這種dna分子也可以使用寡核苷酸探針和常規(guī)雜交方法作為基因組dna或作為cdna而獲得。這種dna分子可以引入到適于在合適的宿主如細菌，例如，大腸桿菌、酵母細胞、動物細胞或植物細胞中表達所述dna和生產所述多肽的表達載體，包括質粒中。感興趣的肽的物理和化學性質(例如，溶解度，穩(wěn)定性)經過檢測以確定所述肽是否適合用于治療組合物。通常而言，這通過調節(jié)所述肽的序列而優(yōu)化。可選地，所述肽能夠在合成后(化學修飾，例如，添加/缺失官能團)使用本領域中已知的技術進行修飾。它們自己的t細胞表位被認為通過結合至抗原呈遞細胞的表面上的合適hla分子并刺激所述相關t細胞亞群從而以所述t輔助細胞的水平引發(fā)早期事件。這些事件導致t細胞增殖，淋巴因子分泌，局部炎癥反應，附加免疫細胞向所述位點的募集和導致抗體產生的b細胞級聯(lián)的活化。這些抗體的一個亞型，ige，在過敏癥狀的發(fā)展中是基本上重要的，以及其生產通過所述分泌的淋巴因子的性質在事件的級聯(lián)中在所述t輔助細胞的水平上早期受到影響。t細胞表位是通過其中所述表位包括對于受體識別至關重要的氨基酸殘基(其在所述蛋白的氨基酸序列中是連續(xù))的t細胞受體識別的所述基本元件或最小單元。然而，在給予具有t細胞表位和氧化還原基序的肽時，以下事件據(jù)信會發(fā)生：抗原(ⅰ)特異性t細胞的激活，由與通過mhc-ii類分子呈遞的所述抗原衍生的肽同源相互作用(cognateinteraction)而產生；所述還原酶序列還原t細胞表面蛋白，如所述cd4分子。其中的所述第二結構域包含受約束的二硫鍵橋。這會將信號轉導至t細胞中。在一系列涉及提高的氧化途徑的結果中，重要的事件是鈣流入(calciuminflux)增加和所述nf-κb轉錄因子向所述細胞核的轉移。后者導致ifn-γ和粒酶(granzyme)的轉錄增加，這允許細胞經由凋亡誘導機制獲得細胞溶解性質；所述細胞溶解性質通過涉及粒酶b分泌，以及fas-fasl相互作用的機制影響呈遞所述肽的細胞。由于所述細胞殺滅作用通過細胞凋亡途徑獲得，細胞溶解性細胞是比細胞毒性細胞更適合于這些細胞的術語。所述抗原呈遞靶細胞的破壞防止對于位于所述相同抗原，或將會用相同的抗原呈遞細胞進行處理的無關抗原上的表位具有特異性的其他t細胞的活化；t細胞活化的附加結果是通過細胞-細胞接觸依賴性機制抑制旁觀者t細胞的活化。在這種情況下，通過由不同抗原呈遞細胞呈遞的抗原激活的t細胞也受抑制，條件是細胞溶解性和旁觀者t細胞二者緊鄰，即在相同抗原呈遞細胞的表面上激活。上述假定的作用機制采用以上引用的pct申請中和本發(fā)明人的出版物中公開的實驗數(shù)據(jù)證實(substantiate)。本發(fā)明提供了用于體內或體外產生抗原特異性細胞溶解性cd4+t細胞的方法，及其獨立地，從其他細胞群如foxp3+treg中基于特性表達數(shù)據(jù)區(qū)分出細胞溶解性cd4+t細胞的方法。本發(fā)明描述了用于生產抗原特異性cd4+t細胞的體內方法。一個具體實施方式涉及通過采用如本文中描述的本發(fā)明的所述肽免疫動物(包括人)并隨后從所述免疫動物中分離出所述cd4+t細胞而生產或分離所述cd4+t細胞的方法。本發(fā)明描述了生產針對apc的抗原特異性細胞溶解性cd4+t細胞的體外方法。本發(fā)明提供了用于產生對于apc的抗原特異性細胞溶解性cd4+t細胞的方法。在一個實施方式中，提供了包括外周血細胞的分離，通過根據(jù)本發(fā)明的免疫原性肽的體外的所述細胞群的刺激和，更具體而言在il-2的存在下的所述刺激的細胞群的擴增的方法。本發(fā)明的所述方法具有以下優(yōu)點：產生大量的cd4+t細胞并且(通過使用包含抗原特異性表位的肽)能夠產生對所述抗原性蛋白具有特異性的cd4+t細胞。在替代實施方式中，能夠在體內，即通過向受試者注射本文中描述的所述免疫原性肽并收集所述體內產生的所述細胞溶解性cd4+t細胞而生產cd4+t細胞。通過本發(fā)明的所述方法可獲得的所述對于apc的抗原特異性細胞溶解性cd4+t細胞，對于免疫療法在預防過敏反應和自身免疫疾病的治療中向哺乳動物給藥是特別感興趣的。使用同種異體(allogenic)和自體(autogeneic)細胞都進行了設想。細胞溶解性cd4+t細胞群如下面所述獲得。如本文中描述的抗原特異性細胞溶解性cd4+t細胞能夠用作藥物，更具體而言適用于過繼性細胞療法，更具體而言用于急性過敏反應和自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化癥的復發(fā)的治療。分離的細胞溶解性cd4+t細胞或細胞群，更具體而言如所述產生的抗原特異性細胞溶解性cd4+t細胞群，適用于制造用于預防或治療免疫病癥的藥物。公開了通過使用所述分離的或產生的細胞溶解性cd4+t細胞的治療方法。正如wo2008/017517中的解釋，對于apc的細胞溶解性cd4+t細胞能夠基于所述細胞的表達特性從天然treg細胞中區(qū)分出來。更具體而言，細胞溶解性cd4+t細胞群相比于天然treg細胞群具有以下的特性的一種或多種：一旦激活，包括cd103、ctla-4、fasl和icos的表面標記物的表達增加，cd25的中間表達，cd4、icos、ctla-4，gitr表達以及cd127(il7-r)低或無表達，cd27無表達。轉錄因子t-bet和egr-2(krox-20)表達，但所述轉錄抑制物foxp3不表達，高產ifn-γ而il-10、il-4、il-5、il-13或tgf-β沒有或僅有痕量。而且所述細胞溶解性t細胞表達cd45ro和/或cd45ra，不表達ccr7，cd27并存在高水平粒酶b和其他粒酶以及fas配體。本發(fā)明的所述肽，在給藥于活的動物，通常是人類時，將會引發(fā)對旁觀者t細胞發(fā)揮抑制活性的特異性t細胞。這種機制也間接表明，和所述實驗結果表明本發(fā)明的所述肽，雖然包含某些抗原的特異性t細胞表位，能夠用于預防或治療通過針對所述相同抗原的其他t細胞表位的免疫反應引起的病癥，或如果它們通過相同的機制由通過本發(fā)明的所述肽激活的t細胞附近的mhcii類分子呈遞，則在某些情況下甚至適用于治療針對其他不同抗原的其他t細胞表位的免疫反應引起的病癥。公開了具有上述特性的，另外是抗原特異性的，即能夠抑制抗原特異性免疫應答的所述細胞類型的分離細胞群。本發(fā)明的所述肽也可以用于本領域中公知的基因治療方法中，并且本文中所用解釋根據(jù)本發(fā)明的肽的用途的所述術語也包括編碼或表達根據(jù)本發(fā)明的免疫原性肽的核酸的用途。本發(fā)明描述了編碼本發(fā)明的所述肽的核酸序列及其使用方法。通過基因療法的方式實現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的肽、其同源物或衍生物在哺乳動物體內的水平的不同方法都設想于本發(fā)明的上下文中。編碼蛋白序列的重組核酸分子能夠作為裸dna使用或用于遞送到靶細胞的脂質體或其它脂質系統(tǒng)中。對于將質粒dna直接轉運到細胞中的其它方法對于本領域技術人員而言用于人類基因療法中是眾所周知的，并且涉及通過將所述質粒dna復合(complex)到蛋白中而將所述dna靶向細胞上的受體。在其最簡單形式上，基因轉運能夠通過簡單地將微量dna通過顯微注射的方法注射到細胞的所述核中而進行實施。一旦重組基因引入細胞中，它們能夠通過用于轉錄和翻譯的所述細胞正常機制進行識別，以及基因產物將被表達。已經嘗試了其它方法用于將dna引入更大量的細胞中。這些方法包括：轉染，其中dna與磷酸鈣一起沉淀并通過胞飲作用(pinocytosis)攝入細胞中；電穿孔，其中細胞暴露于大電壓脈沖而將孔引入所述膜中)；脂轉染/脂質體融合，其中dna包裝到與靶細胞融合的親脂囊泡(vesicle)中；和使用結合到拋射體(projectile)的dna的顆粒轟擊。用于將dna引入細胞中的另一種方法是將所述dna連接至化學修飾的蛋白。腺病毒蛋白能夠使內體(endosome)失穩(wěn)并增強dna攝入細胞中。將腺病毒混合到含有dna復合物的溶液中，或使用蛋白交聯(lián)劑將dna結合至共價附連于腺病毒的聚賴氨酸會顯著改善所述重組基因的攝取和表達。腺相關的病毒載體也可以用于將基因遞送到血管細胞中。正如本文中所用，“基因轉運(genetransfer)”是指將外源核酸分子引入細胞的方法，這通常實施而使通過所述基因編碼的特定產物能夠表達。所述產物可以包括蛋白，多肽，反義dna或rna，或酶學活性rna。基因轉運能夠在培養(yǎng)的細胞中或通過直接給藥到哺乳動物中進行實施。在另一個實施方式中，提供了包含編碼根據(jù)本發(fā)明的肽的核酸分子序列的載體(vector)。在具體實施方式中，生成所述載體而使所述核酸分子序列僅表達于特異性組織中。實現(xiàn)組織特異性基因表達的方法在本領域內是公知的。這能夠，例如，通過在指導表達的啟動子控制之下將編碼根據(jù)本發(fā)明的所述序列置于一個或多個特定組織中而實現(xiàn)。源于病毒如逆轉錄病毒、牛痘病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒、rna病毒或牛乳頭狀瘤病毒的表達載體可以用于將編碼根據(jù)本發(fā)明的肽、其同系物或衍生物的核苷酸序列(例如，cdna)遞送到靶組織或細胞群。本領域技術人員公知的方法能夠用于構建含有這種編碼序列的重組病毒載體。因此，本發(fā)明公開了能夠在體內表達本發(fā)明的所述肽的核酸用于治療和/或預防由針對外來或自身抗原的免疫應答驅動的疾病的用途。根據(jù)一個實施方式，在體內能夠表達根據(jù)本發(fā)明的所述肽的核酸是一個編碼這種肽的序列，其可操作地連接至啟動子。這種序列能夠直接或間接進行給藥。例如，包含根據(jù)本發(fā)明的肽的編碼序列的表達載體可以插入到細胞中，之后所述細胞進行體外生長，并隨后注射或輸注到患者體內?？商娲?，能夠體內表達根據(jù)本發(fā)明的所述肽的核酸是改變所述細胞內源性表達的序列。所述基因療法可以涉及使用腺病毒載體，其包含編碼根據(jù)本發(fā)明的肽、其同源物或衍生物的核苷酸序列，或編碼根據(jù)本發(fā)明的所述肽的裸核酸分子。另外，可以注射含有編碼根據(jù)本發(fā)明的肽的核酸分子的工程化細胞。在通過基因轉運(即，確保在給藥后體內表達根據(jù)本發(fā)明的肽的核酸給藥)確保給予一個或多個根據(jù)本發(fā)明的肽的情況下，所述核酸的合適劑量能夠基于由于所述核酸的結果(如例如，通過測定給藥之后所述血液中肽的濃度)表達的肽的量進行確定。因此，在具體實施方式中，本發(fā)明的所述肽通過使用編碼所述肽的多核苷酸，無論是否在表達載體中，進行給藥，由此本發(fā)明也涉及基因療法。另一個具體實施方式涉及誘導本發(fā)明的所述肽局部過表達的方法用于治療或預防免疫病癥的用途。本發(fā)明提供了包含根據(jù)本發(fā)明的一種或多種肽的藥物組合物，進一步包含藥用載體。正如以上詳述，本發(fā)明也涉及適合用作藥物的組合物，或通過使用所述組合物治療哺乳動物免疫病癥的方法，以及涉及所述組合物用于制造預防或治療免疫病癥的醫(yī)藥的用途。所述藥物組合物能夠例如是適合治療或預防免疫疾病，特別是空氣源性(airborne)和食源性(foodborne)過敏，以及過敏源的疾病的疫苗。作為本文中進一步描述的藥物組合物的實例，根據(jù)本發(fā)明的肽吸附于適合給藥于哺乳動物的佐劑如氫氧化鋁(明礬(alum))上。通常情況下，50μg吸附于明礬上的所述肽通過所述皮下途徑以2周的間隔三次進行注射。對于本領域技術人員而言顯而易見的是，其它給藥途徑是可能的，包括口服，鼻內或肌內。而且，注射次數(shù)和注射量能夠根據(jù)要治療的病癥而變化。此外，除了明礬之外的其它佐劑都可以使用，條件是它們會促進在mhcii類呈遞和t細胞活化中的肽呈遞(presentation)。因此，雖然有可能單獨給藥所述活性成分，但它們通常會呈現(xiàn)為藥物制劑。本發(fā)明的用于人和獸用的所述制劑包含連同一種或多種藥用載體一起的如上所述的至少一種活性成分。本發(fā)明涉及藥物組合物，包含作為活性成分，與藥用載體混合的根據(jù)本發(fā)明的一種或多種肽。本發(fā)明的藥物組合物包含如下文關于治療或預防的所述方法指出的治療有效量的活性成分?？蛇x地，所述組合物進一步包含其它治療成分。合適的其它治療成分及其常規(guī)劑量(取決于它們所屬的類別)，對于本領域技術人員而言都是眾所周知的，并能夠選自用于治療免疫病癥的其他已知藥物。本文中所使用的所述術語“藥用載體(pharmacuticallyacceptablecarrier)”是指與所述活性組分一起配制，例如，通過溶解、分散或擴散所述組合物而促進其應用或分散到待治療的位點，和/或在不損害其效能的情況下促進其儲存、運輸或處理的任何材料或物質。它們包括任何和所有溶劑，分散介質，包衣(coating)，抗細菌劑和抗真菌劑(例如，苯酚，山梨酸，氯丁醇)，等滲劑(如糖或氯化鈉)等?？梢园ㄆ渌煞?，從而控制所述組合物中的免疫原性肽藥效的持續(xù)時間。藥用載體可以是固體或液體或已被壓縮形成液體的氣體，即本發(fā)明的組合物能夠適當?shù)刈鳛闈饪s物，乳液，溶液，顆粒劑，粉劑(dust)，噴霧劑，氣溶膠(aerosol)，混懸劑，軟膏劑(ointment)，乳膏劑(cream)，片劑，丸劑(pellet)或粉末劑(powder)進行使用。適用于藥物組合物及其制劑中的合適藥物載體在本
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：中是公知的，以及在本發(fā)明內對其選擇沒有特別的限制。它們也可以包括添加劑如潤濕劑，分散劑，粘著劑(sticker)，粘合劑(adhesive)，乳化劑，溶劑，包衣劑(coating)，抗細菌劑和抗真菌劑(例如，苯酚，山梨酸，氯丁醇)，等滲劑(如糖或氯化鈉)等，條件是其與制藥實踐一致，即不會對哺乳動物造成永久性損傷的載體和添加劑。本發(fā)明的藥物組合物可以以任何已知的方式制備，例如，通過均勻混合，涂層和/或研磨所述活性成分，在單步驟或多個步驟的工序中，采用所選擇的載體材料和在適當情況下其他添加劑如表面活性劑。它們也可以通過微粉化進行制備，例如，為了獲得它們以直徑一般為約1-10μm的微球形式，即用于制造控釋或緩釋所述活性成分的微膠囊。在本發(fā)明的藥物組合物中使用的合適表面活性劑，也稱為利泄劑(emulgent)或乳化劑(emulsifier)，是具有良好乳化、分散和/或潤濕性的非離子的、陽離子的和/或陰離子物質。合適的陰離子表面活性劑包括水溶性皂和水溶性合成表面活性劑。合適的皂(soap)是堿或堿土金屬鹽，未取代的或取代的高級脂肪酸(c10-c22)的銨鹽，例如，油酸或硬脂酸，或可獲自椰子油或牛油的天然脂肪酸混合物的鈉或鉀鹽。合成的表面活性劑包括聚丙烯酸的鈉鹽或鈣鹽；脂肪磺酸鹽和硫酸鹽；磺化的苯并咪唑衍生物和烷基芳基磺酸鹽。脂肪磺酸鹽或硫酸鹽通常以堿或堿土金屬鹽，未取代的銨鹽或用具有8-22個碳原子烷基或酰基取代的銨鹽的形式，例如，木素磺酸或十二烷基磺酸的鈉鹽或鈣鹽，或由天然脂肪酸獲得的脂肪醇磺酸鹽、硫酸或磺酸酯的堿或堿土金屬鹽(如十二烷基硫酸鈉)和脂肪醇/環(huán)氧乙烷加成物的磺酸的混合物。合適的磺化苯并咪唑衍生物通常包含8-22個碳原子。烷基芳基磺酸鹽的實例是十二烷基苯磺酸或二丁基萘磺酸或萘磺酸/甲醛縮合產物的鈉、鈣或烷醇胺鹽。對應的磷酸鹽，例如，磷酸酯的鹽和對壬基酚與環(huán)氧乙烷和/或環(huán)氧丙烷的加成物，或磷脂也是合適的。用于此目的的合適的磷脂是天然(源自動物或植物細胞)或腦磷脂或卵磷脂型的合成磷脂，如例如，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰絲氨酸，磷脂酰甘油，溶血卵磷脂，心磷脂，二辛基磷脂酰膽堿，二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(dipalmitoylphoshatidylcholine)和它們的混合物。合適的非離子表面活性劑包括分子中含至少12個碳原子的烷基苯酚、脂肪醇、脂肪酸、脂族胺或酰胺的聚乙氧基化和聚丙氧基化的衍生物，烷基芳烴磺酸鹽和二烷基磺基琥珀酸鹽，如脂族和脂環(huán)族醇的聚乙二醇醚衍生物，飽和的和不飽和的脂肪酸和烷基酚，通常烷基酚中含有3-10個二醇醚基團和(脂族)烴部分中8-20個碳原子和烷基部分中6-18個碳原子的衍生物。進一步合適的非離子表面活性劑是聚環(huán)氧乙烷與聚丙二醇、烷基鏈中含1-10個碳原子的乙二氨基-聚丙二醇的水溶性加合物，所述加合物含有20-250個乙二醇醚基團和/或10-100個丙二醇醚基團。這種化合物一般含有1-5個乙二醇單元/丙二醇單元。非離子表面活性劑的代表性實例是壬基酚-聚乙氧基乙醇，蓖麻油聚乙二醇醚(glycolicether)，聚環(huán)氧丙烷/聚環(huán)氧乙烷加成物，三丁基苯氧基聚乙氧基乙醇，聚乙二醇和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇。聚乙烯山梨聚糖(如聚氧乙烯山梨聚糖三油酸酯)、甘油、山梨聚糖、蔗糖和季戊四醇的脂肪酸酯也是合適的非離子表面活性劑。合適的陽離子表面活性劑包括具有4個可選地被鹵素、苯基、取代苯基或羥基取代的烴基的季銨鹽，特別是鹵化物；例如，含有作為n-取代基的至少一個c8-c22烷基(例如，鯨蠟基，月桂基，棕櫚基，肉豆蔻基，油烯基等)和，作為進一步的取代基，未取代的或鹵代的低級烷基、芐基和/或羥基-低級烷基的季銨鹽。適用于該目的的表面活性劑的更詳細描述可以例如查閱“mccutcheon'sdetergentsandemulsifiersannual”(mcpublishingcrop.，ridgewood，newjersey，1981)，“tensid-taschenbucw”，第二版(hanserverlag，vienna，1981)和“encyclopaediaofsurfactants”，(chemicalpublishingco.，newyork，1981)。根據(jù)本發(fā)明的肽、其同源物或衍生物(及其生理學可接受的鹽或藥物組合物，都包括在所述術語“活性成分”中)可以通過適合于要治療的病癥和適于有待給予的所述化合物，本文中是蛋白和片段的任何途徑進行給藥。可能的途徑包括區(qū)域，全身，口服(固體形式或吸入)，直腸，鼻，局部(包括眼，頰和舌下)，陰道和腸胃外(包括皮下，肌內，靜脈內，皮內，動脈內，鞘內和硬膜外)。優(yōu)選的給藥途徑可以隨例如接受者的狀況或要治療的疾病而變化。正如本文所述，載體(carrier)優(yōu)選地是在與所述制劑的其它成分相容并且不損害其接受者的意義上是“可接受的”。所述制劑包括適合于口服，直腸，鼻，局部(包括頰和舌下)，陰道或腸胃外(包括皮下，肌內，靜脈內，皮內，動脈內，鞘內和硬膜外)給藥的那些。所述制劑可以方便地以單位劑量形式呈現(xiàn)并可以通過任何藥學領域熟知的方法制備。這種方法包括使所述活性成分與構成一種或多種輔助成分的載體結合的步驟。一般而言，所述制劑通過均勻地和緊密地將所述活性成分與液體載體或精細分散的固體載體或兩者結合，并隨后，如果必要，成形產品而進行制備。適合于口服給藥的本發(fā)明的制劑可以呈現(xiàn)為離散單位如各自包含預定劑量的活性成分的膠囊劑，扁囊劑(cachet)或片劑；作為粉末或顆粒劑；作為在水性液體或非水性液體中的溶液或懸浮液；或作為水包油型液體乳劑或油包水型液體乳液。所述活性成分也可以呈現(xiàn)為大丸劑(bolus)，藥糖劑(electuary)或糊劑。片劑可以通過，可選地與一種或多種輔助成分一起壓縮或模制而制成。壓制片劑可以通過在合適的機器中將自由流動形式的活性成分如粉末或顆粒進行壓制而制備，可選地與粘合劑，潤滑劑，惰性稀釋劑，防腐劑，表面活性或分散劑混合。模制片劑可以通過在合適的機器上將用惰性液體稀釋劑潤濕的粉化化合物的混合物模制而制備。所述片劑可以可選地進行包衣涂層(coat)或刻痕(score)，并可以經過配制從而提供緩釋或控釋其中的所述活性成分。對于例如皮膚上，如關節(jié)上的皮膚的局部治療，所述制劑可以可選地，作為含有，例如，0.075％～20％w/w(包括以增量0.1％w/w如0.6％w/w，0.7％w/w等的0.1％～20％w/w的范圍的活性成分)，特別是0.2％～15％w/w，更具體而言0.5％～10％w/w的量的所述活性成分的局部軟膏或乳膏進行施用。當配制于軟膏中時，所述活性成分可以與石蠟烴或水混溶性軟膏基質(base)一起使用?？商娲兀龌钚猿煞挚梢砸耘c水包油乳膏基質一起配制于乳膏中。如果需要，所述乳膏基質的水相可以包括，例如，至少30％w/w的多元醇，即具有兩個羥基或更多個羥基的醇，如丙二醇，丁烷-1,3-二醇，甘露醇，山梨醇，甘油和聚乙二醇(包括peg400)及它們的混合物。所述局部制劑可以合乎需要地包括增強所述活性成分吸收或滲透通過皮膚或其它染病區(qū)域的化合物。這種皮膚滲透增強劑的實例包括二甲基亞砜和相關的類似物。本發(fā)明的乳劑的油相可以以已知的方式由已知成分構成。盡管所述相可以僅包含乳化劑(也另外稱為利泄劑)，它合乎需要地包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪和油二者的混合物?？蛇x地，包括親水性乳化劑與起到穩(wěn)定劑作用的親脂性乳化劑，典型地通過包括油和脂肪二者。共同地，具有或不具有穩(wěn)定劑的所述乳化劑構成所謂的乳化蠟，所述蠟與所述油和脂肪一起構成了所謂乳化軟膏基質，其形成所述乳膏制劑的油性分散相。所述制劑的合適油或脂肪的選擇基于實現(xiàn)所需的化妝品性質，因為所述活性化合物在可能用于藥物乳液制劑的大多數(shù)油中的溶解度非常低。因此，所述乳膏應該可選地是非油脂的，無污染和可洗滌的產品，具有避免從管或其他容器中泄漏的合適稠度(consistency)。直鏈或支鏈的一元或二元(dibasic)烷基酯，如二異己二酸酯，硬脂酸異鯨蠟酯，椰子脂肪酸的丙二醇二酯，肉豆蔻酸異丙酯，油酸癸酯，棕櫚酸異丙酯，特別是硬脂酸丁酯，棕櫚酸2-乙基己酯或已知為crodamolcap的支鏈酯的共混物都可以使用。這些可以單獨使用或組合使用，這取決于所需的性質?？商娲?，高熔點脂質如白色軟石蠟和/或液體石蠟或其他礦物油都能夠使用。適合于局部給藥于眼睛的制劑還包括滴眼劑，其中所述活性成分溶解或懸浮于合適的載體中，特別是用于所述活性成分的水性溶劑。所述活性成分可選地以0.5％～20％，有利地0.5％～10％，特別是約1.5％w/w的濃度存在于這種制劑中。適用于口中局部給藥的制劑包括包含處于調味基質(flavouredbasis)，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中的所述活性成分的糖錠(lozenge)；包含處于惰性基質如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠中的所述活性成分的錠劑(pastille)；和包含處于合適的液體載體中所述活性成分的漱口水。用于直腸給藥的制劑可以以具有含有例如可可脂或水楊酸鹽的合適基質的栓劑提供。其中所述載體是固體的適用于鼻給藥的制劑，包括具有例如范圍為20-500微米的粒度(包括范圍為20-500微米，以5微米，如30微米，35微米等的增量的粒度)的粗粉，其以鼻吸劑(snuff)攝取的方式給藥，即從靠近鼻子的所述粉末的容器中通過鼻子通道快速吸入。其中所述載體為液體的合適制劑(用作例如鼻噴霧劑或作為滴鼻劑給藥)，包括所述活性成分的水性或油性溶液。適合氣溶膠給藥的制劑可以根據(jù)常規(guī)方法制備，并可以與其它治療劑一起遞送。適于陰道給藥的制劑可以作為含有除了活性成分之外的本領域已知的合適載體的陰道栓劑、衛(wèi)生棉條、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑提供。適用于腸胃外給藥的制劑包括水性和非水性無菌注射溶液，其可以含有抗氧化劑，緩沖劑，抑菌劑和使所述制劑與預期接受者的血液等滲的溶質；以及可以包括懸浮劑和增稠劑的水性和非水性無菌懸浮液。所述制劑可以以單位劑量或多劑量容器，例如，密封的安瓿瓶和小藥瓶提供，并可以儲存于使用前僅需要加入無菌液體載體，例如注射用水的冷凍干燥(凍干)條件下。臨時注射溶液和懸浮液可以由上述類型的無菌粉末、顆粒和片劑制備。典型的單位劑量制劑是含有如上引述的日劑量或單位每日亞劑量，或其合適部分的所述活性成分的那些。應當理解的是，除了上述特別提及的所述成分之外，本發(fā)明的制劑可以包括關于所討論的制劑類型的
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：內常規(guī)的其它試劑，例如，適合于口服給藥的那些可以包括調味劑。根據(jù)本發(fā)明的肽、其同源物或衍生物能夠用于提供含有作為活性成分的本發(fā)明的一種或多種化合物的控釋藥物制劑(“控釋制劑(controlledreleaseformulation)”)，其中所述活性成分的釋放能夠經過控制和調節(jié)而允許更少的頻率劑量給予給定的本發(fā)明化合物或改進其藥代動力學或毒性曲線。適于口服給藥的控釋制劑(其中離散單位包含本發(fā)明的一種或多種化合物)，可以根據(jù)常規(guī)方法制備。可以包括附加成分以控制所述活性成分在所述組合物中藥效的持續(xù)時間。因此，通過選擇合適的聚合物載體如例如聚酯、聚氨基酸、聚乙烯吡咯烷酮、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、甲基纖維素、羧甲基纖維素、硫酸魚精蛋白等可以實現(xiàn)控釋組合物。藥物釋放速率和藥效持續(xù)時間(durationofaction)也可以通過將所述活性成分引入顆粒，例如，如水凝膠、聚乳酸、羥甲基纖維素、聚甲基丙烯酸甲酯(polyniethylmethacrylate)和其它上述聚合物的聚合物質的微膠囊中而進行控制。這種方法包括膠體藥物遞送系統(tǒng)，比如脂質體，微球，微乳液，納米顆粒，納米膠囊等。根據(jù)給藥途徑，所述藥物組合物可能需要保護性包衣。適合注射的藥物形式包括無菌水溶液或分散體，以及用于其臨時制備的無菌粉末。因此，用于此目的的典型載體包括生物相容性水性緩沖液，乙醇，甘油，丙二醇，聚乙二醇等及其混合物?？紤]到當組合使用多種活性成分時它們不一定在待治療的哺乳動物中同時直接產生其聯(lián)合治療效果的事實，所述相應的組合物也可以是以包含所述兩種成分于單獨的但相鄰的儲存器(repository)或隔間的醫(yī)學試劑盒或包裝的形式。因此，在后一種情況下，每種活性成分因而可以以適合與另一種成分不同的給藥途徑的方式進行配制，例如，它們中一種可以是口服或腸胃外制劑的形式，而另一種是以用于靜脈注射的安瓿瓶或氣溶膠的形式。如本發(fā)明中獲得的細胞溶解性cd4+t細胞在mhc-ii類依賴性同源物激活后會誘導apc凋亡，影響樹突狀細胞和b細胞兩者，正如在體外和體內證明的那樣，和(2)通過接觸-依賴性機制在不存在il-10和/或tgf-β的情況下抑制旁觀者t細胞。正如wo2008/017517中的詳細討論，細胞溶解性cd4+t細胞能夠與天然和適應性treg區(qū)分開?，F(xiàn)在將通過以下沒有任何限制的意圖提供的實施例舉例說明本發(fā)明。此外，本文所述的所有參考文獻通過明確地包括在本文中作為參考。實施例實施例1：評價肽還原活性的方法使用文獻tomazzollietal.(2006)anal.biochem.350，105–112中描述的熒光測定所述肽的還原酶活性。具有fitc標記的兩種肽在它們通過二硫鍵共價相互連接時而自淬滅(self-quenching)。在通過根據(jù)本發(fā)明的肽還原時，所述還原的各個肽再次出現(xiàn)熒光。采用具有“正?！边€原肽的肽，即具有氧化還原基序但不含其它組氨酸的肽和不含氧化還原基序的肽進行對照實驗。實施例2：細胞活化的測定通過本發(fā)明的所述肽獲得的抗原特異性細胞溶解性細胞能夠驅使抗原呈遞細胞凋亡。為了評價所述激活作用并防止將使其自身凋亡的細胞溶解性細胞最終過度活化，akt和shp的磷?；癄顟B(tài)允許在細胞(能夠凋亡)的活化和細胞(自凋亡)的過度活化之間產生相關性。實施例3：mog衍生肽的設計本發(fā)明的所述肽的實例是具有序列hcpycsrvvhlyrngkd[seqidno:1]的所述肽。這種肽包含所述人mog蛋白的所述srvvhlyrngkd[seqidno:2]片段(髓磷脂少突膠質細胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoprotein))(uniprotq16653登錄號)，其自身含有所述vvhlyrngk九肽mhcii類t細胞表位序列[seqidno:3]。根據(jù)本申請中提及的所述定義，這種17aa肽包含：-修飾的氧化還原基序h-c-x(2)-c[seqidno:80]，其中pro和tyr作為x，-所述基序和所述t細胞表位序列之間2個氨基酸(ser，arg)的連接子(linker)，-具有序列vvhlyrngk[seqidno:3]的9氨基酸mhc類t細胞表位，-所述表位c端的單氨基酸側翼序列(flankingsequence)(asp)。與所述mog肽片段yrppfsrvvhlyrngkd[seqidno:4]的所述序列相比，所述序列中的yrppf[seqidno:5]已被所述序列hcpyc[seqidno:6]置換。對照肽是：yrppfsrvvhlyrngkd[seqidno:4]，即mog的上述片段。cpycsrvvhlyrngkd[seqidno:7]，具有c(x)2c基序[seqidno:71]但缺少所述附加組氨酸。srvvhlyrngkd[seqidno:2]，缺乏還有的所述c(x)2c基序[seqidno:71]。肽已經通過肽合成制備而具有conh2修飾的羧基端，并通過質譜和hplc測試純度。實施例4：細胞系的體外擴增原始的(naive)人cd4+t細胞系對具有mog的t細胞表位和不具有(圖1右側條棒)[seqidno:7]和具有附加組氨酸(圖1左側條棒)[seqidno:1]的氧化還原基序的肽的應答(response)。將等量的兩種肽加入到不同的原始的人cd4+t細胞系中。所述結果表示在臨床規(guī)模過程結束時導致具有細胞溶解性質的分化t細胞產生的細胞數(shù)(作為初始接種細胞的％)。當加入所述添加的組氨酸時，由此獲得體外細胞轉化的顯著增加，但這僅對于呈遞dr2單倍型(haploptye)的人的細胞系，而不是對于其他單倍型。因此，對于所述dr2+群體(再次是70％的ms群體)這種肽的使用是特別感興趣的，這看起來使用含his的肽存在明確的(和意想不到的)優(yōu)點。實施例5：在多發(fā)性硬化癥的體內模型中使用mog蛋白的t細胞表位通過采用具有t細胞表位的髓磷脂少突膠質細胞糖蛋白(mog)肽進行免疫能夠在實驗模型中誘導多發(fā)性硬化癥。一組c57bl/6小鼠按照旨在誘導多發(fā)性硬化樣綜合征的方案，用cd4+mog特異性效應子t細胞克隆進行過繼性轉移(adoptivelytransfer)。這包括給予處于完全弗氏(freund)佐劑中的mog肽并2次注射百日咳毒素(pertussistoxin)。這種方案引起所述效應子t細胞克隆的擴增，其在所述mog肽給藥后12天內導致與多發(fā)性硬化相容的癥狀(sign)發(fā)展。第二組c57bl/6小鼠首先用mog特異性細胞溶解性t細胞克隆(使用具有[seqidno:1]的肽獲得)進行過繼性轉移，然后在1天后進行疾病誘導的所述完整方案。使用具有seqidno:2，4和7的肽作為對照。實施例6：多發(fā)性硬化癥的預防和抑制用實施例1包含吸附于氫氧化鋁上的所述修飾的序列基序[seqidno:1]或對照肽[seqidno:2，4或7]的所述肽皮下(20μg)免疫c57bl/6小鼠的組。以兩周的間隔進行三次注射。最后一次免疫后10天，處死小鼠，并使用磁珠從所述脾臟制備cd4+t細胞(2×106個細胞)。然后cd4+t細胞通過貼壁(adherent)脾細胞(2×106個細胞)表達的所述mogt細胞表位(20μg/ml)進行體外刺激。在四次再刺激之后，在旁觀者抑制分析測定中(bystandersuppressionassay)，采用從eae(實驗性自身免疫性腦脊髓炎)有效的動物中獲得的多克隆cd4+cd25-細胞作為靶細胞，測試t細胞系。與存在于來自eae動物的效應子cd4+cd25-的對照相比，只有從使用具有含有所述hc(x)2c[seqidno:80]或c(x)2c[seqidno:71]序列基序的seqidno:1和7的所述肽進行免疫的動物中獲得的所述細胞具有在靶細胞中誘導死亡的能力。一組c57bl/6小鼠用cd4+mog特異性cd4+t細胞克隆進行過繼性轉移，隨后在1天后實施旨在誘導多發(fā)性硬化樣綜合征的方案。這包括給予處于完全弗氏佐劑中所述mog肽并2次注射百日咳毒素。這種方案引起效應子t細胞克隆的擴增，這在所述mog肽給藥后12天內導致與多發(fā)性硬化相容的癥狀發(fā)展。用細胞溶解性t細胞克隆預處理的小鼠發(fā)展的所述臨床評分與僅接受疾病誘導的完整方案的小鼠進行比較。實施例7：通過肽免疫預防多發(fā)性硬化癥在所述模型組中，c57bl6小鼠在第0天接受在cfa中的100μgmog肽/400μg乳酪分支桿菌(mycobacteriumbutyricum)的sc注射和在nacl中的300ng百日咳博德特氏菌(bortetellapertussis)的ip注射。在第+2天時，提供第二次百日咳博德特氏菌注射。在所述預防組中，如在所述模型組中在疾病誘導之前以14天的間隔，通過5次注射在ifa中的20μg具有seqidno:1的所述肽(含有所述序列基序hc(x)2c[seqidno:80])對c57bl/6小鼠進行免疫。使用具有seqidno:2，4和7的所述肽進行對照實驗。計分為0：無疾病，1：跛行尾(limptail)，2：跛行尾和體重減輕(lossofweight)高于10％，3：后肢部分麻痹。實施例9關于合成肽的還原酶活性評價合成fitc-nh-gly-cys-asp-cooh肽(eurogentec，比利時)并通過在dmso中溶解而自淬滅((fitc-gly-cys-asp)ox)。用如附表所示肽(25μm)，或用2mm二硫蘇糖醇(dtt)在pbs中孵育之后在96孔板上還原2.5μm(fitc-gly-cys-asp)ox40分鐘(25℃)。使用酶標儀(multiplatereader)(appliedbiosystems)，在494nm激發(fā)后，在530nm下作為熒光讀數(shù)增加的函數(shù)測定還原。結果顯示于實施例10的表格在所述標題“還原酶活性”之下。實施例10人重組cd4的聚合將人重組cd4(300ng)在hepes緩沖液中(具有50μm所述表中所列的肽)在68℃下孵育15分鐘。在相同條件下使用50μmdtt作為陽性對照。然后將lds樣品緩沖液(7.5μl；非還原)加入到15μl肽/cd4混合物中。然后將所述混合物進行非還原page。在考馬斯藍(coomassieblue)染色后，分析蛋白條帶是否存在單體、二聚體或多聚體的reccd4，如通過遷移進入凝膠能力降低確定的。所述表顯示了是否發(fā)生聚合(+)。該表提供了在人胰島素原的ii類限制性表位的氨基端端末添加的氨基酸序列的各種組合。這些序列由含硫還原酶(thioreductase)的基序的第一個半胱氨酸之前的氨基端序列(n-端)，基序本身，連接子，表位和c-端末端(c-端)構成。正如實施例1所述，還原酶活性以％表示。根據(jù)實施例2測定人重組cd4的聚合。本申請中公開的肽在以下序列1-70中，在x出現(xiàn)的情況下，x不是半胱氨酸或不是組氨酸。公開的肽序列總覽。序列表<110>易姆賽斯股份公司saint-remy,jean-marievanderelst,luccarlier,vincentburkhart,davidj.<120>新型免疫原性肽<130>imc2637pct<150>gb1418433.7<151>2014-10-17<160>116<170>patentinversion3.5<210>1<211>17<212>prt<213>人工序列<220><223>合成肽<400>1hiscysprotyrcysserargvalvalhisleutyrargasnglylys151015asp<210>2<211>12<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>2serargvalvalhisleutyrargasnglylysasp1510<210>3<211>9<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>3valvalhisleutyrargasnglylys15<210>4<211>17<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>4tyrargpropropheserargvalvalhisleutyrargasnglylys151015asp<210>5<211>5<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>5tyrargproprophe15<210>6<211>5<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>6hiscysprotyrcys15<210>7<211>16<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>7cysprotyrcysserargvalvalhisleutyrargasnglylysasp151015<210>8<211>16<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>8hiscysprotyrcysserargvalvalhisleutyrargasnglylys151015<210>9<211>19<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>9cysglypheserserasntyrcysglniletyrproproasnalaasn151015lysilearg<210>10<211>20<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>10hiscysglypheserserasntyrcysglniletyrproproasnala151015asnlysilearg20<210>11<211>20<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>11hiscysglyphecysserasntyrcysglniletyrproproasnala151015asnlysilearg20<210>12<211>15<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>12cyshisglysergluprocysileilehisargglylysprophe151015<210>13<211>16<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>13hiscyshisglysergluprocysileilehisargglylysprophe151015<210>14<211>16<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>14hiscyshisglycysgluprocysileilehisargglylysprophe151015<210>15<211>16<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(3)..(3)<223>xaa不是his或cys<400>15hiscysxaaglysergluprocysileilehisargglylysprophe151015<210>16<211>16<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(3)..(3)<223>xaa不是his或cys<400>16hiscysxaaglycysgluprocysileilehisargglylysprophe151015<210>17<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>17cyshisglycysalaglnlyslysileilealaglulys1510<210>18<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>18hiscyshisglycysalaglnlyslysileilealaglulys1510<210>19<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>misc_feature<222>(3)..(3)<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸<400>19hiscysxaaglycysalaglnlyslysileilealaglulys1510<210>20<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>20cysglyprocysmetasnglugluleuthrgluargleu1510<210>21<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>21hiscysglyprocysmetasnglugluleuthrgluargleu1510<210>22<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>22cysglyproseralaalaleuthrtrpvalglnthrhis1510<210>23<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>23hiscysglyproseralaalaleuthrtrpvalglnthrhis1510<210>24<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>24cyshisglycysprothrleuleutyrvalleuphegluval1510<210>25<211>15<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>25hiscyshisglycysprothrleuleutyrvalleuphegluval151015<210>26<211>15<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(3)..(3)<223>xaa不是his或cys<400>26hiscysxaaglycysprothrleuleutyrvalleuphegluval151015<210>27<211>15<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>27cysglyprocysglyglytyrvalprophehisileglnvalpro151015<210>28<211>16<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>28hiscysglyprocysglyglytyrvalprophehisileglnvalpro151015<210>29<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>29cysglyhiscysasplyshisilegluglntyrleulys1510<210>30<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>30hiscysglyhiscysasplyshisilegluglntyrleulys1510<210>31<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(4)..(4)<223>xaa不是his或cys<400>31hiscysglyxaacysasplyshisilegluglntyrleulys1510<210>32<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>32cysglyhiscysglulyslysilecyslysmetglulys1510<210>33<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>33hiscysglyhiscysglulyslysilecyslysmetglulys1510<210>34<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(4)..(4)<223>xaa不是his或cys<400>34hiscysglyxaacysglulyslysilecyslysmetglulys1510<210>35<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>35cysglyhiscyslystyrvallysglnasnthrleulys1510<210>36<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>36hiscysglyhiscyslystyrvallysglnasnthrleulys1510<210>37<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(4)..(4)<223>xaa不是his或cys<400>37hiscysglyxaacyslystyrvallysglnasnthrleulys1510<210>38<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>38cysglyhiscysgluhisproilevalvalserglyser1510<210>39<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>39hiscysglyhiscysgluhisproilevalvalserglyser1510<210>40<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(4)..(4)<223>xaa不是his或cys<400>40hiscysglyxaacysgluhisproilevalvalserglyser1510<210>41<211>13<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>41cysglyhiscysargalamettyralaproproileala1510<210>42<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>42hiscysglyhiscysargalamettyralaproproileala1510<210>43<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>變體<222>(4)..(4)<223>xaa不是his或cys<400>43hiscysglyxaacysargalamettyralaproproileala1510<210>44<211>14<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>44cyshisglycystyrcysalavalproaspaspproaspala1510<210>45<211>15<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>45hiscyshisglycystyrcysalavalproaspaspproaspala151015<210>46<211>15<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<220><221>misc_feature<222>(3)..(3)<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸<220><221>變體<222>(4)..(4)<223>xaa不是his或cys<400>46hiscysxaaglycystyrcysalavalproaspaspproaspala151015<210>47<211>17<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>47cysglyhiscysglyglyileargleuhisprothrhistyrserile151015arg<210>48<211>18<212>prt<213>人工的<220><223>合成肽<400>48hiscy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