疏水性治療劑的制劑、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明還提供了制備疏水性治療劑、諸如氟替卡松或曲安西龍的納米晶體的方法、其藥物組合物(例如，局部或鼻內(nèi)組合物)，及治療和/或預(yù)防障礙、諸如瞼緣炎、瞼板腺功能不良或皮膚炎癥或呼吸系統(tǒng)疾病(例如，哮喘)的征兆和/或癥狀的方法。
【專利說明】疏水性治療劑的制劑、其制備方法及應(yīng)用
[0001] 相關(guān)申請
[0002] 本申請要求2012年5月8日提交的美國臨時申請61/644, 105 ;2012年6月8日 提交的美國臨時申請61/657,239 ;2012年8月23提交的美國臨時申請61/692,487、2013 年2月12日提交的美國臨時申請61/763, 770 ;和2013年3月15日提交的美國臨時申請 61/788, 519及2013年1月7日提交的美國非臨時申請13/735, 973的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益。由此 將這些申請每一項的內(nèi)容完整地引入作為參考。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明提供了最優(yōu)化以滿足藥物施用標(biāo)準(zhǔn)（例如，局部或鼻內(nèi)施用）的疏水性治 療劑（諸如丙酸氟替卡松和曲安奈德）的無菌的納米晶體的制備方法。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 丙酸氟替卡松[(6 α，11 β，16 α，17 α )-6, 9，-二氟-11-羥基-16-甲基-3-氧 代-17-(1-氧代丙氧基）雄留-1，4-二烯-17-硫代甲酸，S-氟甲酯]，一種合成的氟化皮 質(zhì)類固醇。皮質(zhì)類固醇是一類用作抗炎藥和止癢劑的主要是合成的類固醇。丙酸氟替卡松 (FP)已經(jīng)作為皮質(zhì)類固醇上市銷售，用于治療炎癥相關(guān)疾病諸如變應(yīng)性鼻炎、哮喘和特應(yīng) 性皮炎。通過在人中的長期應(yīng)用，該分子的ρκ/ro性質(zhì)已經(jīng)非常確定。
[0006] 在化學(xué)角度上丙酸氟替卡松是C25H31F30 5S。丙酸氟替卡松具有500. 6的分子量。 其是白色至類白色的粉末，且在水中不可溶。像其他的局部用皮質(zhì)類固醇一樣，丙酸氟替卡 松具有抗炎、止癢和血管收縮性質(zhì)。局部用類固醇的抗炎活性的機制總體而言不清楚。然 而，皮質(zhì)類固醇被認(rèn)為通過誘導(dǎo)磷脂酶A 2抑制蛋白質(zhì)（統(tǒng)稱為脂皮質(zhì)蛋白）起作用。據(jù)推 測這些蛋白質(zhì)控制炎癥的強效調(diào)節(jié)劑（例如前列腺素和白三烯）的生物合成，后者通過抑 制其共同前體花生四烯酸的釋放來實現(xiàn)?；ㄉ南┧崾峭ㄟ^磷脂酶A 2從膜磷脂釋放。所 述化合物具有強效的抗炎活性，且特別可用于治療呼吸系統(tǒng)障礙、特別是哮喘。使用人肺細(xì) 胞溶膠制備物的體外試驗已經(jīng)確定丙酸氟替卡松為人糖皮質(zhì)激素受體激動劑，具有超過地 塞米松18倍的親和力及幾乎兩倍于倍氯米松-17-單丙酸酯（BMP)(布地奈德的活性代謝 物）的親和力。
[0007] 丙酸氟替卡松的目前的市售形式的不良反應(yīng)包括淋巴的征兆和癥狀；心血管心 悸；過敏性反應(yīng)、包括血管性水腫、皮疹、臉和舌的水腫、瘙癢、蕁麻疹、支氣管痙攣、喘鳴、呼 吸困難和過敏性/過敏樣反應(yīng)；中耳炎；扁桃體炎；鼻漏/后鼻滴注/鼻涕；耳痛；咳嗽；喉 炎；聲撕/發(fā)聲困難；鼻出血；扁桃體炎；鼻的征兆和癥狀；未指定的口咽斑塊（unspecified oropharyngeal plaques);耳鼻和喉息肉；噴嚷；鼻竇疼痛；鼻炎；喉收縮；變應(yīng)性耳、鼻和 喉障礙；味覺和/或嗅覺改變或喪失；鼻中隔穿孔；鼻粘膜出血；鼻潰瘍；聲音變化；體液 失調(diào)（fluid disturbances);體重增加；甲狀腺腫；尿酸代謝障礙；食欲紊亂；眼發(fā)炎；視 力模糊；青光眼；眼內(nèi)壓增加和白內(nèi)障；角膜炎和結(jié)膜炎；瞼結(jié)膜炎；惡心和嘔吐；腹痛；病 毒性胃腸炎；胃腸炎/結(jié)腸炎；胃腸道感染；腹部不適；腹瀉；便秘；闌尾炎；消化不良和胃 障礙；異常肝功能；損傷；發(fā)熱；銷齒；牙的問題；口腔發(fā)炎；口和舌障礙；膽囊炎；下呼吸道 感染；肺炎；關(guān)節(jié)痛和風(fēng)濕關(guān)節(jié)病；肌肉痛性痙攣和痙攣；骨折；傷口和撕裂傷；挫傷和血 腫；燒傷；肌肉骨骼炎癥；骨和軟骨障礙；關(guān)節(jié)疼痛；扭傷/勞損（strain);頸障礙/癥狀； 肌肉酸痛/疼痛；疼和痛；四肢疼痛；頭暈/眩暈；震顫；催眠作用；壓縮神經(jīng)綜合征；睡眠 障礙；頡神經(jīng)麻搏；偏頭痛；神經(jīng)質(zhì)；支氣管炎；胸部阻塞（chest congestion)和/或癥 狀；不適和疲勞；疼痛；水腫和腫脹；細(xì)菌感染；真菌感染；運動性障礙；囊腫、腫塊和團(tuán)塊 (masses);心境障礙；急性鼻咽炎；呼吸困難；由于吸入導(dǎo)致的發(fā)炎；蕁麻疹；疹/皮膚出 疫（rash/skin eruption);汗和皮脂障礙；出汗；日光性皮炎；皮炎和皮膚?。徊《拘云つw 感染；濕疹；真菌性皮膚感染；瘙癢；痤瘡和毛囊炎；燒傷；多毛癥；紅斑增加；蕁麻疹；毛囊 炎；色素減退；口周皮炎；皮膚萎縮；條紋；粟粒疹；膿皰性銀屑?。荒蚵犯腥?；細(xì)菌性生殖 道感染；痛經(jīng)；陰道念珠菌病；盆腔炎性疾?。魂幍姥?外陰陰道炎；和不規(guī)則月經(jīng)周期。
[0008] 所有市售的和研究性產(chǎn)品的氟替卡松的作用機制均是相同的；穿透細(xì)胞質(zhì)膜和 之后該分子與胞質(zhì)的糖皮質(zhì)激素受體（通過由單個基因轉(zhuǎn)錄的兩個分開的受體GR-α和 GR-β表示）結(jié)合。在這兩個受體中，GR-α與抗炎應(yīng)答的產(chǎn)生相關(guān)。其他調(diào)節(jié)炎癥的機 制通過蛋白-蛋白螯合進(jìn)行，后者經(jīng)由與其他促炎轉(zhuǎn)錄因子、諸如激活蛋白（AP-I)結(jié)合 進(jìn)行，其導(dǎo)致炎癥基因轉(zhuǎn)錄的抑制。GC-GR復(fù)合物也可以直接通過誘導(dǎo)抑制蛋白、例如抑制 NF- κ B活性的I κ B來起作用。因此，抗炎作用還影響免疫通路，導(dǎo)致免疫抑制（使用所述 藥物觀測到的副作用之一）。其它相關(guān)的副作用為眼部影響諸如眼內(nèi)壓的增加（青光眼） 和白內(nèi)障生長。然而，這些副作用與藥物的濃度及施用途徑有關(guān)。
[0009] 存在適于眼部應(yīng)用的氟替卡松的局部用制劑的需求。
[0010] 發(fā)明概述
[0011] 本發(fā)明基于制備疏水性藥物的無菌的穩(wěn)定的納米晶體、諸如丙酸氟替卡松納米晶 體或曲安奈德納米晶體的方法這一發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明的方法能使疏水性藥物（例如，丙酸氟替 卡松和曲安奈德）納米晶體的混懸劑成為0. 0001 %至10%的濃縮形式而保持尺寸、純度、 形狀（棒或板）、pH和重量摩爾滲透壓濃度（osmolality)。該方法使得可以在比之前已經(jīng) 實現(xiàn)用于治療眼和皮膚炎癥性障礙更高的可耐受濃度制備局部用制劑。該方法還能制備結(jié) 晶程度更高的（more crystalline)疏水性藥物和控制疏水性藥物的納米晶體的尺寸和粒 度分布。尺寸和粒度分布的控制可通過選擇該方法的具體條件來實現(xiàn)，諸如用于該方法的 組分溶液的溫度、PH和/或粘度，穩(wěn)定劑的類型、分子量和/或粘度，退火/緩慢冷卻持續(xù) 時間（annealing duration)、聲波處理輸出能量、批量大小和流速。
[0012] 在一個方面中，本發(fā)明提供了丙酸氟替卡松的形態(tài)（A形式），其通過包含在約 7. 8、15. 7、20. 8、23. 7、24. 5和32. 5度2 Θ的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
[0013] 本發(fā)明還提供了多種丙酸氟替卡松的納米板，其具有約l〇-l〇〇〇〇nm(例如， IOO-IOOOnm 或 300-600nm)的平均尺寸。
[0014] 本發(fā)明還提供了純化的丙酸氟替卡松的晶形，其通過不低于〇.35g/cm3 (例如，不 低于〇· 40g/cm3、不低于0· 45g/cm3、不低于0· 50g/cm3或不低于0· 55g/cm3)的振實密度表 征。
[0015] 本文描述的形態(tài)、晶形和/或納米晶體可包括一種或多種以下特征。
[0016] 所述形態(tài)進(jìn)一步通過還包含在約9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和34. 3度2 Θ 的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
[0017] 所述形態(tài)通過基本類似于圖31A中所示的X-射線粉末衍射圖表征。
[0018] 所述形態(tài)具有以重量計大于80 %的純度（例如，>85%、>90%、>95%、>97%、 >98%或 >99% )。
[0019] 所述形態(tài)通過不低于0. 35g/cm3 (例如，不低于0. 40g/cm3、不低于0. 45g/cm3、不低 于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3)的振實密度進(jìn)一步表征。
[0020] 所述形態(tài)進(jìn)一步通過以下表征：熔點為299. 5°C，熔程為KTC。
[0021] 所述形態(tài)進(jìn)一步通過約1 μ g/g/天（在水中，在室溫）的在水中的溶出度表征。
[0022] 所述形態(tài)包括具有約 IO-IOOOOnm (例如，100-1000nm、300-600nm、400-800nm 或 500-700nm)的平均尺寸的丙酸氟替卡松納米板。
[0023] 所述形態(tài)包括粒度分布范圍窄的丙酸氟替卡松納米板。換言之，納米板尺寸基本 均一。
[0024] 所述形態(tài)包括具有 50-100nm、100-300nm、300-600nm、400-600nm、400-800nm、 800-2000nm、1000-2000nm、1000-5000nm、2000-5000nm、2000-3000nm、3000-5000nm 或 5000-10000nm的粒度分布的丙酸氟替卡松納米板。
[0025] 所述納米板各自具有 5nm 至 500nm (例如，5-400nm、5_200nm、10_150nm 或 30-1 OOnm)的厚度。
[0026] 所述納米板具有基本正交于限定所述納米板厚度的表面的[001]晶軸。
[0027] 所述大量的納米板通過不低于0. 35g/cm3 (例如，不低于0. 40g/cm3、不低于0. 45g/ cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3)的振實密度表征。
[0028] 所述大量的納米板通過以下表征：熔點為299. 5°C，熔程為KTC。
[0029] 所述大量的納米板通過約1 μ g/g/天（在水中，在室溫）的在水中的溶出度表征。
[0030] 所述大量的納米板通過包含在7. 8、15. 7、20. 8、23. 7、24. 5和32. 5度2 Θ的峰的 X-射線粉末衍射圖表征。
[0031] 所述大量的納米板進(jìn)一步通過還包含在約9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和 34. 3度2 Θ的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
[0032] 所述大量的納米板通過基本類似于圖31A中所示的X-射線粉末衍射圖表征。
[0033] 所述大量的納米板具有以重量計大于80%的純度（例如，>85%、>90%、>95%、 >97%、>98%或 >99% )。
[0034] 所述晶形進(jìn)一步通過以下表征：熔點為299. 5°C，熔程為KTC。
[0035] 所述晶形進(jìn)一步通過約1 μ g/g/天（在水中，在室溫）的在水中的溶出度表征。
[0036] 所述晶形進(jìn)一步通過包含在7.8、15.7、2〇.8、23.7、24.5和32.5度2 0的峰的 X-射線粉末衍射圖表征。
[0037] 所述晶形進(jìn)一步通過還包含在約9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和34. 3度2 Θ 的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
[0038] 所述晶形通過基本類似于圖31A中所示的X-射線粉末衍射圖表征。
[0039] 所述晶形具有以重量計大于80 %的純度（例如，>85%、>90%、>95%、>97%、 >98%或 >99% )。
[0040] 在另一個方面，本發(fā)明提供了曲安奈德的新的形態(tài)、即B形式，其通過包含在約 11. 9、13. 5、14. 6、15. 0、16. 0、17. 7和24. 8度2 Θ的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
[0041] B 形式進(jìn)一步通過包含在約 7· 5、12. 4、13. 8、17. 2、18. 1、19. 9、27· 0 和 30. 3 度 2 θ 的另外的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
[0042] B形式通過基本類似于圖39中紅色的譜線的X-射線粉末衍射圖表征。
[0043] B形式基本不含雜質(zhì)。
[0044] B形式具有大于85%、大于90%、大于92%、大于95%、大于96%、大于97%、大于 98 %或大于99 %的純度。
[0045] 本發(fā)明還提供了制備上文所述的大量的納米板的方法。所述方法包括：
[0046] 提供I階段溶液（例如，無菌的溶液），其包含丙酸氟替卡松和用于丙酸氟替卡松 的溶劑；
[0047] 提供II階段溶液（例如，無菌的溶液），其包含至少一種表面穩(wěn)定劑和用于丙酸氟 替卡松的抗溶劑，其中所述至少一種表面穩(wěn)定劑包含纖維素表面穩(wěn)定劑；
[0048] 將I階段溶液與II階段溶液混合，得到III階段混合液，其中當(dāng)混合這兩種溶液 時使用聲波處理，且該混合在不超過25°C的第一個溫度進(jìn)行；和
[0049] 將III階段混合液在高于第一個溫度的第二個溫度退火（annealing) -段時間 (T1)，以致生成含大量丙酸氟替卡松的納米板的III階段混懸物。
[0050] 在另一個方面，本發(fā)明提供了制備疏水性治療劑的純化的、穩(wěn)定的、無菌的納米晶 體的方法。所述方法包括：
[0051] 提供含疏水性治療劑和用于該疏水性治療劑的溶劑的I階段溶液（例如，無菌的 溶液）；
[0052] 提供含至少一種表面穩(wěn)定劑和用于該疏水性治療劑的抗溶劑的II階段溶液（例 如，無菌的溶液）；
[0053] 將I階段溶液和II階段溶液混合，得到III階段混合液，其中所述混合在不超過 25°C的第一個溫度進(jìn)行；和
[0054] 將III階段混合液在超過第一個溫度的第二個溫度退火一段時間（T1)，以致生成 含大量該疏水性治療劑的納米晶體的III階段混懸物。
[0055] 本文所述的方法可包括一種或多種以下特征。
[0056] 所述疏水性治療劑是留體藥物、諸如皮質(zhì)類固醇。
[0057] 所述疏水性治療劑是氟替卡松或其酯或曲安奈德。
[0058] 所述疏水性治療劑是丙酸氟替卡松。
[0059] 當(dāng)混合無菌的I階段溶液和無菌的II階段溶液時，使用聲波處理（例如，功率 10-75W 或約 50-70W)。
[0060] 所述第一個溫度為-KTC至30°c、-10°c至25°C (例如，22°C或不超過20°C)、 或-5 °C至I (TC、或(TC至5 °C、或(TC至2 °C、或2 °C至4 °C、或2 °C至8 °C的溫度。
[0061] 所述第二個溫度為4°C至60°C、或KTC至40°C、或15°C至25°C的溫度。
[0062] T1為至少8小時。
[0063] II階段溶液中的至少一種表面穩(wěn)定劑包含纖維素表面穩(wěn)定劑。
[0064] 所述纖維素表面穩(wěn)定劑是分子量不超過IOOkDa的甲基纖維素。
[0065] 所述甲基纖維素在III階段混懸物中的濃度為約0. 1%至0. 5%。
[0066] 用于II階段溶液的纖維素表面穩(wěn)定劑是水溶液。
[0067] 纖維素表面穩(wěn)定劑的水溶液具有不超過4000cP(例如，不超過2000cP、不超過 1000cP、不超過500cP、不超過100cP、不超過50cP、不超過30cP或不超過15cP)的粘度。 [0068] 纖維素表面穩(wěn)定劑的水溶液具有約4cP至50cP的粘度，且所述纖維素表面穩(wěn)定劑 是甲基纖維素。
[0069] 所述抗溶劑包括水（例如，蒸餾水）。
[0070] II階段溶液中的至少一種表面穩(wěn)定劑還包含苯扎氯銨。
[0071] II階段溶液中的苯扎氯銨濃度為約0.005%至0· 15% (例如，約0.01%-0· 12% 或 0· 02% -0· 08% )。
[0072] II階段溶液的pH值不超過6. 5或不超過6. 0或不超過5. 5。
[0073] I階段溶液的溶劑包括聚醚。
[0074] 所述聚醚選自聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇（PPG)及其混合物。
[0075] 所述聚醚選自PEG400、PPG400及其混合物。
[0076] I階段溶液中PEG 400的濃度為約20至35%。
[0077] I階段溶液中PPG 400的濃度為約65 %至75%。
[0078] I階段溶液的溶劑包括一種或多種多元醇、諸如單體的多元醇（例如，甘油、丙二 醇和乙二醇）和聚合的多元醇（例如，聚乙二醇）。
[0079] I階段溶液還包含表面穩(wěn)定劑。
[0080] I階段溶液中的表面穩(wěn)定劑是吐溫80,例如以約7. 0%至15%的濃度存在于I階 段溶液中的吐溫80。
[0081] I階段溶液與II階段溶液的體積比例范圍為1:10至10:1(例如，1:3至3:1，或 1:2 至 2:1，或約 1:1)。
[0082] 纖維素表面穩(wěn)定劑是分子量不超過IOOkDa的甲基纖維素，第一個溫度是0°C至 5°C的溫度，第二個溫度是KTC至40°C的溫度，且T 1為至少8小時。
[0083] 所述方法還包括通過切向流過濾或通過連續(xù)流動離心純化所述疏水性治療劑的 大量納米晶體。所述方法可進(jìn)一步包括通過例如過濾、真空干燥或離心來干燥所述疏水性 治療劑的大量納米晶體。所述方法可進(jìn)一步包括在通過例如離心純化納米晶體后，將純化 的納米晶體與適合的水溶液混合，可以向所述水溶液中加入另外的賦形劑，從而形成符合 FDA眼或皮膚施用標(biāo)準(zhǔn)的最終制劑。例如，所述混合在混合器（例如,Silverson Lab Mixer) 中、在室溫、以6000RPM進(jìn)行約60分鐘或更長時間。
[0084] 通過將氟替卡松的無菌的I階段溶液與含苯扎氯銨、甲基纖維素和蒸餾水的無菌 的II階段溶液混合，以便制備含氟替卡松納米晶體的混懸物的III階段混懸物，來制備氟 替卡松的純化的、穩(wěn)定的、無菌的納米晶體。納米晶體為400-800nm。為了純化，即為除去 和/或減少I階段溶液和II階段溶液的結(jié)晶溶劑的濃度，將氟替卡松納米晶體進(jìn)行洗滌， 并交換至適合的水溶液中。所述交換例如通過使用切向流過濾（TFF)或中空纖維過濾筒進(jìn) 行。在一些方面中，將納米晶體交換至符合FDA眼或皮膚施用標(biāo)準(zhǔn)的制劑中。或者將納米 晶體交換至無菌的水溶液中，向所述水溶液中加入另外的賦形劑，以形成符合FDA眼或皮 膚施用標(biāo)準(zhǔn)的最終制劑。在最終的含水緩沖溶液中的氟替卡松濃度為約〇. 0001%至10% (w/v)。在一些方面中，在緩沖液交換步驟之前進(jìn)行退火步驟。退火步驟在約25-40°C進(jìn)行 并進(jìn)行約30分鐘至24小時的時間。
[0085] 優(yōu)選地，I階段溶液的氟替卡松的濃度為約0. 4%至I. 0% w/v。更優(yōu)選地，I階段 溶液的氟替卡松的濃度為約〇. 45% w/v。
[0086] 在一些方面中，I階段溶液還包含吐溫80、聚乙二醇（PEG)400和聚丙二醇 (PPG)400。吐溫80的濃度為約7. 0%至15%w/v。PEG 400的濃度為約20至35% (w/ v)。PPG 400的濃度為約65%至75% (w/v)。在一個優(yōu)選的實施方案中，I階段溶液包含約 0. 45% w/v的濃度的氟替卡松、約7. 44%的濃度吐溫80、約23% (w/v)的濃度的PEG 400 和約69.11% (w/v)的濃度的PPG 400。
[0087] I階段和II階段的混合在不超過8°C的溫度（例如，0_2°C、2-4°C或2-8°C )進(jìn)行。 I階段與π階段的體積比率為0. 15至0. 3或1:1至1: 3。將I階段溶液與II階段溶液以 0.5至1.4ml/分鐘的流速混合，其中所述II階段溶液是固定的。參見例如圖3。在其他的 實施方案中，在流動反應(yīng)器中通過將I階段溶液以〇. 5-900ml/分鐘（例如，0. 5-2. Oml/分 鐘、10-900ml/ 分鐘、12-700ml/ 分鐘、50-400ml/ 分鐘、100-250ml/ 分鐘或 110-130ml/ 分 鐘）的流速與Π 階段溶液以2. 5-2100ml/分鐘（例如，2. 5-10ml/分鐘、10-900ml/分鐘、 12-700ml/分鐘、50-400ml/分鐘、100-250ml/分鐘或110-130ml/分鐘）的流速組合形成 III階段。參見，例如圖4。在一些實施方案中，I階段溶液的流速和II階段溶液的流速基 本上是相同的。在其他的實施方案中，I階段的流速低于II階段的流速，例如，I階段溶液 與Π 階段溶液的體積比率為約1:2或1:3。在一些實施方案中，流動反應(yīng)器產(chǎn)生的III階 段混懸物的流速為約20-2800ml/分鐘（例如，約100-800ml/分鐘或200-400ml/分鐘）。 任選地，對III階段混合液進(jìn)行聲波處理。
[0088] 在一些實施方案中，最終的含水緩沖液包含甲基纖維素、滲透促進(jìn)劑和潤濕劑。甲 基纖維素的濃度為例如約0.5% (w/v)。
[0089] 本發(fā)明還包括本發(fā)明的方法產(chǎn)生的大量納米晶體和含所述納米晶體的組合物 (例如，藥物組合物）。所述組合物基本沒有有機溶劑。納米晶體具有400-800nm(例如， 300-600nm、400-600nm或500-700nm)的范圍的平均尺寸。納米晶體不聚結(jié)，且經(jīng)24小時 的時間尺寸不增加。所述納米晶體為納米板，例如，丙酸氟替卡松納米板具有基本正交于限 定所述納米板厚度的表面的[001]晶軸。所述納米板可以具有約5nm至IOOnm的范圍的厚 度。任選地，納米晶體被甲基纖維素涂覆。
[0090] 本發(fā)明還提供了無菌的局部用納米晶體氟替卡松制劑，其包含0.0001% -10% W/ V的本發(fā)明的氟替卡松納米晶體和藥學(xué)上可接受的含水賦形劑的混懸物。在一些方面中，所 述制劑在20°C具有10_20cP的粘度。所述制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約280-350m0sm/ kg。所述制劑的pH為約6-7. 5。
[0091] 在另一個方面，本發(fā)明提供了通過向有需要的個體施用、例如向有需要的個體的 瞼緣、皮膚或眼表面局部施用有效量的本發(fā)明的制劑（例如，局部用制劑）來治療或減輕 眼障礙的癥狀（例如，瞼緣炎、瞼板腺功能不良、術(shù)后痛或術(shù)后眼部炎癥、干眼、眼變態(tài)反應(yīng) 或眼色素層炎）的方法。所述制劑例如通過使用涂藥器（例如，刷子或藥簽）施用。在一 個實施方案中，通過例如涂藥器（例如,刷子諸如Latisse?.刷或藥簽、諸如25-3317-U藥 簽），將治療有效量的所述制劑施用于有需要的個體用于治療瞼緣炎。在一些實施方案中， 所述制劑是含本發(fā)明的0. 001% -5% FP納米晶體（例如，0. 01-1 %或約0. 25%、0. 1 %或 0.05% )和藥學(xué)上可接受的含水賦形劑的混懸物的無菌的局部用納米晶體丙酸氟替卡松 制劑。在一些實施方案中，所述制劑還包含約0.002-0. 01% (例如50ppm±15%)的苯扎氯 銨（BKC)。在一些實施方案中，所述制劑還包含一種或多種包衣分散劑（例如，泰洛沙泊、聚 山梨酯80和PEG硬脂酸酯、諸如PEG40硬脂酸酯）、一種或多種組織潤濕劑（例如，甘油）、 一種或多種聚合的穩(wěn)定劑（例如，甲基纖維素4000cP)、一種或多種緩沖劑（例如，磷酸氫 二鈉 Na2HPO4和磷酸二氫鈉 NaH2PO4和/或一種或多種張度調(diào)節(jié)劑（tonicity adjusting agent)(例如，氯化鈉）。在一些實施方案中，所述制劑在20°C具有40-50cP的粘度。在一 些實施方案中，制劑的重量摩爾滲透壓濃度為約280-350 (例如，約285-305)m0sm/kg。在一 些實施方案中，制劑的pH為約6. 8-7. 2。在一些實施方案中，所述制劑在20°C具有40-50cP 的粘度。在一些實施方案中，制劑中的FP納米晶體具有300-600nm的中位尺寸、500-700nm 的平均尺寸、300_600nm的D50值和/或低于2 μ m (例如，低于1. 5 μ m)的D90值。
[0092] 在又一個方面，本發(fā)明提供了通過向有需要的個體施用有效量的本發(fā)明的藥物組 合物來治療或減輕呼吸系統(tǒng)疾?。ɡ纾蚵宰枞苑渭膊。–OPD))、鼻炎、皮炎或 食管炎的方法。
[0093] 還提供了藥物組合物，其包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑以及通過 本發(fā)明的方法制備的疏水性藥物（例如，丙酸氟替卡松）的納米晶體。所述組合物可以是 干粉劑/吸入劑、眼用制劑、噴霧劑、軟膏劑、乳膏劑、丸劑等形式。
[0094] 在另一個方面本發(fā)明提供了半柔性的聚氨酯涂藥器，其包含本發(fā)明的氟替卡松納 米晶體和藥學(xué)上可接受的含水賦形劑。
[0095] 在又一個方面中，本發(fā)明提供了外科手術(shù)裝置或可植入裝置（例如，支架、血管成 形術(shù)氣球、導(dǎo)管、分流器、入口設(shè)備（access instrument)、導(dǎo)線、移植物系統(tǒng)、血管內(nèi)成像裝 置、血管閉合裝置、內(nèi)窺鏡配件或本文公開的其他裝置），其涂覆有或浸透著本發(fā)明的丙酸 氟替卡松晶體。在一些實施方案中，將丙酸氟替卡松晶體涂覆或包埋至外科手術(shù)或可植入 裝置中改變了該藥物的釋放時間。例如，將丙酸氟替卡松晶體涂覆或包埋至外科手術(shù)或可 植入裝置中延長了該藥物的釋放時間。
[0096] 除非另外定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技 術(shù)人員通常所理解的相同的含義。雖然與本文所述的那些相似或等同的方法和材料可用于 實施本發(fā)明，但仍然在下文描述了適合的方法和材料。所有本文提及的出版物、專利申請、 專利和其他參考文獻(xiàn)的全部內(nèi)容明確引入本文作為參考。如果有矛盾，以本說明書、包括定 義為準(zhǔn)。此外，本文描述的材料、方法和實施例僅僅是說明性的，而不是意欲進(jìn)行限制。
[0097] 本發(fā)明的方法的優(yōu)勢包括所述產(chǎn)物（例如，所述疏水性藥物的納米晶體）比該藥 物的原料（stock material)更純（或至少不會更不純）、結(jié)晶程度更高和/或更穩(wěn)定原料。 優(yōu)勢還包括所述產(chǎn)物的尺寸和粒度分布是可控的且產(chǎn)物的尺寸可以是基本上均勻的（其 可導(dǎo)致在體內(nèi)更高地控制藥物釋放），以及本發(fā)明的方法很少或不引起藥物分解。本發(fā)明的 其他特征和優(yōu)勢通過以下詳述和權(quán)利要求將是顯而易見的。
[0098] 附圖簡述
[0099] 圖1是丙酸氟替卡松物理和化學(xué)特征的概述。
[0100] 圖2是丙酸氟替卡松及其常見雜質(zhì)的HPLC色譜圖。
[0101] 圖3是本發(fā)明方法的一個實施方案的流程（稱為"分批方法）。
[0102] 圖4本發(fā)明方法的另一個實施方案的流程（稱為"流動方法"）。
[0103] 圖5是顯示如下內(nèi)容的圖：通過改變階段II溶液的具體組成，丙酸氟替卡松納米 晶體平均尺寸是可控的。
[0104] 圖6是顯示如下內(nèi)容的圖：通過自頂向下技術(shù)，諸如微流化 (microfluidization)、氣流粉碎（jet-milling)、超聲處理（濕磨）和勻化，制備的丙酸氟 替卡松的粒度。
[0105] 圖7是顯示階段II溶液的pH對丙酸氟替卡松的粒度的影響的圖。
[0106] 圖8是顯示階段II溶液中不同的穩(wěn)定劑對丙酸氟替卡松的粒度的影響的圖。 [0107] 圖9是顯示階段III混合物的pH對丙酸氟替卡松的粒度的影響的圖。
[0108] 圖10是顯示純化的丙酸氟替卡松納米晶體不隨著時間推移而聚集的圖。
[0109] 圖11是顯示如下內(nèi)容的圖：當(dāng)混合階段I溶液和階段II溶液時，溫度對丙酸氟替 卡松的粒度的影響。
[0110] 圖12是顯示如下內(nèi)容的圖：退火溫度對在階段III混懸物中具有0. 1 %濃度的丙 酸氟替卡松的粒度的影響。
[0111] 圖13是顯示如下內(nèi)容的圖：退火溫度對在階段III混懸物中具有10%濃度的丙 酸氟替卡松的粒度的影響。
[0112] 圖14是顯示過濾器類型對藥物晶體損失的影響的圖。
[0113] 圖15是顯示過濾器孔徑對藥物晶體損失的影響的圖。
[0114] 圖16是顯示作為批規(guī)模（從左至右：20g、100g、250g、1000g和2000g)的函數(shù)的 制劑的分散性的圖。
[0115] 圖17是顯示作為丙酸氟替卡松濃度（從左至右：10%、5%、1%、0· 1%、0· 05%、 0. 01%和0. 005% )的函數(shù)的制劑的分散性的圖。
[0116] 圖18是顯示作為時間的函數(shù)的制劑的均勻性的圖。
[0117] 圖19是流動反應(yīng)器的示意圖。
[0118] 圖20是顯示在所述流動方法中流速對丙酸氟替卡松的粒度的影響。
[0119] 圖21A-C是顯示以下內(nèi)容的圖：由所述分批方法制得的丙酸氟替卡松納米晶體的 粒度分布、由勻化制得的丙酸氟替卡松顆粒和從制造商獲得的丙酸氟替卡松原料。
[0120] 圖22是一組顯示在25°C和40°C達(dá)至多75天的丙酸氟替卡松納米混懸劑穩(wěn)定性 的圖。
[0121] 圖23是顯示以下內(nèi)容的圖：勻化的丙酸氟替卡松（1-5微米，由灰色正方形點表 示）和由所述分批方法制備的丙酸氟替卡松晶體（400_600nm，由黑色菱形點表示）的溶出 度。
[0122] 圖24A和24B分別是丙酸氟替卡松原料和由所述分批方法制備的納米晶體的色譜 圖。
[0123] 圖25A和25B分別是由所述分批方法制備的干燥的丙酸氟替卡松晶體和丙酸氟替 卡松原料的光學(xué)顯微照片（型號：〇MAX，1600X)原料。
[0124] 圖26A和26B是由所述分批方法制備的干燥的丙酸氟替卡松晶體的掃描電子顯微 照片。
[0125] 圖27A和27B分別是干燥的丙酸氟替卡松原料和由勻化制備的丙酸氟替卡松晶體 的掃描電子顯微照片。
[0126] 圖28A和28B分別是由所述分批方法制備的丙酸氟替卡松納米晶體和丙酸氟替卡 松原料的組合DSC/TGA。
[0127] 圖29是由本發(fā)明的分批方法制備的丙酸氟替卡松納米晶體的傅里葉變換紅外光 譜掃描圖(Fourier Transform Infrared Spectroscopic Scan) 〇
[0128] 圖30是丙酸氟替卡松原料的傅里葉變換紅外光譜掃描圖。
[0129] 圖31A是由所述分批方法制備的丙酸氟替卡松納米晶體的XRPD圖（黑色）。
[0130] 圖31B是由所述分批方法制備的丙酸氟替卡松納米晶體的XRPD圖（黑色），其與 交蓋的多晶型物1(紅色）和多晶型物2(藍(lán)色）的計算的XRPD圖交蓋。藍(lán)色的箭頭顯示 XRPD圖中的一些區(qū)別。
[0131] 圖32是顯示本發(fā)明的方法制備的曲安奈德晶體的粒度分布的圖。
[0132] 圖33是曲安奈德原料的DSC掃描圖。
[0133] 圖34是本發(fā)明的方法制備的曲安奈德晶體的DSC掃描圖。
[0134] 圖35是曲安奈德原料的熱重分析。
[0135] 圖36是本發(fā)明的方法制備的曲安奈德晶體的熱重分析。
[0136] 圖37A-E是不同放大倍率的曲安奈德原料和本發(fā)明的方法制備的曲安奈德晶體 的掃描電子顯微照片：A和B -分別在100X和5000X放大倍率的曲安奈德原料；C、D和E -分別在100X、5000X和10, 000X放大倍率的由本發(fā)明的方法制備的曲安奈德晶體。
[0137] 圖38是顯示用于丙酸氟替卡松納米晶體的制備和純化的本發(fā)明的方法的實施方 案的示意圖。
[0138] 圖39是本發(fā)明的方法制備的曲安奈德納米晶體的XRH)圖（紅色），其與曲安奈德 原料的XRPD圖（藍(lán)色）交蓋。藍(lán)色的箭頭顯示XRPD圖中的一些區(qū)別。
[0139] 發(fā)明詳述
[0140] 本發(fā)明描述了用以制備疏水性治療劑（諸如丙酸氟替卡松）的無菌的納米晶體 (任選地納米混懸劑）的方法和組合物，其被最優(yōu)化以符合藥物施用標(biāo)準(zhǔn)（例如，局部或鼻 內(nèi)施用）。通過所述方法制備的組合物理想地適用于炎性障礙的局部治療，諸如眼部障礙和 皮膚障礙。通過所述方法制備的組合物還理想地適用于所述組合物中的疏水性藥物所應(yīng)用 的障礙的全身或非全身治療，諸如炎性障礙、呼吸系統(tǒng)障礙、自身免疫性疾病和癌癥。
[0141] 當(dāng)施用于有需要的個體時，通過本發(fā)明的方法制備的藥物納米晶體可以是適用于 具體的施用途徑的各種形式，例如滴眼劑、凝膠劑、軟膏劑、干粉末、凝膠劑、氣霧劑或膠態(tài) 混懸劑（例如，液體混懸劑）的形式。例如，藥物納米晶體為混懸于另一種作為"連續(xù)"相 的相中的"分散"相。納米混懸劑可以定義為，通過適合的方法制備并通過適合的穩(wěn)定劑或 表面穩(wěn)定劑穩(wěn)定的納米尺寸的藥物顆粒的膠態(tài)分散體。除非另外說明，否則術(shù)語"穩(wěn)定劑"、 "表面穩(wěn)定劑"和"空間穩(wěn)定劑（steric stabilizer)"在本文中可以互換使用。在一個實 施方案中，將藥物遞送或配制以用于經(jīng)由全身或局部途徑的遞送。例如，將藥物遞送或配制 以用于直接或經(jīng)由涂藥器（例如，刷子或藥簽）遞送。例如，將藥物遞送或配制以用于經(jīng)由 局部途徑遞送至組織、諸如眼組織和/或附器（adnexa)?？梢詫⑺幬镞f送或配制以用于經(jīng) 眼內(nèi)、玻璃體內(nèi)、視網(wǎng)膜下、囊內(nèi)、脈絡(luò)膜上、眼球筋膜囊下（subtenon)、結(jié)膜下、前房內(nèi)、瞼 內(nèi)、穹窿、眼球后或眼球周注射而遞送。還可以將藥物遞送或配制以用于經(jīng)由局部施用遞送 至組織、諸如眼組織和/或附器。還可以將藥物遞送或配制以用于經(jīng)由可植入或外科手術(shù) (例如，藥物遞送）設(shè)備遞送。
[0142] 不溶性藥物的納米混懸劑、諸如納米晶體混懸劑通過增強生物利用度可以顯著降 低其有效濃度。"生物可利用"意指是分子上可供細(xì)胞吸收的溶解的藥物。
[0143] 丙酸氟替卡松幾乎不溶于水中，溶解度為0. 14微克/ml。由于大多數(shù)眼用混懸劑 是含水的，不溶性藥物的粒度決定了其在任何給定時間成為溶解的藥物（或生物可利用藥 物）的溶出度。提高生物利用度的一個方式是確保完全溶解的藥物溶液。對于不溶性藥 物，提高不溶于水的藥物的生物利用度的方式是通過利用微粉化或納米級的劑型。在丙酸 氟替卡松的情況中，通過降低粒度顯著增加了溶出度。800-900nm尺寸的丙酸氟替卡松顆 粒的釋放速率是>10微米的顆粒的許多倍。因此，丙酸氟替卡松的納米混懸劑具有產(chǎn)生強 效藥物的潛力，其在不引起不利副作用的濃度有效。濃度較高時，丙酸氟替卡松可以引起 眼內(nèi)壓升高，導(dǎo)致青光眼和白內(nèi)障。如果藥物是納米微?；蚴歉苡谒男螒B(tài)，則可以預(yù)見 更低濃度的有效的丙酸氟替卡松的制劑。對于丙酸氟替卡松，市售藥品的有效濃度范圍為 0.005% (克廷膚）和0.5% (Flonase)。因此，使得藥物在以前對于所述適應(yīng)癥不曾考慮 的濃度"有效"，是一個令人驚訝和不可預(yù)期的結(jié)果。類似地，對于另一種疏水性藥物曲安奈 德（在28°C水溶解度為17. 5 μ g/mL)，當(dāng)藥物為例如通過本發(fā)明的方法生成的納米顆粒形 式時，可獲得在預(yù)料不到的更低的曲安奈德濃度的TA的有效的制劑，所述濃度對于具體適 應(yīng)癥而言是以前不曾考慮過的。
[0144] 因此，在需要立即緩解、然后持續(xù)緩解的局部用藥的設(shè)計中，推測還具有生物粘附 性的納米晶體混懸劑將有助于增加藥物的停留時間，同時增加生物利用度。在本發(fā)明描 述的實例中，開發(fā)丙酸氟替卡松混懸劑用于治療瞼緣炎，其特征為眼瞼的炎癥和感染。然 而，本文描述的丙酸氟替卡松組合物還可以用于預(yù)防或治療其他眼部炎性病癥。例如，本 發(fā)明中描述的組合物可以用于外科手術(shù)后的術(shù)后護(hù)理。例如，本發(fā)明的組合物可以用于 術(shù)后疼痛的控制、術(shù)后炎癥的控制、氦激光小梁成形術(shù)和屈光性操作（photorefractive procedures)。此外，丙酸氟替卡松組合物可以用于治療其他眼部障礙、諸如眼部變態(tài)反應(yīng)、 變應(yīng)性結(jié)膜炎、囊樣黃斑水腫、眼色素層炎或瞼板腺功能不良。此外，丙酸氟替卡松組合物 可以用于治療皮膚障礙、諸如特應(yīng)性皮炎、皮膚損害、濕疹、銀屑病或疹。
[0145] 疏水性藥物的穩(wěn)定的納米晶體制造的挑戰(zhàn)
[0146] 納米混懸劑的成功的制造具有兩個主要挑戰(zhàn)。第一個挑戰(zhàn)是生成所需尺寸的顆 粒。對大多數(shù)不溶于水的藥物，所需的粒度是亞微米，范圍為從低nm至高（10-990nm)。第 二步是長期保持粒度。這兩個步驟都具有挑戰(zhàn)性。
[0147] 通常通過"自頂向下"的技術(shù)制備藥物混懸劑，通過該技術(shù)將分散體機械地破碎為 更小的顆粒。技術(shù)諸如濕磨、聲波處理、微流化和高壓勻化為該技術(shù)的實例以創(chuàng)造微粉化和 納米化顆粒。在高壓勻化中，由該方法得到的納米晶體尺寸不僅取決于藥物原料的硬度，還 取決于勻化壓力和循環(huán)次數(shù)。然而，其不取決于穩(wěn)定劑的類型。因此，穩(wěn)定劑的功效-是 否能防止顆粒聚集-在加工后和存儲期間顯示。因此，理解所用特定方法中顆粒形成所涉 及的現(xiàn)象是極其重要的。
[0148] 在研磨或機械的粒度降低方法期間，在研磨容器中兩個相反的過程相互影響：原 料碎裂為更小的顆粒和通過顆粒間碰撞的導(dǎo)致的顆粒增長。這兩個相反的現(xiàn)象的發(fā)生取決 于工藝參數(shù)。通常在某個時間點后，粒度已經(jīng)達(dá)到恒定水平，且繼續(xù)研磨不進(jìn)一步降低粒 度。在一些情況中，研磨時間的增加甚至可導(dǎo)致粒度的逐漸增加和原料的多相性，而通過降 低的研磨速度實現(xiàn)降低的粒度。研磨期間還可能發(fā)生物理形式的改變或無定形化。超過某 臨界壓力值的機械壓力增加晶格振動，其使晶格不穩(wěn)定。缺陷的數(shù)量增加，且向無定形態(tài)的 轉(zhuǎn)化在臨界缺陷濃度以上發(fā)生。在顆粒減小技術(shù)期間對藥物晶體的高應(yīng)力導(dǎo)致晶體結(jié)構(gòu)的 去穩(wěn)定作用，結(jié)晶度的損失，且有時轉(zhuǎn)變?yōu)檩^不穩(wěn)定的多晶型物。晶體結(jié)構(gòu)中無定形區(qū)的出 現(xiàn)導(dǎo)致粒度的逐漸增加，因為混懸劑變回穩(wěn)定的晶體形態(tài)。
[0149] 納米晶體制備的另一個挑戰(zhàn)是顆粒尺寸的逐漸增加，也稱為"奧斯特瓦爾德成熟 (Ostwald Ripening) "。膠態(tài)混懸劑中的晶體生長通常被稱為奧斯特瓦爾德成熟，且是粒度 和粒度分布改變的原因。奧斯特瓦爾德成熟源自顆粒溶解性對它們尺寸的依賴性。根據(jù) Ostwald - Freundlich方程，小晶體具有比更大的晶體更高的飽和溶解度，在小和大的晶體 之間造成藥物濃度梯度。因此，分子從環(huán)繞小晶體的較高濃度擴散至具有較低藥物濃度的 較大晶體附近的區(qū)域。這產(chǎn)生大晶體周圍的過飽和的溶液狀態(tài)，導(dǎo)致藥物結(jié)晶至大晶體上。 該擴散過程得到環(huán)繞小晶體的不飽和溶液，引起藥物分子從小晶體溶出至大量介質(zhì)中。該 擴散過程繼續(xù)直至所有的小晶體溶解。奧斯特瓦爾德成熟實質(zhì)上是較小晶體變?yōu)榇箢w粒晶 體的過程。這隨后導(dǎo)致膠態(tài)混懸劑的晶體大小和粒度分布變化至更高的范圍。連續(xù)相中溶 解的藥物的分散體也總是導(dǎo)致粒度的不穩(wěn)定性。
[0150] 納米晶體的另一個挑戰(zhàn)是顆粒的成團(tuán)或結(jié)塊。穩(wěn)定劑在分散體的穩(wěn)定中起關(guān)鍵作 用。穩(wěn)定劑需要吸附在顆粒表面以實現(xiàn)適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定。此外，吸附應(yīng)當(dāng)足夠強以持續(xù)長時間。 穩(wěn)定劑的吸附可通過離子相互作用、氫鍵、范德華力或離子偶極相互作用或通過疏水作用 發(fā)生。
[0151] 在選擇藥物-穩(wěn)定劑對之前始終需要考慮穩(wěn)定劑的官能團(tuán)和藥物原料之間的可 能的相互作用。許多藥物具有含能相互作用的官能團(tuán)如酚類、胺、羥基、醚類或羧酸基團(tuán)的 結(jié)構(gòu)。強離子相互作用、氫鍵、偶極子-誘導(dǎo)的力和弱的范德華或倫敦（London)相互作用 可增加或妨礙顆粒形成。穩(wěn)定劑的濃度水平也重要。吸附/面積是通常不依賴于粒度的表 面性質(zhì)。由于吸附量與表面積相關(guān)，這意味著穩(wěn)定劑的總量與晶體大小直接相關(guān)。當(dāng)吸附 導(dǎo)致的自由能的減少補償所伴隨的熵?fù)p失時，發(fā)生聚合物分子至晶體表面的吸附。由于空 間穩(wěn)定化基于吸附/解吸附過程，所以加工變量、諸如穩(wěn)定劑的濃度、粒度、溶劑等對于穩(wěn) 定劑的功效是重要的因素。
[0152] 穩(wěn)定晶體大小的另一種方法為微粒混懸物在特定穩(wěn)定劑的存在下的噴霧干燥，所 述技術(shù)已經(jīng)用于制備丙酸氟替卡松的噴霧的微粒。與自頂向下方法的組合還用于制備所需 尺寸的顆粒。穩(wěn)定粒度的又一種方法是凍干微?；鞈椅铩?br> [0153] 通常用于制備納米混懸劑的其他方法是抗溶劑沉淀方法，由此將藥物溶液在抗溶 劑中沉淀為納米晶體。該途徑被稱為"自下而上"的結(jié)晶途徑，由此原位制備納米晶體。沉 淀作為納米晶體的藥物通常伴隨勻化或聲波處理。如果在沉淀之前將藥物溶于有機溶劑、 諸如丙酮中，則在形成顆粒后必須除去有機溶劑。這通常通過蒸發(fā)溶劑進(jìn)行。該蒸發(fā)步驟 造成該顆粒形成方法的挑戰(zhàn)，因為蒸發(fā)過程可以改變顆粒穩(wěn)定化的動力學(xué)，常見為粒度的 快速增加。此外，殘留水平的有機溶劑常常保持結(jié)合至在制劑中使用的賦形劑。因此，通過 研究，該方法具有其挑戰(zhàn)性，且一般不優(yōu)選。
[0154] 通過本發(fā)明定義的方法制備疏水性藥物的納米晶體不使用需要除去的有毒的有 機溶劑，且不顯示以上章節(jié)中定義的顆粒不穩(wěn)定性。
[0155] 本發(fā)明的核心特征
[0156] 本發(fā)明提供了可以制備藥物（例如，疏水性藥物）的納米晶體或含納米晶體的 混懸劑的聲波處理結(jié)晶（sonocrystallization)/純化方法。所述方法：（a)在制備納米 晶體之前對所有的組分進(jìn)行無菌的過濾，（b)制備期望尺寸的晶體，（c)通過使用特定的 空間穩(wěn)定組合物結(jié)合在特定溫度退火，來穩(wěn)定納米晶體，（d)通過另一種連續(xù)相替換初始 連續(xù)相，為配方設(shè)計師（formulator)提供了純化所述顆粒的靈活性和（d)提供了在最終 制劑介質(zhì)中實現(xiàn)最終所需的藥物濃度的靈活性。在步驟（d)中，純化步驟的意義可能是本 發(fā)明的主要和關(guān)鍵的方面，因為產(chǎn)生和穩(wěn)定具有期望尺寸的顆粒的所述組合物是差別細(xì) 微的（nuanced)并依賴于以下參數(shù)：離子強度、聚合物分子量和結(jié)構(gòu)及pH。用于產(chǎn)生所述 顆粒的所述組合物通常不是配方設(shè)計師設(shè)想的作為最終制劑的組合物或最終藥物濃度。 這通過噴霧干燥或凍干實現(xiàn)。通過該方法生成的納米晶體的尺寸范圍為100nm-500nm、 500-900nm、400-800nm和900nm至lOOOOnm。優(yōu)選地納米晶體的尺寸范圍為400-800nm(例 如，400-600nm)。本發(fā)明的納米晶體的尺寸和粒度分布可以通過常規(guī)方法、諸如動態(tài)光散射 (DLS)、掃描電子顯微鏡檢術(shù)（SEM)、透射電子顯微鏡（TEM)和X射線粉末衍射（XRPD)測定。 在本發(fā)明中，通過與最終的生物相容的、組織相容的緩沖液交換純化納米晶體。
[0157] 兩部分方法：該方法特征為制備納米晶體的兩部分方法，如步驟1和步驟2所定 義。任選地，所述方法為單個步驟，由此最終制劑在單個步驟（僅步驟1)中制備。對于兩 步驟方法（步驟1，隨后進(jìn)行步驟2)，所述方法的第一個部分是所需尺寸的納米晶體的制備 (步驟1)。所述方法的第二個部分是納米晶體純化，從而得到用于最終制劑的以所需藥物 濃度混懸的高純度的納米晶體和最佳的賦形劑組合物（步驟2)。
[0158] 藥物濃度：在一個優(yōu)選的實施方案中，初始納米晶體濃度（步驟1后）是0. 1 %藥 物（例如，皮質(zhì)類固醇、諸如FP)，但最終制劑可以高至10% (步驟2后）。混懸物的初始濃 度可低于0. 1 % (步驟1中），并在純化方法（步驟2)期間濃縮至10%，其具有同樣的介質(zhì) 組成或不同的介質(zhì)組成。混懸物的初始濃度可以是0.1%或低于0.1%、優(yōu)選0.06%。初 始混懸物可以純化至更低的濃度（步驟2中），其具有同樣的介質(zhì)組成或不同的介質(zhì)組成。 在優(yōu)選的組合物中，初始混懸物可以以〇. 06%的濃度形成（步驟1中），并純化至0. 06%或 更低（步驟2中），其具有同樣的初始介質(zhì)組成或不同的介質(zhì)組成。納米混懸劑的初始濃度 可以是 1%、1% -0· 5%、0· 5% -0· 1%、0· 1% -0· 05%、0· 05% -0· 01%、0· 01% -0· 005%、 0. 005% -0. 001%、0. 001% -0. 0005%、0. 0005% -0. 0001%、0. 0001% -0. 00001%。
[0159] 步包括將藥物在FDA-批準(zhǔn)的賦形劑中溶解以得到I階段。然后將該溶液（I 階段）經(jīng)由0.22微米PVDF(聚偏二氟乙烯）過濾器無菌過濾。制備具有一定粘度、pH和 離子強度的含特定的空間穩(wěn)定劑的組合物的溶液。這是II階段。在一個實施方案中，藥物 為甾體藥物。在一個優(yōu)選的實施方案中，藥物是丙酸氟替卡松。在另一個優(yōu)選的實施方案 中，藥物是糠酸氟替卡松。在另一個實施方案中，藥物丙酸氟替卡松的任何鹽形式。
[0160] 在一個實施方案中，步驟1包括：
[0161] 提供含疏水性治療劑和用于所述疏水性治療劑的溶劑的I階段溶液（例如，無菌 的溶液）；
[0162] 提供含至少一種表面穩(wěn)定劑和用于所述疏水性治療劑的抗溶劑的II階段溶液 (例如，無菌的溶液）；
[0163] 將I階段溶液和II階段溶液混合，得到III階段混合液，其中所述混合在不超過 25°C的第一個溫度進(jìn)行；
[0164] 將III階段混合液在超過第一個溫度的第二個溫度退火一段時間（T1)，以生成含 疏水性治療劑的大量納米晶體的III階段混懸物，和
[0165] 任選地通過例如切向流過濾、中空纖維過濾筒或離心（例如，連續(xù)流動離心）純化 所述納米晶體。
[0166] 任選地，以約L 6L/min在約39, OOOxg進(jìn)行離心。
[0167] 任選地，步驟1包括在退火步驟之后和純化步驟之前用溶液稀釋的步驟。例如，稀 釋步驟包括將納米晶體在溶液中的再分散。用于稀釋的溶液可以包括約0. 002-0. 01% (例 如50ppm±15% )苯扎氯銨、0.01-1%聚山梨酯80(例如，約0.2% )、0.01-1% PEG40硬脂 酸酯（例如，約〇. 2% )、緩沖劑（例如，檸檬酸鹽緩沖液、pH 6. 25)和水。將純化（例如，離 心期間）期間形成的小球再分散至最終制劑中（參見，例如圖38)?？蓪⒃撔∏蚣尤脒m合的 水溶液中以再分散在混合器（例如，Silverson Lab Mixer)中的納米晶體。所述再分散可 以在室溫以6000RPM進(jìn)行約45mins或更長時間（例如，約60mins或更長時間），得到符合 FDA眼或皮膚施用標(biāo)準(zhǔn)的最終制劑。所述制劑可包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
[0168] 例如，所述疏水性治療劑是類固醇。
[0169] 例如，所述疏水性治療劑是丙酸氟替卡松或曲安奈德。
[0170] 例如，所述至少一種表面穩(wěn)定劑包含纖維素表面穩(wěn)定劑、諸如甲基纖維素。
[0171] 例如，所述甲基纖維素具有不超過IOOkDa的分子量。
[0172] 例如，用于II階段溶液的纖維素穩(wěn)定劑（例如，甲基纖維素）具有4cP至50cP的 粘度，例如，15_45cP。
[0173] 例如，第一個溫度例如不超過20°C、不超過8°C，例如<4°C或<2°C或0_4°C。
[0174] 例如，第二個溫度即退火溫度為20°C至60°C。
[0175] 例如，降低納米晶體的粒度和/或硬化納米晶體（例如，為增加納米晶體的硬度） 需要退火步驟。
[0176] 例如，以約I. 6L/min在約39, OOOx g進(jìn)行連續(xù)流動離心。
[0177] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體具有IOnm至10000nm(例如， 50-5000nm、80-3000nm、100-5000nm、100-2000nm、IOO-IOOOnm 或 100-800nm)的平均尺寸。
[0178] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體具有適于通過顯微針（即、27-41號） 遞送的粒度。例如，當(dāng)在眼的脈絡(luò)膜周隙中注射時，所述納米晶體可以有效遞送至眼的背面 或?qū)⒏徛厝芙庖允沟盟幬镏委煱薪M織而不浸析至眼前部的組織、諸如晶狀體、睫狀體、 玻璃質(zhì)等，由此最小化眼的副作用、諸如高眼內(nèi)壓（IOP)或白內(nèi)障形成。
[0179] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體具有窄的粒度分布范圍。換言之，所述 納米晶體大小基本均勻。
[0180] 例如，納米晶體' D90和DlO值的比例低于10,例如，低于5、低于4、低于3、低于2 或低于 1. 5。例如，納米晶體具有 50-100nm、100-300nm、300-600nm、400-600nm、400-800nm、 800-2000nm、1000-2000nm、1000-5000nm、2000-5000nm、2000-3000nm、3000-5000nm 或 5000-10000nm的粒度分布。
[0181] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體具有不超過5000nm(例如，不超過 4000nm、不超過3000nm、不超過2000nm、不超過lOOOnm、不超過900nm、不超過800nm、不超 過700nm、不超過700nm、不超過600nm、不超過500nm、不超過400nm、不超過300nm、不超過 200nm、不超過IOOnm或不超過80nm)的D90值。
[0182] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體涂覆有甲基纖維素。
[0183] 例如，通過本文所述的方法制備的甲基纖維素-涂覆的納米晶體是穩(wěn)定的，例如， 它們不聚集。
[0184] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體為具有400_600nm的粒度分布的丙酸 氟替卡松納米晶體。
[0185] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體為具有300_400nm的粒度分布的曲安 奈德納米晶體。
[0186] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體為液體混懸劑或干粉劑形式。
[0187] 例如，通過本文所述的方法制備的納米晶體具有0. 0001 %至10%、至20%、至 30%、至 40%、至 50%、至 60%、至 70%、至 80%、至 90%、至 99%或至 99. 99%的濃度。
[0188] 例如，當(dāng)混合I階段和II溶液時，應(yīng)用聲波處理。
[0189] 例如，在II階段溶液中甲基纖維素的濃度范圍為0. 1 %至0. 5 % (例如， 0. 2-0. 4% ) 〇
[0190] 例如，II階段溶液還包含第二種穩(wěn)定劑，例如，0· 005 %至0· 1 % (例如， 0· 01-0. 02% )的濃度范圍的苯扎氯銨。
[0191] 例如，當(dāng)疏水性藥物是丙酸氟替卡松時，II階段溶液具有5. 5的pH。
[0192] 例如，當(dāng)疏水性藥物是曲安奈德時，II階段溶液具有約4的pH。
[0193] 例如，I階段溶液的溶劑包括聚醚。
[0194] 例如，所述聚醚選自聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇（PPG)及其混合物。
[0195] 例如，所述聚醚選自PEG400、PPG400、PEG40-硬脂酸酯及其混合物。
[0196] 例如，在I階段溶液中PEG 400的濃度為約20至35%。
[0197] 例如，在I階段溶液中PPG 400的濃度為約65%至75%。
[0198] 例如，I階段溶液的溶劑包括一種或多種多元醇、諸如單體的多元醇（例如，甘油、 丙二醇和乙二醇）和聚合的多元醇（例如，聚乙二醇）。
[0199] 例如，I階段溶液的溶劑包括一種或多種單體的多元醇。
[0200] 例如，I階段溶液還包含表面穩(wěn)定劑。
[0201] 例如，I階段溶液中的表面穩(wěn)定劑是吐溫80,例如在I階段溶液中濃度為約7. 0% 至15%的吐溫80。
[0202] 例如，I階段溶液中的疏水性藥物的濃度為約0. 1-10%，例如，0. 1至5.0%、 0· 2-2. 5%或 0· 4 至 10%。
[0203] 例如，當(dāng)疏水性藥物是FP時，F(xiàn)P在I階段溶液中的濃度約0. 1-10%，例如，0. 4至 1. 0%。
[0204] 例如，I階段溶液與II階段溶液的體積比率范圍為1:10至10:1 (例如，1:3至3:1， 或1:2至2:1，或約1:1)。
[0205] 例如，纖維素表面穩(wěn)定劑是分子量不超過IOOkDa的甲基纖維素，第一個溫度是 (TC至5°C、第二個溫度是KTC至401：，且T1為至少8小時。
[0206] 本發(fā)明的方法能制備從非常小的尺寸（例如，<75nm)至更大的尺寸（例如， 5, OOOnm)的范圍的緊密（tight)的粒度分布（PSD)的藥物晶體，并得到可以單獨使用特定 尺寸的顆粒，或與通過本文所述的方法制備的相同的藥物晶體的更小或更大的尺寸的顆粒 組合，或與藥物的不同形式（例如，原料或通過勻化得到的形式）或與其他賦形劑（諸如溶 齊U、緩和劑、粘膜粘著劑）組合，以控制所述藥物的釋放、分配、代謝（metabolization)或消 除，或增強所述藥物組織穿透力或組織停留時間。
[0207] 在一個實施方案中，在靜態(tài)的分批反應(yīng)器中使用聲波處理（例如，超聲處理）或超 勻化以將沉淀藥物在抗溶劑中分散來制備藥物混懸劑。在一個實施方案中，通過置于向全 部的液體提供超聲能量的超聲處理浴中完成超聲處理過程。在另一個實施方案中，使用探 頭超聲焊極完成超聲處理過程。在又一個實施方案中，藥物在抗溶劑中沉淀期間的分散步 驟是高壓勻化。
[0208] 在另一個實施方案中，在流通式反應(yīng)器（flow-through reactor)中在超聲處理或 超勻化期間制備藥物混懸劑。溶液的溫度可以是0-4或2-8攝氏度。在另一個實施方案中， 溶液的溫度可以是22-30攝氏度。流通式反應(yīng)器可以加保護(hù)層以控制溫度。
[0209] 通過注射泵將藥物溶液（I階段）定量加入反應(yīng)器。在另一個實施方案中，將藥 物混懸劑定量加入反應(yīng)器中通過其他自動泵設(shè)備。I階段的流速范圍可以是0. lml/min至 40ml/分鐘。在流通式反應(yīng)器（或流動反應(yīng)器）中，I階段的流速范圍可以是0. Iml/分鐘 至 40ml/ 分鐘或 0· 5 至 900ml/ 分鐘（例如，0· 5-2. Oml/ 分鐘、10-900ml/ 分鐘、12-700ml/ 分鐘、50-400ml/分鐘、100-250ml/分鐘或110-130ml/分鐘）。在流通式反應(yīng)器中，II階 段的流速范圍可以是〇. lml/min至40ml/分鐘或2. 5-2100ml/分鐘（例如，2. 5-900ml/分 鐘、2. 5-2. Oml/ 分鐘、10-900ml/ 分鐘、12-700ml/ 分鐘、50-400ml/ 分鐘、100-250ml/ 分鐘或 110-130ml/ 分鐘）。
[0210] 步驟1中I階段和II階段的組分：選擇用于溶解藥物以制備I階段中的溶液的 賦形劑，以致它們在II階段中可溶混和可溶解。II階段組分使得該相僅用作所述藥物的抗 溶劑。當(dāng)在聲波處理的存在下將I階段加入II階段中時，藥物沉淀為納米晶體中。將II 階段經(jīng)由0. 22微米PVDF過濾器無菌過濾至保持在0-4°C或2-8°C的保持容器中。將II階 段定量加入裝備有超聲焊極（sonotrode)或聲波處理探頭的池中。然后將I階段溶液定量 滴加至該池的II階段中，同時進(jìn)行聲波處理。通過步驟1制備的納米晶體可以在2-8°C或 22-25°C或30-40°C保持在保持槽中。該"保持"過程稱為退火，以穩(wěn)定步驟1中制備的納米 晶體。步驟1中制備的納米混懸劑的退火或物理老化能使藥物分子"松弛"，并以其最穩(wěn)定 的熱力學(xué)狀態(tài)排列。退火溫度的選擇取決于藥物的理化特征。退火的持續(xù)時間也很重要。 在一個實施方案中，退火的持續(xù)時間為30分鐘。在另一個實施方案中，退火的持續(xù)時間為 30分鐘至90分鐘。在另一個實施方案中，退火的持續(xù)時間為90分鐘至12小時。在另一個 實施方案中，退火的持續(xù)時間為12小時至24小時。
[0211] I階段和II階段的組分具有低粘度，所以各階段可以通過0. 22微米過濾器無菌過 濾。或者，無菌的過濾可以通過其他滅菌方式諸如高壓滅菌法、Y輻照、環(huán)氧乙烷（ETO)輻 照來完成。
[0212] 制備用于初始納米混懸劑的I階段的溶劑可選自但不限于PEG400、PEG300、 PEG100、PEG1000、PEG-硬脂酸酯、PEG40-硬脂酸酯、PEG-Laureate、卵磷脂、磷脂酰膽堿、 PEG-油酸酯、PEG-甘油、吐溫、司盤、聚丙二醇、DMS0、乙醇、異丙醇、NMP、DMF、丙酮、二氯甲 燒、山梨醇。
[0213] 用作用于初始納米混懸劑的II階段的空間穩(wěn)定溶液可選自但不限于以下各項的 水溶液：甲基纖維素、？￥?、？￥八、即1?：、纖維素、普流羅尼克？127、普流羅尼克？68、卡波姆、羥 乙基纖維素、輕丙基纖維素、PEGs、卵磷脂、磷脂酰膽堿、polyquarternium-l、聚賴氨酸、聚 精氨酸、聚組氨酸、瓜爾膠、黃原膠、脫乙酰殼多糖、藻酸鹽、透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、吐溫20、 吐溫80、司盤類、山梨醇、氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，空間穩(wěn)定劑是粘度15cP的甲 基纖維素。在另一個實施方案中，II階段中的空間穩(wěn)定劑是粘度4cP的甲基纖維素。在另 一個實施方案中，空間穩(wěn)定劑是粘度50cP的甲基纖維素。在另一個實施方案中，空間穩(wěn)定 劑是粘度4000cP的甲基纖維素。在另一個實施方案中，空間穩(wěn)定劑是粘度100, OOOcP的甲 基纖維素。甲基纖維素的濃度為〇. 10%-0.20%、0.20%-0.40%和0.40%-0.50%。在一 個優(yōu)選的實施方案中，Π 階段中的甲基纖維素的濃度為0. 20%。在另一個優(yōu)選的實施方案 中，II階段中的甲基纖維素的濃度為0.39%。在一個實施方案中，II階段中的空間穩(wěn)定劑 是濃度0. -10%的卡波姆940。在另一個實施方案中，II階段中的空間穩(wěn)定劑是 濃度0. 1%-1%和1%-10%的羧甲基纖維素。在另一個實施方案中，II階段中的空間穩(wěn) 定劑是與卡波姆940組合的羧甲基纖維素。在另一個實施方案中，II階段中的空間穩(wěn)定劑 是濃度0. 1% -1%和1-10%的PVA。在另一個實施方案中，II階段中的空間穩(wěn)定劑是濃度 0· 1%至 10%的 PVP。
[0214] 空間穩(wěn)定劑還可以是陽離子的。有用的陽離子表面穩(wěn)定劑的實例包括但不限于 聚合物、生物聚合物、多糖、纖維素制品、藻酸鹽、磷脂類和非聚合化合物、諸如兩性離子 穩(wěn)定劑、聚-η-甲基吡啶鐵、蒽基吡啶It氯化物、陽離子磷脂類、脫乙酰殼多糖、聚賴氨 酸、聚乙烯基咪唑、1，5-二甲基-1，5-二氯十一亞甲基聚甲溴化物、聚甲基丙烯酸甲酯三 甲基溴化銨溴化物（PMMTMABr)、己基二苯乙酮基三甲基溴化銨（HDMAB)、聚乙烯吡咯烷 酮-2-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯二甲基硫酸酯、1，2二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸乙 醇胺-N-[氨基（聚乙二醇）2000](鈉鹽）（也稱為DPPE-PEG(2000)_胺Na)、聚（2-甲基 丙烯酰氧基乙基三甲基溴化銨）、泊洛沙胺（poloxamines)、諸如Tetronic 908?、也稱為 Poloxamine 908?、溶菌酶、長鏈聚合物、諸如藻酸和角叉菜膠。其他有用的陽離子穩(wěn)定 劑包括但不限于陽離子脂類、锍、鱗，和季銨化合物、諸如十八烷基三甲基氯化銨、芐基-二 (2-氯乙基）乙基溴化銨、椰油基三甲基氯化銨或溴化銨、椰油基甲基二羥基乙基氯化銨或 溴化銨、癸基三乙基氯化銨、癸基二甲基羥基乙基氯化銨或溴化銨、c 12_15二甲基羥基乙基氯 化銨或溴化銨、椰油基二甲基羥基乙基氯化銨或溴化銨、十四烷基三甲基甲基硫酸銨、十二 烷基二甲基芐基氯化銨或溴化銨、十二烷基二甲基（乙烯氧基） 4氯化銨或溴化銨、N-烷基 (C12_18)二甲基芐基氯化銨、N-烷基（C 14_18)二甲基-芐基氯化銨、N-十四烷基二甲基芐基 氯化銨一水合物、二甲基二癸基氯化銨、N-烷基和（C 12_14)二甲基1-萘甲基氯化銨、三甲基 鹵化胺、烷基-三甲基銨鹽和二烷基二甲基銨鹽、十二烷基三甲基氯化銨、乙氧基化的烷酰 氨基烷基二烷基銨鹽和/或乙氧基化的三烷基銨鹽、二烷基苯二烷基氯化銨、N-二癸基二 甲基氯化銨、N-十四烷基二甲基芐基氯化銨一水合物、N-烷基（C 12_14)二甲基1-萘基甲基 氯化銨和十二烷基二甲基芐基氯化銨、二烷基苯烷基氯化銨、十二烷基三甲基氯化銨、烷基 芐基甲基氯化銨、烷基芐基二甲基溴化銨、C12、C15、C17三甲基溴化銨、十二烷基芐基三乙基 氯化銨、聚-二烯丙基二甲基氯化銨（DADMC)、二甲基氯化銨、烷基二甲基鹵化銨、三鯨蠟 基甲基氯化銨、癸基三甲基溴化銨、十二烷基三乙基溴化銨、十四烷基三甲基溴化銨、甲基 三辛基氯化銨（ALIQUAT 336?)、P0LYQUAT 10?、四丁基溴化銨、芐基三甲基溴化銨、膽堿酯 類（諸如脂肪酸的膽堿酯類）、苯扎氯銨、司拉氯銨（stearalkonium chloride)化合物（諸 如十八烷基三甲基氯化銨和二-十八烷基二甲基氯化銨）、十六烷基吡啶傭溴化物或氯化 物，季銨化的聚氧乙基烷基胺的鹵鹽、MIRAP0L?和ALKAQUAT?、烷基吡啶鹽；胺、諸如烷基 胺、二烷基胺、烷醇胺、聚乙烯聚胺、N，N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯和乙烯基吡啶、胺鹽、諸 如十二烷基胺乙酸鹽、十八烷基胺乙酸鹽、烷基吡啶鋪'鹽和烷基咪唑#鹽和氧化胺；imide azolinium鹽；質(zhì)子化的丙烯酰季銨；甲基化的季聚合物（quaternary polymer)、諸如聚 [二烯丙基二甲基氯化銨]和聚-[N-甲基乙烯基吡啶氯化物];和陽離子瓜爾膠。
[0215] 步驟2的組分：選擇步驟2的組分完成純化之前步驟制備的納米晶體的任務(wù)。所 述純化方法為切向流過濾（TFF)或常規(guī)垂直過濾（NFF)以實現(xiàn)超濾或透濾或微量過濾。在 另一個實施方案中，步驟2通過離心完成。過濾器的選擇取決于制備的納米晶體的尺寸。過 濾器的孔徑可以是〇. Iym或0. 2μπ?或0. 5μπ?或0. 8μπ?或Ιμ--或IOym或20μπ?。如果 納米微粒的粒度分布峰值為0. 5 μ m，則PVDF過濾器的孔徑將是0. 1 μ m。優(yōu)選納米微粒的 尺寸峰值為〇. 5 μ m。在該步驟中，將納米晶體混懸劑純化，這樣初始的連續(xù)步驟完全被新的 連續(xù)相替代。選擇新的連續(xù)相使得藥物在其中具有最小的溶解度。這最小化或消除奧斯特 瓦爾德成熟。
[0216] 純化方法的組分可選自但不限于以下各項的水溶液：HPMC、MC、卡波姆、纖維素、 PEGs、脫乙酰殼多糖、藻酸鹽、PVP、F127、F68、透明質(zhì)酸、聚丙烯酸。
[0217] 步驟2的組分可具有組織粘合組分，其會增加納米晶體在部位的停留時間以隨 后延長治療的功效。組織粘合組分可以是陽離子或陰離子的。陽離子組織粘合分子為 polyquad-Ι、聚乙烯亞胺、PAMAM樹枝狀聚合物、PEI樹枝狀聚合物、脫乙酰殼多糖、藻酸鹽 及其衍生物。
[0218] 通過所限定的方法制備的藥物納米晶體（任選地納米混懸劑）可以是治療眼的炎 性病癥的免疫調(diào)節(jié)劑。免疫調(diào)節(jié)劑已證實在在多種對對類固醇耐藥的炎性病癥中有效，或 當(dāng)類固醇的長期應(yīng)用與類固醇類有關(guān)時如此。目前可用的活性劑用作阻止淋巴細(xì)胞增生的 細(xì)胞毒劑或用作阻止淋巴因子的合成的免疫調(diào)節(jié)劑。環(huán)孢素 A是優(yōu)選的能使用本發(fā)明定義 的方法制備的免疫調(diào)節(jié)劑。
[0219] 藥物納米混懸劑可以是使用相同的方法配制的兩種藥物的組合產(chǎn)品。因此，可以 設(shè)想兩種藥物共溶于共用的賦形劑中，然后本發(fā)明中說明的技術(shù)沉淀。
[0220] 疏水件治療劑
[0221] 用于本文的術(shù)語"疏水性治療劑"或"疏水性藥物"是指在水中難溶的治療劑，例 如，具有低于約10mg/mL(例如，低于lmg/mL、低于0· lmg/mL或低于0· 01mg/mL)的水溶解 度。
[0222] 可以應(yīng)用本發(fā)明的方法以制備疏水性藥物的納米晶體和/或新的形態(tài)。疏水性藥 物的實例包括但不限于ROCK抑制劑、SYK-特異性抑制劑、JAK-特異性抑制劑、SYK/JAK或 多激酶抑制劑、MT0Rs、STAT3抑制劑、VEGFR/H)GFR抑制劑、c-Met抑制劑、ALK抑制劑、mTOR 抑制劑、PI3K δ抑制劑、PI3K/mT0R抑制劑、p38/MAPK抑制劑、NSAID、類固醇類、抗生素、抗 病毒藥、抗真菌劑、抗寄生蟲藥、降血壓劑、癌癥藥物或抗腫瘤藥、免疫調(diào)節(jié)藥物（例如，免 疫抑制劑）、精神病學(xué)藥物、皮膚用藥、降脂藥物、抗抑郁藥、抗糖尿病藥、抗癲癇藥、抗痛風(fēng) 齊[J、抗高血壓劑、抗瘧疾藥、抗偏頭痛藥物、抗毒蕈堿劑、抗甲狀腺藥、抗焦慮藥、鎮(zhèn)靜藥、催 眠藥、精神安定藥、β -阻滯劑、心臟正性肌力藥（cardiac inotropic agent)、皮質(zhì)類固醇、 利尿劑、抗帕金森綜合征劑、胃腸病用藥、組胺H-受體拮抗劑、調(diào)血脂藥、硝酸鹽類和其他 抗心絞痛藥、營養(yǎng)劑、阿片樣鎮(zhèn)痛藥、性激素和興奮劑。
[0223] 適用于本發(fā)明的方法的疏水性藥物可以是類固醇。類固醇包括例如，氟替卡松、氫 化可的松、醋酸氫化可的松、醋酸可的松、替可的松匹伐酯、潑尼松龍、甲潑尼龍、潑尼松、曲 安奈德、曲安西龍、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟輕松、氟輕松、氟西奈德、氟 尼縮松、氟米龍、丙酸氯倍他索、氯替潑諾、甲羥松、利美索龍、二氟潑尼酯、哈西奈德、倍氯 米松、倍他米松、倍他米松磷酸鈉、環(huán)索奈德、地塞米松、地塞米松磷酸鈉、醋酸地塞米松、氟 可龍、氫化可的松-17- 丁酸酯、氫化可的松-17-戊酸酯、雙丙酸阿氯米松、戊酸倍他米松、 二丙酸倍他米松、潑尼卡酯、氯倍他松-17- 丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、己酸氟考龍、特 戊酸氟考龍、醋酸氟潑尼定、醋酸潑尼松龍、潑尼松龍磷酸鈉、氟米龍（fluoromethalone)、 氟米龍醋酸酯、氯替潑諾依碳酸酯和倍他米松磷酸鹽，包括它們的酯和藥學(xué)上可接受的鹽。
[0224] 適用于本發(fā)明的方法的疏水性藥物可以是非類固醇抗炎藥物，例如溴芬酸、雙氯 芬酸鈉、氟比洛芬、酮洛酸氨丁三醇、mapracorat、萘普生、奧沙普秦、布洛芬和奈帕芬胺，包 括它們的酯和藥學(xué)上可接受的鹽。
[0225] 適用于本發(fā)明的方法的其他疏水性藥物包括貝西沙星、DE-110 (Santen Inc.)、瑞 巴派特、雄激素類（DHEA、睪酮、具有弱水溶解度的類似物、&衍生物）、雌激素類（為雌二醇、 雌三醇和雌酮的衍生物的差水溶性化合物；例如，雌二醇、左炔孕酮（Ievonorgesterol)、 其類似物、異構(gòu)體或衍生物）、黃體酮和孕激素類（第一至第四代），其具有弱水溶解度（例 如，炔諾酮、其類似物和衍生物、甲羥孕酮或他那羅吉（tagaproget))和孕烯醇酮。各代孕 激素類的實例包括：第一代（雌烷）諸如炔諾酮、異炔諾酮、醋酸炔諾酮和雙醋炔諾醇；第 二代（留烷）諸如左炔諾孕酮、炔諾酮和炔諾孕酮；第三代（留烷）諸如去氧孕烯、孕二烯 酮、諾孕酯，和屈螺酮；和第四代諸如地諾孕素、屈螺酮、nestorone、醋酸諾美孕酮和曲美 孕酮。
[0226] 疏水性藥物的其他實例包括例如，10-烷氧基-9-硝基喜樹堿、17b-雌二醇、3 ' -疊 氮基-3' -脫氧胸苷棕櫚酸酯、5-氨基乙酰丙酸、ABT-963、醋氯芬酸、阿克拉霉素 A、阿苯 達(dá)唑、紫朱草素/紫草素、全反式維甲酸（ATRA)、醋酸維生素 E、AMG 517、安潑那韋、阿瑞 吡坦、青蒿素、印楝素、黃芩黃素、苯并咪唑衍生物、苯并卟啉、苯并嘧啶衍生物、比卡魯胺、 BMS-232632、BMS-488043、溴西泮、溴匹立明、卡馬西平、坎地沙坦西酯、卡馬西平、卡苯達(dá) 唑（Carbendazim)、卡維地洛、頭孢托侖、頭孢替安、頭孢泊肟、頭孢呋辛酯、塞來考昔、神經(jīng) 酰胺、西洛他唑、丙酸氯倍他索、克霉唑、輔酶Q10、姜黃、環(huán)胞素（Cyclcoporine)、達(dá)那唑、 氨苯砜、右布洛芬、地西泮、雙嘧達(dá)莫、多西他賽、多柔比星、多柔比星、益康唑、ER-34122、 依美拉唑、艾托考昔、依曲韋林、依維莫司、依西美坦、非洛地平、非諾貝特、氟比洛芬、氟他 胺、呋塞米、Y-谷維素、格列本脲、格列齊特、促性激素釋放素、灰黃霉素、橙皮素、H0-221、 口引哚美辛、胰島素、異煙肼、異維甲酸、伊曲康唑、酮基布洛芬、LAB687、利馬前列素、洛匹那 韋（Liponavir)、洛哌丁胺、甲苯咪唑、甲地孕酮、美洛昔康、MFB-1041、米非司酮、MK-0869、 MTP-PE、大麻隆、柚苷配基、尼古丁、尼伐地平、尼美舒利、尼莫地平、尼群地平、硝酸甘油、 NNC-25-0926、川陳皮素（Nobiletin)、八氟丙烷、冬凌草甲素、奧沙西泮、奧卡西平、羥苯甲 酮、紫杉醇、棕櫚酸帕利哌酮、噴昔洛韋、PG301029、PGE2、苯妥英、吡羅昔康、鬼曰毒素、豬胰 脂肪酶和共脂肪酶、普羅布考、吡嗪酰胺、五羥黃酮、雷洛昔芬、白藜蘆醇、大黃酸、利福平、 利托那韋、羅蘇伐他汀、沙奎那韋、水飛薊素、西羅莫司、螺內(nèi)酯、司他夫定、磺胺異唑、他 克莫司、他達(dá)拉非、丹參酮、茶多酚、茶堿、噻洛芬酸、替拉那韋、甲苯磺丁脲、酒石酸托特羅 定、曲尼司特、維甲酸、曲安奈德、雷公藤內(nèi)酯、曲格列酮、伐昔洛韋、維拉帕米、長春新堿、重 酒石酸長春瑞濱、長春西汀、維生素-E、華法林，和XK469。更多的實例包括例如，兩性霉素 B、慶大霉素和其他氨基糖苷類抗生素、頭孢曲松和其他頭孢菌素類、四環(huán)素類、環(huán)孢菌素 A、 阿洛普令、金諾芬、阿扎丙宗、貝諾酯、二氟尼柳、二氟尼柳、芬布芬、非諾洛芬鈣、甲氯芬那 酸、甲芬那酸、萘丁美酮、羥基保泰松、保泰松、舒林酸、芐硝唑、氯碘羥喹、地考喹酯、雙碘喹 啉、二氯尼特（diloxanide furoate)、二硝托胺、呋喃唑酮、甲硝唑、尼莫唑、呋喃西林、奧硝 唑和替硝唑。
[0227] 適合本發(fā)明的疏水性藥物還可以是具有5或跟高的cLogP的FDA-批準(zhǔn)的藥物，諸 如下表中列出的那些。
[0228]
【權(quán)利要求】
1. 丙酸氟替卡松的形態(tài)（A形式），其通過包含在約7. 8、15. 7、20. 8、23. 7、24. 5和32. 5 度2 0的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
2. 權(quán)利要求1的形態(tài)，其通過還包含在約9. 9、13. 0、14. 6、16. 0、16. 9、18. 1和34. 3度 2 0的峰的X-射線粉末衍射圖表征。
3. 權(quán)利要求1的形態(tài)，其通過基本類似于圖31A中所示的X-射線粉末衍射圖表征。
4. 權(quán)利要求1的形態(tài)，其中所述形態(tài)具有以重量計超過99%的純度。
5. 權(quán)利要求1的形態(tài)，其進(jìn)一步通過不低于0. 35g/cm3、不低于0. 40g/cm3、不低于 0. 45g/cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3的振實密度表征。
6. 權(quán)利要求1的形態(tài)，其進(jìn)一步通過以下表征：熔點為299. 5°C，熔程為10°C。
7. 權(quán)利要求1的形態(tài)，其包含具有約100-1000nm的平均尺寸的丙酸氟替卡松納米板。
8. 權(quán)利要求7的形態(tài)，其中所述納米板各自具有約400-800nm的平均尺寸。
9. 權(quán)利要求7的形態(tài)，其中所述納米板具有基本正交于限定所述納米板厚度的表面的 [001]晶軸。
10. 權(quán)利要求1的形態(tài)，其進(jìn)一步通過在水中在室溫時的約1 u g/g/天的在水中的溶出 度表征。
11. 大量的丙酸氟替卡松的納米板，其具有基本正交于限定所述納米板厚度的表面的 [001]晶軸。
12. 權(quán)利要求11的大量的納米板，其中所述納米板具有約100-1000nm的平均尺寸。
13. 權(quán)利要求11的大量的納米板，其中所述納米板各自具有5nm至500nm的厚度。
14. 權(quán)利要求11的大量的納米板，其通過不低于0. 35g/cm3、不低于0. 40g/cm3、不低于 0. 45g/cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3的振實密度表征。
15. 權(quán)利要求11的大量的納米板，其通過以下表征：熔點為299. 5°C，熔程為10°C。
16. 權(quán)利要求11的大量的納米板，其通過在水中在室溫時的約ly g/g/天的在水中的 溶出度表征。
17. 純化的丙酸氟替卡松的晶形，其通過不低于0. 35g/cm3、不低于0. 40g/cm3、不低于 0. 45g/cm3、不低于0. 50g/cm3或不低于0. 55g/cm3的振實密度表征。
18. 權(quán)利要求17的晶形，其進(jìn)一步通過以下表征：熔點為299. 5°C，熔程為10°C。
19. 權(quán)利要求17的晶形，其進(jìn)一步通過在水中在室溫時的約1 ii g/g/天的在水中的溶 出度表征。
20. 藥物組合物，其包含權(quán)利要求1的形態(tài)和藥學(xué)上可接受的載體。
21. 權(quán)利要求20的組合物，其中所述組合物是包含0. 0001% -10%的丙酸氟替卡松的 混懸物的局部用制劑。
22. 藥物組合物，其包含權(quán)利要求11的大量的納米板和藥學(xué)上可接受的載體。
23. 藥物組合物，其包含權(quán)利要求17的晶形和藥學(xué)上可接受的載體。
24. 治療或減輕眼障礙的癥狀的方法，所述方法包括向有需要的個體施用有效量的權(quán) 利要求20的組合物。
25. 權(quán)利要求24的方法，其中所述眼障礙包括瞼緣炎、術(shù)后眼部炎癥、眼色素層炎、干 眼或眼變態(tài)反應(yīng)；且所述方法包括向有需要的個體的瞼緣、皮膚或眼表面局部施用有效量 的權(quán)利要求20的組合物。
26. 治療或減輕呼吸系統(tǒng)疾病的方法，所述方法包括向有需要的個體施用有效量的權(quán) 利要求20的組合物。
27. 權(quán)利要求26的方法，其中所述呼吸系統(tǒng)疾病是哮喘或COPD。
28. 制備權(quán)利要求11的大量的納米板的方法，其包括： 提供無菌的相I溶液，其包含丙酸氟替卡松和用于丙酸氟替卡松的溶劑； 提供無菌的相II溶液，其包含至少一種表面穩(wěn)定劑和用于丙酸氟替卡松的抗溶劑，其 中所述至少一種表面穩(wěn)定劑包含纖維素表面穩(wěn)定劑； 將相I溶液和相II溶液混合，得到相III混合液，其中當(dāng)混合這兩種溶液時使用聲波 處理，且該混合在不超過25°C的第一個溫度進(jìn)行；和 將相III混合液在高于第一個溫度的第二個溫度退火一段時間0\)，以致生成含權(quán)利 要求11的大量納米板的相III混懸物。
29. 權(quán)利要求28的方法，其中使用具有約10-75瓦的輸出功率的超聲處理。
30. 權(quán)利要求28的方法，其中所述纖維素表面穩(wěn)定劑是具有約4至50cP的粘度的甲基 纖維素或分子量不超過l〇〇kDa的甲基纖維素，第一個溫度是0°C至5°C的溫度，第二個溫度 是10°C至40°C的溫度，且為至少8小時。
31. 制備疏水性治療劑的純化的、穩(wěn)定的、無菌的納米晶體的方法，其包括： 提供無菌的相I溶液，其包含疏水性治療劑和用于所述疏水性治療劑的溶劑； 提供無菌的相II溶液，其包含至少一種表面穩(wěn)定劑和用于所述疏水性治療劑的抗溶 劑； 將無菌的相I溶液和無菌的相II溶液混合，得到相III混合液，其中所述混合在不超 過25°C的第一個溫度進(jìn)行；和 將相III混合液在超過第一個溫度的第二個溫度退火一段時間0\)，以致生成含大量 該疏水性治療劑的納米晶體的相III混懸物。
32. 權(quán)利要求31的方法，其中所述疏水性治療劑是氟替卡松或其酯或曲安奈德。
33. 權(quán)利要求32的方法，其中所述疏水性治療劑是丙酸氟替卡松。
34. 權(quán)利要求31-33中任意一項的方法，其中當(dāng)混合無菌的相I溶液和無菌的相II溶 液時使用聲波處理。
35. 權(quán)利要求31-34中任意一項的方法，其中所述第一個溫度是-10°C至15°C、或_5°C 至10°C、或0°C至5°C、或0°C至2°C、或2°C至4°C的溫度。
36. 權(quán)利要求31-35中任意一項的方法，其中所述第二個溫度是4°C至60°C、或10°C至 40°C、或15°C至25°C的溫度。
37. 權(quán)利要求31-36中任意一項的方法，其中為至少8小時。
38. 權(quán)利要求31-37中任意一項的方法，其中相II溶液中的至少一種表面穩(wěn)定劑包含 纖維素表面穩(wěn)定劑。
39. 權(quán)利要求38的方法，其中所述纖維素表面穩(wěn)定劑是分子量不超過lOOkDa的甲基纖 維素。
40. 權(quán)利要求38或39的方法，其中甲基纖維素在相III混懸物中的濃度為約0. 1%至 0? 5%。
41. 權(quán)利要求38-40中任意一項的方法，其中所述纖維素表面穩(wěn)定劑具有的不超過 4000cP、不超過2000cP、不超過lOOOcP、不超過500cP、不超過lOOcP、不超過50cP、不超過 30cP或不超過15cP的粘度。
42. 權(quán)利要求31-41中任意一項的方法，其中所述抗溶劑是蒸餾水。
43. 權(quán)利要求31-42中任意一項的方法，其中相II溶液的pH不超過6. 5或不超過6. 0 或不超過5. 5。
44. 權(quán)利要求31-43中任意一項的方法，其中相I溶液的溶劑包括聚醚。
45. 權(quán)利要求44的方法，其中所述聚醚選自聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇（PPG)及其混合 物。
46. 權(quán)利要求45的方法，其中所述聚醚選自PEG400、PPG400及其混合物。
47. 權(quán)利要求46的方法，其中相I溶液中的PEG 400的濃度為約20至35%。
48. 權(quán)利要求46的方法，其中相I溶液中的PPG 400的濃度為約65%至75%。
49. 權(quán)利要求31-48中任意一項的方法，其中相I溶液還包含表面穩(wěn)定劑。
50. 權(quán)利要求49的方法，其中所述表面穩(wěn)定劑是吐溫80。
51. 權(quán)利要求50的方法，其中吐溫80在相I溶液中的濃度為約7.0%至15%。
52. 權(quán)利要求31-51中任意一項的方法，其中相II溶液中的至少一種表面穩(wěn)定劑還包 含苯扎氯銨。
53. 權(quán)利要求52的方法，其中相II溶液的苯扎氯銨濃度為約0.005%至0. 15%或為約 0? 01%至 0? 12%。
54. 權(quán)利要求31-53中任意一項的方法，所述方法還包括通過切向流過濾或通過連續(xù) 離心純化所述疏水性治療劑的大量納米晶體。
55. 通過權(quán)利要求31-54中任意一項的方法制備的疏水性治療劑的大量納米晶體。
56. 權(quán)利要求55的大量的納米晶體，其中所述納米晶體是厚度范圍10nm至100nm的納 米板。
57. 權(quán)利要求55的大量的納米晶體，其中所述納米晶體具有400-800nm的范圍的平均 尺寸。
58. 權(quán)利要求56的大量的納米晶體，其中所述納米板為具有基本正交于限定所述納米 板厚度的表面的[001]晶軸的丙酸氟替卡松納米板。
【文檔編號】C07J71/00GK104350063SQ201380030423
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年5月6日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月8日
【發(fā)明者】T·加瓦納, S·P·巴曼, T·郝, T·B·勒蘭德, R·V·泰凱德特 申請人:埃塞克斯治療公司