專利名稱：一種同時(shí)制備長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種同時(shí)制備長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷的方法。
背景技術(shù)：
救必應(yīng)為冬青科植物鐵冬青Ilex rotunda Thunb.干燥樹(shù)皮,始載于《嶺南采藥錄》，又名白木香、羊不吃、白沉香等。鐵冬青生長(zhǎng)于山下疏林或溝、溪邊，分布于江蘇、安黴、浙江、江西、福建、臺(tái)灣、湖南、廣東、廣西、云南，為我國(guó)南方民方常用草藥。具有清熱解毒，利濕止痛的功效，常用于治療暑濕發(fā)熱，咽喉腫痛，濕熱瀉痢，脘腹脹痛，風(fēng)濕痹痛，濕疹，瘡癤，跌打損傷。此外，救必應(yīng)こ醇提取部位具有較強(qiáng)的抑菌和抗炎作用[張榕文，黃兆勝，范慶亞，等.救必應(yīng)抑菌抗炎有效部位篩選[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26 (8) =1820-1822],而且對(duì)應(yīng)激性高血壓大鼠有降壓和減慢心率作用[梁燕玲，董艷芬，羅集鵬.救必應(yīng)こ醇提 取物對(duì)應(yīng)激性高血壓大鼠降壓作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥材，2005，28 (7) =582-584.];救必應(yīng)正丁醇提取物具有抗心律失常和抗心肌缺血作用[陳小夏，何冰，徐苑芬，等.救必應(yīng)正丁醇提取物抗心律失常和抗心肌缺血作用研究[J].中藥藥理與臨床，1998，14(4).]。我國(guó)臨床對(duì)本品的應(yīng)用多集中在對(duì)胃腸道消化系統(tǒng)等疾病的治療[戴衛(wèi)波，梅全喜，曾聰彥.救必應(yīng)化學(xué)成分研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008 (12) :137-139.]。救必應(yīng)中主要含有三萜類、黃酮和酚類化合物[廣州市藥品檢驗(yàn)所.中草藥救必應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].新醫(yī)藥通訊，1970 (2) :23-26.]，并分離得到長(zhǎng)梗冬青苷[朱任宏，洪山海，王友海.中藥救必應(yīng)中的配醣體[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，1956，22 (2) :128-133.]、鐵冬青酸[文東旭，陳仲良.救必應(yīng)化學(xué)成分的研究(I)LJ].中草藥，1991,22(6) :246-248.]、鐵冬青酸異丙叉酮縮醇、芥子醛、丁香醛、3-こ酰齊墩果酸、硬脂酸、丁香苷、芥子醛葡萄糖苷、坡模醇酸、苦丁冬青苷H、3-0_ a-L-吡喃阿拉伯糖-3に19 a-ニ羥基齊墩果烷-12-烯-28-酸-28-0- ^ -D-吡喃葡萄糖酷、丁香脂素4' -0-^ -D-吡喃葡萄糖苷、咖啡酸4-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷、香草酸4-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷、^ -谷留醇、胡蘿卜苷、ニ丁香醚、木栓酮、3-羥基齊墩果烷、十九烷酸等。在救必應(yīng)較多的活性成分中，尤以長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷含量較高且活性突出，前者屬五環(huán)三萜，后者屬于苯丙醇苷類化合物。長(zhǎng)梗冬青苷在劑量為40mg/kg時(shí)對(duì)飲食誘導(dǎo)的高脂血癥大鼠具有顯著地降低總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇和致動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)，及升高密度脂蛋白膽固醇的作用；在劑量為75mg/kg時(shí)對(duì)Triton誘導(dǎo)的高脂血癥大鼠具有顯著降低總膽固醇和總脂的作用[Jahromi MAF, Gupta M, Manickam M, etal. Hypolipidemic Activity of Pedunculoside, A Constitunt of Ilex Doniana[J].Pharmaceutical Biology, 1999, 37 (I) :37-41.]。李超生等發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)梗冬青苷可明顯減輕犬冠脈前降支導(dǎo)致的心肌缺血程度和范圍(劑量為40mg/kg)，降低心肌耗氧指數(shù)(劑量為40mg/kg),并能明顯對(duì)抗氯化鋇(4mg/kg)誘導(dǎo)的大鼠抗心律失常(劑量為25_100mg/kg)，還可減少局灶性腦缺血大鼠的腦梗死面積(劑量為100mg/kg)，表明長(zhǎng)梗冬青對(duì)腦缺血及心肌缺血具有一定的保護(hù)作用[李超生.具棲冬青苷的制備方法及應(yīng)用[PLC07J63/00.200610017186. 7. 2008-08-01]。紫丁香苷采用試管法測(cè)定可使凝血時(shí)間縮短，有止血作用；在體試驗(yàn)對(duì)狗股動(dòng)脈切開(kāi)，狗與兔肝葉部分切除，狗脾臟十字切ロ，兔耳及腸系膜靜脈切開(kāi)，均能縮短止血時(shí)間，其止血機(jī)制部分與血管平滑肌收縮有夫，此在離體兔耳血管灌流實(shí)驗(yàn)可獲證明[廣州市藥品檢驗(yàn)所.中草藥救必應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[J].新醫(yī)藥通訊，1970(2)23-26.]。臨床觀察證實(shí)，丁香苷注射液具有止血作用，且似對(duì)泌尿系出血療效較顯著；靜脈給藥，療效有明顯提高，且無(wú)副作用[龐小雄，呂華沖，羅集鵬.救必應(yīng)中具棲冬青甙的分離與鑒定[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，13(2).]。目前，尚未有從救必應(yīng)中同時(shí)快速提取長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷兩個(gè)成分的報(bào)道。已有的提取純化長(zhǎng)梗冬青 苷和紫丁香苷的方法主要是傳統(tǒng)的醇提取、柱層析純化。傳統(tǒng)提純過(guò)程漫長(zhǎng)且目標(biāo)化合物損失較多，采用多次硅膠柱層析，操作步驟繁多且洗脫液以氯仿、丙酮、こ酸こ酯等毒性較大、價(jià)格較高的試劑為主。中國(guó)專利“具棲冬青苷的制備方法及應(yīng)用”(公開(kāi)號(hào)CN101033245)采用傳統(tǒng)醇提救必應(yīng)方法，僅獲得長(zhǎng)梗冬青苷且純度為98%，損失了大量的紫丁香苷。龐小雄等采用傳統(tǒng)柱層析方法分離得到長(zhǎng)梗冬青苷，此法時(shí)間長(zhǎng)，有機(jī)試劑用量大，產(chǎn)量小。紫丁香苷中國(guó)專利(CN101307079)采用苯和丙酮作為溶劑提取分離得到紫丁香苷，此法所用溶劑毒性較大。綜上所述，在提取分離長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷的過(guò)程中，普遍存在長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香的流失、純化過(guò)程漫長(zhǎng)、溶劑殘留毒性大、成本較高的問(wèn)題。因此，有必要尋找ー種既簡(jiǎn)便又安全地提取純化長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供ー種從中藥救必應(yīng)中大量、快速獲得高純度長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷的方法。所述長(zhǎng)梗冬青苷的結(jié)構(gòu)式如式I所示
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\〇H(式I)所述紫丁香苷的結(jié)構(gòu)式如式II所示
權(quán)利要求
1.一種同時(shí)提取長(zhǎng)梗冬青苷和紫丁香苷的方法，包括下述步驟 1)以體積分?jǐn)?shù)50%-70%的こ醇水溶液為提取劑，對(duì)救必應(yīng)進(jìn)行提取，收集提取液； 2)將所述提取液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行柱層析分離，以こ醇-水為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，分別收集體積分?jǐn)?shù)為10% -30%こ醇水溶液的洗脫組分和體積分?jǐn)?shù)為40% -70%こ醇水溶液的洗脫組分； 3)將所述體積分?jǐn)?shù)為10%-30%こ醇水溶液的洗脫組分濃縮、干燥，得到紫丁香苷粗品，將所述紫丁香苷粗品采用重結(jié)晶或柱層析進(jìn)行純化，得到純化的紫丁香苷； 將所述體積分?jǐn)?shù)為40% -70%こ醇水溶液的洗脫組分濃縮、干燥，得到長(zhǎng)梗冬青苷粗品，將所述長(zhǎng)梗冬青苷粗品采用重結(jié)晶法或柱層析法進(jìn)行純化，得到純化的長(zhǎng)梗冬青苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在干步驟I)中所述提取的方法為冷浸提取、超聲提取或回流提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述提取的方法為回流提??；所述回流提取進(jìn)行1-3次，每次提取的時(shí)間為30分鐘-90分鐘，毎次提取時(shí)，提取劑的用量與救必應(yīng)的配比為(8-16)L Ikgo
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于在步驟2)前還包括將步驟I)得到的提取液進(jìn)行濃縮的步驟；所得濃縮液的濃度為0. 04-0. 16g生藥/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在干步驟2)中所述大孔吸附樹(shù)脂選自下述任意一種型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂HP20、NKA-II、HPD-100A、SP825、DM301、D101、AB-8和 S-8。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在干步驟2)中所述梯度洗脫的條件如下先用體積分?jǐn)?shù)為10% -30%こ醇水溶液進(jìn)行洗脫，再用體積分?jǐn)?shù)為40% -70%こ醇水溶液進(jìn)行洗脫；每個(gè)梯度洗脫2-5倍柱體積。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在干步驟3)中所述重結(jié)晶法中所用的溶劑為甲醇、こ醇、丙酮或它們的水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于步驟3)中所述重結(jié)晶的方法具體如下將紫丁香苷粗品或長(zhǎng)梗冬青苷粗品溶于溶劑中，置于50°C _70°C水浴中使其達(dá)到過(guò)飽和溶液，再于室溫靜置5-60h，析出結(jié)晶，過(guò)濾，干燥，得到純化的紫丁香苷粗品或長(zhǎng)梗冬青苷。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在干步驟3)中所述柱層析選自下述至少ー種開(kāi)放式ODS柱色譜法、Sephadex LH-20柱層析法、制備液相色譜法； 所述柱層析法中所用的洗脫劑為體積分?jǐn)?shù)為10-70%的甲醇水溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述純化的紫丁香苷的純度大于90%，所述純化的長(zhǎng)梗冬青苷的純度大于98%。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)制備高純度紫丁香苷和長(zhǎng)梗冬青苷的方法。該方法以救必應(yīng)為原料，采用溶劑提取法、大孔樹(shù)脂吸附法進(jìn)行提取分離，采用重結(jié)晶、開(kāi)放ODS柱色譜法或Sephadex LH-20柱層析法、制備液相色譜法等方法制備高純度紫丁香苷和長(zhǎng)梗冬青苷，其純度均在90％以上，工藝簡(jiǎn)單易行，適宜于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102643322SQ20121008842
公開(kāi)日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月29日
發(fā)明者劉海萍, 吳曉毅, 孫文, 巢志茂, 王淳, 譚志高 申請(qǐng)人:中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所