專(zhuān)利名稱(chēng)：抗-c5a抗體和使用所述抗體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)領(lǐng)域是醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)化學(xué)。
背景技術(shù)：
補(bǔ)體系統(tǒng)與身體的其它免疫系統(tǒng)聯(lián)合作用以防范細(xì)胞和病毒病原體的侵入。有至少25種補(bǔ)體蛋白質(zhì)，它們以血漿蛋白質(zhì)和膜輔助因子的復(fù)合物集合存在。血漿蛋白質(zhì)組成脊椎動(dòng)物血清球蛋白的約10%。補(bǔ)體組分通過(guò)在一系列復(fù)雜但精確的酶切割和膜結(jié)合事件中互相作用而實(shí)現(xiàn)它們的免疫防御功能。所致補(bǔ)體級(jí)聯(lián)導(dǎo)致具有調(diào)理素功能、免疫調(diào)節(jié)性功能和裂解功能的產(chǎn)物的產(chǎn)生。與補(bǔ)體活化有關(guān)的生物學(xué)活性的簡(jiǎn)要總結(jié)，參見(jiàn)，例如，TheMerck Manual,第 16 版。補(bǔ)體級(jí)聯(lián)經(jīng)由經(jīng)典途徑、旁路途徑或凝集素途徑而進(jìn)行。這些途徑共用很多組分，盡管它們的起始步驟不同，它們匯聚且共用負(fù)責(zé)活化和破壞靶細(xì)胞的相同的“末端補(bǔ)體”組分(C5 至 C9) 。經(jīng)典途徑(CP)通常通過(guò)對(duì)靶細(xì)胞上的抗原位點(diǎn)的抗體識(shí)別以及結(jié)合來(lái)啟動(dòng)。旁路途徑(AP)可以是非抗體依賴(lài)性的，并且可通過(guò)病原體表面上的某些分子來(lái)啟動(dòng)。另外，凝集素途徑通常從結(jié)合甘露糖的凝集素(MBL)與高甘露糖底物的結(jié)合來(lái)啟動(dòng)。這些途徑聚集在一點(diǎn)，在此處，補(bǔ)體組分C3被活性蛋白酶切斷以生成C3a和C3b?；罨a(bǔ)體攻擊的其它途徑可隨后在導(dǎo)致補(bǔ)體功能不同方面的序列事件中起作用。C3a是一種過(guò)敏毒素。C3b結(jié)合細(xì)菌和其它細(xì)胞以及某些病毒和免疫復(fù)合物，并標(biāo)記它們以從循環(huán)中除去(起該作用的C3b稱(chēng)作調(diào)理素)。C3b的調(diào)理素功能通常被視作補(bǔ)體系統(tǒng)最重要的抗感染作用。具有阻斷C3b功能的遺傳損傷的患者易于被多種致病性生物體感染，而后來(lái)在補(bǔ)體級(jí)聯(lián)序列中具有損傷的患者，即具有阻斷C5功能的損傷的患者，被發(fā)現(xiàn)僅更易于僅奈瑟球菌屬(Neisseria)感染，因此僅僅在某種程度上更易感。C3b還與每種途徑特有的其它組分形成復(fù)合物，以形成經(jīng)典的或替代的C5轉(zhuǎn)化酶，其將C5裂解為C5a和C5b。因此C3被認(rèn)為是補(bǔ)體反應(yīng)序列中的中樞蛋白質(zhì)，因?yàn)樗鼘?duì)旁路途徑和經(jīng)典途徑而言均是必要的。血清蛋白酶因子I (其作用于C3b以產(chǎn)生iC3b)調(diào)節(jié)會(huì)調(diào)節(jié)C3b的該特性。盡管仍然具有調(diào)理素功能，但iC3b不能形成有活性的C5轉(zhuǎn)化酶。C5是一種190 kDaP球蛋白，在正常血清中以大約75 μ g/mL (0.4 μ Μ)的濃度存在。C5是糖基化的，其質(zhì)量的約1.5-3%歸因于碳水化合物。成熟的C5是一種異源二聚體，由與655個(gè)氨基酸75 kDa3鏈通過(guò)二硫鍵連接的999個(gè)氨基酸115 kDa α鏈鏈組成。C5作為單拷貝基因的單鏈前體蛋白質(zhì)產(chǎn)物而合成(Haviland等人(1991) J Iimunol146:362-368)。該基因的轉(zhuǎn)錄物的cDNA序列會(huì)預(yù)測(cè)1658個(gè)氨基酸的分泌型前-C5前體以及18個(gè)氨基酸的前導(dǎo)序列{參見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，355，245)。前-C5前體在氨基酸655和659之后斷裂，以產(chǎn)生:作為氨基末端片段的β鏈(上述序列的氨基酸殘基+1至655)，和作為羧基末端片段的α鏈(上述序列的氨基酸殘基660至1658)，其中在兩者之間缺失四個(gè)氨基酸(上述序列的氨基酸殘基656-659)。C5a被替代或經(jīng)典C5轉(zhuǎn)化酶從C5的α鏈切割，作為包含α鏈的前74個(gè)氨基酸(即上述序列的氨基酸殘基660-733)的氨基末端片段。C5a的11 kDa質(zhì)量的約20%歸因于碳水化合物。轉(zhuǎn)化酶作用的切割位點(diǎn)是在上述序列的氨基酸殘基733處或與其直接相鄰。結(jié)合此切割位點(diǎn)或與其相鄰處的化合物具有阻斷C5轉(zhuǎn)化酶接近該切割位點(diǎn)的潛力，因此作為補(bǔ)體抑制劑起作用。還可通過(guò)除C5轉(zhuǎn)化酶活性之外的方式活化C5。有限的胰蛋白酶消化、參見(jiàn)，例如，Minta 和 Man (1997) J Immunol 1597-1602 和 Wetsel 和 Kolb (1982) J Immunol128:2209-2216)、凝血酶和和酸處理(Yamamoto和Gewurz (1978) J Immunol 120:2008和Damerau 等人(1989) Molec Immunol 26:1133-1142)也可切割 C5，并產(chǎn)生有活性的 C5b。C5的切割會(huì)釋放出C5a (—種有效的過(guò)敏毒素和趨化因子)和C5b (其通過(guò)一系列蛋白相互作用導(dǎo)致裂解性的末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9的形成)。通過(guò)放大下游炎癥因子(諸如水解酶、活性氧、花生四烯酸代謝物和各種細(xì)胞因子)的釋放，C5a和C5b-9也具有多向性細(xì)胞活化性質(zhì)。C5b與C6、C7和C8結(jié)合，以在靶細(xì)胞表面上形成C5b_8復(fù)合物。在結(jié)合幾種C9分子后，形成膜攻擊復(fù)合物(MAC、C5b-9、末端補(bǔ)體復(fù)合物一TCC)。當(dāng)足夠數(shù)目的MAC插入靶細(xì)胞膜中時(shí)，它們?cè)斐傻拈_(kāi)口(MAC孔)會(huì)介導(dǎo)靶細(xì)胞的快速滲透性裂解。更低的非裂解濃度的MAC可產(chǎn)生其它效應(yīng)。具體地，少量C5b-9復(fù)合物膜插入在內(nèi)皮細(xì)胞和血小板中，可導(dǎo)致有害的細(xì)胞活化。在一些情況下，活化可先于細(xì)胞裂解。如上文所述，C3a和C5a是過(guò)敏毒素。這些活化的補(bǔ)體組分可觸發(fā)肥大細(xì)胞脫粒，這會(huì)釋放出組胺(從嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞)和其它炎癥介質(zhì)，從而導(dǎo)致平滑肌收縮、血管滲透性增加、白細(xì)胞活化以及其它炎性現(xiàn)象，包括導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)多的細(xì)胞增殖。C5a也起趨化肽的功能，用于吸引促炎癥粒細(xì)胞至補(bǔ)體活化位點(diǎn)。C5a受體存在于支氣管和肺泡上皮細(xì)胞和支氣管平滑肌細(xì)胞的表面上。C5a受體還存在于嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和活化的淋巴細(xì)胞上。

發(fā)明內(nèi)容
本公開(kāi)內(nèi)容尤其涉及發(fā)明人對(duì)一系列人源化的單克隆抗體的制備，所述單克隆抗體特異性地結(jié)合游離C5a蛋白(即，已經(jīng)從C5蛋白蛋白水解地切割下的C5a)，但是不結(jié)合旁系同源物蛋白片段游離的C4a或游離的C3a [所述抗體在本文中經(jīng)常稱(chēng)作抗_C5a抗體或抗_C5a新表位抗體]。如本文所述和在工作實(shí)施例中例證的，制備的抗_C5a抗體表現(xiàn)出對(duì)游離C5a的高親和 力。例如，本文所述的所有人源化的抗_C5a抗體會(huì)以小于1.25納摩爾的Kd結(jié)合游離C5a。許多抗體會(huì)以小于300皮摩爾的Kd結(jié)合游離C5a (例如，游離的人C5a);幾種抗體會(huì)以小于100皮摩爾的Kd結(jié)合游離C5a。另外，本文所述的人源化的抗_C5a抗體還會(huì)抑制C5a介導(dǎo)的信號(hào)傳遞。在下面詳細(xì)說(shuō)明了并在工作實(shí)施例中例證了本文所述抗體的其它結(jié)構(gòu)和功能性質(zhì)。使用類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的動(dòng)物模型和具有與人源化抗體副本類(lèi)似的性質(zhì)的替代物抗-小鼠C5a抗體，發(fā)明人還已經(jīng)證實(shí)了抗_C5a抗體在治療RA中的效力。還在工作實(shí)施例中顯示了實(shí)驗(yàn)，所述實(shí)驗(yàn)證實(shí)了人源化的抗_C5a抗體在人C5a誘發(fā)的嗜中性粒細(xì)胞減少的動(dòng)物模型中的積極治療效果。因此，發(fā)明人認(rèn)為，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段在診斷和治療方法的宿主中是有益的，所述方法與C5a介導(dǎo)的信號(hào)傳遞會(huì)促進(jìn)其發(fā)病機(jī)制的病癥有關(guān)。例如，發(fā)明人認(rèn)為，本文所述的人源化的抗_C5a抗體可用于治療或預(yù)防RA和其它補(bǔ)體相關(guān)病癥，包括、但不限于:非典型溶血性毒癥綜合征(aHUS)、年齡相關(guān)的黃斑變性(AMD)、膿毒癥、燒傷(例如，嚴(yán)重?zé)齻?、抗磷脂綜合征(APS)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、炎癥相關(guān)的疼痛、哮喘、狼瘡腎炎、宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩(IUGR)、HELLP綜合征(溶血性貧血、肝酶升高和低血小板計(jì)數(shù))、肺出血腎炎綜合征和慢性阻塞性肺疾病(COPD)。特別適合用人源化的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)行治療的其它病癥，是本領(lǐng)域已知的，且列舉在本文中。本文所述的人源化的抗_C5a抗體具有許多優(yōu)點(diǎn)，例如，勝過(guò)結(jié)合全長(zhǎng)或成熟C5并抑制其切割的試劑。象這樣的試劑一樣，本文所述的抗_C5a抗體(和其抗原結(jié)合片段)能夠抑制由C5片段C5a介導(dǎo)的C5活化的anaphylatoxic下游效應(yīng)。也就是說(shuō)，本文所述的抗_C5a抗體可以抑制C5a介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，已知所述炎癥應(yīng)答在補(bǔ)體相關(guān)病癥(例如，但不限于、膿毒癥、RA和哮喘)的發(fā)病機(jī)制中起組成作用。但是，由于人血清中的C5濃度是大約 0.37 μ M (Rawal 和 Pangburn (2001) J Immunol 166 (4): 2635-2642)，經(jīng)常需要使用抗-C5抗體的高濃度和/或頻繁施用來(lái)有效地抑制C5，并從而抑制人類(lèi)中的C5a介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答。與C5不同，C5a以遠(yuǎn)遠(yuǎn)更低的濃度存在于血液中，且經(jīng)常被限制在局部補(bǔ)體活化的特定區(qū)域，例如，哮喘患者的肺、RA患者的關(guān)節(jié)或AMD患者的眼中的玻璃疣。因而，與例如抗-C5抗體相比，本文所述的抗_C5a抗體可以以遠(yuǎn)遠(yuǎn)更低的劑量和/或更低的頻率施用(例如，局部地施用給補(bǔ)體活化部位)給人類(lèi)，并有效地在人類(lèi)中提供相同的或更大的C5a抑制。與抗-C5抗體的所需劑量相比，施用更低劑量的抗_C5a抗體的能力，也允許其它遞送途徑，例如，皮下給藥、肌 肉內(nèi)給藥、肺內(nèi)遞送和通過(guò)使用可生物降解的微球來(lái)給藥?？乖瑿5a相對(duì)于C5而言更低的濃度，也有利于抗_C5a抗體相對(duì)于例如靶向末端補(bǔ)體的治療性抗體的半衰期而言更長(zhǎng)的半衰期，這是由于抗原介導(dǎo)的抗體清除貢獻(xiàn)的減少。另外，通過(guò)它們的安全性特性，也可以將本文所述的抗_C5a抗體與抑制末端補(bǔ)體的治療劑(諸如C5抑制劑)區(qū)分開(kāi)。抑制末端補(bǔ)體組分(諸如C5、C5b、C6、C7、C8或C9)的一個(gè)顯著后果是，宿主免疫系統(tǒng)針對(duì)末端補(bǔ)體經(jīng)常裂解的具莢膜細(xì)菌(例如，腦膜炎奈瑟球菌{Neisseria和淋病奈瑟球菌{Neisseria的保護(hù)降低。參見(jiàn)，例如，Haeney 等人(1980) Clin Exp Immunol 迎:16-24 和 Brodsky (2009) Blood113(26):6522-6527。由于所述抗_C5a抗體會(huì)抑制C5a介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，但是不會(huì)阻止裂解那些具莢膜細(xì)菌的末端補(bǔ)體復(fù)合物的形成，接收本文所述的治療性抗_C5a抗體的患者不需要保護(hù)性疫苗接種，例如，針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和淋病奈瑟球菌的疫苗接種。因此，在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種結(jié)合游離C5a的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合游離的人C5a (hC5a ;例如，包含在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列或由其組成的人C5a蛋白)。在有些實(shí)施方案中，所述抗體可以結(jié)合去精氨酸化(desarginated)形式的游離C5a,例如,包含在SEQ ID NO:2中所述的氨基酸序列或由其組成的去精氨酸化形式的人C5a。所述抗體可以結(jié)合游離C5a的新表位，所述表位不存在于未切割的C5上，或存在于僅小部分的所有未切割的C5上。盡管本公開(kāi)內(nèi)容絕不限于任何具體理論或作用機(jī)理，在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合游離C5a (例如，游離hC5a)，且還可以結(jié)合未切割的、加工過(guò)的C5 (例如，血漿C5)的亞群，所述亞群構(gòu)成樣品中的全長(zhǎng)C5的總?cè)后w(例如，血液或血漿樣品或包含重組全長(zhǎng)C5的樣品)的小于10 (例如，小于9.5、9、8.5、8、7.5、7、6.5、
6,5.5、5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5,0.4,0.3,0.2 或小于 0.1)%，所述亞群完全地或部分地變性，從而暴露否則會(huì)被封閉的C5a新表位(抗_C5a抗體或片段與其結(jié)合)。因而，在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合游離C5a，但是不會(huì)結(jié)合90%或更多的未切割的、天然的C5群體的未切割的C5蛋白。在有些實(shí)施方案中，在任意數(shù)目的適用于測(cè)試C5活性的試驗(yàn)(例如，溶血試驗(yàn)或CH50eq試驗(yàn)(參見(jiàn)下文))中，上述的部分或完全變性的C5亞群是無(wú)活性的，或具有降低的活性(例如，小于全功能的全長(zhǎng)C5 蛋白的活性的 90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10、5%)。適用于測(cè)試本文所述的抗_C5a抗體在有些實(shí)施方案中可以結(jié)合的小亞群的活性的方法，是本領(lǐng)域已知的，并描述在本文中。在有些實(shí)施方案中，在體外溶血試驗(yàn)或體外CH50eq試驗(yàn)中，甚至在有與未切割的C5 (例如，未切割的、天然的C5)相比至少等于或大于5 (例如，5.6、6、7、8、9、10、15、20、
25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200)倍過(guò)量的所述抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段存在下，本文所述的任一種抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段不會(huì)抑制C5活性。在有些實(shí)施方案中，在體外溶血試驗(yàn)或體外CH50eq試驗(yàn)中，甚 至在有與未切割的、天然的C5相比約5倍至200倍(例如，約5倍至100倍、約10倍至100倍、約20倍至100倍、或約10倍至150倍)過(guò)量的所述抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段存在下，本文所述的任一種抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段不會(huì)抑制C5活性。抑制(例如，它與C5活性有關(guān))包括:在例如溶血試驗(yàn)或CH50eq試驗(yàn)中，與在類(lèi)似條件下和在等摩爾濃度的對(duì)照抗體(或其抗原結(jié)合片段)的效果相比，未切割的、天然的C5的活性的至少 5(例如，至少 6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55 或 60)% 降低。本文使用的“大幅抑制”表示，抑制給定的活性(例如，C5活性)的至少40 (例如，至少45、
50、55、60、65、70、75、80、85、90或95或更大)％。在有些實(shí)施方案中，所述C5得自血漿(例如，從血漿純化或存在于血漿中，所述血漿是例如人血漿)。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以小于2 nM的Kd結(jié)合C5a蛋白(例如，人C5a蛋白)。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段會(huì)以小于I nM的Kd[在本文中也稱(chēng)作“亞納摩爾親和力”]結(jié)合C5a蛋白。在有些實(shí)施方案中，在有摩爾過(guò)量的未切割的、天然的C5 (例如，純化的和/或重組的C5)存在下，所述抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力[例如，小于或等于 9.9 X 1(Γ10 (例如，小于或等于 9 X 1(Γ10、8 χ 1(Γ10、7 χ 1(Γ10、6 χ 1(Γ10、5 χ 1(Γ10、4 χ10_1C1、3 χ 10_1C1、2.5 χ 10_1C1、2 χ 10_1C1、1 χ 10_1C1、8.0 χ 10_η、7.0 χ 10_η、6.0 χ 10_η、5.0χ 10_η、4.0 χ ΙΟ-11或3.0 χ ΙΟ-11) M的Kd ]結(jié)合游離C5a。在有些實(shí)施方案中，與未切割的、天然的C5蛋白相比，本文所述的任一種抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)游離C5a具有大至少 100 (例如，至少 110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000 或 10000)
倍的親和力(例如，通過(guò)它的Kd來(lái)表示)。因而，在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種抗體或其抗原結(jié)合片段，它(a)以亞納摩爾親和力結(jié)合游離C5a (例如，hC5a)，且(b)結(jié)合游離C5a的親和力比它對(duì)未切割的、天然的C5蛋白的對(duì)應(yīng)親和力大至少100 (例如，至少110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000或10000)倍。例如，在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段可以以100 nM的Kd結(jié)合游離hC5a，并以高至少100倍(例如，至少10 nM)的Kd結(jié)合未切割的人C5蛋白的至少一個(gè)亞群。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它結(jié)合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的游離的人C5a多肽，其中在有與人C5a (hC5a)相比摩爾過(guò)量(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、 150、200、300、400或500倍摩爾過(guò)量)的未切割的天然的人C5存在下，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd結(jié)合人C5a多肽。在有些實(shí)施方案中，在有與游離hC5a相比至少或大于2倍摩爾過(guò)量、但是不大于或小于500 (例如，500、450、400、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、25、20或15)倍摩爾過(guò)量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力(例如，本文列舉的亞納摩爾Kd中的任一種)結(jié)合游離hC5a多肽。在有些實(shí)施方案中，在有與游離hC5a相比2倍至20倍摩爾過(guò)量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力(例如，本文列舉的亞納摩爾Kd中的任一種)結(jié)合游離hC5a多肽。在有些實(shí)施方案中，在有與游離hC5a相比10倍至20倍摩爾過(guò)量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力(例如，本文列舉的亞納摩爾Kd中的任一種)結(jié)合游離hC5a多肽。在有些實(shí)施方案中，在有與游離hC5a相比5倍至15倍摩爾過(guò)量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力(例如，本文列舉的亞納摩爾Kd中的任一種)結(jié)合游離hC5a多肽。在有些實(shí)施方案中，在有與游離hC5a相比至少2倍、但是不大于20倍摩爾過(guò)量的未切割的、天然的C5存在下，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力(例如，本文列舉的亞納摩爾Kd中的任一種)結(jié)合游離hC5a多肽。這樣的測(cè)量可以是使用例如標(biāo)準(zhǔn)的親和力測(cè)定技術(shù)的體外測(cè)量，其中的許多在本文中予以列舉和/或描述。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它結(jié)合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a多肽，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd結(jié)合人C5a多肽，且其中與等摩爾量的對(duì)照抗體或其抗原結(jié)合片段相比，所述抗體或其抗原結(jié)合片段不會(huì)大幅抑制C5活性，甚至在有與未切割的、天然的C5相比小于或等于10倍摩爾過(guò)量的所述抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段存在下。在本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段中的任一種的有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合游離的人C5a，且與得自至少一種非人哺乳動(dòng)物物種的游離C5a具有交叉反應(yīng)性。例如，在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體(或其抗原結(jié)合片段)結(jié)合得自人的游離C5a (例如，以亞納摩爾親和力)，且也結(jié)合得自非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如，食蟹猴、恒河猴、猿、狒狒、黑猩猩、猩猩或大猩猩)、嚙齒動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠或兔)、牛、山羊、驢、豬、狗、貓或馬的游離C5a。在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段以小于或等于9.9 χ 10,(例如，小于或等于9 χ 10,、8 χ 10_1(ι、7 χ10_1C1、6 χ 10_1C1、5 χ 10_1C1、4 x 10_1C1、3 x 10_1C1、2.5 x 10_1C1、2 x 10_1C1、1 x 10_1C1、8.0 χ ΙΟ—11、
7.0 χ 1(Γη、6.0 χ 1(Γη、5.0 χ 1(Γη、4.0 χ I(Γ11 或 3.0 χ I(Tn) M 的 Kd 結(jié)合游離 hC5a，且也結(jié)合得自食蟹猴(或其它非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種)的游離C5a，其中對(duì)人C5a的親和力(例如，通過(guò)它的Kd來(lái)表示)比對(duì)食蟹猴(或其它非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物物種)C5a的親和力大不超過(guò) 500 (例如，不超過(guò) 5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、200、250、300、350、400、450或475)倍。例如，在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體結(jié)合游離hC5a的親和力比所述抗體對(duì)非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物C5a的對(duì)應(yīng)親和力大不超過(guò)50倍(例如，對(duì)游離hC5a的Kd為100 nM，對(duì)非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物C5a的Kd不超過(guò)5 nM)。在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段以小于或等于9.9 χ 10,(例如，小于或等于9 χ 10_1(1、8 χ 10_1(1、7 χ 10_1C1、6 χ 10_1C1、5 χ 10_1C1、4 x 10_1C1、3 χ 10_1C1、2.5 χ 10_1C1、2 χ 10_1C1、1 χ 10_1C1、8.0 χ1(Γη、7.0 χ 1(Γη、6.0 χ 1(Γη、5.0 χ 1(Γη、4.0 χ 1(Γη 或 3.0 χ I(Tn) M 的 Kd 結(jié)合游離hC5a，且也結(jié)合得自嚙齒動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠或兔)的C5a，其中對(duì)人C5a的親和力(例如，通過(guò)它的Kd來(lái)表示)比對(duì)嚙齒動(dòng)物C5a的親和力大不超過(guò)1000 (例如，不超過(guò)5、10、
20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、200、250、300、350、400、450、475、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或975)倍。在有些實(shí)施方案中，本文所述的任一種抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力結(jié)合人C5a和得自非人哺乳動(dòng)物(例如，嚙齒動(dòng)物或非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物諸如食蟹猴)的C5a。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以相等親和力(例如，相等Kd)結(jié)合人C5a和非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物C5a。例如，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種抗體或其抗原結(jié)合片段，它以亞納摩爾親和力[例如，Kd of 小于或等于 9.9 χ 1(Γ10 (例如，小于或等于 9 χ 1(Γ10、8 χ 1(Γ10、7 χ 1(Γ10、6 χ10_1C1、5 χ 10_1C1、4 χ 10_1C1、3 χ 10_1C1、2.5 χ 10_1C1、2 χ 10_1C1、1 χ 10_1C1、8.0 χ 10_η、7.0 χ1(Γη、6.0 χ 1(Γη、5.0 χ 1(Γη、4.0 χ 1(Γη 或 3.0 χ I(Tn) Μ]結(jié)合游離的人 C5a，且與得自食蟹猴(或其它非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物)的游離C5a具有交叉反應(yīng)性，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以小于 10 χ 10'9 χ 10'8 χ 10'7 χ 10'6 χ 10'5 χ 10'4 χ 10'3 χ 10'2x10'I χ 10'9.9 χ 1(Γ10 (例如，小于 9 χ 1(Γ10、8 χ 1(Γ10、7 χ 1(Γ10、6 χ 1(Γ10、5 χ1(Γ10、4 χ 1(Γ10、3 χ 1(Γ10、2.5 χ 1(Γ10、2 χ 1(Γ10、1 χ 1(Γ10 或 8.0 χ I(Tn) Μ]的 Kd 結(jié)合食蟹猴(或其它非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物)C5a，其中對(duì)人C5a的親和力比對(duì)食蟹猴(或非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物)C5a 的親和力大不超過(guò) 500 (例如，不超過(guò)5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、125、150、200、250、300、350、400、450 或 475)倍(例如，對(duì)人 C5a 的 Kd 為 100 nM，對(duì)非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物C5a的Kd不超過(guò)50 nM)。適用于測(cè)定所述抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)給定抗原的親和力的方法是本領(lǐng)域已知的，且在本文中予以描述和例證。在有些實(shí)施方案中，所述交叉反應(yīng)性的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段在功能上抑制它所結(jié)合的游離hC5a和非人哺乳動(dòng)物C5a。例如，抗體在1:1 (抗原結(jié)合位點(diǎn):C5a)的摩爾比抑制了至少70 (例如，至少75、80、85、90或95或更大)％的人C5a依賴(lài)性的人嗜中性粒細(xì)胞活化，并在1:1 (抗原結(jié)合位點(diǎn):C5a)的摩爾比抑制了至少70 (例如，至少75、80、85、90或95或更大)％的非人哺乳動(dòng)物C5a依賴(lài)性的嗜中性粒細(xì)胞活化(所述嗜中性粒細(xì)胞得自與所述抗體所結(jié)合的非人哺乳動(dòng)物C5a相同的物種)。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它結(jié)合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的游離hC5a多肽，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd結(jié)合人C5a多肽，且其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合hC5a和得自非人哺乳動(dòng)物物種的C5a。所述非人哺乳動(dòng)物物種可以是，例如，非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物諸如食蟹猴、恒河猴或狒狒。在有些實(shí)施方案中，所述非人哺乳動(dòng)物物種是嚙齒動(dòng)物諸如小鼠、大鼠、兔、豚鼠、沙鼠或倉(cāng)鼠。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合hC5a的親和力比得自非人哺乳動(dòng)物物種的C5a的對(duì)應(yīng)親和力高不大于100倍。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或抗原結(jié)合片段在1:1 (抗原結(jié)合位點(diǎn):C5a)的摩爾比抑制了至少50%人C5a依賴(lài)性的人嗜中性粒細(xì)胞活化。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合得自非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如，食蟹猴或恒河猴)的游離C5a，所述游離C5a蛋白的氨基酸序列包含在SEQ ID NO: 179或SEQ ID NO: 180中所述的氨基酸序列或由其組成。如在工作實(shí)施例中所述，發(fā)明人還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一種二價(jià)抗_C5a抗體BNJ383，其以高親和力結(jié)合游離C5a (在該情況下，人C5a)，且以遠(yuǎn)遠(yuǎn)更低的親和力結(jié)合未切割的人C5(hC5)，其中，在組合物(例如，水溶液)中，在生理?xiàng)l件下，在平衡時(shí)，且在有與所述抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的摩爾量相比摩爾過(guò)量的未切割的人C5存在下，多個(gè)抗體中的至少95%各自結(jié)合不超過(guò)一個(gè)hC5分子。多個(gè)抗體中的至少95%的第二抗原結(jié)合位點(diǎn)保持可用于(例如，主要可用于)結(jié)合游離C5a。盡管本公開(kāi)內(nèi)容絕不受任何具體理論或作用機(jī)理的約束，發(fā)明人認(rèn)為，所述二價(jià)抗_C5a抗體以下述方式(例如，在這樣的表位處)結(jié)合未切割的C5:位阻妨礙或至少大幅抑制所述抗_C5a抗體的第二抗原結(jié)合位點(diǎn)與第二個(gè)未切割的C5蛋白的結(jié)合，盡管所述抗體可以容易地適應(yīng)與兩個(gè)hC5a分子的結(jié)合。因而，甚至在摩爾過(guò)量的未切割的C5中，所述抗體保留以高親和力結(jié)合游離C5a的能力，并由此甚至在該摩爾過(guò)量下，保留抑制C5a的促炎癥活性的能力。

本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)容易地且迅速地理解這樣的抗_C5a抗體的眾多治療益處。例如，如上面所指出的，人血清中的循環(huán)C5的濃度非常高。因而，當(dāng)引入哺乳動(dòng)物中時(shí)，能夠同時(shí)結(jié)合兩個(gè)未切割的C5分子的抗_C5a抗體會(huì)在摩爾過(guò)量的C5中迅速地滅活，且此后不再能夠在補(bǔ)體活化的情況下結(jié)合游離C5a。并且,與抗-C5抗體一樣,在生成C5a的情況下，有效地抑制C5a需要使用高濃度的這類(lèi)抗_C5a抗體和/或頻繁施用。相比而言，本文所述的抗_C5a抗體(甚至在摩爾過(guò)量的未切割的C5中，其保留結(jié)合游離C5a的能力)因而可以以與例如抗-C5抗體相比遠(yuǎn)遠(yuǎn)更低的劑量和/或更低的頻率施用給人類(lèi)，并在人類(lèi)中有效地提供相同或更大的C5a抑制。因此，在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中，在水溶液(其包含(i)多個(gè)所述抗體和(ii)與抗原結(jié)合位點(diǎn)的摩爾量相比摩爾過(guò)量的hC5)中，在平衡時(shí)，且在生理?xiàng)l件下，所述多個(gè)抗體中的至少95 (例如，至少95.5、96、
96.5、97、97.5或97.7) %結(jié)合不超過(guò)一個(gè)hC5分子，S卩，不超過(guò)5%的抗體在平衡時(shí)結(jié)合2個(gè)hC5分子。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中，在平衡時(shí)，且在生理?xiàng)l件下，在水溶液(其包含(i)多個(gè)所述抗體和(ii)與抗原結(jié)合位點(diǎn)(或抗體)的摩爾量相比摩爾過(guò)量的hC5)中，所述多個(gè)抗體中的至少95%保留至少一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)可用于結(jié)合游離hC5a。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中，在平衡時(shí)，且在生理?xiàng)l件下，在水溶液(其包含(i)多個(gè)所述抗體和(ii)與抗原結(jié)合位點(diǎn)(或抗體)的摩爾量相比摩爾過(guò)量的hC5)中，所述多個(gè)抗體中的不超過(guò)5%的每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合hC5分子。在本文所述的任一種分離的抗體的有些實(shí)施方案中，所述摩爾過(guò)量是至少2倍(例如，至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或甚至10倍)摩爾過(guò)量。在本文所述的任一種分離的抗體的有些實(shí)施方案中，所述生理?xiàng)l件是3.9 mMNaH2PO4,6.1 mM Na2HPO4 和 150 mM NaCl，在 ρΗ7.0。在本文所述的任一種分離的抗體的有些實(shí)施方案中，每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以以小于1.25 X 10_9 M的Kd結(jié)合游離hC5a。在有些實(shí)施方案中，每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以以亞納摩爾親和力(參見(jiàn)上文)結(jié)合游離hC5a。在本文所述的任一種分離的抗體的有些實(shí)施方案中，所述分離的抗體包含:含有在SEQ ID N0:42中所述的氨基酸序列的輕鏈多肽，和含有在SEQ ID N0:45中所述的氨基酸序列的重鏈多肽。在本文所述的任一種分離的抗體的有些實(shí)施方案中，所述分離的抗體包含:(i)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；(ii)輕鏈⑶R2，其包含在SEQ IDN0:21中所述的氨基酸序列輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO:22中所述的氨基酸序列；(iv)重鏈⑶R1，其包 含在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；(V)重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和(vi)重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述分離的抗體可以包含本文所述的輕鏈CDR集合中的任一個(gè)、本文所述的輕鏈可變區(qū)中的任一個(gè)(例如，人源化的輕鏈可變區(qū)中的任一個(gè))、本文所述的重鏈CDR集合中的任一個(gè)、本文所述的重鏈可變區(qū)中的任一個(gè)(例如,人源化的重鏈可變區(qū)中的任一個(gè))或它們的任何合適的組合。參見(jiàn)，例如，表I或2。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患補(bǔ)體相關(guān)病癥(例如，C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥)的人的方法，其中所述方法包括:以足以治療所述補(bǔ)體相關(guān)病癥的量，給所述人施用本文所述的任一種分離的抗體。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥的人的方法，其中所述方法包括:給所述人施用至少0.6 (例如，至少0.7、0.8、0.9或I) mg本文所述的任一種分離的抗體/kg人體重，以由此部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離C5a 持續(xù)大于、等于或至少 12 (例如，13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥的人的方法，其中所述方法包括:給所述人施用至少10 mg本文所述的任一種分離的抗體/kg人體重，以由此部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離C5a持續(xù)至少24天。
在另一個(gè)方面,本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥的人的方法，其中所述方法包括:給所述人施用本文所述的任一種分離的抗體(或例如包含本文所述的任一種分離的抗體的藥物組合物)，所述抗體的量足以:(a)實(shí)現(xiàn)等于或小于未切割的hC5的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值，和(b)部分地或完全地結(jié)合和隔離病理生理學(xué)水平的游離C5a。在本文所述的任意方法的有些實(shí)施方案中，以足以實(shí)現(xiàn)大幅低于未切割的C5 (例如，hC5)的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值的量，將抗體施用給受試者(例如，人)。在本文所述的任意方法的有些實(shí)施方案中，所述Cmax值是，例如，不大于80 nM(或大約0.6 mg/kg)。在有些實(shí)施方案中，所述Cmax水平是不大于70 (例如，60、50、40、30或20) nM。在有些實(shí)施方案中，所述Cmax值是不大于大約100 nM。在有些實(shí)施方案中，所述Cmax值是不大于200 nM。在本文所述的任意方法的有些實(shí)施方案中，所述Cmax值是,例如，不大于400 nM (或大約3 mg/kg)。在有些實(shí)施方案中，所述Cmax值是不大于400 (例如 350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20 或 10) nM。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥的人的方法，其中所述方法包括:給所述人施用本文所述的任一種分離的抗體(或例如包含本文所述的任一種分離的抗體的藥物組合物)，所述抗體的量足以:(a)實(shí)現(xiàn)等于、小于或大幅小于未切割的hC5的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值，和(b)部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離C5a持續(xù)至少12天(例如,至少24天)。合適的Cmax值如上所述。在本文所述的任意方法的有些實(shí)施方案中，所述C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥可以是例如選自下述的一種:膿毒癥、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、膿毒性休克、抗磷脂綜合征、災(zāi)難性抗磷脂綜合征、彌漫性血管內(nèi)凝血、狼瘡腎炎、肺出血腎炎綜合征、燒傷或嚴(yán)重?zé)齻⑾?、HELLP綜合征(溶血性貧血、肝酶升高和低血小板計(jì)數(shù))、炎癥誘發(fā)的疼痛、C5a介導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞減少、年齡相關(guān)的黃斑變性(AMD)、慢性阻塞性肺疾病和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，所述多個(gè)抗體中的每一個(gè)包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在有人C5 (hC5)存在下和在生理?xiàng)l件下，在平衡時(shí)，所述多個(gè)抗體中的不超過(guò)5%包含2個(gè)同時(shí)結(jié)合未切割的hC5的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在本文所述的任一種組合物的有些實(shí)施方案中，使用高效液相色譜法(HPLC)，可以評(píng)價(jià)處于任意特定結(jié)合構(gòu)型的數(shù)目的百分比。在有些實(shí)施方案中，用于評(píng)價(jià)抗體的生理?xiàng)l件包括下述條件:在包含3.9 mM NaH2PO4,6.1 mM Na2HPO4和150 mM NaCl的pH7.0水溶液中，與多個(gè)抗體一起在4°C溫育hC5 (例如，摩爾過(guò)量(例如，2倍摩爾過(guò)量)的hC5) 84小時(shí)。為了本公開(kāi)內(nèi)容的目的，在4°C在84小時(shí)時(shí)得到的溶液被視作處于平衡中。在本文所述的任一種組合物的有些實(shí)施方案中，所述多個(gè)抗體中的不超過(guò)5%包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，所述2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)在生理?xiàng)l件下和在有與抗體相比至少2倍摩爾過(guò)量的hC5存在下同時(shí)結(jié)合未切割的hC5。在本文所述的任一種組合物的有些實(shí)施方案中，在包含3.9 mM NaH2PO4、6.1 mMNa2HPO4和150 mM NaCl的pH7.0水溶液中，在4°C與hC5 —起溫育多個(gè)抗體84小時(shí)以后，使用HPLC評(píng)價(jià)出，所述多個(gè)抗體中的不超過(guò)5%包含2個(gè)同時(shí)結(jié)合未切割的hC5分子的抗
原結(jié)合位點(diǎn)。
在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，所述多個(gè)抗體中的每一個(gè)包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人 C5 (hC5)，且其中在包含 3.9 mM NaH2PO4,6.1 mM Na2HPO4 和 150mM NaCl的pH7.0水溶液中，在4°C與hC5 —起溫育多個(gè)抗體84小時(shí)以后，評(píng)價(jià)出(例如，使用HPLC)所述多個(gè)抗體中的不超過(guò)5%包含2個(gè)同時(shí)結(jié)合未切割的hC5的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，所述多個(gè)抗體中的每一個(gè)包含第一抗原結(jié)合位點(diǎn)和第二抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以以小于1.25 χ 10_9 M的Kd結(jié)合游離hC5a多肽，且其中，在有人C5 (hC5)存在下和在生理?xiàng)l件下評(píng)價(jià)(例如，使用高效液相色譜法(HPLC))，所述多個(gè)抗體中的至少95%的2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)以下述構(gòu)型被未切割的hC5占據(jù):(i)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5，第二抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合；或(ii)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合，且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，所述多個(gè)抗體中的每一個(gè)包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在有人C5 (hC5)存在下并在生理?xiàng)l件下評(píng)價(jià)(例如，使用高效液相色譜法(HPLC))，所述多個(gè)抗體中的至少95%包含至少一個(gè)能夠結(jié)合
1 hC5a的抗原結(jié)合似點(diǎn)。在本文所述的任一種組合物的有些實(shí)施方案中，在有至少2倍摩爾過(guò)量的hC5:抗體存在下，評(píng)價(jià)多個(gè)抗體。在本文所述的任一種組合物的有些實(shí)施方案中，在有至少2倍摩爾過(guò)量的hC5:抗原結(jié)合位點(diǎn)存在下，評(píng)價(jià)多個(gè)抗體。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中所述抗體結(jié)合游離C5a或未切割的C5，且其中在有摩爾過(guò)量(例如，至少或大于2倍、5倍、10倍、15倍或甚至20倍摩爾過(guò)量)的未切割的C5存在下，所述抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之一保留可用于結(jié)合游離C5a。在有些實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合位點(diǎn)具有相同的特異性(例如，所述2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)各自的CDR共有相同的氨基酸序列)。在有些實(shí)施方案中，游離C5a是人C5a。在有些實(shí)施方案中，所述抗體具有在人C5a和得自非人哺乳動(dòng)物物種的C5a之間的交叉反應(yīng)性。在有些實(shí)施方案中，所述抗體可以以亞納摩爾親和力結(jié)合游離C5a。在有些實(shí)施方案中，所述抗體對(duì)C5a的親和力比它對(duì)未切割的C5的對(duì)應(yīng)親和力大至少100倍。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在任意的未切割的hC5濃度(例如，與hC5a相比，摩爾過(guò)量的未切割的C5)，所述抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)中的至少一個(gè)保留可用于結(jié)合游離hC5a (例如，在人生理?xiàng)l件下，例如，在人血或血清中)。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在1:1 (抗體:hC5)的摩爾比，所述多個(gè)抗體中的不超過(guò)或小于5 (例如， 不超過(guò)或小于4.9,4.8,4.TA.6,4.5,4.4,4.3,4.2,4.1,4.0、3.9、3.8、3.7、3.6、3.5、3.4、3.3、3.2、3.1、3.0、2.9、2.8、2.7、2.6、2.5、2.4、2.3、2.2、2.1、
2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1 或 1)% 包含 2 個(gè)同時(shí)結(jié)合未切割的 hC5 的抗
原結(jié)合位點(diǎn)。在有些實(shí)施方案中，每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以以小于1.25 χ IO-9 M的Kd(或，例如，以亞納摩爾親和力)結(jié)合游離hC5a。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，當(dāng)以I mg/kg或更高的劑量施用給人時(shí)，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多個(gè)抗體部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離 C5a 持續(xù)大于、等于或至少 12 (例如，13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，當(dāng)以10 mg/kg或更高的劑量施用給人時(shí)，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多個(gè)抗體部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離 C5a 持續(xù)大于、等于或至少 12 (例如，13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，當(dāng)以實(shí)現(xiàn)大幅低于未切割的hC5的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值的劑量施用時(shí)，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多個(gè)抗體部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離C5a持續(xù)大于、等于或至少12 (例如，13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25)天。

在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，當(dāng)以實(shí)現(xiàn)大幅低于未切割的hC5的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值的劑量施用時(shí)，在有生理水平的未切割的hC5存在下，所述多個(gè)抗體部分地或完全地結(jié)合和隔離病理生理學(xué)水平的游離C5a。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含第一抗原結(jié)合位點(diǎn)和第二抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，當(dāng)兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)被完全占據(jù)時(shí)(和，例如，在人生理?xiàng)l件下，例如，在人血或血清中)，下述結(jié)合構(gòu)型是可能的:(i)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合游離hC5a，且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5 ； (ii)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合游離hC5a,且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合游離hC5a ;或(iii)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5,且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合涵^尚hC5a。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含第一抗原結(jié)合位點(diǎn)和第二抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以以小于1.25 χ 10_9 M的Kd (或，例如，以亞納摩爾親和力)結(jié)合游離hC5a，且其中，在含有多個(gè)抗體的生理溶液中，至少95%的抗體處于下述構(gòu)型:(i)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合游離hC5a，且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5 ； (ii)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合游離hC5a,且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合游離hC5a ； (iii)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5,且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合游離hC5a ； (iv)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5,且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合；(V)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合hC5a,且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合；(vi)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合，且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的hC5 ； (vii)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合,且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合hC5a ;和(viii)第一抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合，且第二抗原結(jié)合位點(diǎn)未結(jié)合。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的分離的抗體，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，且其中，在與hC5a相比摩爾過(guò)量的未切割的hC5中，所述抗體在1:1 (抗原結(jié)合位點(diǎn):hC5a)的摩爾比抑制了至少50% hC5a依賴(lài)性的人嗜中性粒細(xì)胞活化。在本文所述的任一種抗體的有些實(shí)施方案中，所述構(gòu)型在人生理?xiàng)l件下可能是與完全折疊的、天然的人C5a和C5蛋白形成。在本文所述的任一種抗體的有些實(shí)施方案中，所述抗體以小于1.25 χ 10_9 M的Kd (或，例如，以亞納摩爾親和力)結(jié)合游離hC5a。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種抗體，所述抗體:(a)以亞納摩爾親和力結(jié)合游離C5a (例如，hC5a)，并且(b)結(jié)合游離C5a的親和力比它對(duì)未切割的C5蛋白的對(duì)應(yīng)親和力大至少 100 (例如，至少 110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000或10000)倍。在包含多個(gè)抗體的生理組合物中，就至少95%的抗體而言，所述抗體的僅一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合未切割的C5蛋白，而第二抗原結(jié)合位點(diǎn)保留可用于結(jié)合游離C5a(所述hC5a可以具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列)。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥的人的方法，所述方法包括:給所述人施用包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中將至少I(mǎi) mg抗體/kg人體重施用給人，且其中所述抗體的施用可有效地部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離C5a持續(xù)至少12天。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患補(bǔ)體相關(guān)病癥(例如，C5a-相關(guān)的補(bǔ)體病癥)的人的方法，所述方法包括:給所述人施用包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5),其中將至少10 mg抗體/kg人體重施用給人，且其中所述抗體的施用可有效地部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離C5a持續(xù)至少24天。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患補(bǔ)體相關(guān)病癥(例如，C5a-相關(guān)的補(bǔ)體病癥)的人的方法，所述方法包括:給所述人施用包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中以特定劑量施用所述抗體，所述劑量足以:(a)實(shí)現(xiàn)大幅低于未切割的hC5的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值，和(b)部分地或完全地結(jié)合和隔離 納克水平的游離C5a持續(xù)至少12天。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患補(bǔ)體相關(guān)病癥(例如，C5a-相關(guān)的補(bǔ)體病癥)的人的方法，所述方法包括:給所述人施用包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中以特定劑量施用所述抗體，所述劑量足以:(a)實(shí)現(xiàn)大幅低于未切割的hC5的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值，和(b)部分地或完全地結(jié)合和隔離納克水平的游離C5a持續(xù)至少24天。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患補(bǔ)體相關(guān)病癥(例如，C5a-相關(guān)的補(bǔ)體病癥)的人的方法，所述方法包括:給所述人施用包含多個(gè)分離的抗體的組合物，其中所述多個(gè)抗體各自包含2個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)獨(dú)立地可以結(jié)合游離的人C5a (hC5a)或未切割的人C5 (hC5)，其中以特定劑量施用所述抗體，所述劑量足以:(a)實(shí)現(xiàn)大幅低于未切割的hC5的生理摩爾濃度的摩爾Cmax值，和(b)部分地或完全地結(jié)合和隔離病理生理學(xué)水平的游離C5a。應(yīng)當(dāng)理解，本文所述的任意組合物(例如，包含多個(gè)抗體)或分離的抗體(例如，其在有C5或摩爾過(guò)量的C5、游離的Fab臂存在下，能夠結(jié)合游離C5a)可以:(a)配制成根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容的藥物組合物，(b)包括在(本文所述的)治療試劑盒中，或(C)包括在本文所述的預(yù)充注射器中。如在本文提供的工作實(shí)施例中所述，發(fā)明人還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一種抗體BNJ383 (參見(jiàn)下文)，其不僅以高親和力(亞納摩爾親和力)結(jié)合游離hC5a，而且在過(guò)量的未切割的C5的濃度，還會(huì)以劑量依賴(lài)性的方式抑制末端補(bǔ)體復(fù)合物(TCC)形成。但是，甚至在比6.5倍過(guò)量的C5更大的抗_C5a抗體濃度，TCC的抑制是不完全的。盡管本公開(kāi)內(nèi)容絕不受任何具體理論或作用機(jī)理的限制，所述抗體可以如下抑制TCC形成:結(jié)合至少一部分未切割的C5，并阻止它的切割，和/或以其它方式阻止C5與其它TCC組分的成功結(jié)合。發(fā)明人理解，這樣的抗體可用于治療補(bǔ)體相關(guān)病癥，例如，其中C5a起重要作用，且含有C5b的TCC可能起不太重要的作用。這樣的病癥可以包括，例如，膿毒癥、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、膿毒性休克、抗磷脂綜合征、災(zāi)難性抗磷脂綜合征、彌漫性血管內(nèi)凝血、狼瘡腎炎、肺出血腎炎綜合征、燒傷或嚴(yán)重?zé)齻?、哮喘、HELLP綜合征(溶血性貧血、肝酶升高和低血小板計(jì)數(shù))、炎癥誘發(fā)的疼痛、C5a介導(dǎo)的 嗜中性粒細(xì)胞減少、年齡相關(guān)的黃斑變性(AMD)、慢性阻塞性肺疾病和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。發(fā)明人還理解，使用這樣的抗_C5a抗體來(lái)治療這些病癥以及其它病癥，可以提供與使用末端補(bǔ)體抑制藥物相比甚至更有益的安全性特性。如上面所指出的，抑制末端補(bǔ)體組分(諸如C5、C5b、C6、C7、C8或C9)的一個(gè)顯著后果是，宿主免疫系統(tǒng)針對(duì)末端補(bǔ)體經(jīng)常裂解的具莢膜細(xì)菌(例如，腦膜炎奈瑟球菌和淋病奈瑟球菌)的保護(hù)降低。由于在本部分中描述的抗_C5a抗體會(huì)抑制C5a介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，但是不會(huì)完全抑制裂解那些具莢膜細(xì)菌的末端補(bǔ)體復(fù)合物的形成，接收本文所述的治療性抗_C5a抗體的患者不需要保護(hù)性疫苗接種，例如，針對(duì)腦膜炎奈瑟球菌和淋病奈瑟球菌的疫苗接種。TCC的部分抑制(盡管沒(méi)有完全廢除末端補(bǔ)體的抗微生物應(yīng)答)可以實(shí)際上減少TCC誘發(fā)的炎癥如組織損傷。據(jù)信，與C5a的抑制相組合的TCC部分抑制，會(huì)使得所述抗_C5a抗體成為一種甚至更有效的抗炎化合物。因此，在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種結(jié)合游離C5a的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述游離C5a是具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a，其中所述抗體抑制C5a與C5a受體的結(jié)合，且其中所述抗體部分地抑制末端補(bǔ)體復(fù)合物(TCC)的形成。本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段的部分抑制可以是例如補(bǔ)體活性，也就是說(shuō)，在有所述抗體存在下，是在沒(méi)有所述抗體或其抗原結(jié)合片段存在下的補(bǔ)體活性的最多或不超過(guò)80 (例如，75、70、65、60、55、50、45、40、35、30或25) %。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段以亞納摩爾親和力結(jié)合游離C5a (例如，游離hC5a)。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段對(duì)游離C5a的親和力比所述抗體或抗原結(jié)合片段對(duì)未切割的C5的對(duì)應(yīng)親和力大至少100倍。在有些實(shí)施方案中，使用CH50eq試驗(yàn)測(cè)得，所述抗體或其抗原結(jié)合片段在超過(guò) 200 (例如，210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、320、340、360、380或400或更高)μ g/mL的濃度抑制了至少50%的TCC形成。在有些實(shí)施方案中，使用在工作實(shí)施例中所述的Wieslab 經(jīng)典途徑補(bǔ)體試劑盒測(cè)得，所述抗體或其抗原結(jié)合片段在超過(guò) 200 (例如，210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、320、340、360、380 或 400或更高)μ g/mL的濃度抑制了至少50%經(jīng)典補(bǔ)體途徑活化。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療摧患補(bǔ)體相關(guān)病癥(例如，C5a_相關(guān)的補(bǔ)體病癥或補(bǔ)體相關(guān)的炎癥性病癥)的人的方法。所述方法包括:給所述人施用有效量的抑制C5a與C5a受體結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，且其中所述抗體部分地抑制末端補(bǔ)體復(fù)合物(TCC)的形成。參見(jiàn)上文。所述病癥可以是本領(lǐng)域已知的或本文所述的那些中的任一種。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它結(jié)合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a多肽，但是不結(jié)合未切割的、天然的C5的α鏈，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段以小于1.25 χ 10_9 M的Kd結(jié)合人C5a多肽。在另一個(gè)方面，本公 開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它結(jié)合具有在SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列的人C5a多肽，但是不結(jié)合未切割的、天然的C5的α鏈，其中所述抗體在1:1 (抗原結(jié)合位點(diǎn):C5a)的摩爾比抑制了至少50%人C5a依賴(lài)性的人嗜中性粒細(xì)胞活化。在有些實(shí)施方案中，在實(shí)施例5所述的試驗(yàn)(其中使用0.4 nM抗體來(lái)抑制2 nM人C5a的嗜中性粒細(xì)胞活化活性)中，所述抗體抑制了至少50%人C5a依賴(lài)性的人嗜中性粒細(xì)胞遷移。在有些實(shí)施方案中，所述抗體不包含在表I中描述的示例性的⑶R配對(duì)3。在有些實(shí)施方案中，所述抗體不是BNJ371。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合具有在SEQ IDNO:2中所述的氨基酸序列的人C5a多肽。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽包含:輕鏈⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的
氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽包含:輕鏈⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:38中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的
氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽包含:重鏈⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:29中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:30中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽包含:重鏈⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:67中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:30中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽包含:重鏈⑶R1，其含有在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:47中所述的
氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID N0:37或SEQ ID NO:36中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽含有在SEQ ID N0:27或SEQ ID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 37中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:27中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 36中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽含有在SEQ ID N0:27或SEQ ID NO:25中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 19中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:27中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:25中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID N0:42或SEQ ID NO:40中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽含有在SEQ ID N0:27或SEQ ID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 42中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:27中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 40中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:33中所述的氨基酸序列。
在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:33中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽含有在SEQ ID NO:45, SEQ ID N0:44或SEQ ID N0:49中的任一個(gè)中所述的氨
基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 19中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:45中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:44中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 17中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:49中所述的氨基酸序列。 在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID N0:37或SEQ ID NO:36中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽含有在SEQ ID N0:45或SEQ ID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 37中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:45中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 36中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID N0:42或SEQ ID NO:40中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽含有在SEQ ID N0:45或SEQ ID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 42中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:45中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈多肽和重鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在SEQ ID NO: 40中所述的氨基酸序列，所述重鏈多肽含有在SEQID NO:49中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段以小于7 χ 10, M的Kd結(jié)合hC5a。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段以小于5 χ 10, M的Kd結(jié)合hC5a。
在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段以小于3 χ 10, M的Kd結(jié)合hC5a。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段以小于2.5 χ 10,M的Kd結(jié)合hC5a。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段以小于1.5 χ 10,M的Kd結(jié)合hC5a。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段以小于1.0 χ 10,M的Kd結(jié)合hC5a。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段以小于8.0 χ 10_nM的Kd結(jié)合hC5a。在有些實(shí)施方案中，抗體在1:1 (抗原結(jié)合位點(diǎn):C5a)的摩爾比抑制了至少70(例如，至少75、80、85、90或95或更大)％的人C5a依賴(lài)性的人嗜中性粒細(xì)胞活化。在有些實(shí)施方案中，所述抗體不包含在表I中描述的示例性的CDR配對(duì)3。在有些實(shí)施方案中，所述抗體不是BNJ371。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它包含在表3或表7中所述的輕鏈CDR。例如，分離的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽含有:(i)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 96中所述的氨基酸序列；和輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 142中所述的氨基酸序列；(ii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 156中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR2，其包含在SEQ ID NO: 157中所述的氨基酸序列；和輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 158中所述的氨基酸序列；(iii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 164中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 165中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ IDNO: 166中所述的氨基酸 序列；(iv)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO: 172中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 173中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQID NO: 174中所述的氨基酸序列；(V)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQID NO:86中所述的氨基酸序列；(vi)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID N0:92中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQID NO: 93中所述的氨基酸序列；(vii)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO: 88中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQID NO: 90中所述的氨基酸序列；(viii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID N0:95中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQID NO: 97中所述的氨基酸序列；(ix)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 99中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 100中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQID NO: 101中所述的氨基酸序列；(χ)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQID NO: 103中所述的氨基酸序列；(xi)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO: 105中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 106中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 107中所述的氨基酸序列；(xii)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID N0:92中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 108中所述的氨基酸序列；(xiii)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID N0:20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 110中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NOilll中所述的氨基酸序列；或(xiv)輕鏈CDRl，其包含在SEQ ID N0:20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 113中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述包含輕鏈⑶R集合的抗體或其抗原結(jié)合片段也包含重鏈多肽，所述重鏈多肽含有在表8中所述的重鏈CDR集合中的任一個(gè)。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它包含在表3或表8中所述的重鏈CDR集合。例如，在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈多肽，所述重鏈多肽包含:(i)重鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈CDR2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(ii)重鏈⑶R1，其包含在SEQ IDNO:28中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:67中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:30中所述的氨基酸序列；(iii)重鏈⑶R1，其包含在SEQID NO: 160中所述的氨基酸序列；·重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 161中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 162中所述的氨基酸序列；(iv)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 168中所述的氨基酸序列；重鏈CDR2，其包含在SEQ ID NO: 169中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 170中所述的氨基酸序列；(V)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 176中所述的氨基酸序列；重鏈CDR2，其包含在SEQ ID NO: 177中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 178中所述的氨基酸序列；(vi)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈CDR2，其包含在SEQ ID NO: 116中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(vii)重鏈CDR1，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重鏈CDR2，其包含在SEQ ID NO: 120中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 121中所述的氨基酸序列；(viii)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ IDNO: 123中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；
(ix)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQID NO: 124中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(x)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 126中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 127中所述的氨基酸序列；(xi)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 129中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xii)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 131中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 132中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 133中所述的氨基酸序列；(xiii)重鏈CDRl，其包含在SEQ ID NO:28中所述的氨基酸序列；重鏈CDR2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列；或(xiv)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 136中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 137中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ IDNO: 138中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述包含重鏈CDR集合的抗體或其抗原結(jié)合片段也包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽含有在表7中所述的輕鏈CDR集合中的任一個(gè)。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它包含來(lái)自表7的輕鏈CDR集合和在表8中所述的它的同源重鏈CDR集合。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它包含在表3或表9中所述的配對(duì)的輕鏈和重鏈⑶R集合。例如，在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含:(i)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 142中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(ii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQID NO:67中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO:30中所述的氨基酸序列輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 156中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 157中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 158中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 160中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQID NO: 161中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 162中所述的氨基酸序列；(iv)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 164中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 165中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 166中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 168中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 169中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 170中所述的氨基酸序列；(V)輕鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 172中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 173中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 174中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 176中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 177中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 178中所述的氨基酸序列；(vi)輕鏈⑶R1， 其包含在SEQ ID NO:88中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:90中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 120中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 121中所述的氨基酸序列；(vii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 105中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 106中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 107中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 124中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(viii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO:86中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 116中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(ix)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 110中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 111中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 136中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 137中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列；(x)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 21中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:113中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 28中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列；(xi)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:99中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 100中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 101中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 119中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 126中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 127中所述的氨基酸序列；(xii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:95中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO:97中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xiii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 142中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:117中所述的氨基酸序列；(xiv)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 105中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 106中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 107中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(XV) 輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:92中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 108中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xvi)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:92中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO:93中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xvii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:92中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:89中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO:93中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:117中所述的氨基酸序列；(xviii)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 103中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 129中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(xix)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:95中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:96中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R3，其包含在SEQ ID N0:97中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 123中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；(XX)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:84中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:85中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 103中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 115中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 144中所述的氨基酸序列；和重鏈⑶R3，其包含在SEQ ID NO: 117中所述的氨基酸序列；或(xxi)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:20中所述的氨基酸序列；輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 21中所述的氨基酸序列；輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:113中所述的氨基酸序列；重鏈⑶Rl，其包含在SEQ ID NO: 131中所述的氨基酸序列；重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO: 132中所述的氨基酸序列；和重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 133中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含在表3中所述的配對(duì)的輕鏈⑶R集合和重鏈⑶R集合。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含在表2中所述的配對(duì)的輕鏈CDR集合和重鏈CDR集合。例如，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種抗體，所述抗體包含:(i)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 20中所述的氨基酸序列；(ii)輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:21中所述的氨基酸序列；和(iii)輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID N0:22中所述的氨基酸序列；(iv)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:28中所述的氨基酸序列；(V)重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:46中所述的氨基酸序列；和(vi)重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:47中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含在表2中所述的輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈與在表2中所述的任一個(gè)重鏈可變區(qū)配對(duì)。例如，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種抗體(或其抗原結(jié)合片段)，它包含:(a)輕鏈可變區(qū)，其氨基酸序列包含在SEQ ID NO: 42中所述的氨基酸序列，和(b)重鏈可變區(qū)，其氨基酸序列包含在SEQ ID N0:45中所述的氨基酸序列。 在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗體或其抗原結(jié)合片段包含:(i)重鏈可變區(qū)框架區(qū)1，其包含在SEQ ID N0:68或SEQ ID NO:69中所述的氨基酸序列；(ii)重鏈可變區(qū)框架區(qū)2，其包含在SEQ ID N0:70或SEQ ID NO:71中所述的氨基酸序列；和重鏈可變區(qū)框架區(qū)3，其包含在SEQ ID NO:72-74中的任一個(gè)中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)框架區(qū)4，后者包含在SEQ ID N0:75中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)，后者包含在SEQ ID NO:76-80中的任一個(gè)中所述的氨基酸序列。所述抗體重鏈可以包含本文所述的任一個(gè)重鏈⑶R集合。在有些實(shí)施方案中，所述重鏈可變區(qū)可以與包含在SEQ ID N0:16中所述的氨基酸序列的可變區(qū)多肽配對(duì)。在有些實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合非人C5a蛋白。例如，所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合小鼠C5a和/或去精氨酸化的小鼠C5a蛋白。在有些實(shí)施方案中，分離的抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合小鼠C5a (和/或去精氨酸化的小鼠C5a)，且包含:(i)輕鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO: 54中所述的氨基酸序列；(ii)輕鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:55中所述的氨基酸序列；(iii)輕鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO: 56中所述的氨基酸序列；(iv)重鏈⑶R1，其包含在SEQ ID NO:62中所述的氨基酸序列；(V)重鏈⑶R2，其包含在SEQ ID NO:63中所述的氨基酸序列；和(vi)重鏈CDR3，其包含在SEQ ID NO:64中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，所述抗-小鼠C5a抗體可以包含:含有在SEQ IDNO:59中所述的氨基酸序列的輕鏈多肽；和含有在SEQ ID N0:66中所述的氨基酸序列的重鏈多肽。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段會(huì)抑制C5a和C5a受體之間的相互作用。所述C5a受體可以是，例如，C5aRl或C5L2。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段不會(huì)在體外和/或在體內(nèi)大幅抑制補(bǔ)體介導(dǎo)的紅血細(xì)胞溶血。在有些實(shí)施方案中，分離的抗體(和因此其任意抗原結(jié)合片段)是單克隆抗體、人源化的抗體或全人抗體。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段選自:重組抗體、單鏈抗體、雙體、細(xì)胞內(nèi)抗體、嵌合化的或嵌合的抗體、去免疫化的人抗體、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)2片段。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段是多特異性的(例如，雙特異性的)，因?yàn)樗隹贵w或片段結(jié)合至少2種不同的表位。所述2種不同的表位可以是，例如，來(lái)自相同蛋白(例如，C5a)的2種不同表位，或所述抗體可以結(jié)合來(lái)自第一蛋白(例如，C5a)的第一表位和來(lái)自第二蛋白的第二表位。在有些實(shí)施方案中，本文所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段包含異源部分。所述異源部分可以是，例如，糖。例如，所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以被糖基化。所述異源部分可以是，例如，可檢測(cè)的標(biāo)記例如，但不限于、熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、重金屬標(biāo)記、放射性標(biāo)記或酶標(biāo)記。在有些實(shí)施方案中，用提高抗體在循環(huán)中的穩(wěn)定化和/或保留的部分，修飾本文所述的分離的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段。例如，所述修飾可以是聚乙二醇化或羥乙基淀粉化。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體可以含有改變的恒定區(qū)，與它的對(duì)應(yīng)的未改變的恒定區(qū)的效應(yīng)子功能相比，所述改變的恒定區(qū)具有降低的(或沒(méi)有)效應(yīng)子功能。在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體含有改變的恒定區(qū)，后者具有未改變的恒定區(qū)的效應(yīng)子功能的約O至約20%。本文描述了這樣的降低效應(yīng)子功能的抗體的示例性實(shí)施方案。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，它會(huì)交叉阻斷任一種前述抗體的結(jié)合。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種藥物組合物，其包含一種或多種本文所述的任意分離的抗體或其抗原結(jié)合片段和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了:(i)核酸，其編碼一種或多種本文所述的任一種抗體或其抗原結(jié)合片段；( )包含所述核酸的載體；(iii)包含所述核酸的表達(dá)載體；和/或(iv)包含所述載體或所述表達(dá)載體的細(xì)胞。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于生產(chǎn)多肽(諸如本文 所述的任一種抗體或其抗原結(jié)合片段)的方法。所述方法包括:在足以允許前述細(xì)胞(其包含所述表達(dá)載體)表達(dá)由所述載體中的核酸編碼的所述抗體或抗原結(jié)合片段的條件和時(shí)間下，培養(yǎng)所述細(xì)胞。所述方法還可以包括:從所述細(xì)胞或從用于培養(yǎng)所述細(xì)胞的培養(yǎng)基，分離出所述抗體或抗原結(jié)合片段。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種分離的核酸，其編碼本文所述的任一個(gè)氨基酸序列或特定多肽，所述特定多肽的氨基酸序列包含本文所述的任一個(gè)氨基酸序列或由其組成。所述核酸可以被包括在載體(例如，表達(dá)載體)中，和/或可以存在于細(xì)胞中。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種治療試劑盒，其包含:(i) 一種或多種本文所述的分離的抗體或抗原結(jié)合片段(例如，一種或多種本文所述的任意人源化的抗體或其抗原結(jié)合片段)；和(ii)用于將所述抗體或抗原結(jié)合片段遞送給受試者的裝置。所述裝置可以適用于，例如，向所述受試者皮下遞送、眼內(nèi)遞送或關(guān)節(jié)內(nèi)遞送所述抗體或其抗原結(jié)合片段。所述裝置可以是，例如，注射器、雙筒注射器或集成的2個(gè)單獨(dú)的注射器，用于以推拉方式在吸出膝流體(例如，用于分析)的同時(shí)施用治療性抗體或其抗原結(jié)合片段。在有些實(shí)施方案中，所述裝置是用于眼遞送，且包含經(jīng)鞏膜的貼劑或接觸鏡，它們各自包含所述抗體或其抗原結(jié)合片段。在有些實(shí)施方案中，所述裝置適用于肺內(nèi)遞送。例如，所述裝置可以是吸入器或噴霧器。在有些實(shí)施方案中，所述裝置是預(yù)充注射器，諸如筆式裝置。所述預(yù)充注射器可以含有，例如，至少一個(gè)藥物單位劑型的一種或多種本文提供的抗體或其抗原結(jié)合片段。在有些實(shí)施方案中，本文所述的治療試劑盒可以含有至少一種其它活性劑，所述其它活性劑用于治療受試者的補(bǔ)體相關(guān)病癥。所述其它活性劑可以是，例如，本文所述的任意其它試劑。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種用于治療或預(yù)防補(bǔ)體相關(guān)病癥的方法。所述方法包括:以足以治療折磨人的補(bǔ)體相關(guān)病癥的量，給有此需要的人施用本文所述的治療性抗體或其抗原結(jié)合片段。所述方法還可以包括:將所述受試者鑒別為具有補(bǔ)體相關(guān)病癥。所述補(bǔ)體相關(guān)病癥可以是，例如，補(bǔ)體相關(guān)的炎癥性病癥、非典型溶血性毒癥綜合征、年齡相關(guān)的黃斑變性、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、膿毒癥或抗磷脂綜合征。在有些實(shí)施方案中，所述補(bǔ)體相關(guān)病癥是補(bǔ)體相關(guān)肺病。例如，所述補(bǔ)體相關(guān)肺病可以是，例如，哮喘或慢性阻塞性肺疾病。本文描述了適合 在本方法中描述的治療或預(yù)防的其它補(bǔ)體相關(guān)病癥。給藥模式可以隨要治療的補(bǔ)體相關(guān)病癥的類(lèi)型而變化，且可以是，例如，靜脈內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、眼內(nèi)給藥、皮下給藥或關(guān)節(jié)內(nèi)給藥。在有些實(shí)施方案中，以足以在治療期間維持降低的全身C5a活性水平的量和頻率，將所述抗體或其抗原結(jié)合片段施用給人。在有些實(shí)施方案中，所述方法可以包括:在給藥以后，監(jiān)測(cè)所述人的補(bǔ)體相關(guān)病癥的一種或多種征狀的改善。在有些實(shí)施方案中，所述方法可以包括:給所述人施用一種或多種其它治療劑。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容表征了一種制品，所述制品包含:(i)具有標(biāo)簽的容器，和(ii)組合物，其包含本文所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。所述標(biāo)簽可以指示，所述組合物用于施用給具有、疑似具有補(bǔ)體相關(guān)病癥或處于發(fā)展該病癥的危險(xiǎn)中的人。所述制品還可以包括一種或多種其它活性劑。貫穿本公開(kāi)內(nèi)容使用的術(shù)語(yǔ)“抗體”表示整個(gè)或完整的抗體(例如，IgM、IgG、IgA、IgD或IgE)分子，其通過(guò)本領(lǐng)域已知的和描述在本文中的多種方法中的任一種來(lái)制備。術(shù)語(yǔ)“抗體”包括多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合化的或嵌合的抗體、人源化的抗體、去免疫化的人抗體和全人抗體。所述抗體可以在多個(gè)物種中的任一個(gè)中制備或衍生出，所述物種是例如:哺乳動(dòng)物諸如人類(lèi)、非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如，猴、狒狒或黑猩猩)、馬、牛、豬、綿羊、山羊、狗、貓、兔、豚鼠、沙鼠、倉(cāng)鼠、大鼠和小鼠。所述抗體可以是純化的或重組的抗體。本文使用的術(shù)語(yǔ)“抗體片段”、“抗原結(jié)合片段”或類(lèi)似術(shù)語(yǔ)表示，保留結(jié)合抗原(例如，存在于C5a中、但是不存在于未切割的、天然的C5蛋白的α鏈中的表位)的能力的抗體片段，例如，單鏈抗體(scFv)、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’)2片段。scFv是單個(gè)多肽鏈，其包括衍生出所述scFv的抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)。另外，在抗體片段的定義中包括:雙體(Poljak (1994) Structure 2(12):1121-1123: Hudson 等人(1999)J Immunol Methods 23 (1_2): 177-189,它們二者的公開(kāi)內(nèi)容通討引用糖體并入本f )、微體、三體(Schoonooghe等人(2009) BMC Biotechnol 2:70)、結(jié)構(gòu)域抗體(也稱(chēng)作“重鏈免疫球蛋白”或 camel ids; Holt 等人(2003) Trends Biotechnol 21(11): 484-490)和細(xì)胞內(nèi)抗體(Huston 等人(2001) Hum Antibodies 10 (3~4): 127-142; Wheeler 等人(2003)Mol Ther 8(3):355-366: Stocks (2004) Drug Discov Today 9(22): 960-966，它們各自的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用整體并入本文)，且可以摻入所述組合物中，并用于本文所述的方法中。除非另有定義，在本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本公開(kāi)內(nèi)容所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。在沖突的情況下，以發(fā)明的文件(包括定義)為準(zhǔn)。下面描述了優(yōu)選的方法和材料，盡管與本文所述的那些類(lèi)似或等效的方法和材料也可以用于實(shí)踐或測(cè)試本發(fā)明公開(kāi)的方法和組合物。在本文中提及的所有出版物、專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利和其它參考文獻(xiàn)都通過(guò)引用整體并入本文。從下面的描述、實(shí)施例，和從權(quán)利要求書(shū)，顯而易見(jiàn)本公開(kāi)內(nèi)容的其它特征和優(yōu)點(diǎn)，例如，用于治療受試者的補(bǔ)體相關(guān)病癥的方法。



圖1的Venn簡(jiǎn)圖描繪了被鼠抗-人C5a抗體的下述選定集合結(jié)合的人C5a中的表位的重疊程度:5anl01ME、5anl80ME、5an048ME、5anl79ME 和 5anl78ME。圖2的線(xiàn)圖描繪了在體外使用嗜中性粒細(xì)胞活化試驗(yàn)測(cè)得的C5a介導(dǎo)的信號(hào)傳遞的拮抗作用。Y-軸表示隨著新鮮分離的人嗜中性粒細(xì)胞的髓過(guò)氧化物酶釋放而變化的生色底物的光密度(OD)測(cè)量。X-軸表示與細(xì)胞一起溫育的抗體的濃度。在插例中標(biāo)明了測(cè)試的人源化的抗體:BNJ367、BNJ369、BNJ371、BNJ378、BNJ381、BNJ383和人源化的抗-C5抗體。圖3的線(xiàn)圖描繪了幾種治療性抗體對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型中的關(guān)節(jié)炎癥的作用。Y-軸表示按毫米計(jì)的初始發(fā)炎的膝關(guān)節(jié)厚度。X-軸表示疾病發(fā)作以后的天數(shù)。在插例中標(biāo)明了測(cè)試的治療性抗體:5anl95ME (小鼠抗-小鼠C5a抗體)和具有與所述抗-C5a抗體相同的Fe區(qū)的對(duì)照抗體。圖4的線(xiàn)圖描繪了幾種治療性抗體對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠模型中的總體疾病嚴(yán)重性的作用。Y-軸表示關(guān)節(jié)炎指數(shù)。X-軸表示疾病發(fā)作以后的天數(shù)。在插例中標(biāo)明了測(cè)試的治療性抗體:5anl95ME (小鼠抗-小鼠C5a抗體)和具有與所述抗_C5a抗體相同的Fe區(qū)的對(duì)照抗體。圖5描繪了一系列人源化的重鏈可變區(qū)序列。按照從最上面至最下面的次序:BNJ345人源化的抗-C5a抗體的重鏈可變區(qū)(SEQ ID NO: 76) ;BNJ346人源化的抗_C5a抗體的重鏈可變區(qū)(SEQ ID NO:77) ;BNJ347人源化的抗_C5a抗體的重鏈可變區(qū)(SEQ IDNO: 78) ;BNJ354人源化的抗-C5a抗體的重鏈可變區(qū)(SEQ ID NO: 79);和BNJ350人源化的抗_C5a抗體的重鏈可變區(qū)(SEQ ID N0:80)。技術(shù)人員會(huì)明白重鏈框架區(qū)1、2、3和4和重鏈⑶R 1、2和3之間的略圖。由Kabat等人(下文)定義的這樣的略圖顯示在附圖中?！癏CFR1”表示重鏈可變區(qū)框架區(qū)I，“HC FR2”表示重鏈可變區(qū)框架區(qū)2，“HC FR3”表示重鏈可變區(qū)框架區(qū)3，“HC FR4”表示重鏈可變區(qū)框架區(qū)4?！癏C⑶R1”表示重鏈可變區(qū)互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR) 1，“HC CDR2”表示重鏈可變區(qū)CDR2，“HC CDR3”表示重鏈可變區(qū)CDR3。圖6的線(xiàn)圖描繪了在給小鼠施用hC5a以后，小鼠血液中的循環(huán)嗜中性粒細(xì)胞的百分比。在Y-軸上，嗜中性粒細(xì)胞數(shù)表示為”基線(xiàn)”的百分比，所述基線(xiàn)是在時(shí)間O時(shí)的嗜中性粒細(xì)胞數(shù)(或100%嗜中性粒細(xì)胞)。χ-軸表示,按分鐘計(jì)的時(shí)間。以下述劑量之一,給小鼠組群靜脈內(nèi)地施用對(duì)照抗體[抗-炭疽保護(hù)性抗原63，IgG2/G4同種型](“對(duì)照”;5只小鼠)或抗-人C5a抗體BNJ383:24 mg/kg (5只小鼠)；12 mg/kg (5只小鼠)；6 mg/kg (5只小鼠)；和3 mg/kg (5只小鼠)，然后施用hC5a。參見(jiàn)實(shí)施例13。6只小鼠(“假的”)沒(méi)有施用人C5a。圖7的條形圖描繪了在給小鼠施用人C5a之前和之后，小鼠血漿中的髓過(guò)氧化物酶(MPO)水平。Y-軸表示小鼠血漿中的MPO的濃度(ng/mL)。X-軸表示，按分鐘計(jì)的時(shí)間。以下述劑量之一，給小鼠組群靜脈內(nèi)地施用對(duì)照抗體[抗-炭疽保護(hù)性抗原63，IgG2/G4同種型](“對(duì)照” ；8只小鼠)或抗-人C5a抗體BNJ383:24 mg/kg (5只小鼠)；12 mg/kg (5只小鼠)；6 mg/kg ( 5只小鼠)；和3 mg/kg (5只小鼠)，然后施用hC5a。4只小鼠(“假的”)沒(méi)有施用人C5a。圖8的線(xiàn)圖描繪了在有或沒(méi)有不同濃度的抗_hC5a抗體(BNJ383)存在下小鼠(施用人C5a)血漿中的人C5a水平的變化。Y-軸表示小鼠血漿中的hC5a的濃度(ng/mL)。X-軸表示，按分鐘計(jì)的時(shí)間。以下述劑量之一，給小鼠組群靜脈內(nèi)地施用對(duì)照抗體[抗-炭疽保護(hù)性抗原63，IgG2/G4同種型](“對(duì)照”；6只小鼠)或抗-人C5a抗體BNJ383:24mg/kg (3 只小鼠)；12 mg/kg (3 只小鼠)；6 mg/kg (3 只小鼠)；和 3 mg/kg (3 只小鼠)，然后施用hC5a。4只小鼠(“假的”)沒(méi)有施用人C5a。圖9的線(xiàn)圖描繪了在體外與人C5a的結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)。與不同濃度(例如，400、133、
44.4、14.8、4.9、1.6和0.5 nM)的下述物質(zhì)之一，用I nM生物素化的hC5a溫育250 pM的釕-標(biāo)記的抗-C5a抗體(BNJ383): (a)在磷酸鹽緩沖鹽水中的人C5a desarg蛋白，(b)人血漿，(c)食蟹猴血漿，(d) Balb/C (小鼠)血漿，或(e) DBA/2J (小鼠)血漿。關(guān)于血漿組分(b)、(C)、(d)和(e)，所述濃度表示溫育混合物中的C5抗原的近似終濃度。Y-軸表示，隨著檢測(cè)的釕-標(biāo)記的抗_C5a抗體的量而變化的任意熒光單位。X-軸表示抗原競(jìng)爭(zhēng)劑的濃度(nM)。圖10的線(xiàn)圖描繪了幾種補(bǔ)體抑制蛋白對(duì)補(bǔ)體的旁路途徑(AP)的影響。Y-軸表示，AP補(bǔ)體活性相對(duì)于基線(xiàn)(BL ;在沒(méi)有補(bǔ)體抑制劑存在下的活性水平)的百分比。X-軸表示，給定的補(bǔ)體抑制劑的濃度(μ M)。分別評(píng)價(jià)了抗_hC5a抗體BNJ383以及抗-C5抗體對(duì)AP活性的影響。圖11的線(xiàn)圖描繪了幾種補(bǔ)體抑制蛋白對(duì)補(bǔ)體的經(jīng)典途徑(CP)的影響。Y-軸表示，CP補(bǔ)體活性相對(duì)于基線(xiàn)(BL ;在沒(méi)有補(bǔ)體抑制劑存在下的活性水平)的百分比。X-軸表示，給定的補(bǔ)體抑制劑的濃度(μ M)。分別評(píng)價(jià)了抗_hC5a抗體BNJ383以及抗-C5抗體對(duì)CP活性的影響。圖12A、12B、12C和12D是一系列色譜圖，它們描繪了在有或沒(méi)有hC5蛋白存在下抗_C5a抗體(BNJ383)和抗_hC5抗體的保留時(shí)間。就所有圖而言，X-軸表示按分鐘計(jì)的保留時(shí)間，Y-軸表示在214 nm波長(zhǎng)的吸光度單位。在每個(gè)圖中，潛入的子圖描繪了特征峰的放大圖。圖12A描繪了在沒(méi)有hC5蛋白存在下，BNJ383的保留時(shí)間。圖12B描繪了在沒(méi)有hC5蛋白存在下，抗-C5抗體的保留時(shí)間。圖12C描繪了在有hC5 (與BNJ383相比2.1倍摩爾過(guò)量的hC5)存在下，BNJ383的保留時(shí)間。從右至左，列舉的峰代表:(a)未形成復(fù)合物的BNJ383或hC5 ； (b) BNJ383,其具有一個(gè)與未切割的hC5結(jié)合的抗原結(jié)合位點(diǎn)；和(c)微量級(jí)分，其與未切割的hC5對(duì)BNJ383的雙占據(jù)相一致。圖12D描繪了在有等摩爾量的hC5存在下，抗-C5抗體的保留時(shí)間。從右至左，列舉的峰代表:(a)未形成復(fù)合物的抗-C5抗體或hC5 ； (b)抗-C5抗體，其具有一個(gè)與未切割的hC5結(jié)合的抗原結(jié)合位點(diǎn)；和(c)與2個(gè)未切割的C5分子結(jié)合的抗-C5抗體。圖13的線(xiàn)圖描繪了，使用ELISA，在有hC5存在下，抗_C5a抗體BNJ383與hC5adesarg的結(jié)合。X-軸表示抗體的濃度(ng/mL)。Y-軸表示在450 nm波長(zhǎng)的光密度。圖14的散布圖描繪了隨抗_C5a抗體(BNJ383)的血漿濃度而變化的、存在于食蟹猴血漿中的游離C5a/C5a desarg的濃度。Y-軸描繪了在血漿樣品中檢測(cè)到的C5a/C5adesarg 的濃度(pg/mL),所述血衆(zhòng)樣品在以 I mg/kg、10 mg/kg、100 mg/kg、250 mg/kg 或400 mg/kg動(dòng)物體重的劑量 單次靜脈內(nèi)施用BNJ383以后I天至30天范圍內(nèi)的時(shí)間點(diǎn)得自食蟹猴。X-軸表示，在每個(gè)樣品中的BNJ383濃度&g/mL)。圖15A的散布圖描繪了隨著循環(huán)中的抗_C5a抗體(BNJ383)的濃度(X-軸)而變化的、經(jīng)過(guò)經(jīng)典途徑開(kāi)始的血清樣品中的溶血性活性相對(duì)于基線(xiàn)值的百分比(Y-軸)。圖15B的散布圖描繪了隨著循環(huán)中的抗_C5a抗體(BNJ383)的濃度(X-軸)而變化的、通過(guò)CH50eq試驗(yàn)測(cè)得的、血清樣品中經(jīng)過(guò)經(jīng)典途徑開(kāi)始的末端補(bǔ)體復(fù)合物形成相對(duì)于基線(xiàn)值的百分比(Y-軸)。圖15C的散布圖描繪了隨著循環(huán)中的抗_C5a抗體(BNJ383)的濃度(X-軸)而變化的、通過(guò)CCP試驗(yàn)測(cè)得的、血清樣品中經(jīng)過(guò)經(jīng)典途徑開(kāi)始的末端補(bǔ)體復(fù)合物形成相對(duì)于基線(xiàn)值的百分比(Y-軸)。
具體實(shí)施例方式本公開(kāi)內(nèi)容提供了結(jié)合游離C5a (例如，游離的人C5a)的抗體和其抗原結(jié)合片段、含有所述抗體或它們的片段的組合物、以及使用前述任一種治療或預(yù)防補(bǔ)體相關(guān)病癥的方法，所述病癥例如、但不限于:aHUS、黃斑變性(例如，AMD)、RA、膿毒癥、抗磷脂綜合征、燒傷(例如，嚴(yán)重?zé)齻?、肺出血腎炎綜合征、狼瘡腎炎或補(bǔ)體相關(guān)肺病諸如哮喘或慢性阻塞性肺疾病(C0PD)。本公開(kāi)內(nèi)容也提供了這樣的抗_C5a抗體(及其片段):它們具有在得自人的游離C5a和得自非人哺乳動(dòng)物物種(諸如非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如，食蟹猴或恒河猴))的游離C5a之間的交叉反應(yīng)性。盡管無(wú)意成為限制性的，在下面詳細(xì)說(shuō)明并在工作實(shí)施例中例證了示例性的抗體(和抗原結(jié)合片段)、組合物(例如，藥物組合物和制劑)和使用所述組合物的方法?？筥C5a抗體和其抗原結(jié)合片段
本公開(kāi)內(nèi)容提供了結(jié)合補(bǔ)體組分C5a的抗體。如以上所討論的，C5的原型(proform)(1676個(gè)氨基酸殘基的前體蛋白)通過(guò)一系列蛋白水解性裂解事件進(jìn)行加工。前18個(gè)肽(編號(hào)為-18至-1)構(gòu)成從前體蛋白切下的信號(hào)肽。剩余的1658個(gè)氨基酸的蛋白被切成2段，以形成α和β鏈。第一個(gè)切割事件發(fā)生在氨基酸殘基655和656之間。第二個(gè)切割發(fā)生在氨基酸殘基659和660之間。所述2個(gè)切割事件導(dǎo)致3個(gè)獨(dú)特多肽片段的形成:(i)包含氨基酸1-655的片段，它被稱(chēng)作β鏈；(ii)包含氨基酸660-1658的片段，它被稱(chēng)作α鏈；和(iii)由氨基酸656-659組成的四肽片段。α鏈和β鏈多肽片段經(jīng)由二硫鍵彼此連接，并構(gòu)成成熟的C5蛋白。CP或AP C5轉(zhuǎn)化酶通過(guò)在殘基733和734之間切割α鏈而活化成熟的C5，所述切割會(huì)導(dǎo)致C5a片段(氨基酸660-733)的釋放。成熟的C5的剩余部分是片段C5b，它含有與β鏈通過(guò)二硫鍵相連的α鏈的殘基734-1658。在體內(nèi)，C5a會(huì)被血清酶 (羧肽酶B)快速地代謝成73個(gè)氨基酸的形式，稱(chēng)作“C5adesarg”,它已經(jīng)喪失了羧基端精氨酸殘基。因此,在有些實(shí)施方案中，結(jié)合游離C5a的抗體也會(huì)結(jié)合去精氨酸化的C5a。在有些實(shí)施方案中，結(jié)合游離C5a的抗體不會(huì)結(jié)合去精氨酸化的 C5a。在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體會(huì)結(jié)合存在于C5a中的新表位，即，在從成熟的C5的α鏈片段釋放出C5a以后暴露出的表位。也就是說(shuō)，在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗-C5a抗體結(jié)合C5a和/或C5a desarg,但是不結(jié)合未切割的、天然的(完全折疊的)C5。如上所述，在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合未切割的、加工過(guò)的C5 (例如，血漿C5)的亞群，所述亞群構(gòu)成樣品中的全長(zhǎng)C5的總?cè)后w(例如，血液或血漿樣品或包含重組全長(zhǎng)C5的樣品)的小于10 (例如，小于9.5、9、8.5、8、7.5、
7,6.5、6、5.5、5、4.5、4、3.5、3、2.5、2、1.5、1、0.5,0.4,0.3,0.2 或小于 0.1)%，所述亞群完全地或部分地變性，從而暴露否則會(huì)被封閉的C5a新表位。因而，在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段可以結(jié)合游離C5a，但是不會(huì)結(jié)合90%或更多的未切割的、天然的C5群體的C5。在有些實(shí)施方案中，在任意數(shù)目的適用于測(cè)試C5活性的試驗(yàn)(例如，溶血試驗(yàn)或CH50eq試驗(yàn))中，所述部分或完全變性的亞群是無(wú)活性的，或具有降低的活性(例如，小于全功能的全長(zhǎng)C5蛋白的活性的90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、
30、25、20、15、10、5%)。適用于測(cè)試本文所述的抗_C5a抗體在有些實(shí)施方案中可以結(jié)合的小亞群的活性的方法，是本領(lǐng)域已知的，并描述在本文中。在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體會(huì)結(jié)合哺乳動(dòng)物(例如，人)C5a蛋白。例如，所述抗_C5a抗體可以結(jié)合具有下述氨基酸序列的人C5a蛋白:
TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTECCVVASQLRANISHKDMQLGR (SEQ ID NO:1).在有些實(shí)施方案中，所述抗_C5a抗體可以結(jié)合具有下述氨基酸序列的去精氨酸化的人 C5a 蛋白:TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTECCVVASQLRANISHKDMQLG (SEQ ID NO: 2)。本文所述的抗_C5a抗體可以結(jié)合全長(zhǎng)人C5a和去精氨酸化的人C5a。在有些實(shí)施方案中，所述抗體可以結(jié)合人C5a的表位，所述表位在具有下述氨基酸序列的蛋白的結(jié)構(gòu)片段內(nèi)或與其重疊:TLQKKIEEIAAKYK (SEQ ID NO:3) ；HSVVKKCCYDGAC(SEQ ID NO:4) ；VNNDE (SEQ ID NO:5) ；TCEQRAAR (SEQ ID NO:6) ；ISLG (SEQ ID NO:7)；PRCIKAFTECCVVASQLRANIS (SEQ ID NO:8) ；HKDMQLG (SEQ ID NO:9) ;*HKDMQLGR (SEQ IDNO: 10)。參見(jiàn)，例如，Cook等人(2010) Acta Cryst 2並:190-197。在有些實(shí)施方案中，所述抗體可以結(jié)合C5a的表位，所述表位在包含至少2個(gè)配對(duì)的半胱氨酸殘基的C5a肽片段的氨基酸序列內(nèi)或與其重疊。例如，抗_C5a抗體可以結(jié)合這樣的片段，所述片段包含下述氨基酸序列或由其組成:CCYDGACVNNDETC (SEQ ID NO: 11) ；CYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTEC (SEQ ID NO:12 ;和CEQRAARISLGPRCIKAFTECC (SEQ ID NO:13)，其中，在每個(gè)所述的肽片段內(nèi)，第一個(gè)和最后一個(gè)半胱氨酸殘基通過(guò)二硫鍵配對(duì)。在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗-C5a抗體可以結(jié)合人C5a蛋白的表位,所述表位在下述氨基酸序列內(nèi)或與其重疊:YDGACVNNDETCEQRAAR (SEQ ID NO: 14)或 CYDGACVNNDETCEQRAA (SEQ ID Ν0:1δ)。在有些實(shí)施方案中，抗體可以結(jié)合人C5a蛋白或其含有特定氨基酸序列的片段，所述特定氨基酸序列含有在SEQ ID NO: 1-15中的任一個(gè)中描述的至少4個(gè)(例如，至少4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16或17或更多個(gè))連續(xù)氨基酸或由其組成。在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗-C5a抗體會(huì)結(jié)合三元表位,所述三元表位包含C5a蛋白的2個(gè)或更多個(gè)(例如,至少
2、3或4個(gè))不連續(xù)的肽區(qū)域,例如,通過(guò)二硫鍵連接到一起的2個(gè)或更多個(gè)不連續(xù)的C5a肽區(qū)域。用于鑒別特定抗體(例如，抗_C5a抗體)所結(jié)合的表位的方法也是本領(lǐng)域已知的。例如，可以如下鑒別抗_C5a抗體所結(jié)合的在C5a (或去精氨酸化的C5a)內(nèi)的結(jié)合表位:測(cè)量所述抗體與補(bǔ)體組分C5a蛋白的幾種(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或30或更多)重疊肽片段(例如，具有在SEQ ID N0:1或SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列的人C5a蛋白的幾種重疊片段)的結(jié)合。然后使每種不同的重疊肽結(jié)合在固體支持物(例如，多孔試驗(yàn)板的單獨(dú)孔)上的獨(dú)特地址 。接著，如下研究所述抗_C5a抗體:在允許所述抗體結(jié)合它的表位的時(shí)間量和條件下，使它接觸在所述試驗(yàn)板中的每種肽。通過(guò)洗滌每個(gè)孔，除去未結(jié)合的抗_C5a抗體。接著，使可檢測(cè)地標(biāo)記的第二抗體(其結(jié)合在板孔中可能存在的抗_C5a抗體)接觸每個(gè)孔，并通過(guò)洗滌步驟除去未結(jié)合的第二抗體。由在孔中的可檢測(cè)地標(biāo)記的第二抗體產(chǎn)生的可檢測(cè)信號(hào)的存在或量，指示所述抗_C5a抗體會(huì)結(jié)合與所述孔連接的特定肽片段。參U列如，Harlow和Lane {同上)，Benny K.C.Lo {同上\和美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)20060153836，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用整體并入。使用BIAcore色譜技術(shù){參見(jiàn)M如，Pharmacia BIAtechnology Handbook, “Epitope Mapping,，，第 6.3.2 部分(1994 年 5月);和Johne等人(1993) J Immunol Methods 160:20191-8),也可以鑒別出抗體所結(jié)合的特定表位。在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體含有輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的特定集合和/或重鏈CDR的特定集合。例如，在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含從特定輕鏈多肽得到的輕鏈CDR集合，所述特定輕鏈多肽包含在SEQ ID NO: 19、37或42中的任一個(gè)中所述的氨基酸序列。在有些實(shí)施方案中，本文所述的抗_C5a抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含從特定重鏈多肽得到的重鏈⑶R集合，所述特定重鏈多肽包含在SEQ ID N0:27或45中所述的氨基酸序列。在下面更詳細(xì)地描述了從前述輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)得到的示例性的輕鏈和重鏈CDR集合(參見(jiàn)表I)。根據(jù)不同的方法，已經(jīng)不同地定義了⑶R和框架區(qū)的確切邊界。在有些實(shí)施方案中，在輕鏈或重鏈可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的CDR或框架區(qū)的位置可以如Kabat等人[(1991) “Sequences of Proteins of Immunological Interest.，，NIH
發(fā)明者R.P.羅瑟, D.L.謝里丹, P.P.坦伯里尼, 張?jiān)４?申請(qǐng)人:阿雷克森制藥公司