專利名稱：抗her2蛋白單克隆抗體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種抗HER2蛋白的單克隆抗體，產(chǎn)生該抗體的雜交瘤細(xì)胞株，以及該抗體的免疫檢測(cè)用途。
背景技術(shù)：
HER2基因又稱為ERBB2基因，編碼一種具有酪氨酸激酶活性的蛋白，是表皮生長(zhǎng)因子受體家族的一個(gè)成員，能增強(qiáng)激酶活性，促進(jìn)細(xì)胞的分裂、增殖和轉(zhuǎn)化。HER2基因主要是在人體的胚胎發(fā)育時(shí)期表達(dá)，參與多種組織器官的生長(zhǎng)發(fā)育，而在成人正常組織中此基因常以單拷貝存在，表達(dá)水平較低。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率約10%_15%，病人最后多死于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。HER2基因作為腫瘤發(fā)生的癌基因，與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)；在乳腺癌中可見到該基因的異常擴(kuò)增或過表達(dá)，有研究指出在20% 30%的侵襲性乳腺癌患者中有HER2擴(kuò)增；HER2蛋白的高表達(dá)出現(xiàn)在乳腺癌發(fā)生的早期階段。臨床前研究發(fā)現(xiàn)，HER2的高表達(dá)提高了乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能，表現(xiàn)出較多的侵襲性臨床病理特征。2003年NCCN乳腺癌診療指引已明確建議，對(duì)原發(fā)性浸潤(rùn)性乳腺癌組織病理學(xué)檢查中常規(guī)進(jìn)行HER2檢測(cè)，有助于藥物的使用和評(píng)估預(yù)后。另外，除乳腺癌外，在其他許多上皮來源的腫瘤如卵巢癌和胃癌等腫瘤細(xì)胞中，HER2基因也常常有異常擴(kuò)增或過表達(dá)。目前臨床上通常通過免疫組織化學(xué)病理實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中HER2蛋白的表達(dá)狀況，而免疫組化實(shí)驗(yàn)的核心為一抗，即可特異性結(jié)合HER2蛋白的單克隆抗體，其性能的優(yōu)劣直接決定著整個(gè)檢測(cè)的靈敏度和特異性。因此，研制出一種結(jié)合特異性高的抗HER2蛋白的單克隆抗體具有重要的意義
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題為提供一種結(jié)合特異性較高的抗HER2蛋白的單克隆抗體，產(chǎn)生該抗體的雜交瘤細(xì)胞株，及該抗體在制備用于檢測(cè)HER2蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種雜交瘤細(xì)胞株，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱為CGMCC)，保藏日期為2012年11月29日，保藏編號(hào)為 CGMCC N0.6908。本發(fā)明還提供了一種特異性結(jié)合HER2蛋白的單克隆抗體，由上述雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。本發(fā)明所述單克隆抗體的制備方法如下:(I)重組表達(dá)載體的構(gòu)建:根據(jù)HER2基因的ORF全序列(如SEQ ID N0.1所示)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，基因兩側(cè)分別引入限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)SgfI和Mlul，并在其C末端引入Myc-DDK標(biāo)簽序列(標(biāo)簽序列如SEQ ID N0.2所示),插入表達(dá)載體pCMV6_Entry,構(gòu)建HER2重組表達(dá)質(zhì)粒(簡(jiǎn)稱為pCMV6-HER2)；
(2) HER2重組蛋白的表達(dá)與純化:以pCMV6_HER2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，裂解離心取上清，DDK親和層析柱純化，獲得純化的HER2重組蛋白；(3)單抗的篩選與制備:采用上述HER2重組蛋白免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾臟細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合，有限稀釋法獲得單克隆，ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，獲得能分泌抗HER2特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株，即為本發(fā)明雜交瘤細(xì)胞株,其所分泌的抗體亞型鑒定為IgG2a;制備小鼠腹水，通過親和層析柱純化HER2單抗。分別通過Western Blot(結(jié)果見圖3)、免疫組化實(shí)驗(yàn)(結(jié)果見圖4、圖5)驗(yàn)證該單抗的靈敏度和特異性。發(fā)明人還通過OriGene高密度蛋白芯片驗(yàn)證了上述單克隆抗體的特異性:OriGene高密度蛋白芯片上包含10400種HEK293T細(xì)胞蛋白過表達(dá)裂解物，每種蛋白裂解液在芯片上具有兩個(gè)拷貝的重復(fù)。蛋白裂解液被印跡在硝酸纖維素膜上。每一鐘蛋白裂解液的定位可以通過Excel文件進(jìn)行準(zhǔn)確定位。蛋白芯片上蛋白分為40個(gè)亞矩陣,每個(gè)亞矩陣上有一些參照，通過參照，可以定量每個(gè)芯片點(diǎn)上蛋白的含量，監(jiān)控每次免疫反應(yīng)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，以及定位陽(yáng)性信號(hào)的方向。將本發(fā)明單克隆抗體與上述芯片雜交并確定陽(yáng)性信號(hào)位點(diǎn)，結(jié)果顯示:本發(fā)明單克隆抗體特異性結(jié)合HER2蛋白，與其他蛋白無交叉反應(yīng)。本發(fā)明還提供了一種免疫組化檢測(cè)試劑盒，包括上述單克隆抗體；可用于檢測(cè)組織細(xì)胞中HER2蛋白的表達(dá)狀況。上述免疫組化檢測(cè)試劑盒，還包括用于免疫組化檢測(cè)的其它常規(guī)試劑；如采用免疫酶標(biāo)法的免疫組化試劑盒還包括封閉試劑，針對(duì)上述單克隆抗體的生物素標(biāo)記的二抗，酶標(biāo)抗生物素組分和底物。本發(fā)明的另 一個(gè)目的在于提供一種上述單克隆抗體在制備用于檢測(cè)HER2蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。所述免疫檢測(cè)工具為試劑盒、芯片或試紙。本發(fā)明還提供了上述單克隆抗體在制備用于診斷HER2相關(guān)性腫瘤的病理診斷試劑盒中的應(yīng)用。由于HER2蛋白的異常表達(dá)或擴(kuò)增與人類多種惡性腫瘤有關(guān)，因此使用本發(fā)明單克隆抗體檢測(cè)細(xì)胞中HER2蛋白的表達(dá)或擴(kuò)增狀況，可用于輔助診斷HER2相關(guān)性腫瘤。所述HER2相關(guān)性腫瘤為乳腺癌、胃癌、食管癌、大腸癌、膀胱癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、甲狀腺癌或非小細(xì)胞肺癌。本發(fā)明所述針對(duì)HER2的特異性單抗，可與HER2蛋白特異結(jié)合，提高了實(shí)驗(yàn)的特異性和可靠性，并建立了基于該單克隆抗體的免疫組織化學(xué)技術(shù)，主要用于乳腺癌、大腸癌、子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺癌、食管癌、非小細(xì)胞肺癌等腫瘤的輔助診斷。保藏信息用于保藏的雜交瘤細(xì)胞株的科學(xué)描述為:抗人Her2單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；保藏單位全稱:中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；保藏單位簡(jiǎn)稱:CGMCC ；保藏單位地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏日期:2012年11月29日；保藏編號(hào):CGMCCN0.6908。


圖1為Western blot驗(yàn)證HER2重組質(zhì)粒在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)；左邊泳道的上樣樣品為轉(zhuǎn)染PCMV6空載體的HEK293T細(xì)胞裂解液，右邊泳道的上樣樣品為轉(zhuǎn)染PCMV6-HER2重組質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞裂解液，雜交所用一抗為抗DDK標(biāo)簽抗體；圖2為HER2重組蛋白的SDS-PAGE鑒定圖；圖3為本發(fā)明單克隆抗體在4種不同細(xì)胞系中的Western blot結(jié)果；圖4為以本發(fā)明單克隆抗體為一抗，免疫組化法檢測(cè)膀胱癌組織中HER2蛋白的表達(dá)；圖5為以本發(fā)明單克隆抗體為一抗，免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織中HER2蛋白的表達(dá);圖6為使用origene蛋白芯片對(duì)本發(fā)明HER2單抗的特異性鑒定圖。
具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實(shí)施例1抗HER-2單克隆抗體的制備一、HER2重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建以從ATCC獲得的質(zhì)粒BC167147.1 (含SEQ ID N0.1所示HER20RF序列)為模板，設(shè)計(jì)兩條引物并分別引入酶切位點(diǎn)Sgf1、MluI，以及C末端Myc-DDK標(biāo)簽(標(biāo)簽序列如SEQ ID N0.2所示)，并克隆入表達(dá)載體pCMV6-Entry，構(gòu)建HER2重組表達(dá)質(zhì)粒(簡(jiǎn)稱為PCMV6-HER2)。二、HER2重組蛋白的表達(dá)與純化1、轉(zhuǎn)染 HEK293T 細(xì)胞HEK293T細(xì)胞以1:3傳至直徑IOcm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)；取7.5ml DMEM (無血清及抗生素)培養(yǎng)基至50ml管中，加入300 u IPEI MegaTranl.0混勻，然后加入75 y g上述HER2重組質(zhì)粒(pCMV6-HER2) DNA混勻并靜置30分鐘；分別取515 上述混合液至各細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，每培養(yǎng)皿細(xì)胞添加25 iU2M丁酸鈉至終濃度5mM。2、裂解細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，進(jìn)行細(xì)胞裂解。吸去培養(yǎng)基，加入Iml PBS進(jìn)行漂洗，吸去PBS。加入Iml裂解緩沖液，使用前加入蛋白酶抑制劑PI和PMSF。置于冰盒中在搖床上振蕩，收集所有培養(yǎng)皿中的裂解液，4°C離心，收集上清。3、DDK親和層析柱純化

以孔徑為0.45 u m,直徑為33mm的PVDF膜濾器過濾離心后的裂解液上清并轉(zhuǎn)入15ml管中，加入混合好的Sepharose Beadslml,封口后放入360度混勻器中，于4°C結(jié)合2小時(shí)；取出15ml管，將裂解液倒入BIO-RAD層析柱中，并接住穿透液，滴盡后穿透液取樣WB檢測(cè)，見圖1 (圖1顯示:HER2重組質(zhì)粒在HEK293T細(xì)胞中正常表達(dá))；以裂解緩沖液沖洗柱料1-2次，滴盡后再用TBST沖洗Beads3次，滴盡后用0.1M Glycine (pH3.5)洗脫，第一次200 yl，滴盡不收集，第二、三次各500 yl，第四次250 yl，收集至一個(gè)1.5mlTube中，并迅速加入NaH2PO4 CpH=Il.0)中和至pH7.0左右，每管加入甘油至終濃度為10%，Tween-80至終濃度為0.1%。純化后HER2重組蛋白用SDS-PAGE鑒定，結(jié)果見圖2。三、單抗的篩選與制備1、動(dòng)物免疫:上述純化的HER2重組蛋白以完全弗氏佐劑乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周齡BALB/c小鼠，免疫劑量為50 u g/只，間隔兩周后進(jìn)行第二次免疫，以不完全弗氏佐劑乳化，免疫劑量為50ii g/只。免疫兩次后取尾血以ELISA法梯度稀釋測(cè)定血清效價(jià)；根據(jù)結(jié)果確定是否加強(qiáng)免疫，選取抗體效價(jià)最高的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合。2、細(xì)胞融合:骨髓瘤細(xì)胞采用BALB/c小鼠來源的sp2/0，融合時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；取上述免疫的小鼠脾臟，制成淋巴細(xì)胞單細(xì)胞懸液；免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞以1:5-1:10混合，滴加37°C的50%PEG (PH8.0)lml，加入不完全培養(yǎng)基及其余終止液，離心棄上清后加入HAT培養(yǎng)基懸浮混勻，MC定容到50ml，分裝到3.5cm培養(yǎng)皿中，放于濕盒中，置于37°C、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。3、篩選 和克隆:融合7-10天內(nèi)挑選細(xì)胞克隆，使用上述純化的HER2重組蛋白進(jìn)行ELISA測(cè)試，標(biāo)記細(xì)胞株號(hào)。對(duì)陽(yáng)性孔細(xì)胞進(jìn)行有限稀釋，每次有限稀釋后5-6天測(cè)定ELISA值，挑取0D280陽(yáng)性值較高的單克隆孔進(jìn)行有限稀釋，直至ELISA測(cè)定96孔板全板結(jié)果為陽(yáng)性；挑取陽(yáng)性值高的單克隆定株，即為本發(fā)明雜交瘤細(xì)胞株。4、腹水單抗的制備與純化:10-12周齡的雄性BALB/c小鼠腹腔注射0.5ml降植烷，一周后每只小鼠用Iml注射器腹腔注射經(jīng)PBS洗滌重懸的單克隆細(xì)胞懸液，細(xì)胞用量為5X106/只，每株抗體打2只小鼠。待小鼠腹水積聚后收集腹水，離心取上清，親和層析法進(jìn)行腹水純化，根據(jù)抗體亞型選擇相應(yīng)柱料，本發(fā)明雜交瘤細(xì)胞株所分泌的抗體亞型為IgG2a，采用protein G進(jìn)行純化。純化后的單抗?jié)舛葴y(cè)定、分裝、凍存在_20°C。以本發(fā)明單克隆抗體為一抗，對(duì)H印G2、HeLa, A549、MCF7四種細(xì)胞系的蛋白裂解液進(jìn)行雜交、顯色，其結(jié)果如圖3所示，由圖3可見:HER2蛋白在HeLa、A549、MCF7細(xì)胞中均有表達(dá)。實(shí)施例2以本發(fā)明單克隆抗體為一抗的免疫組化試驗(yàn)1、取膀胱癌或乳腺癌組織進(jìn)行石蠟包埋，使用Finesse組織切片機(jī)進(jìn)行切片，組織厚度為6 m ;2、脫臘與水化:分析純二甲苯3次X IOmin,無水乙醇3次X IOmin, 95%乙醇5min,85%乙醇5min, 75%乙醇5min,去離子水浸泡3minX 3次；3、加入抗原修復(fù)液(0.01M, pH6.0枸櫞酸鈉緩沖液)高壓鍋高壓熱修復(fù)2min，待高壓鍋溫度降至約90°C時(shí)，打開高壓鍋，取出標(biāo)本，然后自然冷卻至室溫。去離子水浸泡3minX 3 次。4、使用3%過氧化氫滅活組織內(nèi)源性過氧化物酶,室溫靜置lOmin。去離子水浸泡5minX 3 次。5、加上封閉液(PBS+5%脫脂奶粉+5%正常山羊血清)，37°C孵育60min。6、去除封閉液，勿沖洗，加入1:150比例稀釋的本發(fā)明單克隆抗體；置于濕盒中，37 0C 孵育 60min。PBST(含 0.l%Tween-20 )洗滌 2 次，每次洗滌 5min。PBST(含 0.02%Tween-20 )洗漆I次，每次洗漆5min。7、滴加 Polink-試劑盒 2 (Catlog N0.D37-15)中的試劑 1，37°C孵育 10-20 分鐘。使用PBS洗滌3次，每次5min。滴加Pol ink-2試劑盒(Catlog N0.D37-15)中的試劑2，37°C孵育10-20分鐘，使用PBS洗滌3次，每次5min。8、應(yīng)用DAB溶液(中杉金橋ZL1-9019)顯色，顯色3 10min。蒸餾水洗滌。9、蘇木精復(fù)染細(xì)胞核2min，蒸餾水漂洗，1%鹽酸分化。蒸餾水漂洗3次，室溫靜置lmin。10、脫水和透明:75*% 乙醇 5min, 100% 乙醇 5minX3 次，85% 乙醇乙醇5min, 100%乙醇3X 5min ;二甲苯3X 5min,中性樹膠封片。11、鏡檢，其結(jié)果分別見圖4、圖5。結(jié)果:由圖4、圖5可見，膀胱癌、乳腺癌組織經(jīng)染色后，可見大量棕黃色顆粒，為HER2蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞；并且，HER2陽(yáng)性著色定位準(zhǔn)確，染色信號(hào)強(qiáng)，未發(fā)現(xiàn)非特異染色。
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實(shí)施例3、本發(fā)明單克隆抗體的特異性檢測(cè)OriGene高密度蛋白芯片上包含10400種HEK293T細(xì)胞蛋白過表達(dá)裂解物，每種蛋白裂解液在芯片上具有兩個(gè)拷貝的重復(fù)。蛋白裂解液被印跡在硝酸纖維素膜上。每一鐘蛋白裂解液的定位可以通過Excel文件進(jìn)行準(zhǔn)確定位。蛋白芯片上蛋白分為40個(gè)亞矩陣,每個(gè)亞矩陣上有一些參照，通過參照，可以定量每個(gè)芯片點(diǎn)上蛋白的含量，監(jiān)控每次免疫反應(yīng)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，以及定位陽(yáng)性信號(hào)的方向。以下為使用OriGene蛋白(OriGene Cat PA100001)芯片對(duì)本發(fā)明單克隆抗體進(jìn)行特異性鑒定的具體步驟:1、將一張蛋白芯片放在50ml離心管中，使用40ml去離子水浸潤(rùn)芯片，置于搖床上，室溫混合30分鐘；棄掉去離子水，使用IOmlPBST平衡芯片，室溫處理10分鐘。2、向50ml離心管中加入40ml5%脫脂牛奶(用PBST進(jìn)行稀釋)置于搖床上，室溫封閉30分鐘。3、使用封閉液(5%脫脂牛奶)稀釋本發(fā)明單克隆抗體，稀釋比例1:200。4、將潔凈的封口膜粘貼到實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，滴加250-300 ill上述稀釋的單克隆抗體在封口膜上。5、將蛋白芯片從封閉液中抽出，將蛋白芯片NC膜的一面朝下，從芯片的一邊接觸抗體，慢慢滑下，依靠液體表面張力，抗體將慢慢浸潤(rùn)芯片NC膜，直至整張NC膜浸潤(rùn)在單抗溶液中。整個(gè)操作過程避免產(chǎn)生氣泡。將芯片移到4度環(huán)境下，靜置，單抗孵育過夜。在芯片上加蓋培養(yǎng)皿蓋，其上黏附一張濕紙巾，以防止長(zhǎng)時(shí)間孵育導(dǎo)致抗體蒸發(fā)。6、第二天將芯片移至50ml離心管中，使用PBST漂洗芯片兩次，去除多余的抗體。使用40ml PBST (含0.l%Tween-20)洗滌芯片，置于搖床上混合均勻，洗滌三次，每次洗滌5min。7、使用封閉液(5% 脫脂牛奶)稀釋二抗 DyLight649_conjugated AffiiniPureFragment Goat-ant1-Mouse IgG,稀釋比例為 1:400。8、按照上述步驟4，步驟5進(jìn)行二抗孵育操作。室溫孵育I小時(shí)。在芯片上方用鋁箔紙遮蓋，以防止發(fā)生信號(hào)漂白。9、按照上述步驟6，使用PBST洗滌芯片。10、使用去離子水沖洗芯片，以去除殘余的鹽分和變性劑。11、室溫干燥芯片，確保芯片完全干燥。
12、使用芯片掃描儀讀取熒光信號(hào)。13、根據(jù)BSA_Cy3以及BSA_Cy5確定芯片方向以及陽(yáng)性信號(hào)的位點(diǎn)。14、根據(jù)陽(yáng)性信號(hào)位點(diǎn)找出對(duì)應(yīng)蛋白裂解液ID，根據(jù)裂解液數(shù)據(jù)庫(kù)信息，查找到對(duì)應(yīng)蛋白名稱，NCBI錄入號(hào)(accession number),蛋白ID,蛋白大小等信息。芯片雜交結(jié)果如圖6所示:實(shí)驗(yàn)組芯片上僅出現(xiàn)一個(gè)陽(yáng)性信號(hào)點(diǎn)，對(duì)應(yīng)蛋白為ERBB2 (即HER2蛋白);結(jié)論:本發(fā)明抗HER2單克隆抗體僅特異性結(jié)合HER2蛋白，而與其他蛋白無交叉反應(yīng)。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保 護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種特異性結(jié)合HER2蛋白的單克隆抗體，由保藏編號(hào)為CGMCC N0.6908的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。
2.一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCC N0.6908。
3.一種免疫組化檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的單克隆抗體。
4.如權(quán)利要求1所述的單克隆抗體在制備用于檢測(cè)HER2蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述免疫檢測(cè)工具為試劑盒、芯片或試紙。
6.如權(quán)利要求1所述的單克隆抗體在制備用于診斷HER2相關(guān)性腫瘤的試劑盒中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述HER2相關(guān)性腫瘤為乳腺癌、胃癌、食管癌、大腸癌、膀 胱癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、甲狀腺癌或非小細(xì)胞肺癌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.6908，以及由此雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的單克隆抗體，包括該單克隆抗體的免疫組化試劑盒。本發(fā)明還涉及上述單克隆抗體在制備用于檢測(cè)HER2蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用，以及上述單克隆抗體在制備用于診斷HER2相關(guān)性腫瘤的試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明所述單克隆抗體可與HER2蛋白特異性結(jié)合，而與細(xì)胞內(nèi)其他蛋白無交叉反應(yīng)，顯著提高了HER2蛋白免疫檢測(cè)的特異性和可靠性。
文檔編號(hào)C07K16/40GK103102414SQ201310043630
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2013年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月4日
發(fā)明者何為無, 陳堅(jiān), 袁克湖, 馬東輝, 王超, 方麗, 沈怡, 吳易潘 申請(qǐng)人:無錫傲銳東源生物科技有限公司