專利名稱：優(yōu)化的Fc變體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含F(xiàn)c區(qū)的親本多肽的變體。該變體與親本多肽相比顯示增加的與 FcRn的結(jié)合，且在它的Fc區(qū)中包含至少一個氨基酸修飾。相關(guān)技術(shù)描述單克隆抗體被用作治療劑來治療包括癌癥、自身免疫病、慢性炎性疾病、移植排斥、傳染病和心血管疾病的多種病癥。目前，市場上存在超過二十種批準(zhǔn)的單克隆抗體或單克隆抗體片段產(chǎn)品，且超過四百種處于臨床開發(fā)中。盡管這種接受和前景，但仍存在優(yōu)化抗體的結(jié)構(gòu)特性和功能特性的顯著需要。單克隆抗體在治療中的用途中的關(guān)鍵問題之一是它們在血液循環(huán)中的持久性?？贵w清除的速度直接影響治療的功效，并因此影響可以在患者中引起副作用且還增加治療費(fèi)用的藥物施用的頻率和量。IgG是人類中最主要的免疫球蛋白種類，也最常用于治療中。已通過與嚙齒類動物中被動免疫從母親至胎兒或新生兒的轉(zhuǎn)移相關(guān)的研究闡明了 IgG穩(wěn)態(tài)的機(jī)制(Brambell， 1966, Lancet ；2 (7473) 1087-93 ；Rodewald,1976, J Cell Biol. ；71 (2) :666_9 Jones 等， 1972，J Clin Invest.，51 (11) :2916_27)。在早期研究中，Brambell 推測存在用于 IgG 母胎(maternofetal)傳遞的受體，且涉及IgG母胎轉(zhuǎn)移和IgG分解代謝的機(jī)制可以相同，或者至少非常密切相關(guān)(Brambell, 1966, Lancet ；2 (7473) 1087-93) 研究發(fā)現(xiàn)，極性細(xì)胞內(nèi)和跨極性細(xì)胞的IgG轉(zhuǎn)運(yùn)由Fc區(qū)與稱為新生兒Fc受體 (FcRn)的高親和力Fc受體的結(jié)合介導(dǎo)。FcRn是異二聚體，其包含與I類主要組織相容性復(fù)合體分子α-鏈的胞外域具有結(jié)構(gòu)同源性的跨膜α-鏈，及由β2-微球蛋白(β2πι)組成的可溶性輕鏈(Simister 和 Mostov，1989，Cold Spring Harb Symp Quant Biol. :54Pt 1 571-80)。在人類中，F(xiàn)cRn表達(dá)在胎盤細(xì)胞中；腸、腎和支氣管上皮細(xì)胞中；內(nèi)皮細(xì)胞中 ’及造血細(xì)胞(hematopoetic cell)，如小腸巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和單核細(xì)胞衍生的樹枝狀細(xì)胞中(Zhu X等，2001，J Immunol. ；166 :3266_76)。FcRn以pH依賴性方式結(jié)合它的兩種主要配體IgG和血清白蛋白，在pH 6. 0-6. 5下有效結(jié)合，而在pH 7. 0-7. 5下釋放(Raghavan 等，1995，Biochemistry.，34 14649-57)。針對IgG免受分解代謝提出的機(jī)制是，IgG通過非特異性胞飲作用內(nèi)化進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)體，其中低 pH 促進(jìn)與 FcRn 結(jié)合(Ghetie 和 Ward，1997，Nat. Biotechnol.，15 637-40)。結(jié)合的IgG-FcRn復(fù)合體再循環(huán)回到細(xì)胞表面，并在細(xì)胞外液的中性pH下解離，回到血液中的循環(huán)。未與FcRn結(jié)合的IgG轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入溶酶體中，其中它們被蛋白酶降解。根據(jù) IgG存活的濃度依賴性分解代謝機(jī)制，在低血清IgG濃度下，受體將結(jié)合所有胞吞的IgG，并有效地使其回到循環(huán)，產(chǎn)生長的IgG半衰期。相反，在高IgG濃度下，受體被IgG飽和，IgG 的主要級分未被受體結(jié)合，并轉(zhuǎn)運(yùn)降解，產(chǎn)生未結(jié)合的IgG的更快的分解代謝。小鼠IgG的Fc區(qū)中的多種位點(diǎn)特異性誘變實(shí)驗(yàn)已導(dǎo)致涉及IgG和FcRn間相互作用的某些關(guān)鍵氨基酸殘基的鑒定(Kim等，1994，Eur J Immunol. ；24 :2429_34 ;Kim等， 1994，Eur J Immunol ；24542-8 ；Medesan 等，1996，Eur J Immunol. ；26 :2533_6 ；Medesan等，1997，JImmunol. ；158 :2211_7)。這些研究和序列比較研究發(fā)現(xiàn)，位置253上的異亮氨酸、位置310上的組氨酸和位置435上的組氨酸(根據(jù)Kabat編號，Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版 Public Health Service, National Institutes of Health,Bethesda,Md. (1991))在人和嚙齒類動物IgG中高度保守，暗示它們在IgG-FcRn結(jié)合中的重要性。這些殘基定位在CH2-CH3結(jié)構(gòu)域界面上，功能位點(diǎn)定位于這些殘基符合與大鼠Fc復(fù)合的大鼠FcRn的X射線晶體結(jié)構(gòu)(Burmeister等，1994, Nature ； 372(6504) :379-83)。G hetie 等(1997，Nat. Biotechnol ；15 :637_40)在小鼠 IgGlFc-鉸合部片段中隨機(jī)誘變了位置252、位置254和位置256。與野生型相比，一個突變體對小鼠FcRn顯示高 3. 5倍的親和力和在兩個小鼠品系中分別長約23%或65%的半衰期。Kim 等(1999，Eur J Immunol ；29 :2819_25)通過 Fc 區(qū)的位置 253、位置 310 或位置435上的氨基酸取代誘變了人IgGl。他們發(fā)現(xiàn)，與野生型IgGlFc-鉸合部片段相比，突變體Fc-鉸合部片段在小鼠中具有減少的血清半衰期，并得出Ile253、His310和His435在調(diào)節(jié)IgG的血清半衰期中發(fā)揮中心作用的結(jié)論。Hornick 等(2000，J Nucl Med. ,41 :355_62)顯示，嵌合人 IgGl 抗體 Fc 區(qū)中位置253上的單個氨基酸取代在小鼠中加快清除，并改善實(shí)體瘤的免疫閃爍顯像 (immunoscintigraphy)。Shields 等(2001，J Biol Chem ;276 :6591_604)用丙氨酸掃描誘變改變?nèi)?IgGl 抗體的Fc區(qū)中的殘基，然后評估與人FcRn的結(jié)合。在改變?yōu)楸彼釙r(shí)有效廢除與FcRn的結(jié)合的位置包含I253、S254、H435和Y436。在結(jié)合中顯示較不顯著的減少的其他位置如下 E233-G236、R255、K288、L309、S415和H433。幾個氨基酸位置在改變?yōu)楸彼釙r(shí)顯示FcRn 結(jié)合的改善，這些位置尤其是 P238、T256、E272、V305、T307、Q311、D312、K317、D376、E380、 E382、S424和N434。許多其他氨基酸位置顯示FcRn結(jié)合的輕微改善(D265、N286、V303、 K360、Q362 和 A378)或無變化(S239、K246、K248、D249、M252、E258、T260、S267、H268、S269、 D270、K274、N276、Y278、D280、V282、E283、H285、T289、K290、R292、E293、E294、Q295、Y296、 N297、S298、R301、N315、E318、K320、K322、S324、K326、A327、P329、P331、E333、K334、T335、 S337、K338、K340、Q342、R344、E345、Q345、Q347、R356、M358、T359、K360、N361、Y373、S375、 S383、N384、Q386、E388、N389、N390、K392、L398、S400、D401、K414、R416、Q418、Q419、N421、 V422、E430、T437、K439、S440、S442、S444 和 K447)。針對具有改善的與FcRn的結(jié)合的組合變體發(fā)現(xiàn)了最顯著的加和性。在pH 6. O下， 與相對于天然IgGl與FcRn的結(jié)合，E380A好2倍和N434A好3. 5倍相比，E380A/N434A變體相對于天然IgGl顯示與FcRn的結(jié)合好超過8倍。向此加入T307A導(dǎo)致結(jié)合相對于天然 IgGl改善12倍。Dall ‘ Acqua 等(2002，J Immunol. ； 169 :5171_80)描述了針對小鼠 FcRn 的人IgGl鉸合部-Fc片段噬菌體展示文庫的隨機(jī)誘變和篩選。他們公開了位置251、252、 254-256、308、309、311、312、314、385-387、389、428、433、434 和 436 的隨機(jī)誘變。IgGl-人 FcRn復(fù)合體穩(wěn)定性的主要改善存在于定位在橫跨Fc-FcRn界面的帶中的取代殘基中 (M252、S254、T256、H433、N434和Y436)，且以較小的程度存在于外周殘基如V308、L309、 Q311、G385、Q386、P387 和 N389 的取代。通過組合 M252Y/S254T/T256E 和 H433K/N434F/Y436H突變獲得了對人FcRn具有最高親和力的變體，且相對于野生型IgGl顯示親和力增加 57倍。Hinton 等(2004，J Biol Chem. ；279 :6213_6)描述了兩個突變 T250Q 和 M428L， 其分別使人IgG2與人FcRn的結(jié)合增加約3倍和7倍。組合時(shí)，這兩個突變誘導(dǎo)IgG2的結(jié)合能力增加28倍。注射至獼猴進(jìn)行藥物代謝動力學(xué)研究時(shí)，兩個IgG2突變體M428L和 T250Q/M428L都顯示比野生型抗體長約2倍的半衰期。Dair Acqua 等(2006，J. Biol. Chem. ；281 :23514_24)描述了在位置 252,254 和 256上突變其Fc區(qū)(M252Y/S254T/T256E)的人源化抗呼吸道合胞病毒IgGl。這些突變使 PH 6. O下與人FcRn的結(jié)合增加約10倍，同時(shí)允許pH 7. 4下的有效釋放(DalT Acqua等， 2002，J Immunol. ； 169 :5171_80)。與野生型IgGl相比，這種突變的人IgGl的體內(nèi)行為顯示在食蟹猴中的血清半衰期增加近4倍。

此外，多種出版物描述了用于獲得通過以下改變其半衰期的生理活性分子的方法通過將FcRn結(jié)合多肽引入分子中(W0 97/43316、美國專利號5，869，046、美國專利號 5，747，035、WO 96/32478、WO 91/14438)；或通過使分子與保留FcRn結(jié)合親和力但對其他 Fc受體的親和力大幅降低的抗體融合(W0 99/43713)；或與抗體的FcRn結(jié)合結(jié)構(gòu)域融合 (W000/09560 ；美國專利號 4，703，039)。美國專利號6，165，745公開了通過將突變引入編碼抗體的DNA區(qū)段中來產(chǎn)生具有減少的生物半衰期的抗體的方法。該突變包含F(xiàn)c-鉸合部結(jié)構(gòu)域的位置253、310、311、433 或434上的氨基酸取代。美國專利號6，165，745的全部公開內(nèi)容，以及本文中引用的所有其他美國專利參考文獻(xiàn)的全部公開內(nèi)容在此弓I入作為參考。PCT公開號WO 00/42072公開了包含具有改變的FcRn結(jié)合親和力的變體Fc區(qū)的多肽，該多肽在 Fc 區(qū)的氨基酸位置 238、252、253、254、255、256、265、272、286、288、303、 305、307、309、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、386、388、400、413、415、424、 433、434、435、436、439和447中的任一個或多個上包含氨基酸修飾，其中Fc區(qū)中殘基的編號是EU索引(index)的編號(Kabat等，在以上引文中)。PCT公開號WO 02/060919A2公開了包含相對于野生型IgG恒定結(jié)構(gòu)域含有一個或多個氨基酸修飾的IgG恒定結(jié)構(gòu)域的修飾IgG，其中，與具有野生型IgG恒定結(jié)構(gòu)域的 IgG的半衰期相比，該修飾IgG具有增加的半衰期，且其中該一個或多個氨基酸修飾在位置 251、253、255、285-290、308-314、385-389 和 428-435 中的一個或多個上。本領(lǐng)域中仍然存在對新的優(yōu)化的Fc變體的需要。發(fā)明概述本發(fā)明提供具有優(yōu)化特性的親本多肽的變體。該優(yōu)化特性包含比對應(yīng)的親本多肽高的與FcRn的結(jié)合特性。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該親本多肽的變體包含F(xiàn)c區(qū)，與該親本多肽相比顯示增加的與FcRn的結(jié)合，且與該親本多肽相比在該親本多肽的Fc區(qū)中包含至少一個氨基酸修飾，其中該修飾選自Fc區(qū)的226、227、228、230、231、233、234、239、241、243、 246、250、252、256、259、264，265，267，269，270，276，284，285，288，289，290，291，292，294， 297，298，299，301，302，303，305，307，308，309，311，315，317，320，322，325，327，330，332， 334，335，338，340，342，343，345，347，350，352，354，355，356，359，360，361，362，369，370， 371，375，378，380，382，383，384，385，386，387，389，390，392，393，394，395，396，397，398，399，400，401，403，404，408，411，412，414，415，416，418，419，420，421，422，424，426，428，433、434、438、439、440、443、444、445、446 和 447，其中 Fc 區(qū)中氨基酸的編號是 Kabat中的EU索引的編號。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的變體的藥物組合物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供分離的編碼本發(fā)明的變體的核酸。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含上述核酸的載體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含上述載體的宿主細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于產(chǎn)生多肽變體的方法，該方法包括培養(yǎng)上述宿主細(xì)胞，使得核酸表達(dá)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的變體的藥物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本發(fā)明的變體在制備藥物中的用途。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于鑒定Fc優(yōu)化變體的方法。附圖簡述

圖1顯示噬菌粒載體pMG58，其中克隆入編碼源自人IgGl重鏈的氨基酸殘基 226-447 (Kabat 中的 EU 索引)(Fc226，SEQ n° 1)的人 Fc 基因。CVDE =VMAl衍生的內(nèi)切核酸酶的C端部分；VMA 液泡ATP酶亞基(VMA) ；CPIII M13噬菌體的衣殼蛋白pill (或p3)的C端部分。圖2顯示用于固相中(2A)和溶液中(2B)的Fc變體選擇的方法。FcRn-biot指生物素化FcRn，而FcRn-p3指FcRn-p3融合蛋白質(zhì)。Fc-噬菌體是在它的衣殼上表達(dá)Fc變體的M13噬菌體。在固相選擇中，用FcRn-p3融合蛋白質(zhì)(Fc-Rn-p3)，或用neutravidin然后用FcRn-biot包被免疫平板(immunoplate)的孔。圖3顯示對選擇的Fc變體進(jìn)行的噬菌體-ELISA測定的原理。Fc-噬菌體是在它的衣殼上表達(dá)Fc變體的M13噬菌體。FcRn-p3是包被在免疫平板的孔上的FcRn-p3融合蛋白質(zhì)?？?M13指用于進(jìn)行ELISA檢測的與辣根過氧化物酶(HRP)融合的小鼠抗-M13抗體。圖4顯示直方圖，其表示Fc IgGl的各氨基酸位置上包含修飾的突變體的百分比。 X坐標(biāo)突變位置根據(jù)Kabat中的EU索引的氨基酸編號。Y坐標(biāo)包含突變位置的Fc變體的百分比。圖5a顯示用于測量Fc變體對FcRn的結(jié)合親和力的ELISA測定的原理。FcRn_p3 是包被在免疫平板的孔上的FcRn-p3融合蛋白質(zhì)。Fc是包含用于ELISA檢測的V5標(biāo)記的 Fc變體?？?V5是與HRP融合的抗-V5抗體。該抗體用于進(jìn)行ELISA檢測。圖5b顯示通過按實(shí)施例1中的IV. 1. a中所述進(jìn)行的ELISA測定獲得的野生型 Fc (圓形)和Fc-H變體(正方形)的劑量效應(yīng)曲線。X坐標(biāo)Fc多肽的濃度。Y坐標(biāo)與 Fc多肽結(jié)合的FcRn的百分比。圖5c顯示通過按實(shí)施例1的IV. 1. a中所述進(jìn)行的ELISA測定獲得的野生型 Fc (圓形)和S3A_07變體(正方形)的劑量效應(yīng)曲線。X坐標(biāo)Fc多肽的濃度。Y坐標(biāo)與 Fc多肽結(jié)合的FcRn的百分比。圖5d顯示通過按實(shí)施例1的IV. 1. a中所述進(jìn)行的ELISA測定獲得的野生型 Fc (圓形)和S5A_41變體(正方形)的劑量效應(yīng)曲線。X坐標(biāo)Fc多肽的濃度。Y坐標(biāo)與Fc多肽結(jié)合的FcRn的百分比。 圖6顯示涉及位置216-447 (根據(jù)Kabat中的EU索引)的天然人IgGl序列與人 IgG2(SEQ ID NO :14)、人 IgG3(SEQ ID NO 15)和人 IgG4(SEQ ID NO 16)的對應(yīng)序列的比對。IgGl 序列指 Glml，17 同種異型(SEQ ID NO 12)和 Glm3 同種異型(SEQ ID NO :13)。 IgGl的“下鉸合部-CH2-CH3”結(jié)構(gòu)域開始于位置216 (見箭頭)。圖7顯示ELISA測定的結(jié)果，進(jìn)行該ELISA測定來顯示不同pH下Fc變體與FcRn 的結(jié)合親和力(詳見實(shí)施例2，112部分)。直方圖表示各變體在pH = 6(黑條)、pH = 6. 5 (白條)或pH = 7. 4 (灰條)下進(jìn)行ELISA測定所測量的OD45tlnm的值。OD42tlnm的值與結(jié)合Fc變體的固定化FcRn的量相關(guān)。圖8a顯示提出用于表達(dá)具有本文中所述Fc變體的重組IgGl抗體的表達(dá)載體的示意圖譜。產(chǎn)生的重組IgGl抗體具有針對CD20抗原的結(jié)合特異性。如圖8a中所示，將編碼具有本說明書中和實(shí)施例中所述突變的重鏈恒定區(qū)的核酸插在HKCD20-0pti-GA載體中存在的Apal和AscI克隆位點(diǎn)之間。圖8b和8c分別顯示IgG變體在非還原條件和還原條件下的SDS-PAGE。(1)指包含野生型Fc的IgG ；⑵指包含F(xiàn)c-H變體的IgG ； (3)指包含C6A_69變體的IgG ； (4)指包含C6A_78變體的IgG ； (5)指包含T5A_74變體的IgG ； (6)指包含C6A_74 變體的IgG ； (7)指包含C6A_60變體的IgG ；和(8)指包含C6A_66 (的IgG)。圖9顯示為了表征IgG變體與FcRn的結(jié)合而通過按實(shí)施例2的III. 1中所述進(jìn)行的ELISA測定獲得的本發(fā)明的IgG變體(“1”)和野生型IgG( “2”)的劑量效應(yīng)曲線。 X坐標(biāo)IgG的濃度。Y坐標(biāo)與IgG結(jié)合的FcRn的百分比。圖10顯示為了表征它們與Fc γ RIIIa的親和力而通過ELISA測定針對本發(fā)明的 IgG變體獲得的劑量效應(yīng)曲線。(1)指針對C6A_66變體獲得的曲線；(2)指針對利妥昔單抗(Rituximab)獲得的曲線；和(3)指針對 C6A_69、C6A_78、T5A_74、C6A_74、C6A_60 變體和野生型IgG獲得的曲線。按實(shí)施例2的IV. La部分中所述進(jìn)行ELISA測定。X坐標(biāo)IgG 的濃度。Y坐標(biāo)與IgG結(jié)合的Fc γ RIIIa的百分比。圖11顯示多種重組IgG與Jurkat FcRn的結(jié)合。圖11顯示按上文材料和方法部分中所述測定了 Ritixan和本發(fā)明的多種變體與Jurkat FcRn的結(jié)合，并表示為平均熒光強(qiáng)度(MFI)值。圖12顯示在用于本發(fā)明的de IgG變體的ADCC測定中獲得的劑量效應(yīng)曲線。(1) 指C6A_66變體的曲線；(2)指利妥昔單抗的曲線；和(3)指LFB-R603、WT-IgG和本發(fā)明的 IgG 變體(即 C6A_69、C6A_78、T5A_74、C6A_74、C6A_60 變體)的曲線。X 坐標(biāo)IgG 的濃度。 Y坐標(biāo)細(xì)胞裂解的百分比。發(fā)明詳述為了本申請可以被更充分地理解，下文給出了幾個定義。這類定義意在包含語法等同形式。在本說明書和權(quán)利要求全文中，F(xiàn)c區(qū)中殘基的編號是根據(jù)在此明確引用作為參考 StJ Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda,Md. (1991)中的 EU 索引的免疫球蛋白重鏈編號。“Kabat中的EU索弓丨”指人IgGlEU抗體的殘基編號。
本文中使用的“多肽”或“蛋白質(zhì)”意指至少兩個共價(jià)結(jié)合的氨基酸，其包含蛋白質(zhì)、多肽、寡肽和肽。本文中使用的“氨基酸”意指可以存在于具體的、確定的位置上的20種天然氨基酸或任意非天然類似物之一。可以用三字母密碼或用單字母密碼縮寫天然氨基酸
權(quán)利要求
1.包含F(xiàn)c區(qū)的親本多肽的變體，該變體與所述親本多肽相比顯示增加的與FcRn的結(jié)合，且包含至少兩個氨基酸修飾，所述至少兩個氨基酸修飾包含⑴選自Fc區(qū)的378V、378T、434Y和434S的一個氨基酸修飾；和(ii)選自 Fc 區(qū)的 226G、P228L、P228R、230S、230T、230L、241L、264E、307P、315D、330V、 362R、378V、378T、389T、389K、434Y 和 434S 的至少氨基酸修飾；其中Fc區(qū)中氨基酸的編號是Kabat中的EU索引的編號，只要修飾(i)不發(fā)生在與修飾(ii)相同的氨基酸位置上。
2.權(quán)利要求1的變體，所述變體與所述親本多肽相比包含選自Fc區(qū)的 226G/315D/434Y,230S/315D/434Y,230T/315D/434Y,230T/264E/434S, 230T/389T/434S, 241L/264E/378V,241L/264E/434S,250A/389K/434Y,259I/315D/434Y,264E/378T/396L, 264E/378V/416K,264E/378V/434S,264E/396L/434S,294deI/307P/434Y,307P/378V/434Y, 315D/330V/434Y, 315D/382V/434Y 和 378V/383N/434Y 的至少一個氨基酸修飾組合，其中 Fc 區(qū)中氨基酸的編號是Kabat中EU索引的編號。
3.權(quán)利要求2的變體，其中所述變體與所述親本多肽相比進(jìn)一步包含選自Fc區(qū)的 226G、227L、230S、230T，230L,231T,241L,243L,250A,256N,2591，264E，265G,267R,290E, 294del，303A，305A,307P,307A,3081，315D，322R,325S,327V,330V,342R,347R,352S,361D, 362R, 362E, 370R,378V,378T,382V,383N,386R,386K,387T,389T,389K,392R,395A,396L, 397M、403T、404L、415N、416K、421T、426T、428L、433R、434Y、434S 和 439R 的至少一個氨基酸修飾，其中Fc區(qū)中氨基酸的編號是Kabat中EU索引的編號。
4.權(quán)利要求1或2的變體，其中所述變體與所述親本多肽相比包含選自Fc區(qū)的 307A/315D/330V/382V/389T/434Y,256N/378V/383N/434Y,315D/330V/361D/378V/434Y, 259I/315D/43 4Y,230S/315D/428L/43 4Y,241L/26 4E/307P/378V/433R, 250A/389K/434Y,305A/315D/330V/395A/434Y, 264E/386R/396L/434S/439R, 315D/330V/362R/434Y,294deI/307P/434Y，305Α/3 15D/330V/389Κ/434Υ, 315D/327V/330V/397M/434Y,230T/241L/264E/265G/378V/421T,264E/396L/415N/434S, 227L/264E/378V/434S,26 4E/378T/396L,230T/315D/362R/426T/43 4Y, 226G/315D/330V/434Y,230L/241L/243L/264E/307P/378V,250A/315D/325S/330V/434Y, 290E/315D/342R/382V/434Y,241L/315D/330V/392R/434Y,241L/264E/307P/378V/434S, 230T/264E/403T/434S,264E/378V/416K,230T/315D/362E/434Y,226G/315D/434Y, 226G/315D/362R/434Y,226G/264E/347R/370R/378V/434S,308I/315D/330V/382V/434Y, 230T/264E/378V/434S,231T/241L/264E/378T/397M/434S,230L/264E/378V/434S, 230T/315D/330V/386K/434Y,226G/315D/330V/389T/434Y,267R/307P/378V/421T/434Y, 230S/315D/387T/434Y, 230S/264E/352S/378V/434S 和 230T/303A/322R/389T/404L/434S 的一個氨基酸修飾組合，其中Fc區(qū)中氨基酸的編號是Kabat中EU索引的編號。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的變體，其中所述變體是抗體。
6.權(quán)利要求5的變體，其中所述抗體是IgG抗體。
7.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)定義的變體。
8.分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)定義的變體。
9.載體，其包含權(quán)利要求8的核酸。
10.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求9的載體。
11.用于產(chǎn)生權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的變體的方法，其包括培養(yǎng)權(quán)利要求10的宿主細(xì)胞，以使得核酸表達(dá)。
12.藥物，其包含權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的變體。
13.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的變體的用途，用于制備藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含F(xiàn)c區(qū)的親本多肽的變體，該變體與該親本多肽相比顯示增加的與FcRn的結(jié)合，且在Fc區(qū)中包含至少一個氨基酸修飾。
文檔編號C07K16/28GK102405231SQ201080017521
公開日2012年4月4日 申請日期2010年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月20日
發(fā)明者A·卡拉特, C·莫內(nèi)-馬爾斯, C·貝倫斯, K·布阿亞迪, P·蒙東, S·若里約克斯 申請人:Lfb 生物技術(shù)公司