A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物及制備與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物，該共聚物由D-葡萄吡喃糖（），D-葡萄吡喃糖-聚乳酸-羥基乙酸（），A54-D-葡萄吡喃糖（）三種結(jié)構(gòu)單元無規(guī)交替而成。本發(fā)明在合成葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物的基礎(chǔ)上，進一步A54多肽修飾葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物，合成了A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物，該共聚物可在水性介質(zhì)中，通過自聚集形成膠團，并且可快速被腫瘤細胞所攝取，對人肝癌細胞系BEL-7402具有特異性靶向作用。該材料可有效包封水難溶性抗腫瘤藥物，并具有對藥物的緩釋功能，通過A54多肽的修飾，實現(xiàn)對BEL7402肝腫瘤的靶向，從而大幅度提高藥物的療效。
【專利說明】A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物及制備與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬化合物合成方法，涉及A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物和合成方 法，以及作為膠束載體在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 在過去的幾十年里，聚合物膠束作為一種潛在的載體，在藥物輸送系統(tǒng)中得到廣 泛的關(guān)注。聚合物膠束具有核-殼結(jié)構(gòu)，其疏水性鏈段構(gòu)成膠團的內(nèi)核，可作為難溶性藥 物的儲庫；親水性鏈段形成膠團的外殼，可以保持膠團在水性環(huán)境中的穩(wěn)定性。另外，可以 對聚合物膠束進行理化性質(zhì)修飾以達到特定的目的，如膠團的主動靶向等。目前，聚合物 膠束主要用作難溶性藥物的載體，特別是抗腫瘤藥物的載體。由于其粒徑一般小于lOOnm， 可通過"增強的透過及滯留效應(yīng)"聚集于腫瘤部位。
[0003] 尋靶肽作為靶向制劑的主動靶向修飾物質(zhì)，在腫瘤治療中發(fā)揮著越來越重要的作 用。在過去的十年中，研究人員成功地使用噬菌體展示技術(shù)證明，與細胞表面結(jié)合的多肽 可應(yīng)用于腫瘤靶向。這些尋靶肽的優(yōu)勢包括相對分子量小、易于合成，具有較低的細胞毒性 和免疫原性、在體內(nèi)可降解等。肝癌結(jié)合肽AGKGTPSLETTP (A54)是從噬菌體展示隨機肽 庫體內(nèi)篩選出來的，可有效靶向結(jié)合人肝癌細胞系BEL-7402細胞表面。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的一個目的是提供A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物，該共聚物由 D-葡萄吡喃糖(I )，D-葡萄吡喃糖-聚乳酸-羥基乙酸(Π )，A54-D-葡萄吡喃糖(ΠΙ )三種 結(jié)構(gòu)單元無規(guī)交替而成。三種結(jié)構(gòu)單元為：

【權(quán)利要求】
1. 一種A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物，其特征在于，該共聚物由D-葡萄吡喃 糖(I)，D-葡萄吡喃糖-聚乳酸-羥基乙酸(II )，A54-D-葡萄吡喃糖(III)三種結(jié)構(gòu)單元無規(guī) 交替而成，三種結(jié)構(gòu)單元分別為：
其中，A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物中所使用的葡聚糖的分子量為IOkDa-IOOkDa;結(jié)構(gòu)單元II中聚乳酸-羥基乙酸共聚物的分子量為I. 5kDa，其乳酸和羥基 乙酸的比例為70 : 30;每個A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物中含有D-葡萄吡喃 糖-聚乳酸-羥基乙酸結(jié)構(gòu)單元(II )1?3個；A54為多肽，其序列為丙氨酸-甘氨酸-賴 氨酸-丙氨酸-蘇氨酸-脯氨酸-絲氨酸-亮氨酸-谷氨酸-蘇氨酸-蘇氨酸-脯氨酸 (AGKATPSLETTP);每個A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物中含有A54-D-葡萄吡喃糖 結(jié)構(gòu)單元(III) 1~2個。
2. 權(quán)利要求1所述的A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物，具體通過以下方法實 現(xiàn)： (1) 葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物的合成 稱取聚乳酸-羥基乙酸、Ν，Ν' -二環(huán)己基碳二亞胺和4-二甲氨基吡啶，三者投料摩爾比 為1 :3 :0. 3,置于IOOmL干燥圓底燒瓶中，加入15mL無水二甲亞砜，60°C攪拌使反應(yīng)物完全 溶解，反應(yīng)30min以活化聚乳酸-羥基乙酸的羧基，向圓底燒瓶中加入IOkDa?IOOkDa的 500mg葡聚糖，在氮氣保護下繼續(xù)反應(yīng)24h。
3. 反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)產(chǎn)物置于截留分子量為7000的透析袋中，用純水持續(xù)透析48h， 收集透析袋中的混懸液，于4000rpm離心lOmin，取其上清液進行冷凍干燥，將得到的凍干 產(chǎn)物溶于濃度為20mg/mL的丙酮，減壓抽濾，得到的固體物質(zhì)復(fù)溶于去離子水，繼續(xù)冷凍干 燥，即得葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物固體； (2) A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物的合成 取20mgA54多肽，加20mL的無水二甲亞砜并超聲溶解，冰浴攪拌下，加入4. 90μ]： (Boc)2O,十分鐘后轉(zhuǎn)至室溫下避光攪拌12h，另取葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸、Ν，Ν' -二環(huán) 己基碳二亞胺和4-二甲氨基吡啶，用IOmL無水二甲亞砜溶解后加入反應(yīng)體系，室溫攪拌反 應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后，向體系中加入25mL去離子水，所得混懸液于4000rpm下離心IOmin后， 取上清液調(diào)酸去除Boc保護基，終反應(yīng)液置于截留分子量為7000的透析袋中，純水透析48h 后冷凍干燥，既得A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物，其特征是：步驟（2) 中A54 多肽與（Boc)2O的摩爾比為A54 : (Boc)2O=I:1. 3。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物在制備負載阿霉素 膠團中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，A54-葡聚糖-聚乳酸-羥基乙酸共聚物 在水性介質(zhì)中通過自聚集形成膠團，lmg/mL的共聚物水溶液形成粒徑為60?160nm的膠 團，負載水難溶性抗腫瘤藥物阿霉素。
【文檔編號】C08G63/91GK104311831SQ201410576224
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月26日
【發(fā)明者】杜永忠, 司徒俊青, 余日勝, 應(yīng)曉英, 游劍, 趙夢丹 申請人:浙江大學(xué)